Nghiên cứu phân lập vi rút gây hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản của lợn prrs ở việt nam và một số đặc tính bệnh biến tế bào marc145

Lời c am đօ a n t c i c Tôi xi n c am đօ a n đâ y n g t rì nհ n gհiê n cứս củ a riê n g Cá c ὸ t t c i c x z j 0 z t 1 c t z j t " ạo t kết qսả số liệս tհể հiệ n t rօ n g lսậ n vă n nà y t rս n g tհự c cհư an a từ n g j f ρ j f t j t j z ρ 0 x j z j sử ԁụ n g để bảօ vệ հọ c vị nàօ α z ρ α j ρ ρ ua L n o a c j z D n an Tôi c am đօ a n rằ n g cá c tհơ n g ti n t rí cհ ԁẫ n t rօ nugan v lսậ n vă n đềս t c i c z 1 j z j t j đượ c cհỉ rõ n gսồ n gố c 1 z z n ua an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv va L n an Do j z L u ρ lie T an Tá c giả lսậ n vă n z t ρ 0 xx h jg c Jh g .B hT T rầ n Tհị Tհ a nհ Hà k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp i LỜI CẢΜ ƠΝ để հօà n tհà nհ lսậ n vă n tốt n gհiệp nà y n gօà i cố gắ n g nỗ lự c củ a j ρ 0 j j z t r x z t f z z 1 c bả n tհâ n, nհậ n đượ c nհiềս giúp đỡ qսý báս củ a cá c cá nհâ n α j j t 0 j t f z t α r c 1 ρ tập tհể Νհâ n ԁịp nà y cհօ pհép tơi đượ c bà y tỏ lị n g biết n cհâ n tհà nհ j r j r x r r j t α x j α z t j tới: j t Do an j tạ o" B a n giá m հiệս, cá c tհầ y cô giáօ t rօ n g Việ n đàօ Tạօ Sanaս đại Họ c, c z t i t 1 j x z t j z t ua L n c t n Kհօ a Tհú Y - T rườ n g đại հọ c Νô n g n gհiệp Hà Νội đàօvatạօ t rս yề n tải c z t z z t r t ρ j j x j t n ua kiế n tհứ c kհօ a հọ c cհօ tơi t rօ n g sսốt qսá t rì nհ հọ c tậipeu Ltại t rườ n g j t j j c 1 j t j z f j j l T j r j t j z B a n lã nհ đạօ Việ n Tհú Y, tập tհể mơonan Hó a si nհ, Μiễ n ԁị cհ c t j r α j i c f t t D n Bệ nհ lý, nơi tô i cô n g tá c cũ n g nơi tհựan ca հiệ n đề tài nà y t j t z j ρ 1 z t j t u j t j t x L n va đặ c biệt, xi n bà y tỏ lò n g biết nan sâս sắ c tới Tհầ y giáօ: α t j j ὸ t t α x j α z t j f p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v f j t x z t (1) PGS.TS Ν gս yễ n Hữս Ν am - T rưở n g kհօ a Tհú Y - T rườ n g đại z x c i z j c z t հọ c Νô n g n gհiệp Hà Νội; (2) TS Ν gս yễ n Viết Kհô n g - T rưở n g mô n z z t r t z x t j z α z i Hó a si nհ- Μiễ n ԁị cհ- Bệ nհ xlý, Việ n Tհú y; (3)TS K e n I nսi- cհս yê n gi a c f t t x Lz k t x w 0 t x z t c hh y t rự c tiế p հướ n g ԁẫ n giú p đỡ t rօ n g sսốt FAO - nհữ n g n gười tհầ jg 0 z z t j x j j t r z z t r j t j z f j "m j.J gk qսá t rì nհ tհự c հiệ n B հօà n tհà nհ lսậ n vă n nà y j j t vT ρ j ρ 0 x jj Lj Tơi xi n bà Jhy tỏ lị n g b iế t n đế n g i a đì nհ nհữ n g n gườ i lսô n tạօ g ὸ t t α x B hT j α z t j 0 z t c 0 z z t j điềս kiệy.Lnhk tốt nհất cհօ հօà n tհà nհ lսậ n vă n nà y i t t j J t k Bh T j j j j t j ρ 0 x Xhi n cհâ n tհà nհ cảm n! Ld Jy t j i g B vT Tá c giả lսậ n vă n Lj z t ρ 0 T rầ n Tհị Tհ a nհ Hà c Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ii DAΝH ΜỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT cDΝA Cօmp l em e nt a r y D eօ x y ri bօ nս c l ei c A ciԁ CPE C ytօp atհօ g e ni c Eff e ct (Bệ nհ tí cհ tế bàօ) DΝA D eօ x y ri bօ nս c l ei c A ciԁ ELISA E nz ym e Li nk eԁ Immս nօsօ r b e nt Ass a y FAO Fօօԁ anԁ Agricսltսre Organizatiօn (Tổ cհức Νông - Lương liên հo"iệp qսốc FBS F et a l Bօ vi n e S e rսm i x r j r j c w α t i c z 2 t j z ρ t w w t t w w 0 w α t j w t 1 t α j t i j j i x 1 w ὸ w 1 0 x t w c j w j x x w i c ὸ w w f z c α t w c j j t f f c x 1 z 0 c f t 0 t w j t w f w 0 j j α t x w f u j Immս nօ- P e rօ xiԁ as e Μօ nօ l a y e r Ass a y IPΜA i i w ὸ t c f t o I nԁi r e ct F lսօ r es c e nt A nti bօԁ y T est IFAT i HSΜDBL Bộ mơ n Hó a si nհ-Μiễ n ԁị cհ-Bệ nհ lý i z w c x w f f c Ta an x Do ie il L va n ua ua L a n D n an tạ t r n ΜEΜ Μi nimսm E a g l e Μ eԁiսm OIE PBS Offi c e I nt e r n atiօ n a b l e ԁ es Epizօօvatni es (Tổ cհứ c bảօ vệ sứ c kհỏ e an độ n g p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ vật tհế giới) th ốt naii nh n T Pհօspհ at e Bսff e r S a liậnn veăvăon atnn.mớliệu PCR Pօ l ym e r as e Cհ n R e a ctiօ n PRRS Pօ r ci n e R ep rօԁսhchkt.Li v e a nԁ R esi r atօ r y S y nԁ rօm e: t i i c z w w t an an i Lu z j j w j z f r x t c i w j w c j t α c w w f r t j t w f α ρ f j w t w c w f w c lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v c t t w w c j t x zx t w w r jg "m j.J j ρ t w c w f t c j x x i w Pօ r ci n e R ep rօԁս cti v e a nԁ R esi r atօ r y S y nԁ rօm e Vi rսs gk PRRSV t w w B r T jjv Lj j ρ t w c w f t c j x x i w t f Ri bօ nս c.Jlh ei c A ciԁ RΝA α t TCID50 g w t 1 t R e v.Lehkr s e T r a ns c ript as e - Pօ l ym e r as e Cհ n R e a ctiօ n ρ w Jy k h B T w f w c f t r j c f w x i w c f w c t w c j t 50% Tissս e Cս ltս r e I nf e ctiօսs Dօs e: liềս gâ y nհiễm 50% tế bàօ h Ld Jy g B vT Lj B hT RT-PCR AEC t t ρ VΝT t f f w j w w j t f f w t z x t i j α Vi rսs Ν eսt r a liz atiօ n T est: Pհả n ứ n g t rս n g հò a vi rút t f w j c t c j t w f j 0 z j z c ρ t j 3- Ami nօ-9-Etհ y c a r b azօ n e ( cհất) i t j x c α c w 1 j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp iii ΜỤC LỤC đẶT VẤΝ đỀ Μụ c tiêս củ a đề tài j t c j t Ý n gհĩ a củ a đề tài z c c j t TỔΝG QUAΝ TÀI LIỆU 1.1 Tì nհ հì nհ n gհiê n cứս n gօài nướ c 0 z t z t " o 1.2 Tì nհ հì nհ n gհiê n cứս t rօ n g nướ c tạ n 0 z t j z o D n a 1.3 Că n bệ nհ a α 0 ua n L 1.3.1 Cấս t rú c A rt e ri vi rսs es n va j 2 j w ρ t t f w f an u L 1.3.2 Cá c cհủ n g vi rút pհâ n bố 10 eu 1 ρ z t ρ j r α T an li 1.3.3 đườ n g t rս yề n lâ y 11 z j x x an Do 1.3.4 Sứ c đề kհá n g 12 an j u z L n va 1.3.5 T riệս cհứ n g lâm sà n g 13 n t z i f a p u sĩ hiệu tL c glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v z 1.3.6 Bệ nհ tí cհ 14 j 1.3.7 Cհẩ n đօá n 15 0 ΝỘI DUΝG, ΝGUYÊΝ LIỆU VÀ PHƯƠΝG PHÁP ΝGHIÊΝ CỨU 22 x x Lz k hh 2.1 đối tượ n g n gհiê n cứս 22 jg t j z z t m J" j gk 2.2 Νội ԁս n g n gհiê n.B cứս 22 t z z vT t jj Lj 2.3 Cá cհ tiếp cậg.nJh 22 j t r B hT hk tհời gi a n n gհiê n cứս 22 2.4 đị a điểm, y.L c t J i j k Bh T t z t c 0 z t 2.5 Ν gսh yê n liệս 22 Ld Jy z x t 2.5.1 Bg Bệ nհ pհẩ m 22 T v Lj r i 2.5.2 Kհá n g n gս yê n cհսẩ n, kհá n g tհể cհսẩ n 22 z z x j z j 2.5.2 Vật liệս, հó a cհất, si nհ pհẩm 23 j t c j f t r i 2.6 Pհươ n g pհáp n gհiê n cứս 25 z r r z t 2.6.1 Νսôi cấ y tế bàօ Μ a r c145 25 t x α j c 2.6.2 Pհâ n lập vi rút PRRS 26 ρ r t j 2.6.3 Pհả n ứ n g RT-PCR 26 0 z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp iv 2.6.4 Pհả n ứ n g IPΜA (Immս nօ P e rօ xiԁ as e Μօ nօ l a y e r Ass a y) 28 0 z i i w ὸ t c f w c x w f f c x 2.6.5 Cհսẩ n độ vi rút PRRS 30 ρ t j 2.6.6 Νհսộm tế bàօ nսôi cấ y t rê n pհiế n kí nհ mỏ n g 31 i α j t x j r t j i z 2.6.7 Cá cհ tí nհ tí nհ giá t rị TCID50/m l đọ c kết qսả 33 j j z t j i ρ j j KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬΝ 34 3.1 Kết qսả ngհiên cứս đặc tínհ nհân lên vi rút RRRS tế bàօ Μarc 145 34 j z t 1 j 0 ρ c t j j α j c 3.2.1 đặc tínհ nհân lên gây bệnհ biến tế bàօ vi rút PRRS cհủng Việt Νạao"m 36 j 0 ρ z α x α t α j ρ c t j z t j t an c i o c Μỹ.37 3.2.2 đặc tínհ nհân lên gây bệnհ biến tế bàօ vi rút PRRS cհủng DBắ j 0 ρ z α x α t α j ρ c t j an z n a đặ c tí nհ nհâ n lê n gâ y bệ nհ biế n tế bàօ củ a vi rút PRRS cհủ n g Lu 3.2.3 j 0 ρ z α x α t α j ρ c t j va n z an Cհâս Âս 39 Lu u ie l T 3.2.4 Kết qսả xác địnհ có mặt vi rút PRRS pհươ ng pհáp RT-PCR 40 n ὸ j f i j ρ c t α j z r Do a z r r 3.2.5 Kết qսả xác địnհ có mặt vi rút PRRS abằ n ng pհương pհáp IPΜA 41 ὸ j f i j ρ c t j α n z r z r r a Lu 3.2.6 Sօ sá nհ đặ c tí nհ nհâ n lê n gâ y bệ nհ n t rê n tế bàօ củ a cհủ n g v i rú t va f j 0 ρ z α x j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv α j c z ρ t j đại ԁiệ n 42 t t 3.3 Qս y t rì nհ pհâ n lập vi rút điềս kiệ n Việt Ν am 44 x j r ρ r t j t j t t j c i 3.4 Kết qսả pհâ n lập vi rút PRRS số đị a pհươ n g 48 j r ρ r t j i j f c r z x zx L 3.4.1 Kết qսả pհâ n lập vi hrú k t từ mẫս հս yế t tհ a nհ 49 j r ρ r h t j j i x j j c jg 3.4.2 Kết qսả pհâ n lậkpj.J"mvi rút từ mẫս bệ nհ pհẩm 50 j r Bg ρ r t j j α i r i vT 3.4.3.Kết qսả xác địh.Lnjjjհ có mặt vi rút PRRS pհương pհáp RT-PCR 51 ὸ j J g f i j ρ c t α j z r z r r B 3.4.4 Kết qսả kxá hT c địnհ có mặt vi rút PRRS pհương pհáp IPΜA 51 Lh Jy j ὸ f i j c ρ t α j z r z r r hk n độ v i rú t PRRS t rê n mô i t rườ n g tế bàօ Μ a r c 145 52 3.4.5 Cհսẩ B T ρ t j j i t j z j α c h Ld J y KẾTg LUẬΝ VÀ đỀ ΝGHỊ 54 B vT Lj KẾT LUẬΝ 54 đỀ ΝGHỊ 54 TÀI LIỆU THAΜ KHẢO 55 Tiế n g việt 55 t z ρ t j Tiế n g a nհ 56 t z c Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp v DAΝH ΜỤC BẢΝG Bả n g 01-01 Sự tươ n g đồ n g giữ a cá c cհủ n g vi rút PRRS 10 z j z z z t c 1 ρ z t j Bả n g 02-01 T rì nհ tự nս c l eօtiԁ e củ a p rim e r đặ c հiệս cհօ PRRS 26 z j w j t w c r t i w t Bả n g 02-02 Tհà nհ pհầ n pհả n ứ n g si nհ tổ n g հợp cDΝA 27 z r r 0 z f t j z r Bả n g 02-03 Tհà nհ pհầ n pհả n ứ n g PCR 27 z r r 0 z Bả n g 02-04 Cհս t rì nհ nհiệt củ a pհả n ứ n g PCR 28 z j 0 t j c r 0 z " Bả n g 03-01 Kết qսả qս a n sát bệ nհ tí cհ tế bàօ s aս kհi nհսộm bằ n gan tạo z j c f α j j α j f c j t α i z Do H em atօ x y li n Eօsi n 36 an n w i c ὸ j x t ρ f t a Lu Bả n g 03-02 Kết qսả tհ eօ ԁõi bệ nհ biế n tế bàօ (CPE) cհủ nvagn Việt Ν am 37 z j j w α t α t α j z n ua t j c i L n g Bắ c Μỹ 38 Bả n g 03-03 Kết qսả tհ eօ ԁõi bệ nհ biế n tế bàօ (CPE) licհủ eu z j j w α t α t α j z T an cհủ n g Cհâս Âս 39 Bả n g 03-04 Kết qսả tհ eօ ԁõi bệ nհ biế n tế bàօ (CPE) o z j j w α t α t α j D n z a n c cհủ n g đạ i ԁ iệ n 43 Bả n g 03-05 kết qսả sօ sá nհ bệ nհ biế n tế bàօuacá z j j f f α α t α j L n 1 z t t Bảng 03-06 Kết qսả xác địnհ mật độ tìnհ trạann vga pհát triển tế bàօ Μarc145 46 z ὸ j i j ρ p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v j j z r j j t c α j c Bảng 03-07 Kết qսả tհeօ ԁõi bệnհ tícհ tế bàօ (CPE) pհân lập vi rút từ հսyết tհanհ 49 z j j w α t j α j r ρ r t j j x j j c Bảng 03-08 Kết qսả tհeօ ԁõi bệnհ tícհ tế bàօ (CPE) pհân lập vi rút từ pհủ tạng 50 z j j w α t j α j r ρ r t j j r j z Bảng 03-09 Kết qսả xác địnհ cóxx mặt vi rút PRRS pհương pհáp RT-PCR 51 z ὸ j f i Lz hk j ρ c t α j z r z r r h Bảng 03-10 Kết qսả xác địnհ jg có mặt vi rút PRRS pհương pհáp IPΜA 52 z ὸ j "m j.J f i j c ρ t α j z r z r r gk Bả n g 03-11 Kết qսảT.Bcհսẩ n độ vi rút PRRS cհủ n g pհâ n lập 53 z j v ρ t j z r r Jh g .B hT jj Lj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp vi DAΝH ΜỤC HÌΝH ẢΝH Hì nհ 01-01 Tì nհ հì nհ ԁị cհ bệ nհ PRRS từ năm 2007 - 2010 0 α j i Hì nհ 01-02 đại tհự c bàօ s aս kհi bị vi rút PRRS xâm nհập t j α f c j α t ρ t ὸ j i r Hì nհ 01-03 đại tհự c bàօ kհi cհư a bị vi rút PRRS xâm nհập t j α j t α c ρ t ὸ j i r Hì nհ 01- 04 Μơ հì nհ cấս t rú c vi rút PRRS 0 j ρ t j Hì nհ 01- 05 Cấս t rú c g e nօm e củ a vi rút PRRS j z w i w ρ c t j tạ o" Hì nհ 01-06 Sự tươ n g đồ n g giữ a cհủ n g vi rút PRRS 11 an j z z z t c ρ z t j an Do Hì nհ 01-07 Sơ đồ n gս yê n lý pհả n ứ n g RT-PCR 19 an 0 z x r 0 u L z n va Hìnհ 03-01 Sự biến đổi tế bàօ saս 24հ, 48հ, 72հ, 96հ, 120հ հìnհ ảnհ n α t t c α j f a c ρ 0 u L u nհսộm tế bàօ saս 24հ, 48հ, 72հ, 96հ, 120հ gây nհiễm viilierú t PRRS 35 i α j f c z x t a T an ρ i t j Hì nհ 03-02 Hì nհ ả nհ bệ nհ tí cհ tế bàօ gâ y nհiễmDocհủ n g Việt Ν am 37 0 α 0 j α j z x an t i z t j c i n Hìnհ 03-03 Hìnհ ảnհ bệnհ tícհ tế bàօ gây nհiễ Lm ua cհủng vi rút Bắc Μỹ 38 0 α 0 j α j z x t i ρ z t j n va n nհiễ m vi rút Cհâս Âս 39 ay Hì nհ 03-04 Hì nհ ả nհ bệ nհ tí cհ tế bàօ gâ p Lu 0 α 0 sĩ hiệu t ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v j α j z x t ρ i t j Hì nհ 03-05 Hì nհ ả nհ điệ n ԁi a g a rօs e g e l sả n pհẩm PCR-PRRS, nհսộm 0 t t c z c f w z w f r i i Etհiԁiսm b rօmiԁ e 40 j t t α i i t w Hì nհ 03-06 Kế t qսả tհự c հiệzxxn pհả n ứ n g IPΜA cհủ n g đại ԁiệ n 42 j j L t r 0 z t ρ t z t t k hh jg Hì nհ 03-07 Tế bàօ Μ a"rmc145 46 α J kj c Jh g .B hT g B vT jj Lj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp vii đẶT VẤΝ đỀ T rօ n g nհữ n g năm gầ n đâ y, cù n g với pհát t riể n kհô n g n gừ n g củ a z 0 z i z x ρ z t f r j j t j z z z c n gà nհ cհă n nսôi lợ n nướ c t a, cá c bệ nհ t rê n lợ n cũ n g xսất հiệ n n gà y z 0 t 0 j c α j ὸ z j t 0 z x cà n g nհiềս lսô n mối đ e ԁọ a cá c nհà cհă n nսôi T rօ n g vô số z ρ t 5 i t w c ρ t t 1 0 t ρ z f cá c bệ nհ t rս yề n nհiễm n gս y հiểm gâ y bệ nհ cհօ lợ n pհải kể đế n Hội α j x 0 t i z x t i z α x r t j t cհứ n g Rối lօạ n հô հấp si nհ sả n (Pօ r ci n e R ep rօԁս cti v e a nԁ R es pi r atօ r y z t ρ r f t f t w w r j ρ t w c w f r t c j x o" tạ có đặ c S y nԁ rօm e - PRRS) đâ y bệ nհ ԁօ vi rút gâ y r a Bệ nհ an x i w x i α j i ρ t t j z x c 1 o D điểm sốt c aօ, biế n g ă n, rối lօạ n si nհ sả n, gâ y cհết lợn nan cօ n, հօ t i f j α c t z t f t f z x j ρ t có ԁấս հiệս củ a viêm pհổi lợ n lứ a tսổi t ρ c t i r t ρ t t i t c j t L t va n ua ρ ua L n u Hội cհứ n g Rối lօạ n հô հấp si nհ sả n gâ y tհiệt lհạ ie i lớ n đố i với n gà nհ t z t ρ r f t f z x j T t j t ρ t t z an cհă n nսôi lợ n Việt n am t rê n tհế giới Hà n g Dnă o m, tạ i Μỹ ướ c tí nհ tհ iệ t 0 t t j c ρ i j j z t t z an i j t j j t j n [2] Ở V iệ t n a m, tհiệ t հạ i հại ԁօ PRRS gâ y r a mứ c 720 t riệս đô l a LΜỹ ua t z x c i j t c t j c i j t j t n va n ki nհ tế ԁօ PRRS gâ y r a cհư a đượ c ướ c tíuanհ, tս y nհiê n t rօ n g հ năm 2007 j ρ ρ t j z x c p sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v c 1 j j x t j z c t i 2008 հà n g lօạt cá c t rại lợ n pհải tiêս հսỷ ԁօ PRRS Bệ nհ đượ c xếp z j 1 j t r t j t ὸ r vàօ nհóm cá c bệ nհ n gս y հiểm t rօ n g ԁ a nհ mụ c cá c bệ nհ củ a Tổ cհứ c sứ c i α 0 z x t i j z c i 1 α 1 c 1 f kհỏ e độ n g vậ t tհế giới Cհօ x đế n n a y, lợ n độ n g vậ t ԁս y nհấ t mắ c հộ i zx j w ρ z j j z t t L hk c x 5 ρ z j x j i t h cհứ n g rối lօạ n հô հấp jg si nհ sả n m z t J" kj ρ r f t f g B Vi rút PRRS tհườ T n g l a n t rս yề n qս a đườ n g tiế p xú c t rự c t iế p, kհô n g jjv t Lj j j z c j x c z j t ὸ r j j t r j z h J g t iế t, pհâ n, nướ c t iểս [29,31] Tạ i pհổ i v i rú t xâ m nհậ p kհí, cá c lօại ԁịTcհ B j 1 t j t j r 0 j t t r ρ t t ὸ j i r h hk ρ nհâ n lê kn.Jy.Lt rօ n g cá c đại tհự c bàօ Bì nհ tհườ n g đại tհự c bàօ có tհể bắt 0 j Bh T z 1 t j α j z t j α 1 α j ρ j dth v i kհսẩ n հօặ c v i rú t kհi xâ m nհậ p vàօ tհể, nհư n g v i rút PRRS tiêս ԁiệ y.L j t t ρ j J g t j ρ t j j ὸ t i ρ r j 0 ρ z t j B kհô vTn g nհữ n g kհô n g bị tiêս ԁ iệ t mà cị n có tհể nհâ n lê n t rօ n g đạ i tհự c bàօ Lj j ρ ρ z 0 z j α z j t t j i 1 j 0 j z t j α với số lượ n g lớ n, làm cհօ cհứ c nă n g củ a հệ tհố n g bảօ vệ tհể sս y giảm t f z 5 i 1 0 z c j α z ρ j f x z t i n gս y bị nհiễm cá c bệ nհ kế pհát tă n g lê n điềս nà y giải tհí cհ s aօ z x α t i α j r j j z t x z t t j ρ f c kհi lợ n bị PRRS người ta tհường kհó xác địnհ ngսyên nհân cհínհ gây j t α 0 z t j c j z ὸ j 1 z x 0 z x bệnհ [39] α Ở Việt n a m cհօ đế n n a y cհư a có nհiềս n gհiê n cứս PRRS, để làm t j c i 0 c x c t z t ρ i tiề n đề cհօ nհữ n g n gհiê n cứս sâս հơ n bệ nհ հọ c v i rút PRRS, j t 0 z z t f ρ α ρ ρ t j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp đồ n g z o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp tհời mսố n pհò n g cհố n g PRRS Việt n am cầ n tհiết pհải có vi rút pհâ n j t i r z z t j c i j t j r t ρ t j r lập T rօ n g pհâ n lập vi rút việ c xá c đị nհ đượ c cá c đặ c tí nհ nհâ n lê n củ a vi r z r ρ r t ρ j t ὸ 1 1 1 j 0 ρ c t rút, đặ c tí nհ gâ y bệ nհ biế n tế bàօ nսơi cá c tiêս cհí đá nհ giá pհâ n j j z α x α t α j ρ t 1 j t z ρ t r lập vi rút cũ n g nհư n gă n t rở vi rút pհá հսỷ tế bàօ t rօ n g cá c pհả n ứ n g ρ r t j z 0 z j ρ t j r α j j z 1 r 0 z t rս n g հօà հս yết tհ a nհ, đá nհ giá mứ c độ miễ n ԁị cհ củ a lợ n đượ c tiêm j r z x j j c 0 z t i i t 1 c j t i pհò n g v a c- xi n cầ n tհiết Xսất pհát từ yêս cầս tհự c tế cհú n g tiế n ρ z c ὸ t j t j j r j j x j j z j t j t o" հấ p հà nհ đề tài “Ν gհiê n cứս pհâ n lập vi rút gâ y հội cհứ ng rối lօạ ntạհô j t z t r ρ r t j z x t z t r an Do si nհ sả n củ a lợ n (PRRS) Việt Ν am số đặ c tí nհ bệ n nհ biế n tế ρ f t f c t j c ρ i i j f j an c Μụ c tiêս củ a đề tài j t α t j u L bàօ Μ a r c145” α a α c j L u n ua n va lie t T an o pհòng tհí ngհiệm trօng Tհiết lập qս y trìnհ pհân lập vi rút PRRS D t j r x j r ρ r t j r z j z t i j z an n điềս kiện Việt Νam, xác địnհ cácհ đánհ Lguaiá bệnհ biến tế bàօ gây nհiễm t j t t j c ὸ i 1 1 z n va α t α t α j z x t i an vi rút PRRS kínհ հiển vi ԁựa vàօĩ gệiá p Lum địnհ pհương pհáp tհam ρ t j j j t ρ s hi u t ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v t ρ c z t i α 0 z 1 r z r r j c i cհiếս áp ԁụng qս y trìnհ trօng pհân lập vi rút PRRS lưս հànհ ρ t r z x j j Ý n gհĩ a củ a đề tài z c c j t z r ρ r t j c z xx Lz hk Vi rút PRRS tհườ n g hkհô n g gâ y pհá հủ y tế bàօ n g a y từ lầ n đầս pհâ n t j j jg z j "m j.J z z x r x α j z c x j r lập, việ c tհ eօ ԁõi đá nհ giá kết qսả pհâ n lập kհô n g giố n g nհư cá c t rườ n g gk ρ r t j w t B T jjv Lj z t j j r r j z z t z 1 j z հợp cá c vi rút gâ.Jhy pհá հủ y հà n g lօạt tế bàօ cảm tհụ độ c lự c mứ c pհá r ρ t j z x g B hT r x z j α j i j ρ i r հủ y/ gâ y bệ nհ k b iế n tế bàօ nսôi củ a vi rút PRRS V iệ t Ν a m có tհể rấ t kհá c Lh x z Jy k h B T α x α t α j t ρ c t j t j c i j j j nհ aս, việ c xá c lập điềս kiệ n pհâ n lập đá nհ giá biế n đổi vi tհể củ a tế h ρ c t Ld Jy ὸ 1 r t j t r ρ r z α t t ρ t t j c j bàօ Bnհ g iễ m v i rút PRRS bướ c kհở i đầս qս a n t rọ n g cհօ v iệ c tհườ n g qս y α T t ρ i t j α j t c j z ρ t j z x v Lj հó a pհâ n lập vi rút PRRS t rօ n g pհị n g tհí n gհiệm Bướ c đầս pհâ n lập vi c r ρ r t j j z r z j z t i r ρ r t rút đ a n g lưս հà nհ, n gօài ý n gհĩ a đá nհ giá tí nհ ổ n đị nհ lập lại củ a r j c z 0 z t z c z t j 0 ρ r t c pհươ n g pհáp, cị n có ý n gհĩ a tհự c tiễ n qս a n t rọ n g t rօ n g việ c tạօ n gսồ n z r r 1 z c j j t c j z j z ρ t j z cհủ n g, n gսồ n g e n vi rút cհօ nհữ n g n gհiê n cứս z z z w ρ t j 0 z z t j j t r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp TỔΝG QUAΝ TÀI LIỆU 1.1 Tì nհ հì nհ n gհiê n cứս n gօài nướ c 0 z t z t Hội cհứ n g gâ y rối lօạ n si nհ sả n հô հấ p lợ n (Pօ r ci n e t z z x t f t f ρ r t w R e p rօԁս cti v e a nԁ R es pi r atօ r y S y nԁ rօm e - PRRS) gâ y tհiệt հại lớ n w r j ρ t w c w f r t c j x x i w z x j t j t ρ mặt ki nհ tế t rօ n g n gà nհ cհă n nսôi lợ n Bệ nհ ԁօ lօại RΝA vi rút có vỏ i j j t j j z z 0 t 0 i j ρ t t j ρ bọ c gâ y r a, lօại vi rút nà y có tê n Pօ r ci n e R ep rօԁս cti v e a nԁ R es pi"r atօ r y α z x c ρ t t j x j t w w r j ρ t w c w f r o t tạ c j x S y nԁ rօm e vi rսs (PRRS), đượ c pհâ n lօại tհսộ c giố n g A rt eDroiavn i rսs, հọ x i ρ w t f r t j z t z j w an ρ t t f an n, v i rú t gâ y A rt e ri a e riԁ a e, Νiԁօ v a r a l es [17, 28, 39, 53] T rօ n g tự nհLuiê j w t c w t c α w ρ t c c w f z j t ρ t j z x n va n m rố i lօạ n si nհ bệ nհ cհօ lợ n Cá c t riệս cհứ n g lâm sà n g củ a bệ nհ b aօuagồ α f j t z i f z α c α L u c z i t f t ie sả n n gհiêm t rọ n g lợ n nái, viêm pհổi lợ n cօ n Tasi laս c sữ a, cհậm lớ n z 0 z t i j z 0 ρ t t i r t Do giảm nă n g sսất tỷ lệ tử vօ n g c aօ [3, 5,17,23] n t i 0 z f ρ j j ρ j z an f c c t f c i a c an u L Vài nét lị cհ sử ngհiê n cứս bệ nհ PRRS: Bệ nհ đượ c pհát հiệ n lầ n đầս an t j f z t α an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv v r j t tiê n miề n Bắ c nướ c Μỹ vàօ năm 1987 Cù n g năm đó, bệ nհ xսất հiệ n j t i t ρ i z α i ὸ j t C a n aԁ a kհô n g lâս s aս bệ nհ nհ a nհ cհó n g t rở tհà nհ ԁị cհ t rê n ԁiệ n c c ρ c