Chiết xuất polysaccharide từ tảo xoắn spirulina platensis

Nghiên cứu này nhằm mục đích nghiên cứu chiết xuấtpolysacarit từ tảo Spirulina platensis PSP dựa trên các nghiêncứu trước đây về tối ưu hóa các điều kiện thí nghiệm bằngphương pháp nước

1 HỘI NGHỊ TỔNG KẾT HOẠT ĐỘNG SINH VIÊN NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ NHÓM SRT NĂM HỌC 2019-2020 CHIẾT XUẤT POLYSACCHARIDE TỪ TẢO XOẮN SPIRULINA PLATENSIS EXTRACTION OF POLYSACCHARIDE FROM SPIRULINA PLATENSIS SVTH: Phạm Thị Mỹ Yên Lớp 17SH1, Khoa Công Nghệ Hóa Học- Mơi Trường, Trường Đại học Sư phạm Kỹ thuật - Đại học Đà Nẵng GVHD: TS Nguyễn Thị Đơng Phương Khoa Cơng Nghệ Hóa Học- Môi Trường, Trường Đại học Sư phạm Kỹ thuật - Đại học Đà Nẵng Tóm tắt - Polysacarit sản phẩm tự Abstract - The polysaccharide is one of the key natural products that profit human living conditions This study aimed at nhiên quan trọng mang lại lợi nhuận cho điều kiện sống investigating the polysaccharide extraction from Spirulina người Nghiên cứu nhằm mục đích nghiên cứu chiết xuất platensis (PSP) basing on previous researches on optimization of polysacarit từ tảo Spirulina platensis (PSP) dựa nghiên experimental conditions by hot water, lye, ultrasound-assisted cứu trước tối ưu hóa điều kiện thí nghiệm and freeze-thaw method As a result, the efficiency of raw PSP for phương pháp nước nóng, dung dịch kiềm, siêu âm đông lạnh four extraction methods was higher than previous studies and Kết là, hiệu PSP thô bốn phương pháp chiết detailed at 68.35%, 65%, 76.9% and 85.1% for hot water, lye, xuất cao so với nghiên cứu trước chi tiết ultrasound-assisted and freeze-thaw extraction method, 68,35%, 65%, 76,9% 85,1% phương pháp chiết xuất respectively Particularly, the efficiency of pure PSP extraction nước nóng, dung dịch kiềm, siêu âm đông lạnh Đặc was most dominant with 14.89% of the dry matter of raw PSP biệt, hiệu chiết xuất PSP túy chiếm ưu với Moreover, the characterization of pure PSP extract was 14,89% chất khơ PSP thơ Hơn nữa, đặc tính chiết xuất implemented by the analysis of monosaccharides so that PSP nguyên chất thực cách phân tích determined the emphasized compounds for nutritional foods The monosacarit để xác định hợp chất nhấn mạnh cho thực phẩm major composition was spotted to glucose and galactose while dinh dưỡng Thành phần phát thành glucose glucose composition was up to 85% after being hydrolyzed to the galactose thành phần glucose lên tới 85% sau bị end Another important property determined, the capacity of the thủy phân đến cuối Một tính chất quan trọng khác xác định, antioxidant activity of pure polysaccharide, exhibited the highest khả hoạt động chống oxy hóa polysacarit tinh khiết, thể IC64 at 780 mg mL-1 for the freeze-thaw extraction method IC64 cao mức 780 mg mL-1 cho phương pháp chiết Meanwhile, IC 50 with a control sample of ascorbic acid at 101.7 xuất đơng lạnh Trong đó, IC 50 với mẫu đối chứng axit mg mL-1 was determined at 373, 403, 276, and 258 mg mL-1 for ascorbic mức 101,7 mg mL-1 xác định 373, hot water, lye, ultrasound-assisted, and freeze-thaw extraction 403, 276 258 mg mL-1 cho nước nóng, dung dịch kiềm, siêu method, respectively âm phương pháp chiết đông lạnh Key