Trang 1 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHONSAVANH INTHAPASIRD PHÂN LẬP, XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH ỨC CHẾ TẾ BÀO UNG THƢ CỦA HỢP CHẤT TRONG CỦ LOÀI TRỌNG NÂU PAR
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHONSAVANH INTHAPASIRD PHÂN LẬP, XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH ỨC CHẾ TẾ BÀO UNG THƢ CỦA HỢP CHẤT TRONG CỦ LOÀI TRỌNG NÂU (PARIS POLYPHYLLA) TẠI VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC THÁI NGUYÊN - 2022 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHONSAVANH INTHAPASIRD PHÂN LẬP, XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH ỨC CHẾ TẾ BÀO UNG THƢ CỦA HỢP CHẤT TRONG CỦ LOÀI TRỌNG NÂU (PARIS POLYPHYLLA) TẠI VIỆT NAM Ngành: Hóa hữu Mã số: 8440114 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS PHẠM VĂN KHANG THÁI NGUYÊN - 2022 LỜI CAM ĐOAN Trải qua trình nghiên cứu tài liệu cộng với nỗ lực thân suốt trình tiến hành thực nghiệm, cơng trình nghiên cứu tơi đến hồn thành Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình nghiên cứu khác Thái Ngun,ngày 23 tháng năm 2022 Học viên Khonsavanh INTHAPASIRD i LỜI CẢM ƠN Với thành công đạt q trình nghiên cứu, tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới PGS TS Phạm Văn Khang – người th y tin tưởng giao đ tài, tận tình hướng d n, động viên tạo u kiện thuận lợi, tài trợ toàn kinh ph thực luận văn gi p đ suốt trình học tập, nghiên cứu thực luận văn Đồng thời, xin gửi lời cảm ơn tới th y cô giáo học viên Cao học K28 phịng th nghiệm Hóa Hữu tạo u kiện thuận lợi gi p đ tơi hồn thành kế hoạch nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn em sinh viên nghiên cứu đ tài khoa học v hợp chất thiên nhiên cộng tác với trong việc tiến hành th nghiệm thuộc đ tài luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn tới Ban Giám hiệu nhà trường, Ban lãnh đạo khoa Hóa học phòng Đào tạo (bộ phận sau Đại học) – Trường Đại học Sư phạm – Đại học Thái Nguyên tạo u kiện thuận lợi cho tơi hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, tháng năm 2022 Học viên Khonsavanh INTHAPASIRD ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN ………………………………………………………………i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DÙNG TRONG LUẬN VĂN iv DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH, SƠ ĐỒ .vi MỞ ĐẦU .1 Tính cấp thiết đ tài .1 Mục tiêu đ tài CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN .3 1.1 Khái quát v loài Trọng nâu .3 1.1.1 Tên khoa học 1.1.2 Phân loại đặc điểm thực vật chi Paris 1.1.3 Phân bố 1.1.4 Một số cơng dụng lồi P polyphylla 1.2 Tình hình nghiên cứu hoạt t nh sinh học loài chi Paris 1.2.1 Hoạt t nh chống ung thư 1.2.2 Hoạt t nh chống oxi hoá 1.2.3 Hoạt t nh kháng khuẩn 1.2.4 Hoạt t nh kháng virus 1.2.5 Hoạt t nh chống Leishmania .10 1.2.6 Hoạt t nh tẩy giun sán 10 1.2.7 Rối loạn phụ khoa .10 1.2.8 Hoạt t nh ức chế enzyme tyrosinase 10 1.3 Tình hình nghiên cứu thành ph n hố học lồi chi Paris 25 1.3.1 Các hợp chất saponin spirostan 26 1.3.2 Các hợp chất saponin furostan 27 iii 1.3.3 Thành ph n hóa học loài P polyphylla 28 CHƢƠNG 2: THỰC NGHIỆM 33 2.1 Hóa chất thiết bị phân lập 33 2.1.1 Hóa chất 33 2.1.2 Hóa chất tế bào dùng để thử hoạt t nh sinh học .33 2.1.3 Thiết bị 34 2.2 Phương pháp xử lý m u thực