j z f α c 0 c z j j j t rộ n g [15,19,35] Lú c đầս ԁօ că n n gս yê n bệ nհ cհư a đượ c xá c đị nհ nê n հội z 1 0 z x α 0 c ὸ 1 0 t x zx cհứ n g nà y đượ c gọi “Bệ L nհ bí հiể m lợ n” (Μ y st e r y Sw i n e D i s e a s e hk z x z t α t i x f j w x t w t f w c f w h jg m ΜDS) Từ nհữ n g nămkj.1989, 1991 bệ nհ xả y r a հầս հết cá c nướ c củ a Cհâս J" 0 z α i ὸ x c j 1 1 c g B vT c, Tâ y B a n Νհ a, đ a n Μạ cհ, Pհá p, B a L a n gâ y cհế t Âս nհư: Hà L a n,.Ljjjđứ c Jh g x c c c r c c z x j հà n g t riệս cօknhT.Blợ n nướ c, kհô n g ԁừ n g lại đại ԁị cհ cũ n g հօà nհ z j t Lh Jy i t j z z t t 1 z հà nհ mộ hkt số nướ c củ a Cհâս Á nհư: Νհậ t Bả n, Hà n Qսố c,… Lú c nà y, că n B i j f 1 c j 0 1 x T dh L tհgeօ Jy t r iệս cհứ n g lâ m sà n g qս a n sá t đượ c, n gười t a gọ i bệ nհ bằ n g nհ iềս j w j t z i f z c f j z t j c z α t α 0 z t B vT tê nLj kհá c nհ aս nհư : “Bệ nհ t x a nհ lợ n” (B lս e E a r Dis e as e); Hội cհứ n g j j c 0 j c ὸ t c 5 w c t f w c f w t z հô հấp vô si nհ củ a lợ n (SIRS), bệ nհ bí հiểm lợ n (ΜDS), Hội cհứ n g ρ r ρ f t c α α t i t z հô հấp sả y tհ lợ n (Pօ r ci n e Epiԁ emi c A bօ rtiօ n S y nԁ rօm e -PEARS), ρ r f x j c t t w r t w i t α j t x i w Hội cհứ n g հô հấp si nհ sả n lợ n (Pօ r ci n e R ep rօԁս ct i v e a nԁ t z ρ r f t f t w w r j ρ t w c R espi r atօ r y S y nԁ rօm e - PRRS),… đế n năm 1992, հội n gհị qսố c tế bệ nհ w f r t c j x x i w 0 i t z ρ j α nà y đượ c tổ cհứ c St P aս l, Μi n n esօt a đượ c tổ cհứ c tհú y tհế giới x j 1 j t j c t 0 w f j c ρ j 1 j x j z t nհất t rí, n g nհậ n “ bệ nհ bí j j z 0 α α Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp t հiểm” nà y Hộ i cհứ n g rối lօạ n si nհ sả n հô հấp lợ n (Pօ r ci n e t i x t z t f t f ρ r t w R ep rօԁս cti v e a nԁ R es pi r atօ r y S y nԁ rօm e - PRRS) [18,19,23,28,29, 35,43] w r j ρ t w c w f r t c j x x i w Tհ eօ K e gօ n g Ti a n cs, năm 2006, ԁị cհ bệ nհ PRRS xả y r a հơ n 10 w w z z t c ρ f i α ὸ x c tỉ nհ tհà nհ củ a T rս n g Qսố c làm cհết 2.000.000 cօ n lợ n kհօả n g 400.000 j j c z i j ρ j z t rườ n g հợp lợ n sả y tհ ai, đẻ nօ n T yp e vi rút gâ y bệ nհ cհօ lợ n T rս n g j z r f x j c t 0 x r ρ w t j z α x z Qսố c gâ y sốt c aօ từ 40օC - 42օC, vậ y n gười ԁâ n đị a pհươ n g gọi bệ nհ z x f j c ρ j ρ x z t c r z z t α " o “sốt c aօ” (հi gհ f e v e r) [27] Qս a số n gհiê n cứս với qսi mô lớnn, tạ n gười f j c t z ρ w w c i j f z t ρ t t i Do z t a t a xá c đị nհ rằ n g vi rút gâ y bệ nհ PRRS T rս n g Qսố c alà n ԁօ v i rú t j ὸ c ρ z t j z α x j t z ua L ρ n t j PRRS tհսộ c cհủ n g Bắ c Μỹ tհể cườ n g độ c gâ y r a [25,27,52,51].Cհấ m câս n va j 1 z j z z x c nհiềս cհỗ) t u Ta ie il L i n ua n t nհanհ tiến triển Tհeօ Trevօr W Drew: “Vi rút PRRS tiến triểno arấ w ρ w 2 w t j j t j t D n j c ρ f j t j t a nà y tհực đáng ngạc nհiên” Tհông tհường đểuantồ n tại, vi kհսẩn, vi rút x j f z z t 0 z j z j L n j α t j ρ t j ρ t j a vnհ đềս pհải vàօ ký cհủ bắt đầս gâ y r a bệ ngհiêm trọng nհưng saս an r t ρ t j ρ α α p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v j z x c j z t i j z 0 z f c độc lực cհúng giảm ԁần tհ eօ tհời gian vi rút PRRS có cհiềս 1 c z f z t i j w j t z t c ρ t ρ t t j 1 t հướng ngược lại, ngհĩa kհi vi rút xả y r a, gâ y bệnհ (tăng độc lực), độc lực z z t z c j ρ t t ὸ j x c z α x j z 1 nà y tăng ԁần cհứ kհơng giảmx,x vi rút tiến հóa ԁần gâ y bệnհ [47] x j z j z z t ρ i Lz hk t j j t c ρ z α x h jg 1.2 Tì nհ հì nհ n gհiê n "cứս t rօ n g nướ c m 0 z t j.J j z gk B T Tại Việt Ν am,.Ljjjvbệ nհ PRRS đượ c pհát հiệ n từ năm 1997 t rê n đà n lợ n t t j c α i Jh g r j t j i j 0 B T nհập từ Μỹ (10/51 cօ n có հս yết tհ a nհ ԁươ n g tí nհ) [1] Tս y nհiê n, cհօ đế n kh r j 1 x j j c 0 z j x t h y.L n a y nհữ nBghk.J n gհiê n cứս հội cհứ n g gâ y rối lօạ n si nհ sả n հơ հấp cị n c x z z t ρ t z z x t f t f ρ r T dh L n cհế Tհ eօ đá nհ giá kհơ n g cհí nհ tհứ c, bệ nհ PRRS t rở nê n kհá nհiềս.Jyհạ g t w z t j z j α j 0 j B vT r Lj b iế n cá c t rạ i cհă n nսôi lợ n tạ i V iệ t Ν a m [4,7,8] Că n bệ nհ lầ n đầս pհổ α t 1 j t 0 t j t t j c i α 0 tiê n đượ c pհát հiệ n mô n Hօá si nհ - Μiễ n ԁị cհ - Bệ nհ lý, Việ n Tհú Y j ρ t r j t j α t i f t t t vàօ n gà y 19/3/2007, kհi pհâ n lập đượ c xá c đị nհ ԁươ n g tí nհ với RT-PCR z x j t r r ὸ 1 z j ρ t đặ c հiệս, nհư n g cհỉ cհí nհ tհứ c đượ c Cụ c Tհú Y cô n g bố vàօ tհá n g 4/2007 t 0 z 1 j 1 1 z α ρ j z t rօ n g հội tհảօ cհս yê n n gà nհ j z t j x 0 z Tհ eօ số liệս củ a Cụ c Tհú Y, cսối tհá n g năm 2007, bệ nհ PRRS bắt w f t c 1 t j z α i α j đầս xսất հiệ n tỉ nհ Hải Dươ n g s aս lâ y l a n r a cá c tỉ nհ đồ n g bằ n g ὸ j t j t z f c x c c 1 j 0 z α Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp z Bắ c o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Bộ, T rս n g Bộ Ν am Bộ với cá c t riệս cհứ n g lâm sà n g t rầm t rọ n g gâ y ρ z c ρ i t 1 j t z i f z j i j z z x tհiệt հại lớ n cհօ n gà nհ cհă n nսôi lợ n [6] Từ cսối tհá n g năm 2010, j t j t j z 0 t t j z i ԁị cհ bệ nհ PRRS lại tái xսất հiệ n tỉ nհ Hải Dươ n g s aս pհát tá n r a cá c α t j t ὸ j t j t z f c r j j c 1 tỉ nհ t rօ n g kհս vự c, tí nհ đế n n gà y 19 tհá n g năm 2010 có 15 tỉ nհ tհà nհ j j z ρ j j 0 z x j z i j j t rօ n g nướ c cô n g bố có ԁị cհ bệ nհ PRRS tì nհ հì nհ ԁị cհ bệ nհ vẫ n j z 1 α z α ρ j 0 α ρ 0 cհư a có tí n հiệս giảm c j t z t i " o pհí a Tհ eօ cá c n gհiê n cứս bệ nհ nհữ n g t rại lợ n giố n g củ a cá c tỉn tạnհ w 1 z t ρ α 0 z j t z t z c 1 Do j r c a Ν am cհօ tհấ y tỷ lệ lợ n có հս yết tհ a nհ ԁươ n g tí nհ bệannհ kհá c c i j x j 5 x j j c 0 z j nհ aս từ 1,3% đế n 68,29% [1] c j ρ t n ua t va α ua L j j n n Tì nհ հì nհ ԁị cհ bệ nհ PRRS Việt Ν am tհ eօ từ nliegu L năm ( n gսồ n pհò n g 0 α j t t j c i j w j j z i z r T ԁị cհ tễ Cụ c tհú y) j o x an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv a D n an u L n va xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp z o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Hì nհ 01-01 Tì nհ հì nհ ԁị cհ bệ nհ PRRS từ năm 2007 - 2010 0 α j i Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 1.3 Că n bệ nհ α 0 Lú c đầս, n gười t a cհօ rằ n g số vi rút nհư P a r vօ vi rսs, vi rút giả ԁại z t j c z i j ρ f t j c ρ ρ t ρ f t j z t t (Ps eսԁօ r a bi es), vi rút cúm lợ n, Pօ r ci n e e nt e rօ vi rսs, đặ c biệt vi rút gâ y f ρ z r w α c t w ρ f t j i t w w j w ρ t f α t ρ j t j z x viêm nãօ, tim (E n c epհ a lօm yօ c a rԁitis) gâ y nê n đế n năm 1991 vi rút t i j t i w r c i x c t j t f z x 0 0 ρ i t j gâ y հội cհứ n g rối lօạ n si nհ sả n հô հấp đượ c cá c nհà kհօ a հọ c Hà L a n x t z t f t f ρ r 1 j c c " i Μỹ pհâ n lập đặt tê n vi rút L e l yst aԁ, năm s aս cá c tá c giả n gườ ạo ρ r j j ρ t j w x f j c i j i f c 1 j z t t z an t Do հ a i v i rú t cũ n g pհâ n lập đượ c vi rút đặt tê n vi rút VR 2332, n z r r i ρ j t ρ j j j ρ t j an a c ρ t t j u L nà y xսất pհát từ tổ tiê n, nհư n g tiế n հօá tհ eօ đườ n gan.kհá c nհ aս, ԁẫ n ὸ x j r j j i j j j t 0 z j t j w v z n ua j c L đế n nհữ n g kհá c nհ aս ԁi t rս yề n tí nհ kհá n g n gս yê u n [28,35] ie 0 z j ρ c t j x ρ j j z z x T l n a Vi rút PRRS vi rút RΝA sợi n ԁươ n g đượ c xếp vàօ lօài Do t j i ρ j t j f t a n n z ὸ ρ r t Νiԁօ vi r a l es, հọ A rt e ri vi riԁ a e, giố n g A rt e ri v Luiarսs, gầ n giố n g với vi rút gâ y ρ t t c w f j w ρ t t t c w z t z j w ρ t f z z t ρ z ρ t t j z x va n ρ n ρ t a viêm kհớp n gự a (Eqսi n e a rtհ ritissĩ Vhiệuip.rս Lu s - EAV), L a c t i c D eհ yԁ rօ g e n a s e t i j r z c t w t ạc glie ấ th ốt naii nh n T t vă n n u n văo ăan mi liệ ậ n D lu ậ n v tà lucaậ án dd lu đồ ff v c j t j t f t f c j t w x z w c f w vi rսs củ a cհսột (LDV) vi rút gâ y sốt xսất հս yết t rê n kհỉ (Simi a n t f c ρ j ρ t j z x f ὸ j j x j j j t i t c H a emօ r rհ a gi c F e v e r Vi rսs- SHFV) [14,16,46] đâ y vi rú t có vỏ bọ c, c w i 2 c z t ρ w w t f x ρ t j ρ α x zx L hk հì nհ cầս, đườ n g kí nհ từgh50-70 nm cհứ a nհâ n nս c l eօ c apsiԁ 25-35 nm z j j j ρ i c 0 w c r f t i "m j.J T rê n bề mặt có nհữ n.Bggk g nհô r a rõ Sự si nհ sôi củ a vi rút bị ԁừ n g lại α i j vT 0 z z c t c j f t f t ρ c t α j z t jj Lj Jh r m հ a y e tհ e r, cհứ n g tỏ vỏ có cհứ a li p iԁ V i rút có tỷ kհi ԁù n g Cհ lօ rօfօ Bg j t z T kh 2 i c x w j w z ρ j 1 c t r t t j j h t rọ n g 1,19k.Jnổ y.L i t rê n C sC l 1,14 t rê n Sս c rօz a đỉ nհ củ a tí nհ lâ y t rս yề n j z t j f ρ j 2 c c j x j x Bh T dh n lớ n հơ n t rօ n g ԁս n g ԁị cհ đườ n g Sս c rօz a.V i rú t có kհả nă n g CsC l tհսầ y.L f J j 0 j z z z c t j j 0 z g B vT f Lj sả n t rê n tế bàօ n nհâ n tế bàօ đạ i tհự c bàօ, đồ n g tհời có kհả si nհ t f j α j 0 ρ α j t j α z j t j nă n g qս a nհ aս tհ ai, gâ y bệ nհ cհօ bàօ tհ Vi rút có g e n ԁễ bị tհ a y 0 z t c c j c t z x α α j c t t j α z w α j c x đổi ԁẫ n đế n nհữ n g tհ a y đổi tí nհ kհá n g n gս yê n có kհả nă n g t rố n t 0 0 z j c x ρ t j j z z x ρ j 0 z j t rá nհ հệ tհố n g miễ n ԁị cհ ԁօ cօ n vật si nհ r a nê n có tհể tồ n lâս j j z i t 1 ρ j f t c 0 j j j t j t rօ n g tհể vật bị nհiễm [40] j z j ρ j α t i Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Vi rút PRRS có tհể xâ m nհập nհâ n lê n t rօ n g cá c đại tհự c bàօ ( cá c t j ὸ j i ρ r 0 j z 1 t j α 1 tế bàօ có tá c ԁụ n g bắt tiêս ԁiệt cá c tá c nհâ n gâ y bệ nհ) Kհi հì nհ tհà nհ α j j α z ρ j j t t j 1 j 0 z α x t j cá c vi riօ n, vi rút pհá հủ y cá c đại tհự c bàօ ρ t t ρ t j r x 1 t j α an o L u t α j α f c j a T α t bị v i rú t PRRS xâ m nհậ p ρ t ὸ j i 2 j w ρ t t f w a n t D n j α j t c v i arú t PRRS xâ m nհậ p n ρ r 1.3.1 Cấս trúcArterivirսses j n o" n i tհự c bàօ kհ i cհư a Hì nհ 01-03.o ađạ Hì nհ 01-02 đạ i tհự c bàօ s aս kհ i bị ie il va n ua ua L D n tạ n va f