words - Polysaccharide; monosaccharide; antioxidation Từ khóa - Polysacarit; đường đơn; hoạt động chống oxy hóa; activity; spirulina plantensis; nutritional food Tảo xoắn, thực phẩm dinh dưỡng Giới thiệu miễn dịch chống vi rút (Kurd & Samavati, 2015; Lupatini et al., 2017) Các sản phẩm tự nhiên liên tục tìm kiếm để chống lão hóa từ để kéo dài tuổi trẻ an tồn cho sức Các tính chất polysacarit thay đổi tùy theo khỏe Thật vậy, chi phí trẻ hóa da mối quan tâm đặc phương pháp hình thức thực chiết xuất (Markou, biệt phụ nữ, người sẵn sàng đầu tư số tiền Angelidaki, & Georgakakis, 2012; Wang cộng sự, lớn, khoảng 20-30% ngân sách sinh hoạt để làm việc 2018; Wu, Li, Zhao, & Liu, 2017) Trong nghiên cứu Để đáp ứng nhu cầu này, nhiều sở làm đẹp mọc Qu et al xuất năm 2013, trích xuất PSP phương lên nấm để đáp ứng số lượng lớn khách hàng nữ Tuy pháp siêu âm dẫn đến hàm lượng cao nước nóng, nhiên, nhà sản xuất sản phẩm làm đẹp chịu áp hoạt tính chống oxy hóa PSP giảm (Qu et lực lớn từ hàng giả, sản phẩm gốc không rõ nguồn gốc al., 2013) Phương pháp trích xuất PSP cách đóng thị trường, làm niềm tin phụ nữ nhãn băng làm tan băng Wang cộng sự, xuất hiệu sản phẩm tự nhiên có hầu hết năm 2018 đánh bại nhược điểm này, phức thương hiệu tiếng sản phẩm làm đẹp từ Spirulina tạp việc thực thí nghiệm (Wang et al., đắt 2018) Tảo xoắn loại thực phẩm ăn bổ dưỡng, Mặc dù hợp chất PSP nghiên cứu Việt chứa tới 60% - 70% protein, 6% -, 12% polysacarit, axit Nam đặc tính chống oxy hóa Spirulina Nguyễn béo khống chất, nhiều vitamin Ngoài ra, Spirulina Lê Anh Dao cộng sự, xuất năm 2018, đánh giá ý hoạt động sinh học thể hoạt động sinh học PSP (Đào, Tiên, & Phú, 2018) người đóng vai trò trường hợp PSP xtracted từ nấm shiitake Trần Thị Hồng Hà y học chăm sóc sức khỏe khác (L L Yang cộng sự, xuất năm 2013 (Hồng Hà cộng sự, 2013), cộng sự, 2012; L Yang cộng sự, 2009) Polysacarit họ ý đến hoạt động chống oxy hóa chiết Spirulina (PSP) báo cáo có tác dụng xuất từ tảo Spirulina hoạt động khác PSP từ chống ung thư, chống oxy hóa, chống lão hóa, điều hịa nhiều nguồn thực vật khác Võ Hồi Bắc nhóm nghiên Phạm Thị Mỹ Yên cứu (Võ Hoài Bắc, Trần Thị Vân Anh, Nguyễn Thị Mai Bột S.platensis nặng 40g thêm vào 1,6 kg nước Phương cộng sự, 2018); Nói cách khác, nghiên cứu hỗn hợp siêu âm 50 phút 50oC 320 W công bố thực vật ngoại trừ tảo Spirulina Ngồi Các bước thử nghiệm cịn lại giống a Đánh giá ra, phương pháp trích xuất để lấy PSP từ Spirulina hiệu việc thu PSP thô cho phương pháp quan tâm, nghiên cứu chủ yếu tập trung vào việc có hoạt động sinh học PSP mà quan 2.2.4 Chiết xuất đóng băng- tan băng tâm đến q trình trích xuất PSP, điều ảnh hưởng đến suất PSP đặc tính sinh học mong Bột tảo Spirulina (40 g) thêm vào 1,6 kg nước Hỗn muốn hợp sau đông lạnh - 4°C tan chảy 30°C Các bước thử nghiệm lại Để giải vấn đề việc nghiên cứu giống bước a Đánh giá hiệu mua lại điều kiện chiết xuất PSP phương pháp sinh học PSP cho phương pháp để tối đa hóa hàm lượng PSP đảm bảo hoạt động sinh học chúng, nghiên cứu sử dụng bốn Hiệu việc khai thác PSP thơ tính sau: phương pháp chiết xuất nước nóng, siêu âm, dung dịch kiềm đóng băng để làm giảm hiệu suất polysacarit E , %= Trọng lượng khơ PSPthơ × 100(1) chiết