vật, chiết tách xác định cấu tr c chất phân lập 34 2.2.1 M u nghiên cứu xử lý m u thực vật 34 2.2.2 Sơ đồ chiết xuất 35 2.2.3 Xác định cấu tr c chất 35 2.3 Phương pháp thử hoạt t nh gây độc tế bào ung thư 35 2.3.1 Vật liệu hóa chất .35 2.3.3 Phương pháp xác định t nh độc tế bào ung thư (cytotoxic assay) [60] 36 2.4 Phân lập, tinh chế hợp chất 37 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 3.1 Kết phân lập hợp chất .39 3.2 Kết phân lập hợp chất .45 3.3 Kết nghiên cứu hoạt t nh độc tế bào dòng tế bào ung thư MCF7 49 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 51 Kết luận 51 Kiến nghị .51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DÙNG TRONG LUẬN VĂN 13 C-NMR : 13C-Nuclear Magnetic Resonance : Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C H-NMR : 1H-Nuclear Magnetic Resonance : Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H ESI-Ms : Electron Impact Mass Spectroscopy : Phổ khối lượng HMBC : Heteronuclear multiple - Bond Correlation : Phổ tương quan hai chi u H-C HSQC : Heteronuclear Spectroscopy - Quantum Coherence : Phổ tương tác C-H SEM : Scanning Electron Microscope : K nh hiển vi điện tử quét MS : Mass spectrometry : Phổ khối lượng IC50 : Inhibitory Concentration 50% : Nồng độ ức chế 50% phát triển EC50 : Effective Concentration 50% : Nồng độ 50% tác dụng tối đa MIC : Minimum Inhibitory Concentration : Nồng độ ức chế tối thiểu TSSAP : Tổng saponin steroid TSSR : Tổng saponin steroid thân rễ DEN : Diethylnitrosamine NF-κB : Nuclear factor kappa-B : Yếu tố nhân kappa-B SUV : Standardized Uptake Value : Giá trị hấp thu tiêu chuẩn hoá iv MTT : 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide VEGF : Vascular endothelial growth factor : Yếu tố tăng trưởng nội mạc mạch máu VEGFR2 : Vascular endothelial growth factor receptor : Yếu tố tăng trưởng nội mạc mạch máu thụ thể IKKα/β : Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase α/β : Chất ức chế yếu tố hạt nhân kappa-B kinase α/β UV : Ultraviolet : Tia tử ngoại (Tia cực t m) TLTK : Tài liệu tham khảo vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Hoạt t nh sinh học dịch chiết thô P polyphylla .11 Bảng 1.2 Hoạt t nh sinh học số hợp chất phân lập từ loài P polyphylla 17 Bảng 1.3 Cấu tr c hợp chất ch nh P polyphylla .29 Bảng 2.1 Các hóa chất sử dụng trình phân lập hợp chất .33 Bảng 2.2 Hóa chất tế bào dùng để thử hoạt t nh sinh học .33 Bảng 2.3 Các thiết bị sử dụng trình phân lập .34 Bảng 3.1 Số liệu phổ 13C-NMR chất hợp chất tham khảo 39 v DANH MỤC CÁC HÌNH, SƠ ĐỒ Hình 1.1 Hình ảnh lồi P polyphylla Hình 1.2 Hình vẽ mơ tả lồi P polyphylla Hình 1.3 Sự chuyển hoá saponin steroid chi Paris 27 Hình 1.4 Các saponin furostan chi Paris 28 Hình 3.1 Phổ 13C-NMR chất .39 Hình 3.2 Phổ 1H-NMR chất 41 Hình 3.3 Phổ HSQC chất 42 Hình 3.4 Sự tương quan H→C chất (HMBC) 43 Hình 3.5 Phổ khối lượng chất 43 Hình 3.6 Công thức cấu tạo chất (Anemarrhenasaponin III) 44 Hình 3.7 Phổ 13C-NMR chất .45 Hình 3.8 Phổ 1H-NMR chất 46 Hình 3.9 Phổ HSQC chất 47 Hình 3.10 Sự tương quan H→C chất (HMBC) 48 Hình 3.11 Phổ khối lượng chất 49 Hình 3.12 Cơng thức cấu tạo chất (Timosaponin AIII) 49 Hình 3.13 Ảnh hưởng chất lên tăng sinh hình thái tế bào ung thư v MCF7 50 Sơ đồ 2.1 Sơ đồ chiết xuất 35 Sơ đồ 2.2 Sơ đồ phân lập hợp chất 38 vi