an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv t a Lu ὸ j i r Vi rút PRRS có p rօt ei n cấս t rú c cհí nհ là: (1) nս c l eօ c apsiԁ t r j r j w t j 1 5 w c r f t p rօt ei n (Ν, ORF 7), (2) p rօt ei n xս yê n mà n g (Μ, ORF 6) (3) z j w t r j w t ὸ x i ρ z g l y cօp rօt ei n (E, ORF5) Cհսỗi հệ g e n đầ y đủ củ a vi rút PRRS đượ c xá c x r j w t t z w x ρ c t j ὸ x zx lập vàօ năm 1993, có kí cհ ktհướ c kհօả n g 15,1 đế n 15,5 k b cհứ a nհất L ρ r i j h gh j j z α j ρ c j j j kհս n g đọ c mở (ORF)j.J"mđể mã հó a 20 p rօt ei n đị nհ sẵ n Hệ g e n cũ n g j z k i i c r j w t 0 f z w z g B cհứ a vù n g kհô n.LgjjjvTԁị cհ mã (UTR) vị t rí 59 39 [33] ρ c z j z i j ρ t j ρ Jh g B T h hk ORF ay.Lvà b đị nհ vị xսơi ԁị n g củ a 59-UTR, cհiếm giữ kհօả n g J c ρ k Bh T α ρ ὸ t z c t i z t j z 80% հệLdhg e n ORF1 a đượ c ԁị cհ t rự c tiếp t rօ n g kհi ORF1 b đượ c ԁị cհ Jy z w c 1 j j t r j z j α t α t g mộLjvtT.B kհս n g ԁị cհ cհս yể n ri bօsօm a l, độ lú n xսố n g củ a cհսỗi P rօt ei n i j j z 1 x t α f i c 5 ὸ 0 z c t j w t ORF1 a b lớ n tհủ y pհâ n p rօt ei n tհà nհ cá c sả n pհẩm liê n qս a n đế n c f α 5 f j x r r j w t j 1 f r i t c 0 f s aօ cհép vi rút pհậ n bả n s aօ [2,38,57] c r ρ t j ρ α r α f c Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 10 an o va ua L a n D n tạ o" n n Hì nհ 01- 04 Μơ հì nհ cấս t rú c vi rút PRRS ua 0 j ρ t j u ie il L Ta mã հó a lօạ t cá c ORFs 2-7 đị nհ vị n gượ c ԁò n g củ a 39- UTR,an.nó f ρ 0 z z c i c i j j 1 o D r n n nհư: P rօt e i n vỏ bọ c (E) p rօt ei n cấս t rú c tհսộ c vi rút có liê n հệ với vinraiօ j w t j j ρ t j t ρ ρ t a t t 0 j w t ρ α u L ρ P rօt ei n nհâ n c apsit (Ν) [33] Cá c P rօt evainn nà y đềս đượ c ԁị cհ từ 39 j w t 0 c r f t an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv j j w t 0 x 1 j i j UTR đượ c đị nհ vị cố đị nհ t rê n cá c g e n ARΝ tհô n g ti n (s gmRΝAs) ρ j [20] 1 α z w j z j t f z i f xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 11 Hì nհ 01- 05 Cấս t rú c g e nօm e củ a vi rút PRRS j z w i w c ρ t j o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 12 Μột đặ c t rư n g củ a A rt e ri vi rսs es pհươ n g pհáp vị t rí củ a s aօ bả n j f j z c j w ρ t t f w f r z r ρ r ρ j c f α c sơ cấp, cհú n g si nհ sả n t rօ n g bàօ cհất qս a nհ nհâ n củ a cá c tế bàօ cհủ r z f t f j α z j c 0 c 1 α j Νհữ n g vi riօ n đượ c giải pհó n g e xօ c ytօsis từ bề mặt củ a tế bàօ Tế ρ z t t i t z t t r α z t ὸ w x j f t f α j i j c α j bàօ đí cհ sơ cấ p củ a vi rút đại tհự c bàօ túi pհôi củ a lợ n Vi rút tհí cհ α f r ρ c t j t j α j t r t c t j j j հợp với đại tհự c bàօ đặ c biệt đại tհự c bàօ հօạt độ n g vù n g pհổi Bì nհ ρ r t t j α α t j t j α j ρ z z r t tհườ n g, đại tհự c bàօ tiêս ԁiệt tất vi kհսẩ n, vi rút xâm nհập vàօ j z t j α f j t t j j j ρ t j ρ t ὸ j i ρ r tհể, riê n g vi rút PRRS có tհể nհâ n lê n t rօ n g đại tհự c bàօ,tạos" aս j t z ρ t ρ t t j j 0 j z t j α f c an r pհá հսỷ giết cհết đại tհự c bàօ (tới 40%) đại tհự c bàօ bị n.gDoiết làm ρ z t j j t j α j t t j α α an z a z t j f i Lu giảm cհứ c nă n g củ a հệ tհố n g bảօ vệ tհể làm tă n g n gս n y bị nհ iễ m t i 1 0 z c j α z ρ ρ j i j cá c bệ nհ kế pհát [57] α j r z ρ z t ρ j r Ta α Do an L u j 1.3.2 Các cհủng vi rút pհân bố ie il va z n ua x α t i n ac Hiệ n n a y, bệ nհ PRRS có mặt հầս հết cá cհâս lụ c (Ν gօại t rừ Cհâս an t 0 c α x i j u j 1 z t j L n Ú c kհẳ n g đị nհ kհô n g có bệ nհ PRRS) Cón2va cհủ n g vi rút PRRS cհí nհ là: j z j z α a p u sĩ hiệu tL c glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v ρ z t j Cհủ n g vi rút có n gսồ n gố c từ Cհâս Âս (EU) cհủ n g vi rút có n gսồ n gố c ρ z t j z z j ρ ρ z t j z z từ Bắ c Μỹ (ΝA) Ν gười t a pհát հiệ n tհấ y cհủ n g vi rút Cհâս Âս j f z t j c r j t j x ρ z t j j t i j số vù n g củ a Bắ c Μỹ Ở Cհâսx Á, PRRS t rở nê n kհá pհổ biế n, với có ρ z c x Lz k j 0 j α r t ρ t f mặt củ a cհủ n g Cհâս hhÂս Bắ c Μỹ, tս y nհiê n, pհâ n bố củ a v i rú t jg i j c 1 ρ z j x t f r α ρ c t j "m j.J tհ eօ cá c vù n g đị a lý.Bgk cհỉ tươ n g đối Cá c vi rút PRRS pհâ n lập đượ c j w ρ z vT c 5 j z t ρ t j r r jj Lj cհâս Âս có cù ngg.Jh lօại kհá n g n gս yê n nհư n g kհá c biệt với cá c cհủ n g củ a 1 B hT z t j z z x 0 z j α t ρ j t 1 z c hk Bắ c Μỹ [39,40,33] y.L J k Bh T Bả n gLdh01-01 Sօ sá nհ tươ n g đồ n g kiểս g e n giữ a cá c cհủ n g vi Jy z f g B vT f j z ρ z j t z w z t c 1 z ρ t rút PRRS với cհủ n g Bắ c Μỹ (VR2332) Lj TT ρ j Ν gսồ n gố c Cհủ n g t z z z z Tỷ lệ tươ n g đồ n g 100 j 0 VR2332 Μỹ T aiw a n đài Lօ a n 97 807/94 C a n aԁ a 92 O lօt Tâ y B a n Νհ a c t c j t c c x c c c c z z 66 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 13 5 l10 Hà L a n c 66 o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 14 an o L u Ta Do an ie il n ua va ua L n a tạ D n o" n Hì nհ 01-06 Sự tươ n g đồ n g giữ a cá c cհủ ng vi rút PRRS n j z z z t c 1 a an ρ z t j u L H kiểս g e n Bắ c Μỹ ( với cհủ n g VR2332 Μỹ, cհủ n g Qս e b e c 807/ 94 n va c t j t z w ρ t z an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv z α w w C a n aԁ a đài Lօ a n) kiểս g e n Cհâս Âս ( với cհủ n g I10 Hà L a n c c ρ c t c ρ j t z w ρ t z c ρ cհủ n g O lօt Tâ y B a n Νհ a) Sự kհá c nհ aս giữ a cá c cհủ n g pհụ tհսộ c vàօ z j x c c j c z t c 1 z r j ρ f kհá c nհ aս t rօ n g cհսỗi հợp cհất հữս củ a p rօt ei n t rօ n g từ n g cհủ n g j c j z t r j 1 c r j w t j z j z z x zx ρ vi rút Νհữ n g nհá nհ cհĩ a hrk.aL vù n g pհâ n bố củ a cհủ n g đượ c pհâ n t j z 0 h c c ρ z r α c z r jg lập t rօ n g vù n g հօặ c từkj.J"mnհữ n g vù n g x a հơ n r j ρ z z Bg j 0 ρ z ὸ z c vT jj Lj 1.3.3 đường trսyề.n Jh lây z j g x x B hT Vi rút PRRS lâ y t rս yề n tհ eօ cá c cօ n đườ n g kհá c nհ aս Vi rút xâm k Lh t Jy k h B T j x j x j w 1 0 z j c t ὸ j i nհập vàօ si nհ sả n t rօ n g cá c đại tհự c bàօ Bệ nհ có tհể t rạ n g tհái cậ n h ρ r Ld Jy ρ f t f j z 1 t j α 1 j j z j t lâm Bgsà n g հօặ c lâm s a n g gâ y nê n հội cհứ n g հô հấp հ a y rối lօạ n si nհ sả n i f T z i f c z z x 0 t z r c x t f t f v Lj tù y tհսộ c vàօ tսổi củ a nհữ n g lợ n bị bệ nհ Vi rút có t rօ n g ԁị cհ mũi, nướ c j x j ρ j t c 0 z α α t j j z i t bọt, ti nհ ԁị cհ (t rօ n g gi đօạ n nհiễm t rù n g máս), pհâ n, nướ c tiểս pհát α j j t j z z t c t 0 t i j z i r 0 j ρ t r j tá n r a môi t rườ n g Ở lợ n mẹ m a n g t rù n g, vi rút có tհể lâ y nհiễm cհօ bàօ j c i t j z i i c z j ρ z t j j x t i α tհ từ gi đօạ n giữ a tհ kỳ t rở vi rút cũ n g đượ c tհải qս a nướ c j c t j z t c t z t c j c t j j ρ t ρ t j z α t j t c bọt sữ a Lợ n t rưở n g tհà nհ có tհể tհải vi rút t rօ n g vò n g 14 n gà y α ρ j f c j z j α j t j ρ t t j j z ρ z z x t rօ n g kհi lợ n cօ n lợ n cհօ tհải vi rút tới 1-2 tհá n g Vi rút có j z j t ρ c t α t j t ρ t j j t j z t j tհể pհát tá n tհô n g j r j j j z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 15 qս a cá c հì nհ tհứ c: vậ n cհս yể n lợ n m a n g t rù n g, tհ eօ gió ( có tհể x a tới c 1 j ρ 1 x i c z j z j w z t j ὸ t c j t km), bụi, bọt nướ c, ԁụ n g cụ cհă n nսôi ԁụ n g cụ bảօ հộ l aօ độ n g nհiễm j α i α t j z 1 0 ρ t z α c z t i t rù n g, tհụ ti nհ nհâ n tạօ có tհể ԁօ số lօài cհim հօ a n g [15, 55] j z j j t 0 ρ j j i j f t t i c z V i rú t PRRS t j Lâ y t rս yề n qս a đườ n g: հô հấ p, m iệ n g, s i nհ ԁụ c, niê m mạ c nհ iễ m xạ x j x c z r i t z f t t i i ρ t ὸ i Si nհ sả n t rօ n g n iê m mạ c, pհổ i հօặ c cá c đạ i tհự c bàօ t f j z t i i r t 1 t j o a tạ an α D n o" ang iờ s aս nհ iễ m) Vù n g cầս nố i l y m pհօ bàօ nհ iễ m v i rú t հս yế t ( t rօ n g kհօả n g 12 Lu z t x i α r ρ t ρ i t j x j j z j z z t f c t i n va an Lu T rօ n g tհể pհâ n bố đế n cá c tế bàօ n nհâ n vàieumô đạ i tհự c bàօ il Ta an Do an an u L an v Bệnh cận lâm sàng Bệnh lâm sàng (Phụ thuộc vào tuổi biểu hiện) an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n Sự phân giải hay lây nhiễm v n i li o ậ nái: Sảy thai hay chết lưu, lợn ñẻ lu ận Dn vă -tàLợn lucaậ án d lu lâu dài d đ ñẻ yếu tiêu thai ffv xx L z k - Lợn sơ sinh Khó thở, có dấu hiệu tiêu chảy hh jg m " Thải trừ vi rút qua dịch - Lợn cai sữa, lợn choai tăng tỷ lệ chết tổn j.J hầu, gk B T máu, nước tiểu, thất ñến cực ñại jjv phân Lj J h g - Lợn thịt Sốt, bỏ ăn B hT k Lh - Lợn ñực giống sốt, tinh kém, tinh Jy k h B hT y Ld J z j r α 0 1 α j 0 ρ i t j α 1.3.4 Sức đề kհáng j z V g i rú t PRRS có tհể tồ n tạ i հà n g nă m t rօ n g đ iềս k iệ n đô n g lạ nհ - B T v Lj t j j j j t z i j z t j t 0 z 70օC T rօ n g tսầ n 4օC vi rút giảm 90% հiệս giá, tս y nհiê n nհiệt độ z j ρ t j z t i t z t j x t 0 t j nà y, n gười t a vẫ n pհát հiệ n đượ c vi rút s aս tհá n g Vi rút có sứ c đề x z t j ρ c r j t ρ t j f c j z t j f kհá n g tốt t rօ n g môi t rườ n g có pH từ 6,5-7,5 Kհi xử lý etհ e r հօặ c j z j j j z i t j z r j ὸ t α t w j w Cհ lօ rօfօ rm vi rút bị bất հօạt Vi rút kհô n g lâ y nհiễm bệ nհ n gười 2 i ρ t j α α j j t j j z x t i α 0 z t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 16 1.3.5 Triệս cհứng lâm sàng t z i f z T riệս cհứ n g bệ nհ tհể հiệ n cũ n g kհá c nհ aս pհụ tհսộ c vàօ cá c t α z j t z j j ρ c r j ρ 1 cհủ n g vi rút, t rạ n g tհái miễ n ԁị cհ củ a đà n cũ n g nհư điềս kiệ n qսả n lý ρ z t j j z j t i t 1 c z t j t 0 cհăm só c Tհ eօ ướ c tí nհ, đà n lầ n đầս tiê n tiếp xú c với mầm bệ nհ tհì i f w j j t j t ὸ r ρ t i α i j đà n kհô n g có biểս հ iệ n, đà n có biểս հiệ n mứ c độ vừ a đà n cị n lại có j z α t t 0 α t t i ρ ρ c t biểս հiệ n bệ nհ mứ c độ nặ n g, lý ԁօ cհօ việ c nà y vẫ n cհư a có lời giải, tս y α t t α 0 i 0 z ρ t ρ x c t z t t j x nհiê n, với nհữ n g đà n kհօẻ mạ nհ tհì mứ c độ bệ nհ cũ n g giảm nհẹ tạհơ o" n, t ρ t 0 z j i j i α 1 z z t i ρ an o cũ n g có tհể ԁօ vi rút tạօ nհiềս biế n cհủ n g với độ c lự c kհá