xuất tinh chế từ tảo Spirulina platensis Do sinh khốitrọng lượng khô đó, PSP tinh khiết phân tích thành phần monosacarit tính chất hoạt động nhặt gốc 2.3 Tinh loại màu PSP tự PSP thô, sau thu từ phương pháp chiết Nguyên liệu phương pháp xuất trên, tinh chế khử màu Các bước thực sau: 2.1 Nguyên vật liệu - Hịa tan PSP thơ nước cất hòa tan S.platensis thu hoạch phịng thí nghiệm Trường Đại học Sư phạm Kỹ thuật - Đại học Đà Nẵng - Điều chỉnh pH đến 7,0 dung dịch HCl 1M sấy khô để tiếp tục khai thác Trước thực NaOH 1M quy trình chiết xuất, S platensis sấy khô làm giảm trọng lượng chất khơ Các hóa chất để phân tích - Thêm 3% papain vào hỗn hợp ủ 50°C 2,5 mua từ Merck, Việt Nam Sigma, Mỹ, bao gồm 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) để kiểm tra - Thêm 5% TCA đun sôi để làm bất hoạt enzyme gốc tự do, Coomassie Brilliant Blue G-250 để xác định tổng số protein phương pháp Bradford, Phenol, - Để hỗn hợp tủ lạnh 4oC qua đêm Sulfuric axit, axit Chlohydric, Glucose, Albumin axit ascoricic theo tiêu chuẩn - Ly tâm hỗn hợp để thu phần phía 2.2 Chiết PSP thơ - Thêm dung dịch TCA 5% để qua đêm tủ lạnh 4°C Dựa Wang cộng sự, 2013, S platensis trích xuất bốn phương pháp để so sánh với hiệu suất - Dung dịch PSP chiết xuất protein giữ 55°C trình chiết xuất đánh giá tính chất polysacarit Do đó, q trình trích xuất thực - Điều chỉnh pH đến 8,0 dung dịch amoniac đậm sau: đặc 2.2.1 Chiết xuất nước nóng - Thêm 30% dung dịch hydro peroxide để ổn định Bột S platensis nặng 40g thêm vào 1,6 kg nước Hỗn hợp khuấy mạnh nồi cách thủy 800C - Thêm 95% nồng độ ethanol qua đêm 4°C để thu giờ, sau ly tâm 4300 vòng / phút 20 kết tủa Kết tủa hòa tan nước cất kết tủa lại phút Dung dịch thu từ máy ly tâm cô đặc đến với 95% Ethanol, bước thực lần Kết tủa 1/5 so với thể tích ban đầu Sau đó, 95% ethanol cuối rửa etanol khan, acetone ether thêm vào dung dịch đậm đặc với thể tích gấp năm lần thể sau sấy khơ Mẫu khơ sau bảo quản tủ tích dung dịch đậm đặc Hỗn hợp với ethanol đơng -20°C để phân tích thêm đặt tủ lạnh qua đêm, sau ly tâm tốc độ 4300 vòng / phút 20 phút Kết tủa rửa acetone, 2.4 Tổng lượng đường, tổng số xét nghiệm protein lọc sau sấy khơ Đánh giá hiệu PSP thô cho phương pháp Để xác định tổng lượng carbohydrate PSP tinh khiết, phương pháp Dubois xuất năm 1956 2.2.2 Chiết xuất bazơ- kiềm sử dụng (Dubois et., 1956) Tổng số protein S.pirulina súc tích phương pháp Bradford Bột S platensis nặng 40g thêm vào 1,6 kg nước (Bradford, 1976) độ pH điều chỉnh thành 10,0 cách thêm thể tích NaOH 1M Các bước trích xuất tương tự 2.5 Xét nghiệm DPPH mục 2.2.1 Đánh giá hiệu mua lại PSP thô cho phương pháp Dung dịch ml DPPH 0,1mM với metanol thêm vào ml dung dịch PSP với nồng độ chuẩn bị 2.2.3 Chiết xuất có hỗ trợ siêu âm khoảng 780 - 24 Miếngg mL-1 sau ủ nhiệt độ phịng 30 phút Hoạt tính qt gốc tự mẫu xác định cách so sánh độ hấp thụ với độ trắng etanol (etanol) Trong đó, axit ascobic sử dụng làm chất chuẩn Khả quét gốc tự DPPH ghi lại phương trình sau: HỘI NGHỊ TỔNG KẾT HOẠT ĐỘNG SINH VIÊN NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ NHÓM SRT NĂM HỌC 2019-2020 ( ) DPPH scavenging act ivity (%)= 1− At ×100 (2) nghiên cứu họ vào năm 2017 cho thấy tỷ lệ protein Ac 100 