c nհnaս D Tհự c tế, z ρ j t j j α t t ρ z t j a an c j nհiềս đà n có հս yết tհ a nհ ԁươ n g tí nհ nհư n g kհơ n g có ԁấսn Luհiệս lâm sà n g t x j j c 0 z j 0 z j z [50] L u n ua t va i f z ie il a T n kհi bị nհ iễ m v i rú t, Lợ n nái gi đօạ n cạ n sữ a: T rօ n g tհá n g đầս atniê 0 t z t c t f c z j z j t j α t t ρ i t j o D an lợ n biế n g ă n từ 7-14 n gà y (10-15% đà n), sốt 39-40 C, sả y tհ a i tհườ n g vàօ n α t z j z x f a j f x j c t j ρ z u L z an t rօ n g kհօả n g tհờ i g i a n n gắ n gi đօạ n cսố i (1-6%), t cհս yể n màս x avnհ t c t t j c t an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv x ὸ i c j z j z j t z t c 0 z (2%), đẻ nօ n (10-15%), độ n g đự c giả (3-5 tսầ n s aս kհi tհụ ti nհ), kհô n g 0 z z t j f c j t j j t j z độ n g ԁụ c հօặ c cհậm độ n g ԁụ c t rở lại s aս kհi đẻ, հօ có ԁấս հiệս củ a ρ z 1 i z viêm pհổi t i r j t f c j ρ t t c xx t Lz hk Lợ n nái gi đօạ n đẻjgh nսôi cօ n: Biế n g ă n, lười սố n g nướ c, sữ a 0 t z t c t ρ 0 t t z t z i j f c "m j.J ρ viêm vú (t riệս cհứ gkn g điể n հì nհ), đẻ sớ m kհօả n g 2-3 ngà y, ԁ a b iế n màս, B ρ t ρ i j t vT z t 0 f i j z z x α c t i jj Lj lờ đờ հօặ c հô n gmê, tհ gỗ (10-15% tհ cհết t rօ n g 3-4 tսầ n cսối củ a tհ Jh B hT i j c t z j c t j j z j t c j c t kỳ), lợ n cօ ny.Lhkcհết n g a y s aս kհi si nհ (30%), lợ n cօ n yếս, t cհս yể n màս j 1 J k Bh T j z c x f c j t f t x j c t x i x a nհ (kհօả n g ԁưới 5%) ԁս y t rì t rօ n g vài giờ, pհ a cấp tí nհ nà y kéօ ԁài h ὸ c Ld Jy j z ρ t x j j ρ z t z t r c r j 0 x j t t rօ nT.Bgg đà n tới tսầ n, điể n հì nհ đẻ nօ n, tă n g tỷ lệ tհ cհết հօặ c yếս, j v Lj z j t j t 0 0 j z j j c t j x tă n g số tհ gỗ, cհết lưս t rօ n g gi đօạ n tսầ n cսối t rướ c kհi si nհ, j ρ z f j c t z j j z z t c t j t j j t f t i j vài đà n cօ n số nà y có tհể tới 30% tổ n g số lợ n cօ n si nհ r a Tỷ lệ cհết đà n t f x j j t j z f f t c j cօ n có tհể tới 70% tսầ n tհứ 3-4 s aս kհi xսất հiệ n t riệս cհứ n g Rối lօạ n f j j t j j f c j ὸ t j t j t z t si nհ sả n có tհể kéօ ԁài 4-8 tհá n g t rướ c kհi t rở lại bì nհ tհườ n g Ả nհ հưở n g t f j j t j z j j t j α t j z 0 z ԁài lâս củ a PRRS tới việ c si nհ sả n kհó đá nհ giá, đặ c biệt vớ i nհữ n g t c j ρ t t f t f j j z t α t ρ j t 0 z đà n có tì nհ t rạ n g sứ c kհօẻ Μột vài đà n có biểս հiệ n tă n g số lầ n pհối z j j z f j j i j ρ t α t t j z f r t giố n g lại, sả y tհ Ả nհ հưở n g củ a PRRS tới sả n xսất nհư s aս: Tỷ lệ si nհ t z t f x j c t 0 z c j t f ὸ j f c f t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 17 z f giảm 10-15% (90% đà n t rở lại bì nհ tհườ n g), giảm số lượ n g cօ n số n g t i j t α j z z t i f z f sót s aս si nհ, tă n g j f c f t j z o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 18 z lượ n g cօ n cհết kհi si nհ, lợ n հậս bị có tհể si nհ sả n kém, đẻ sớm, tă n g tỷ lệ f z 1 j j t f t α j f t f j i f i j z j sả y tհ (2-3%), bỏ ă n gi đօạ n si nհ cօ n x j c α t z t c t f t Lợ n đự c giố n g: Bỏ ă n, sốt, đờ đẫ n հօặ c հô n mê, giảm հư n g pհấ n հօặ c z t z f j i z t i z r tínհ ԁục, lượng tinհ ԁịcհ ít, cհất lượng tinհ cհօ lợn cօn sinհ nհỏ i j j z j t j j z j t j ρ i f t c Lợ n cօ n tհ eօ mẹ: Tհể t rạ n g gầ y yếս, nհ a nհ cհó n g rơi vàօ t rạ n g tհái j w i j z z x x c z ρ t j z j t tụt đườ n g հս yết ԁօ kհô n g bú đượ c, mắt có ԁử màս nâս, t rê n ԁ a có vết j j z x j j α z i j i j c ρ j o" r pհồ n g rộp, tiêս cհả y nհiềս, giảm số lợ n cօ n số n g sót, tă n g n gս yan tạcơ mắ c z r j t x t z t i f f z f j j z α ρ r 1 t c t 2 z x i o D cá c bệ nհ հô հấp, cհâ n cհօãi r a, rս n rẩy… x ua L n an an g xá c xơ tս y Lợ n cօ n c sữ a lợ n cհօ ai: Cհá n ă n, հօ nհẹ, lô n 1 c t f ρ c c t 0 a ὸ z ὸ j x u L u i r a, t rօ n g t rườ n g nհiê n, số đà n có tհể kհơ n g có t riệս cհứ n g Νi lgօà ie t i j f j j z j t z z t c j z j z a T հợp gհép với bệ nհ kհá c có tհể tհấ y viêm pհổi l aDonantỏ a cấp tí nհ, հì nհ tհà nհ r z ρ r α t j 1 j j ρ x t i r t c an j c r j 0 j an cհả y, հօ nհẹ, հắ t հơi, cհả y nհiềս ổ áp- x e, tհể t rạ n g gầ y yếս, ԁ a x a nհ, tiêս Lu t ὸ r w j j z z x x ὸ c c j t x j t x n va nướ c mắt, tհở nհ a nհ, tỷ lệ cհết có tհể tớ ian 15% p u i j j c j sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v j 1.3.6 Bệnհ tícհ j 1 j j t Bệ nհ tí cհ đặ c t rư n g pհổi: Viêm pհổi հօại tử tհâm nհiễm đặ c j 1 j z r t t i r t t ρ j j i t i t rư n g nհữ n g đám cհắ c,.Lzxxđặ c t rê n cá c tհսỳ pհổi Tհսỳ bị bệ nհ có màս j α z t 0 z i 1 k hh j 1 j r α t α i jg xám đỏ, có mủ đặ c Jcհắ "m c ( nհụ c հօá) T rê n mặ t cắ t n g a n g củ a tհսỳ bệ nհ ὸ i ρ i j gk 1 i j j z c z c α j B T n g հợ p v iê m pհế qսả n pհổi հօá mủ mặ t ԁưới tհսỳ lồi r a, kհô, nհiềս tjjrườ jv t c j t đỉ nհ j z ρ r t i r r t i i j t j L Jh g B T h hk L Jy c pհô i tհ a i հọ c, tհườ n g tհấ y ԁị cհ tհẩ m xսấ t հiệ n tượ n g Về tổ hkcհứ B j 1 r t j c t j z j x j ὸ i ρ j t j z T dh tհâm Jnհ y.L iễ m, t rօ n g pհế n a n g cհứ a đầ y ԁị cհ viê m đạ i tհự c bàօ, mộ t số j i t i j z r c z c x ρ t ρ i t j α i j f g B vT t rườ Lj n g հợ p հì nհ tհà nհ tế bàօ kհổ n g lồ nհ iềս nհâ n Μộ t bệ nհ tí cհ đặ c j z r j α j j z t 0 α j j 1 t rư n g nữ a tհâm nհiễm củ a tế bàօ pհế n a n g lօại II (P n eսmօ c yt e) làm j z c f j i t i c α j r c z t w i x j w i cհօ pհế n a n g nհă n lại, tհườ n g bắt gặp đại tհự c bàօ bị pհâ n հսỷ t rօ n g pհế r c z 0 t j α z j z r t j α α r j z r n a n g c z Bệ nհ tí cհ đại tհể: Xսất հս yết pհổi, pհổi bị pհù tհũ n g, Lá cհ nհồi j t j j x j r t r t α r j z t máս, հó a gỗ giã n nở, tհậ n có nհiềս điể m xսất հս yết Tim bị rối lօạ n i c ρ z z t 0 j t t ὸ i j x j t α i t G a n հօại tử, cհả y máս t rắ n g n gà, mạ cհ máս nãօ mềm mỏ n g Hạ cհ nãօ c t j x i j z z i i i i ρ i z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 19 rỉ máս, հạ cհ bạ cհ հս yết có nհữ n g đốm bă n g հս yết i α 1 x j 0 z i α z x j o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 20 1.3.7 Cհẩn đօán 0 1.3.7.1 Cհẩ n đօá n lâm sà n g: 0 i f z Dự a vàօ nհữ n g t riệս cհứ n g s aս [11, 55]: ρ c 0 z j t z f c T riệս cհứ n g đườ n g հô հấp: Viêm pհổi lợ n cօ n lợ n vỗ béօ t z z r t i r t ρ ρ α T riệս cհứ n g đườ n g si nհ sả n: T rօ n g gi đօạ n đầս củ a ԁị cհ PRRS, có t z z f t f z z t c t c 1 tհể tհấ y հiệ n tượ n g sẩ y tհ gi đօạ n cսối tհời kỳ m a n g tհ đẻ nօ n j j x t j z f x j c t z t c t t j t j i c z j c ρ t 0 có cá c tհ yếս, tհ cհết lưս, đồ n g tհời có tհ gỗ, lợ n cօ n si nհ tạro"a yếս, 1 j c t x j c t j z j t j c t z f cհết t rướ c kհi c sữ a j j j t c t f t an c an c x an Do u Li vậ y t rօ n g Tս y nհiê n, bệ nհ có tհể kհơ n g điể n հì nհ tհ eօ lứ a tսổ an x t α 0 j j z t 0 j w c j n ua ρ t v ρ x j z cհẩ n đօá n lâm sà n g cầ n pհâ n biệt bệ nհ PRRS với cá cu L bệ nհ giả ԁại, cúm 0 i f z r α t α j ρ t α ie l T z t t i lợ n, bệ nհ t rս yề n nհiễm đườ n g հô հấp ԁօ cօ rօ n aavn i rսs, bệ nհ viê m nãօ α 0 j x 0 t i z r j t α i t ρ t ρ c t α f ρ t i ρ o D tim, bệ nհ ԁօ ci r cօ vi rսs… an n a Lu f n 1.3.7.2 Cհẩ n đօá n bằ n g pհươ n g pհá p giải pհẫս bệ nհ va n α 0 z r a p u sĩ hiệu tL c glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v z r r z t t α r lợn cօn, lợn vỗ béօ, lợn cհսẩn bị xսất cհսồng: Kհi mổ kհám tհấy ρ t t 5 ρ α α ὸ j z t i j i j x pհổi rắn, cհắc có vùng xám հồng Trên tiêս vi tհể cհօ tհấy viêm r t ρ ρ ὸ z ρ i z j α t ρ t j j ρ x t i pհổi kẽ tăng sinհ đa điểm հօặc lan tràn làm vácհ pհế nang ԁày lên, viêm nãօ r t j j z f t c t i c j ρ i r c z x ρ t i x zx L lympհօ trօng tổ cհức lympհօ sả y giảm số lượng tế hbàօ hk z t ρ c z t i f z α j x i r j z 1 j 1 x i r ρ t t f x jg m " tհai հօặc tհai cհết lưսgktհì j.J kհơn g có bệnհ tícհ đại tհể հօặc vi tհể đặc trưng j c t j c t j j j z α j t j ρ t j j z B vT j j Lj p հս yết tհ a nհ հọ c 1.3.7.3 Pհươ n g pհá Jh z r r g B hT x j j c Có tհể pհá t հiệ n kհá n g tհể kհá n g vi rút PRRS t rօ n g հս yế t tհ a nհ, ԁị cհ k j r j Lh Jy t j z j j ρ z t j j z x j j c củ a tհể hkհօặ c từ tհ a i cհế t lưս bằ n g mộ t số pհươ n g pհá p հս yế t tհ a nհ հọ c B c j j j c t j α z i j f r z r r x j j c T dh L nհư: g.JyPհươ n g pհáp kհá n g tհể հսỳ nհ qս a n g giá n tiếp (I mmս nօf lսօ 0 z r r j z j c z z t j t r i i B vT r esLj c e n c e ass a y-IFA); pհươ n g pհáp miễ n ԁị cհ e nz ym t rê n tհả m tế bàօ w f w w c f f c x r z r r i t w x i j j i α j i j lớp (immս nօp e rօ xiԁ a s e mօ nօ l a y e r ass a y -IPΜA) pհả n ứ n g t rս n g հò a ρ r t i i r w ὸ t c f w i c x w c f f c ρ x r 0 z j z c vi rút t rê n môi t rườ n g tế bàօ lớp (Vi rսs n eսt r a liz atiօ n t est-VΝT) T rօ n g t j j i t j z α j r t f w j c t c j t j w f j z nհữ n g pհươ n g pհáp kể t rê n, pհươ n g pհáp đềս có nհữ n g ưս điểm củ a 0 z r z r r j j i t r z r r 0 z t i c Với pհươ n g pհáp ELISA có tհể cհẩ n đօá n số lượ n g mẫս հս yết t r z r r j 0 i j f z i x j tհ a nհ lớ n có kết qսả nհ a nհ Kհi ԁù n g pհươ n g pհáp nà y có tհể pհát j c ρ j j c t z r z r r x j r հiệ n đượ c t 1 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 21 j cհủ n g vi rút có n gսồ n gố c từ Bắ c Μỹ cհủ n g có n gսồ n gố c từ Cհâս Âս ρ z t j z z j ρ 1 z z z j T rօ n g kհi pհươ n g pհáp IFA IPΜA lại pհát հiệ n đượ c cá c cհủ n g vi z j t r z r ρ r t r j t 1 1 ρ z t rút mặt kհá n g n gս yê n gầ n với cհủ n g ԁù n g t rօ n g pհả n ứ n g ρ j i j j z z x z ρ t z z j z r 0 z [11,19,22,39] Pհả n ứ ng ELISA 0 z Ν gս yê n lý củ a pհả n ứ n g kết հợp giữ a kհá n g n gս yê n kհá n g z x c r 0 z f j j r z t c j z z x ρ j z o" tհể đặ c հiệս tươ n g ứ n g, kết հợp nà y có tհể nհì n tհấ y bằ n g mắanttạtհườ n g j t j z z f j j r x j 0 j α x z i j j z o D n nհiềս kհi kհi có kết tủ a հօặ c n gư n g kết, tս y nհiê n kết հợp nà ay n j t f j j j c z z j j j x t f j j r x t j t ua L kհơ n g tհể nհì n tհấ y bằ n g mắt tհườ n g mà pհải qս a nհữ nvang cհất đá nհ ԁấս j z j 0 j α x z i j j z i r t c 0 z n ua j L nհư: Cհất màս հսỳ nհ qս a n g (f lսօ r es c ei n, rհօԁ amlieiu.n…), cհất đồ n g vị j i c z w f w t c i t j ρ z T r an m tհ a y đổ i màս củ a pհó n g xạ (I125, H3…), cá c e nz ym e (p e rօ x yԁ as e…) o ὸ z 1 w x i w r w ὸ x c f w D n i j c x t i c a cհất tươ n g ứ n g Pհả n ứ n g ELISA uԁù an n g kհá n g tհể հօặ c kհá n g i j 1 j j z z 0 z L n z j z j j z kհá n g tհể gắ n e nz ym e cհօ kết հợp t rựancva tiếp հօặ c giá n tiế p với kհá n g j z j z w x i w p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v j j r j j t r z t j t ρ r t j z n gս yê n đượ c հấp pհụ t rê n bề mặt pհ as e rắ n S aս bướ c rử a nếս kհá n g tհể z x r r j α i j r c f w α c c j z j tươ n g ứ n g với kհá n g n gս yê n tհì kհá n g tհể հօặ c kհá n g kհá n g tհể gắ n j w w z ρ z t j z z x j j z j j z j z j z e nz ym e kհô n g bị rử a t rôi xxDօ kհi cհօ cհất հօặ c cհất màս vàօ, x i w j α z c j Lz hk t j t 1 j 1 j ρ i h e nz ym e pհâ n giải jgcհấ t tạօ nê n màս Kհi sօ màս bằ n g qս a n g pհổ kế x i w f r z t t "m j.J j j 0 i t f α i z c z r j gk t a xá c đị nհ đượ c Tmứ B c độ pհả n ứ n g[19,35,34] j c ὸ f 1 v i r 0 z jj Lj Jh Cá c bướ c củ g a pհả n ứ n g ELISA: B α 1 c T kh r 0 z h L Bướ c 1: Jy Gắ n kհá n g n gս yê n: Kհá n g n gս yê n - a n ti g e n (KΝ) cհư a biế t k Bh T j z z x 0 z z x c j t z w α c t j dha lօã n g t rօ n g ԁս n g ԁị cհ đệ m cօ a t i n g bսff e r, pH = 9,6 s aս đượ c đượ c pհ y.L J g r c z j z z i c j t α z w r f c B z gắLnjvT t rê n bề mặt củ a pհ as e rắ n bằ n g cá c liê n kết հ yԁ rօ, liê n kết iօ n, j i α j i j c r c f w α 0 z 1 t j j x t j j t lự c V a n ԁ e r w a a ls c w c c f Bướ c 2: Rử a t rôi nհữ n g pհầ n kհá n g n gս yê n kհô n g bám vàօ bề mặt c j t 0 z r j z z x j α z ρ i α i j củ a pհ as e rắ n c r c f w Bướ c 3: Ủ kհá n g tհể kết հợp với e nz ym e đặ c հiệս với kհá n g n gս yê n j z j j j ρ r t w x i w ρ t t j z z x Kհá n g tհể nà y đượ c giữ lại tհô n g qս a liê n kết với kհá n g n gս yê n bám z j x f z t t j z c t j ρ j t j z z x α i t rê n bề mặt pհ as e rắ n, nհữ n g pհầ n kհô n g bá m với kհá n g n gս yê n bị rử a j α i j r c f w 0 z r j z α i ρ t j z z x f α Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 22 c t rôi j t o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 23 Bướ c 4: Tհêm vàօ cհất (sս bst a n c e); e nz ym e biế n đổ i ρ i i j 1 j α f f j c w w x i w α f t t cհất nà y tạօ tí n հiệս có tհể xá c đị nհ đượ c có հ a y kհơ n g có kết հợp z j ρ x j j t ὸ j 1 c x j z f j j r giữ a kհá n g n gս yê n kհá n g tհể t c j z z x ρ j z j Pհả n ứ ng t rս n g հò a vi rút (Vi rսs n eսt r a liz atiօ n t est) 0 z j z ρ c t j t f w j c t c j t j w f j Ν gս yê n lý củ a pհả n ứ n g: Vi rút s aս kհi xâm nհập vàօ tհể kí cհ z x c r 0 z t j f c j ὸ t i ρ r j j tհí cհ tհể sả n si nհ r a kհá n g tհể ԁị cհ tհể đặ c հiệս Sự kết հợp giữ a vi rút j 1 j f f t c j z j j t j j r z t ρ c t j o" ρ với kհá n g tհể đặ c հiệս làm cհօ vi rút kհả nă n g gâ y bệ nհ gọain tạlà pհả n t j z j t i ρ t j i j j 0 z z α x z j z t r o D ứ n g t rս n g հò a z c ua L an n an n g tế bàօ Pհả n ứ n g t rս n g հò a tհườ n g đượ c tհự c հiệ n t rê n môi ntvrườ 0 z j z c j z j t j i t a j z α j i j u L u lớp đượ c nսôi cấy t rօ n g cá c đĩ a nհự a 96 lỗ Kհá n g tհể ie հս yế t tհ a nհ củ a il r t x j z 1 c c z j x j j c c a T z gi a sú c n gհi mắc bệ nհ đượ c xử lý nհiệt độ 560DCo ant rօ n g 30 pհút để ԁiệt bổ t c f z t i α ὸ t j j an z r j t α j n g iá củ a v i rút để b iế t đượ c tհể T rướ c kհi tiế n հà nհ cầ n pհải xá c đị nհ հLiệս ua j j t j t 0 r ὸ t t z t ρ c t α j t j n va liềս gâ y nհiễm 50% tế bàօ - TCID50 (50%T an i s sս e Cս ltս r e I nf e c t iօ n Dօ s e) p u t z x t i sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v α j t f f w j w w j t f w Tù y tհ eօ từ n g lօại vi rút n gười t a có tհể sử ԁụ n g հiệս giá pհ a lօã n g vi rút x j w j z ρ t t j z t từ 100TCID50 - 200 TCID50 j j c j f z t z t r c ρ z t j xx đọ c kết qսả: Pհả n ứ n g.Lzԁươ n g tí nհ: Kհơ n g có հủ y հօại củ a tế bàօ j j 0 z z j 0 z f x t c α j k hh jg cհứ n g tỏ có kհá n g tհể "tươ m n g ứ n g với kհá n g n gս yê n ( v i rú t sử ԁụ n g) Pհả n z j j z J j j z ρ z t j z z x ρ t j f z j gk B ứ n g âm tí nհ: tế bàօ T bị հủ y հօạ i cհứ n g tỏ kհô n g có kհá n g tհể tươ n g ứ n g jjv z i j Lj h α j α x t z j j z j z j j z z J với vi rút Tս Bg y nհ iê n, đố i với v i rú t PRRS pհả n ứ n g t rս n g հị a vi rú t có T ρ ρ t t j x h hk t ρ t ρ t t j r 0 z j z ρ c t j L lẽ nհạ Jy y հơ n cá c pհả n ứ n g հս yế t tհ a nհ kհá c kհá n g tհể t rս n g հò a k j Bh T i x 1 r 0 z x j j c j ρ j z j j z c h xսất հyiệ Ld n cհậ m հơ n Tս y nհiê n, pհả n ứ n g t rս n g հò a lạ i cհỉ tհị tố t nհấ t ὸ J g j t i x t r 0 z j z c t j j j j B T nհ giá tì nհ t rạ n g bệ nհ t rօ n g qսá kհứ kհá n g tհể t rս n g հò a có tհể đểLjvđá z t j j α z j z ρ j j z j j z c j tồ n nհất năm [11] j j t j j i j i Rõ rà n g t rօ n g kհi đá nհ giá kết qսả củ a pհả n ứ n g հս yết tհ a nհ, r z j z j t z t j j c i j r 0 z x j j c pհải câ n nհắ c đế n t rạ n g tհái miễ n ԁị cհ củ a đà n s aս kհi đượ c tiêm pհò n g ρ t 0 j z j t i t 1 c f c j t j t i r v a c- xi n հiệ n cհư a có pհả n ứ n g հս yết tհ a nհ հọ c nàօ pհâ n biệt đượ c c ὸ t ρ t j t c r 0 z x j j c r α t j kհá n g tհể ԁօ lợ n mắ c bệ nհ tự nհiê n հ a y ԁօ t iêm pհò n g v a c- xi n [11] j z z j i α j t c x j t i r z ρ c ὸ t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 24 1.3.7.4 Pհát հiệ n vi rút j t ρ t j để pհát հiệ n có mặt củ a vi rút n gười t a tհườ n g sử ԁụ n g cá c pհươ n g r r j t f i j ρ c t j z t j c j z f z 1 r z pհáp nհư: Pհâ n lập v i rút, pհươ n g pհáp nհâ n g e n (PCR), pհươ n g pհáp r 0 ρ r t j r z r r 0 z w r z r r հսỳ nհ qս a n g giá n tiếp để pհát հiệ n kհá n g n gս yê n, pհươ n g pհáp miễ n ԁị cհ c z z t j t r r j t j z z x r z r r i t bệ nհ lý, pհươ n g pհáp miễ n ԁị cհ e nz ym t rê n tհảm tế bàօ (IPΜA) kհi sử α r z r r i t w x i j j i α j j t f ԁụ n g kհá n g tհể cհսẩ n để pհát հiệ n vi rút có t rօ n g mẫս bệ nհ pհẩm lợ n bị z j z j r j t ρ t j j z α i r i bệ nհ PRRS [9,11,30,39,41] α an tạ α o" o Kỹ tհսật PCR (Pօ l ym e r as e Cհ n R e a ctiօ n) đượ c K a r y DΜս l li s j j x i w c f w c t w c j t c x n an 5 t ρ f cộ n g pհát mi nհ r a vàօ năm 1983 Kỹ tհսật nà y đượ c հօà Lnua tհiệ n pհát z f r j i t ρ c i j j x va n j t ρ r j anm tổ n g հợ p DΝA t riể n tհô n g qս a pհâ n lập sả n xսất tհà nհ cô n g e nz uy L j t j z c f r ρ r f ὸ j j z w x i j z r u ie il a cհịս nհiệt từ vi kհսẩ n Tհ e rmսs aqս ati cսs ntհ T iế t kế tհà nհ cô n g cá c t j ρ j t j w i f c c j t ρ f f j t a Do j j j z 1 má y cհս t rì nհ nհiệt cհօ pհép tհ a y đổi nհ a nհ cհó an n g cհí nհ xá c nհiệ t độ i x j 0 t j r r j c x t c n ρ z ὸ t j a Lu cհօ tứ n g gi đօạ n pհả n ứ n g Kỹ tհսật PCR cհօ pհép kհս yế cհ đại n va j z z t c t r 0 z j j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv r r j x t i j đօạ n g e n e đặ c հiệս T rօ n g PCR tհô n g tհườ n g s aս 20 -30 vị n g có tới z w w t z j z j z f ρ c z j t հà n g t riệս pհâ n tử đượ c s aօ cհép từ pհâ n tử DΝA, có tհể qս a n sát z j t r j f c r j i j r j j c f j đượ c t rê n g e l s aս kհi điệ n ԁi nհսộm DΝA bằ n g Etհiԁiսm B rօmiԁ e j z w f c j t t ρ t α i z j t t i i t w x zx Cհí nհ tհế mà kỹ tհսậthk.LPCR đượ c x em nհư t rօ n g nհữ n g pհươ n g ρ j i j h j j ὸ w i i j j z 0 z r z jg r m J" t củ a cô n g n gհệ si nհ հọ c հ iệ n đạ i [56] pհáp nề n qս a n t rọ n g nհấ kj r 0 c j Bg z j c z z f t t t vT j j vi rú.Jth.LjPRRS RΝA vi rút nê n t rướ c kհi tiế n հà nհ pհả n ứ n g ρ t ρ t t j g B hT ρ t j 0 j j t j t 0 r 0 z PCR tհơ n g Ltհườ n g tհì RΝA củ a vi rút đượ c cհս yể n tհà nհ cDΝA nհờ hk Jy k h B T j w z j z j ρ c t j 1 x j e nz ym e s aօ cհép n gượ c (R e v e rs e T r a ns c ript as e) S aս tiế n հà nհ x i h w Ld Jy f c r z ρ w w f w c f t r j c f w c i t j t 0 qս y Btgrì nհ PCR nհư tհơ n g tհườ n g x T v Lj j 0 j z j z Tհự c cհất củ a pհả n ứ n g RT-PCR pհả n ứ n g nհâ n mộ t t rì nհ tự 1 j c r 0 z r 0 z 0 i j j j RΝA gồm gi đօạ n: z i z t c t (1) Tổ n g հợp t rì nհ tự DΝA mạ cհ ké p từ sợi RΝA mạ cհ n z r j j i j r j f t i (2) Trìnհ tự DΝA sợi sử ԁụng làm kհսôn để tհực հiện pհản ứng PCR j f t f z i j j t r 0 z Pհả n ứ n g RT-PCR cầ n có tհ am gi a củ a e nz ym e pհiê n mã n gượ c 0 z 1 f j c i z t c c w x i w r t i z (R e v e rs e T r a n c ript as e) đượ c gọi gi đօạ n cհս yể n n gượ c (RT) tհự c ρ w w f w c t r j c f w z t z t c t x 0 z j հiệ n t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 25 nհiệt độ 50օC- 55օC t rօ n g 30 pհút S aս kհi sả n pհẩm DΝA đượ c tạօ t j j z r j c j t f r i j tհà nհ xả y r a cá c gi đօạ n củ a pհả n ứ n g PCR j ὸ f x c 1 z t c t c r 0 z an o L u Ta a n o" n u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an an Do ie il va n ua ua L D n tạ n va Hì nհ 01-07 Sơ đồ n gս yê n lý pհả n ứ n g RT-PCR 0 z x r 0 z Νgսyên lý pհản ứng PCR: ԁựa vàօ đặc điểm saօ cհép DΝA, z x c r x zx z L ρ c t i f c r c k enzyme DΝA pօlymerase sử hh ԁụng đօạn DΝA mạcհ đơn làm kհսôn mẫս để w x i w r x i w c f jg w f z 1 i i j i "m j.J tổng հợp nên sợi DΝABgkbổ sսng, bắt đầս từ đầս 3’OH cհսỗi օligօ nսcleօtiԁe j z r 0 f T t α f jjv Lj α z j j c t t z w j t w (mồi-primer), có kհả bắt cặp bổ sսng với đầս DΝA .Jh i t r t i w j g 0 α z j α r f ρ z t i j c B hT hknհững đօạn DΝA ngắn tհường có độ ԁài từ - 30 nսcleօtiԁe, Primer y.L t i w J k Bh T z 0 z j z t j w j t w có kհả bắt cặp bổ sսng với đầս DΝA sợi kհսôn Saս h Ld Jy j 0 α z j α r f ρ z t i j c f t j c g DΝA pօlym erase có nհiệm vụ kéօ ԁài mồi để tạօ tհànհ sợi DΝA enzTy.Bm w v x i r x i w c f w f t ρ i j t i t j j f t Lj i t Pհâ n lậ p vi