g sinh khối S.platensis 38,42% với phương pháp chiết xuất có hỗ trợ siêu âm (Lupatini et al., Trong Ac độ hấp thụ đối chứng At độ 2017) nghiên cứu cho kết hấp thụ mẫu thử (Kedare & Singh, 2011; Rehakova et protein chiếm 27,5% protein hòa tan 100 g PSP al., 2008) thô 2.6 Phân tích monosacrit HPLC Bảng 2: Thành phần protein (%) phân số S.platensis với nồng độ sinh khối 57,02 ± 2,2% Để đánh giá thành phần có giá trị PSP nguyên chất chiết xuất, việc phân tích monosacarit khơng Phương Nước Bazơ Siêu Đóng cần thiết để phân tích HPLC Các quy trình thí pháp chiết nóng kiềm âm băng-tan nghiệm thực công bố (Nguyen et al., 2020) xuất băng Kết thảo luận 3.1 Khai thác tinh chế PSP PSP thô ,mg 27 25 22.5 24.25 Trước đánh giá hoạt động PSP chiết xuất 100g-1 trình xây dựng polysacarit hoạt động chống oxy hóa, liệu dịch chiết ghi lại để tính PSP nguyên 3.4 2.3 3.1 2.65 hiệu trình trích xuất PSP thơ theo phương trình kết Bảng Tương tự chất , % vậy, thành phần PSP nguyên chất xác định từ q trình tinh chế PSP thơ Sự khác biệt bốn phương 3.2 Thành phần monosacarit pháp trích xuất chắn làm tăng hiệu q trình tinh chế PSP thơ phụ thuộc vào PSP thô chiết Dựa Nguyen et al xuất năm 2020, xuất PSP chiết xuất xác định HPLC để làm sáng tỏ thành phần monosacarit xây dựng PSP Bảng 1: Thành phần PSP chiết xuất PSP (Nguyễn cộng sự, 2020) Dữ liệu phân tích tinh chế monosacarit ban đêm Bảng xyloza ribose thám tử bốn phương Theo Wang et al công bố vào năm 2018, hiệu pháp chiết xuất Hơn nữa, thành phần Glucose không chiết xuất lyse giá trị cao phân biệt phương pháp chiết xuất cao so với PSP túy với hàm lượng PSP 10,8% (Wang et al., monosacarit khác So với nghiên cứu trước đây, 2018) Một ví dụ khác thành phần tổng lượng hợp chất Glucose nghiên cứu phát đường PSP đưa ấn phẩm cao hơn, ví dụ, Wang et al (2018) tìm thấy thành Markou cộng sự, 2012) với hàm lượng carbohydrate phần glucose mức 21,3% so với 10% Trong đó, kết nghiên cứu trình monosacarit khác Shekaram cộng sự, (1987) bày khía cạnh khác chiết xuất, PSP tinh khiết cao phát hầu hết hợp chất mức 75,1% (Shekharam, kế thừa cho phương pháp trích xuất đóng băng Venkataraman, & Salimath, 1987) Trong đó, Glucose Hiệu việc khai thác để thu PSP thơ tìm thấy Bảng lên tới 80%, cho thấy phương pháp thể cao (Bảng 1), cho hàm lượng Glucosamine cao PSP nguyên chất thấy phương pháp chiết xuất phù hợp để thu hoạch Thành phần thứ hai tìm thấy Galactose, PSP nguyên chất theo quy trình sản xuất PSP an toàn phát tới 7,5% cho phương pháp chiết xuất kinh tế quy mô lớn nước nóng Kết cho thấy khía cạnh quan trọng sức khỏe người, thành phần glucose góp phần điều trị đau thấp khớp Bảng 3: Đặc tính polysacarit thơng qua hợp chất monosacarit Mặc dù nghiên cứu nhằm mục đích điều tra việc 3.3 Hoạt động chống oxy hóa chiết xuất PSP, thành phần protein xác định để so sánh với nghiên cứu khác trích dẫn Hàm lượng protein từ bốn phương pháp chiết xuất Bảng Lupatini et al công bố Phạm Thị Mỹ Yên Để đánh giá khả chống oxy hóa PSP nguyên PSP nguyên chất bao gồm đặc tính đặc biệt hoạt chất, axit ascobic sử dụng để so sánh với hợp động chống oxy hóa đánh giá thơng qua giá trị chất khác điều khiển từ nhà máy Với liệu phân tích, kết hoạt động chống oxy hóa