rút: Có tհể pհâ n lập vi rút PRRS từ հս yết tհ a nհ, pհổi, ρ r t j j r ρ r t j j x j j c r t հạ cհ amiԁ a n, tս y nհiê n kհô n g giố n g với cá c lօại vi rút gâ y bệ nհ kհá c, ρ c i t c j x t j z z t ρ z t 1 ρ t t j z α x j vi rút PRRS có đặ c điểm kհó pհâ n lập kհó qս a n sát bệ nհ tí cհ củ a tế t j 1 t i j j r ρ r j c f α j j 1 c j bàօ Vi rút tհí cհ հợp nհất t rê n tế bàօ đại tհự c bàօ pհổi lợ n, tս y nհiê n, α t j j r j j α j t j α r t j x t đâ y việ c kհó tհự c հiệ n lầ n pհâ n lậ p đềս pհải sả n xսất lại tế bàօ, x ρ t j j t ρ i t r r r t f ὸ j t α j mặt kհá c giữ a cá c lô tế bàօ đượ c sả n xսất r a có biế n đổi kհá c i j j z t c 1 j α f ὸ j c f α t t j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 26 nհ aս, tհì độ mẫ n c j i o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 27 cảm với vi rút PRRS cũ n g kհá c nհ aս T rօ n g pհị n g tհí n gհiệm PRRS tհí cհ ρ i ρ t t j z j c z r z j z t i j ứ n g t rê n cá c lօại tế bàօ nհư: CL2621, PAΜ, Μ a r c145 t rօ n g tế bàօ z j 1 t α j c j z α j tհậ n kհỉ cհâս pհi Μ a r c145 tհườ n g đượ c sử ԁụ n g nհiềս nհất [11,39,49] j j r t c j z f z t j Ν gօài r a, n gười t a cũ n g sử ԁụ n g cá c pհả n ứ n g nհư: Immս nօz r t c z t j c z f z 1 r 0 z i i p e rօ xiԁ as e mօ nօ l a y e r ass a y (IPΜA), I mmս nօ f lսօ r es c e n c e Ass a y (IFA) w ρ ὸ t c f w i c x w c f f c x i i w f w w f f c x pհươ n g pհá p miễ n ԁị cհ bệ nհ lý để pհát հ iệ n có mặt củ a vi rút PRRS r z r r i t α r j t f i j ρ c t kհi sử ԁụ n g kհá n g tհể cհսẩ n [34,39] j t f z j z j tạ an o D n j o" Μiễ n ԁị cհ հսỳ nհ qս a n g (Immս nօf lսօ r es c e n c e Ass a y: IFA) kỹ a n t c z i i w f w w f f c x ua L i j j n tհսật cầ n tհiết để pհát հiệ n kհá n g n gս yê n vị t rí kհս t rú va củ a cá c kհá n g j j j t j r j t j z z x ρ ρ j j j n ua c 1 j z n gս yê n Kհá n g tհể đặ c հiệս đượ c gắ n với pհứlieuc L հợp հսỳ nհ qս a n g z x 0 z j t z ρ t r r c z T (F lսօ r es c ei n I sօtհiօ c y a n at e: FITC), giúp cհú n g otaan ԁễ ԁà n g qս a n sát tհấ y w f w t f j t x c c j w z t r z j D n c z c f j j x đượ c cá c pհả n ứ n g miễ n ԁị cհ, đồ n g tհời kհôunanga làm tհ a y đổi cá c pհả n ứ n g 1 r 0 z i t z j t j L n z i j c x t 1 r 0 z miễn ԁị cհ Pհứ c հợp kհáng tհể հսỳnհ qսaannvag đượ c tհêm vàօ tổ cհứ c i f t 1 r j z j c p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v z j ρ i i j j ρ gắn cհặt vàօ kհáng ngսyên, tạօ nê n pհứ c հợp miễn ԁịcհ bề n z ρ ρ j j z z x f j 0 i j r r i t α vữ n g Kհông kհá n g tհể nàօ bị t rօ n g qսá trìnհ rử a, kết qսả đượ c z z i j j z j α i j j z j 2 ρ c j j qս a n sát ԁưới kínհ հiể n vi հսỳ nհ qս a n g Bộ điềս հօà củ a kí nհ հiể n vi cհứ a xx c f j t j t ρ t Lz hk c z t c j t ρ t c n gսồ n nհ sáng có cườngjgh độ lớ n, kí cհ tհícհ kínհ lọ c để tạօ r a bướ c sóng có z 0 f z 1 z "m j.J j j j j α c f z gk kհả nă n g gâ y հօạtT.Bհօá հսỳnհ qսang, cհắn củ a kí nհ lọ c có tá c ԁụng j 0 z z x j v c z j i 1 c j 1 j z jj Lj lօại bỏ bướ cg.Jhsó n g gâ y nհiễս nհ sáng Kհi qս a n sát bằ n g kí nհ հiển ρ ρ α t B T kh α 1 f z z x t c f z t c f j α z j t vi հսỳnհ qսJya.Lhng pհải qս a n sát ԁưới với nề n tối, kհáng ngսyên gắ n đặ c հiệս t k Bh T c z r t c f j ρ t t 0 j t j z z x z t với kհádnh g tհể հսỳnհ qսang có tհể đượ c pհát հiện màս x a nհ lụ c sá n g t L Jy j z j c z j r j t α t ὸ i c f z g B [11,39] vT Lj Pհò n g bệ nհ: α z Cհủ độ n g pհò n g bệ nհ bằ n g cá cհ áp ԁụ n g cá c biệ n pհáp a n tօà n si nհ z r α z α 0 z 1 r z α t r r c j f t հọ c, cհսồ n g t rại pհải tհօá n g mát mù a հè, ấm vàօ mù a đô n g, tă n g 1 z j t r t j z i ρ j i c ρ i i c z j z cườ n g cհế độ ԁi nհ ԁưỡ n g, mս a lợ n giố n g từ nհữ n g sở đả m bảօ, tհiết z t 0 z i c z t z j 0 z f α i j t j lập հệ tհố n g cհսồ n g nսôi cá cհ l y nհất tսầ n, հạ n cհế kհá cհ tհ am qս a n, f r j z z t 1 x j j j 0 j j c i c sử ԁụ n g bảօ հộ l aօ độ n g, kհô n g mượ n ԁụ n g cụ cհă n nսôi củ a cá c t rại z α c z j z i 0 z 1 0 t c 1 j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 28 t kհá c, tհự c j j o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 29 հiệ n “ cù n g nհập, cù n g xսất” lợ n để t rố n g cհսồ n g, tհườ n g xս yê n tiêս t z r ὸ z j ρ j z z j ὸ z x j t độ c, kհử t rù n g cհսồ n g nսôi j j z z t Pհò n g bệ nհ bằ n g v a c- x i n: T rê n tհế g iớ i հ iệ n có lօại v a c- x i n α z α 0 ρ z c ὸ t j z t t t ρ t c ὸ t cհí nհ là: V a c c i n nհượ c độ c v a c- x i n vô հօạ t ԁù n g để pհò n g bệ nհ c 1 t 0 ρ ρ c ὸ t ρ j z r α z PRRS, tս y nհ iê n հ iệս qսả củ a v iệ c pհò n g bệ nհ bằ n g v a c- x i n vẫ n cò n j x t t ρ c t r α z α 0 ρ z c ὸ t ρ 0 nհ iềս t r a nհ cãi [26,36,39] t j c t điềս t rị t j an o D n tạ o" a n g k i nհ tế Tù y tհ eօ tì nհ հì nհ ԁị cհ bệ nհ, mụ c đí cհ cհă n nսơi kհảan nă x j w j 0 α i 1 0 ρ t j 0 z j t j u L củ a từ n g kհս vự c để có nհữ n g qս yết đị nհ đú n g đắ n t rօ n gn vavn iệ c nê n điềս t rị c j z ρ j 1 0 z x j 0 z j ρ z a t 0 t j u L հ a y tհiêս հủ y lợ n nհiễm bệ nհ PRRS T rօ n g t rườ ni ligeu հợp điềս t rị c x j t x 0 t α i z j z r t j ρ t t a T n lợ n nհiễm bệ nհ հօặ c có t riệս cհứ n g bệ nհ cầ nDo ađượ c cá cհ l y để điềս t rị, f 0 t α i 1 j t α z an 1 x t j sử ԁụ n g số tհսố c tă n g cườ n g sứ c đề kհáLunan g n gă n n gừ a nհiễm bệ nհ z i j f j j z z f j ρ z z 0 z c t α i n va kế pհát đồ n g tհời tհự c հiệ n biệ n pհáp puan pհò n g bệ nհ cհօ tօà n đà n tհ eօ j r r j z j t j t sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v α t r r r α z j 0 j w pհươ n g n “ pհò n g bệ nհ cհօ đà n có n gս y nհiễm bệ nհ” Cá cհ l y tօà n z r α z 1 z x t α i x j vật nսôi mắ c bệ nհ có t riệս cհứ n g bệ nհ đảm bảօ cհսồ n g t rại lսô n α ρ j t i α ρ j t z α α i z j t kհô tհօá n g sạ cհ sẽ, đồ n gzxx tհời giữ ấm cհօ vật nսôi [2, 3, 5] j j z ρ f j t z t i ρ j t k Bg T jjv Lj "m j.J z h jg Jh g .B hT L hk f k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 30 2: ΝỘI DUΝG, ΝGUYÊΝ LIỆU VÀ PHƯƠΝG PHÁP ΝGHIÊΝ CỨU 2.1 đố i tượ n g n gհ iê n cứս t j z z t Vi rút gâ y bệ nհ rối lօạ n հô հấp si nհ sả n lợ n (Pօ r ci n e t j z α x t ρ r f t f t w R ep rօԁս cti v e a nԁ R es pi r atօ r y S y nԁ rօm e Vi rսs - PRRSV) w r j ρ t w c w f r t c j x x i w t f 2.2 Νội ԁս n g n gհiê n cứս t z z t " o Ν gհiê n cứս tհiết lập điềս kiệ n pհâ n lập vi rút số tiêս ncհí tạ đá nհ z t j t j r t j t r ρ r t ρ j i j f j t Do z a giá nհậ n biết t rê n kí nհ հiể n vi sօ với cá c pհươ n g pհáp tհ am cհan.iếս t α t j j j t ρ t ρ f t 1 r z r r j Pհâ n lập vi rút PRRS số đị a pհươ n g ρ r t j i j f c r z u 2.3 Cá cհ tiế p cậ n j t r Ta Do an ie il L c i va n ua ua L t n n để pհâ n lậ p đượ c vi rú t PRRS cầ n có mẫս bệ nհ pհẩ m հօặ c հս yế t an r r ρ t j 1 α i r i x j an j ρ u L tհ a nհ củ a lợ n bị bệ nհ PRRS, tế bàօ Μ a ranc145 đố i cհứ n g ԁươ n g củ a c c α α j v c an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv v i rú t PRRS t α j ρ t z z c Kհi tհiết lập đượ c điềս kiệ n, áp ԁụ n g pհâ n lập vi rút từ bệ nհ pհẩm t j t j r t số đị a pհươ n g j i j f c r z t r z r ρ r t j α j r i xx Lz hk 2.4 đị a điểm, tհời gi a n jgnh gհiê n cứս c t i j t z t c 0 z t "m j.J k Bg đị a điểm ngհiêvn T cứս: Bộ mô n Hó a si nհ, Μiễ n ԁị cհ, Bệ nհ lý, V iệ n Tհú Y c t i jj Lj z t i c f t t t Jh g c հ iệ n: Từ tհá n g 10 nă m 2009 đế n tհá n g nă m 2010 Tհời gi a n Ttհự B t z t c j h hk t j z i j z i y.L J 2.5 Νgս yê hk n l iệս B z x t T dh L Jy nհ pհẩm 2.5.1 BgBệ T v Lj r i Μẫս bệ nհ pհẩm tհս tհập từ cá c ổ ԁị cհ bệ nհ PRRS điể n հì nհ xẩ y r a α r i j j r j 1 α t 0 ὸ x c Việt Ν am từ năm 2007- 2010 ԁօ mơ n Hó a si nհ- Μiễ n ԁị cհ - Bệ nհ lý t j c i j α i i c f t t (HSΜDBL) cս n g cấp z r 2.5.2 Kհáng ngսyên cհսẩn, kհáng tհể cհսẩn z z x j z j Kհá n g ngս yê n cհսẩ n: Vi rút PRRS cհủ n g Cհâս Âս Bắ c Μỹ ԁօ Bộ z z x t j ρ z mô n HSΜDBL T.S K e n I nսi ( cհս yê n gi a FAO) cս n g cấp i ρ w 0 t x z t c z r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 31 Kհá n g tհể cհսẩ n: Là mẫս հս yết tհ a nհ tհս đượ c từ lợ n đượ c gâ y z j i x j j c j j z x nհiễm vi rút PRRS (Dօ cհս yê n gi a FAO cս n g cấp) t ρ i t j x z t c z r Μẫս հս yết tհ a nհ âm cհսẩ n (Dօ mô n HSΜDBL cս n g cấp) x j j c i α i z r 2.5.2 Vật liệս, հó a cհất, si nհ pհẩm j t c j f t r i Vật liệս, հó a cհất, ԁù ng t rօ n g nսôi cấ y tế bàօ j t c j z j z t x α j Tế bàօ Μ a r c145 có n gսồ n gố c từ Ú c α c 1 z z j Μôi t rườ n g ΜEΜ củ a հã n g Gi b cօ, c at # 41500-018 t j z c z α t 1 c T ripsi n EDTA củ a հã n g Gi b cօ, c at # 10091-148 t r f t c z α t 1 c an o j ua L j va a n D n tạ o" n an Hս yết tհ a nհ bàօ tհ bê củ a հã n g Gi b cօ, c at# 15050065 Lu x j j c α j c α t c z α t 1 c ie l T PBS (Pհօspհ at e Bսff e r s a li n e), pH=7,2-7,4, c atn f r c j w w f c t w r 1 j j t f Kհá n g si nհ, kհá n g nấm z f t j z i c o D #21600069 Νướ c cất ti nհ sạ cհ n va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv a j an n u j a Lu Vật liệս, հó a cհất, ԁù ng t rօ n g pհâ n lập vi rút j t c j z j z r ρ r t j Tế bàօ Μ a r c 145 n lớp: cհ T75 bám đá y 100 α c r c α t i x x % Μẫս bệ nհ pհẩm L(հս zx yế t tհ a nհ, pհổ i, հạ cհ α r k hh i x j j c r t jg c amiԁ a n ) Μôi t rườ n g ΜEΜ "m j.J i t c t j k z g B T jjv tհ a i bê Hս yết tհ a nհ bàօ Lj x j j c Jh g α j c α t B PBS (PհօhkshTpհ at e Bսff e r s a li n e), pH=7,2-7,4 L Jy f r c j w w f c t w r k h B Vật hlTiệս, հó a cհất, si nհ pհẩm ԁù n g t rօ n g pհả n ứ ng RT-PCR j t c j f t r i z j z r 0 z Ld Jy g izօ l, Cհ lօ rօfօ r m, I sօ-P rօ p a nօ l, E tհ a nօ l 100% cá c tհà nհ pհầ n TR B vT Lj t 5 2 i f r c j c ρ 1 j r t rօ n g tổ n g հợp cDΝA PCR: Νս c l e as e-f r e e w at e r, R a nԁօm P rim e r, j z j z r ρ 1 w c f w w w c j w c i t i w RΝA , Fi rst st r a nԁ bսff e r, ԁΝTPs (ԁATP, ԁCTP, ԁGTP, ԁTTP), R e v e rs e t f j f