bốn PSP IC50 so với axit ascobic túy chiết xuất từ bốn phương pháp giả định Hình Với dao động phương pháp Lời cảm ơn: Nghiên cứu hỗ trợ Sở Khoa trích xuất, PSP trích xuất cho thấy thay đổi nhỏ học Công nghệ Đà Nẵng thông qua hiệu ứng nhặt rác DDPH Như hiển thị Hình 1, PSP túy thể hoạt động Tài liệu tham khảo chống oxy hóa mạnh mẽ thông qua IC 780 biag mL- 60% So với bốn lần chiết, phương pháp đóng băng [1] Balci, F., & Özdemir, F (2016) Influence of shooting period and tìm thấy với hiệu vượt trội chiết xuất oxy oxy Với giá trị cao nồng độ PSP extraction conditions on bioactive compounds in Turkish green tea tinh khiết phương pháp chiết đông đặc, ức chế Food Science and Technology, 36(4), 737–743 trình oxy hóa DPPH kiểm tra có giá trị https://doi.org/10.1590/1678-457X.17016 với IC50 258,8 4) Kết cho thấy khả chống oxy hóa mạnh mẽ PSP nguyên chất chiết [2] Bradford, M M (1976) A Rapid and Sensitive Method for the xuất phương pháp đông lạnh so với Vitamine C Quantitation Microgram Quantities of Protein Utilizing the Principle of Trong đó, sản phẩm tự nhiên khác có khả Protein-Dye Binding Analytical Chemistry, 72, 248–254 chống oxy hóa hạt bắp cải tronchuda với IC50 https://doi.org/10.1016/0003-2697(76)90527-3 353 35g-1 (Pereira, Ferreres, Valentão, & Andrade, 2011), trà xanh với 0,48-1,16 mg DW mg-1 DPPH (Balci [3] Đào, N L A., Tiên, N T C., & Phú, T M (2018) Ảnh hưởng & zdemir, 2016) dung môi chiết tách đến hoạt tính chống oxy hóa cao chiết từ bột tảo Spirulina (Anthrospira platensis) Can Tho University, Journal of Hình 1: Khả chống oxy hóa PSP nguyên chất Science, 54(Thủy sả, 218 https://doi.org/10.22144/ctu.jsi.2018.056 nội dung 780 biag mL-1 bốn phương pháp chiết xuất; DPPH gốc tự phản ứng với polysacarit [4] Dong, T., Nguyen, P., Tuan, C., Nguyen-sy, T., Ngoc, T., & Tran, T (2020) Utilization of microalgae for self-regulation of extracellular giải phóng hydro polymeric substance production Biochemical Engineering Journal, Bảng 4: IC50 PSP nguyên chất từ bốn phương pháp 159(May), 107616 https://doi.org/10.1016/j.bej.2020.107616 chiết xuất thành axit ascobic [5] Dubois, M., Gilles, K A., Hamilton, J K., Rebers, P A., & Smith, F (1956) Colorimetric Method for Determination of Sugars and Related Kết luận Substances Analytical Chemistry, 28(3), 350–356 Nghiên cứu thực khía cạnh khác https://doi.org/10.1021/ac60111a017 chiết xuất polysacarit từ tảo Spirulina platensis dựa [6] Hồng, T., Chính, L V., Cường, L H., Thị, T., Hằng, N., Nghị, Đ H., nghiên cứu trước Kết … Vi, C N (2013) Đánh giá hoạt tính sinh học cú polysaccharide hiệu việc chiết xuất PSP thô nguyên chất hợp chất tách chiết từ nấm Hương ( Lentinus edodes ), 35(4), đạt cao so với phương pháp họ, đặc biệt 445–453 phương pháp đóng băng Điều mang lại lợi nhuận cho việc sản xuất polysacarit toàn cầu từ [7] Kedare, S B., & Singh, R P (2011) Genesis and development of S.platensis áp dụng phương pháp chiết xuất đơn DPPH method of antioxidant assay Journal of Food Science and giản, kinh tế việc vận hành quy trình Hơn nữa, Technology, 48(4), 412–422 https://doi.org/10.1007/s13197-011-0251-1 [8] Kurd, F., & Samavati, V (2015) Water soluble polysaccharides from Spirulina platensis: Extraction and in vitro anti-cancer activity International Journal of Biological Macromolecules, 74, 498–506 https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2015.01.005 [9] Lupatini, A L., de Oliveira Bispo, L., Colla, L M., Costa, J A V., Canan, C., & Colla, E (2017) Protein and carbohydrate extraction from S platensis biomass by ultrasound and mechanical agitation Food Research International, 99, 1028–1035 https://doi.org/10.1016/j.foodres.2016.11.036 [10] Markou, G., Angelidaki, I., & Georgakakis, D (2012) Microalgal carbohydrates: An overview of the factors influencing carbohydrates production, and of main bioconversion technologies for production of biofuels Applied Microbiology and Biotechnology, 96(3), 631–645 https://doi.org/10.1007/s00253-012-4398-0 [11] Pereira, D M., Ferreres, F., Valentão, P A., & Andrade, P B (2011) Brassica Seeds: Metabolomics and Biological Potential Nuts and Seeds in Health and Disease Prevention, 83–91 https://doi.org/10.1016/B978-0-12-375688-6.10009-X [12] Qu, C., Yu, S., Luo, L., Zhao, Y., & Huang, Y (2013) Optimization of ultrasonic extraction of polysaccharides from Ziziphus jujuba Mill By response surface methodology Chemistry Central Journal, 7(1), https://doi.org/10.1186/1752-153X-7-160 [13] Rehakova, Z., Koleckar, V., Cervenka, F., Jahodar, L., Saso, L., Opletal, L., … Kuca, K (2008) DPPH radical scavenging activity of several naturally occurring coumarins and their synthesized analogs measured by the SIA method Toxicology Mechanisms and Methods, 18(5), 413–418 https://doi.org/10.1080/15376510701511448 [14] Shekharam, K M., Venkataraman, L V., & Salimath, P V (1987) Carbohydrate composition and characterization of two unusual sugars from the blue green alga Spirulina platensis Phytochemistry, 26(8), 2267–2269 https://doi.org/10.1016/S0031-9422(00)84698-1 [15] Võ Hoài Bắc, Trần Thị Vân Anh, Nguyễn Thị Mai Phương et al (2018) Nghiên cứu tách chiết tác dụng tăng cường miễn dịchcủa Polysaccharide từ thuốc Xuân Hoa PSEUDERANTHEMUM, 16(2), HỘI NGHỊ TỔNG KẾT HOẠT ĐỘNG SINH VIÊN NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ NHÓM SRT NĂM HỌC 2019-2020 327–335 (2012) Comparison of the therapeutic effects of extracts from Spirulina platensis and amnion membrane on inflammation-associated corneal [16] Wang, B., Liu, Q., Huang, Y., Yuan, Y., Ma, Q., Du, M., … Cai, Y neovascularization International Journal of Ophthalmology, 5(1), 32– (2018) Extraction of Polysaccharide from Spirulina and Evaluation of 37 https://doi.org/10.3980/j.issn.2222-3959.2012.01.07 Its Activities Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2018 https://doi.org/10.1155/2018/3425615 [19] Yang, L., Wang, Y., Zhou, Q., Chen, P., Wang, Y., Wang, Y., … Xie, L (2009) Inhibitory effects of polysaccharide extract from [17] Wu, X., Li, R., Zhao, Y., & Liu, Y (2017) Separation of Spirulina platensis on corneal neovascularization Molecular Vision, polysaccharides from Spirulina platensis by HSCCC with ethanol- 15(September), 1951–1961 ammonium sulfate ATPS and their antioxidant activities Carbohydrate Polymers, 173, 465–472 https://doi.org/10.1016/j.carbpol.2017.06.023 [18] Yang, L L., Zhou, Q J., Wang, Y., Gao, Y., & Wang, Y Q