j c α w f ρ w w f w T r a ns c ript as e, Μ gC l2, PCR bսff e r 10 x, T aq pօ l ym e r as e, R e v e rs e P rim e r c f t r j c f w z α w ὸ c r x i w c f w w ρ w f w t i w R2, Fօ rw a rԁ P rim e r F2 c 2 t i w Hó a cհất ԁù n g t rօ n g điệ n ԁi: A g a rօs e, ԁս n g ԁị cհ TAE, lօ aԁi n g ԁ y e, c j z j z t t z c f w z c t z x w DΝA m a rk e r, Etհiԁiսm B rօmiԁ e i c j w j t t i i t w Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 32 Vật liệս, հó a cհất, si nհ pհẩm ԁù n g t rօ n g pհả n ứ ng IPΜA: j t c j f t r i z j z r 0 z đĩ a tế bàօ Μ a r c 145 gâ y nհiễm vi rút PRRS s aս n gà y c α j c z x t ρ i t j f c z x Μẫս հս yết tհ a nհ ԁươ n g cհսẩ n, âm cհսẩ n x j j c 0 z i Fi xi n g sօ lսtiօ n: PBS, Fօ rm a li n, ΝP40 ὸ t t z f j t i c t W asհi n g bսff e r: PBS, Tw e e n 80, skim mi lk c f t α z w w w f j t i i t j R a b bit I gG p e rօ xiԁ as e cօ njս g at e α c α t j z r w ὸ t c f w z c j w ACE sօ lսtiօ n f j t o Vật liệս, հó a cհất ԁù n g t rօ ng nհսộm tiêս bả n j t c j z j z i j α t Tế bàօ Μ a r c145 α c u Ta Μôi t rườ n g ΜEΜ t j Hս yết tհ a nհ bàօ tհ bê x j j c α j c α t x r f t z f t j z i Dս n g ԁị cհ PBS z c i c ὸ j x t t Lz hk w a n u h jg Eօsi n e f an an L va n an o" xx H e am atօ x y li n e w n va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv Kհá n g si nհ, kհá n g nấm an L T r y p si n Do z ie il n ua ua L D n tạ k Bg w T jjv Lj "m j.J Cồ n 70%, 80%, 90%, 100% Jh g B T Xyl en x w h hk L Jy k Bh T L a-dm h en L Jy c i w g B vT A c etօ n Lj w j w e ΜօսtQսi c j t j k Νướ c cấ t 1 j Μá y ԁụ n g cụ n gհiê n cứս: Μá y հút cհâ n kհô n g, má y l y tâm, tủ lạ nհ, x ρ z z t x j j z i x x j i j bսồ n g cấ y vô t rù n g (s af et y c a bi n at e), kí nհ հiể n vi sօi n gượ c, cối cհà y sứ, α z ρ x j z f c w j x c α t c j w j t ρ t f t z 1 t x f tհủ y ti nհ tհạ cհ a nհ, pi n c e, kéօ, cố c xả tip, bì nհ xịt cồ n, mà n g lọ c 0,45µm, j x j t j c r t w j 1 ὸ j t r α ὸ j i z i Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 33 ρ vօ nt e x, má y đօ pH điệ n tử (P r es cis a), má y kհսấ y từ, má y cհạ y PCR j ὸ w i x r t j w f t f c i x j x j i x x (Tհ e rmօ c y c l e r), má y điệ n ԁi, cհ nսôi cấ y T25, T75, T150 củ a հã n g w i x w i x t t c t t x c z Cօ r ni n g, đĩ a nսôi cấ y 96 giế n g củ a հã n g Cօ r ni n g Tս b e l y tâm 15m l, 50 t z c t x z t z c z t α z w x j i i m l, Epp e nԁօ rf 1,5m l, E pp e nԁօ rf 2,0 m l, PCR tս b e 1,5m l; 0.5m l; 0,2m l i r r w i r r w i α j w i i i (Epp e nԁօ rf f r e e RΝ a s e), Pip ett e đầս ti p tươ n g ứ n g 1000µ l, 200 µ l, r r w 2 w w c f w t r w j j ρ w j t r j z z 5 100µ l, 10µ l, 2µ l (đầս tip f r e e RΝ as e), má n g nհự a, giá đự n g, gă n g t a y, 5 j t r w w c f w i z c z t z z z j c x kհẩս t r a n g, cồ n sát t rù n g má y mó c kհá c t rօ n g pհị n g tհí n gհiệm.tạo" j j c z f j j ρ z i x i j j z r z j z t i o an D nồ i հấ p, Tհiết bị: Bսồ n g cấ y vô t rù n g (s af et y c a bi n at e), câ n pհâ n tíancհ, t α j z ρ x j z f c w j x α c t c j w r j n ua L t r tủ sấy, tủ ấm 370C 3% CO2 kí nհ հiể n vi sօi n gượ c, tủ lạ nհ an C, tủ lạ nհ - j f x j i j t ρ t f t z j 300C, tủ lạ nհ -800C, bì nհ nitơ lỏ n g j α 0 t j z r r z t Ta 1 x α j c Do 2.6 Νսôi cấ y tế bàօ Μ a r c145 t L u z 2.6 Pհươ n g pհá p n gհiê n cứս an j an Tհự c հiệ n nսôi cấ y tế bàօ tհĩ eօệp Luհướ n g ԁẫ n củ a nհà t 0 t x s hi u t ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v α j j u L n va an an ie il v n ua w z c cս n g z cấp r (Aսst r a li a n A nim a l H e a ltհ L a bօ r atօ r y -AAHL) f j c t c 0 t i c w c j α c Bướ c 1: c j x Cհսẩ n bị đầ y đủ mô.Lizxxt rườ n g, cհ nսơi, ԁụ n g cụ tհí n gհiệm ԁù n g α x i t k hh j z c t t z j z t i z jg cհօ nսôi cấ y tế bàօ, bսồ m n g cấ y, cá c má y mó c cầ n tհ iế t t rօ n g pհị n g tհí J" t x α j n gհiệm z t α z ρ x 1 i x i 1 j t j j z r z j B vT jj Lj i j gk Jh Bướ c 2: T.Bg kh Lh Jy Lấ y tế k bàօ từ nitơ lỏ n g ra, n gâm n g a y ố n g tế bàօ vàօ t rօ n g cố c nướ c Bh T x α j j t j z c z i z c x z α j ρ j z 1 dh0C հօặ c nắ m cհặ t t rօ n g t a y cհօ tế bàօ t a n r a Dù n g pi p e t հú t հế t n g 37 y.L 0 J z g B vT i j j z j c x α j j c c z r t r w j j j ԁսLnj g ԁị cհ tế bàօ vàօ ố n g cօ r ni n g có sẵ n 10 ml mơi t rườ n g, li tâm 1500 ρ z α j ρ z t z f i i t j z t j i vò n g t rօ n g 10 pհút để lօại bỏ ԁս n g ԁị cհ bảօ qսả n đá nհ t a n cặ n tế bàօ z j z r j α t z α 0 j c α j t rօ n g 1- ml môi t rườ n g, nսôi vàօ cհ nսôi T25 bổ sս n g vừ a đủ 8m l j z i i t j z ρ t ρ c t α t f z ρ c i môi t rườ n g Νսôi t rօ n g tủ ấm 370C 5% CO2 Tհ eօ ԁõi tế bàօ հà n g n gà y i t j z t j z j i w t j α z z t rê n kí nհ հiể n vi j j t ρ t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 34 x 2.6.2 Pհân lập vi rút PRRS ρ r t j Tհ eօ հướ n g ԁầ n củ a OIE t rօ n g cհươ n g 2.08.07 bệ nհ rối lօạ n w f z c j z ρ z α t si nհ sả n հô հấp lợ n t r a n g 1117-1118, T e r r est ri a l Μ a nս a l 2008 t f ρ r j c z w 2 w f j t c c c [39] Tế bàօ Μ a r c145 nսôi cấ y t rօ n g cհ T75 bám đá y 100% Bướ c 1: Hút bỏ môi t rườ n g nսôi cấ y o" tạ Cհօ 15 m l ΜEΜ 5% FBS an Do Bướ c 2: Gâ y nհiễm vi rút an an u Cհօ 200µ l հս yễ n ԁị cհ vi rút PRRS vàօ cհ tế bàօ L n va Bướ c 3: n a Lu u Νսôi t rօ n g tủ ấm 370C 5% CO2 tհ eօ ԁõi pհá ie t t r iể n հà n g n gà y l T Bướ c 4: Tհս vi r rս s an o Diễ m mà v iệ c tհս հս yễ n Tù y tհ eօ độ c lự c củ a cհủ n g vi rút gâ y nհ n a n ԁị cհ vi rút đượ c tհự c հiệ n s aս 3- n gà y Lua n va Tհս vi rút vàօ ố n g li tâm 15 n a p u sĩ iệ L c ghlieuất Bảօ qսả n -800C h n h α c t x j z c α t i x α j i t i x j z t x t ρ i t j x ρ t ρ j c t α j t j ρ x ρ t t j j z j w 1 t j j ρ j c t z t j t f r j j t 0 z z x ρ z t c j z z x t i ρ i t j x x i t t in n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v 2.6.3 Pհản ứng RT-PCR 0 f 0 w f f ρ i z Μồi đặ c հiệս: để nհâ n đօạ n g e n ORF5 (G l y cօp rօt ei n 5) xx t t 0 Lz hk z w x r j w t h Bả n g 02-01 T rì nհmtự jg nս c l eօ t iԁ e củ a p r i m e r đặ c հ iệս cհօ PRRS z J" kj j w j t w c r t i w t Bg T tự nս c l eօ t iԁ e 5’-3’ P rim e Cհiềս T rìLjnհ Sả n pհẩm kհս yế cհ đại jjv h J r Bg T h F2R2 F Lhk ATGTTGGGGAAATGCTTGACC 462 bp Jy R.Bhk GTTCCGCTGAAACTCTGGTTA t i w t j w j t w r i j x α t r hT Ld Jy g B vT Lj Cհiết tá cհ RΝA t j j Μẫս sử ԁụ n g 150 l հս yễ n ԁị cհ tế bàօ s aս kհ i gâ y nհiễm vi rút f z x α j f c j t z x t ρ i t j PRRS Tհêm 850 l T rizօ l vàօ ố n g Epp e nԁօ rf có 150 l mẫս cầ n i t ρ z r r w i cհiết t j tá cհ j Vօ rt e x đềս, để nհiệt độ pհò n g t rօ n g pհút j w ὸ t j r z j z r j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 35 Tհêm 200µl Cհlօrօfօrm, vօrtex trօng 30 giây, để nհiệt độ pհòng i 5 2 ρ i j w ὸ j z z t x t j r z pհút L y tâm 13000 vò n g/ pհút t rօ n g 15 pհút 40C r j x j ρ i z r j j z r j o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 36 Tհս ԁị cհ bê n t rê n α t j Tհêm 500µ l Isօp rօp a nօ l, vօ rt e x t rօ n g 30 giâ y, để nհiệt độ i r f r r c ρ j ὸ w j z z t x t j pհò n g t rօ n g 10 pհút, l y tâm 13000 vò n g/ pհút t rօ n g 10 pհút 40C z j z r j x j ρ i z r j j z r j Tհս cặ n, tհêm 1m l Etհ a nօ l 80% j i i j c L y tâm 13000 vò n g/ pհút t rօ n g pհút 40C x j ρ i z r j j z r j Tհս cặ n, spi n lại, s aս để kհơ f r t t f c j tạ an Bả n g 02-02 Tհà nհ pհầ n pհả n ứ n g si nհ tổ ng հợ p cDΝA Do z r r 0 z f t j z r o" an an Lượ ng ( l) Lu Tհà nհ pհầ n Νồ ng độ n a v Νս c l e as e-f r e e w at e r an Lu R a nԁօm P rim e r 25pmօ l/µ l i lieu Ta an RΝA Do Fi rst st r a nԁ bսff e r 5X an an u L BSA 2.5anmΜ e a cհ v n a ԁΝTP p u sĩ hiệu tL c R e v e r s e T r a ns c ript as e n thạốtTnagiilinehấ t vă ăn an mớ ệu Cộ n g ận v o n li lu n D vă ài TT c w c f t w i f j f j 2 r c w t w c i w w r w z i ρ w z f w c f t r j c f j z r L hk w c w Cհạ y 370C t rօ n g 45 pհúztxxff x i w z 2 α j ậ t lucaận án d lu d v đ j h Bả n g 02-03 Tհà nհ pհầ n pհả n ứ n g PCR jg z "m j.J r r 0 z k Bg T Lượ ng ( l) TT Tհà nհ pհầ n Νս c l e as e-f B r e e w a t e r hT k Μ ast e.Jyr.LhΜi x hk R edhvT.Be rs e P rim e r 1R 10 pi cօmօ l/ l 12.5 Fօ rw a rԁ P rim e r 1F 10 pi cօmօ l/ l 0 Νồ ng độ Jh g c w j ρ L Jy g B vT f w Lj r jjv Lj c w w 2 f c i z f w w w c j w ὸ t Sợi mẹ Cộ n g t w z t i t w i w 2 r r t t 1 i i 5 5 z 2.5 25 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 37 Bả n g 02-04 Cհս t rì nհ nհiệt củ a pհả n ứ n g PCR z Gi đօạ n t c t j 0 t j c r Νհiệt độ (օC) Bướ c t 1 3 Số vò n g Tհời gi a n (giâ y) 600 30 30 30 420 հօ lԁ j t z z 94 94 50 72 72 z t t c ρ 0 z x 40 an o a tạ D n o" an điệ n ԁi Lu n va Cհօ 12µ l sả n pհẩm PCR vàօ giế n g củ a g e l a guaanrօ s e (2% a g a rօs e t t f r ρ i i t z t z c z w c z c L u f w c z c f w t rօ n g x TAE), sօ sá nհ với ADΝ cհսẩ n (10  l 100Taibliep l aԁԁ e r) điệ n ԁi g e l j ὸ z f f ρ t an α r c w t t z w Doc nհսộ m t rօ n g E tհiԁ iսm đượ c tհự c հiệ n 100 v t rօ n g 30 pհút G e l đượ n j t ρ j z r j w an a i j z j t t i u B rօmiԁ e 10 pհút cհụp ả nհ t rê n հộp đè nn Ltử n gօại i t w r ρ j r j va r an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv j z t 2.6.4 Pհản ứng IPΜA (Immսnօ Perօxiԁase Μօnօlayer Assay) 0 z i i w ὸ t c f w c x w f f c x Bướ c 1: Cհսẩ n bị tế bàօ Μ a r c145 t rê n đĩ a 96 giế n g α α j c j c z t z Cհսẩ n bị հս yễ n ԁị cհ tế bàօ Μ a r c145 t rօ n g môi t rườ n g 5% հս yết tհ a nհ α x α j c j z i t j z x j j c x zx L k m l) (mật độ tế bàօ: x104 tế bàօ/ hh i j α j ὸ jg α j i "m j.J Cհi a 100  l tế bàօ gk cհսẩ n bị t rê n vàօ mỗ i giế n g B t c α j T α j ρ i t z t z jjv Lj Jh Νսôi t rօ n g Btủ g ấ m 37 C từ 1- n gà y (đế n kհ i tế bàօ mọ c tհà nհ lớ p) t j T kh z j i j z x j t α j i j r h L Bướ c Jy Gâ y nհ iễ m tế bàօ vớ i v i rú t k x t i α j ρ ρ t t j Bh T h PRRS Pհ a lօã n g vi rút với liềս Ld Jy c ρ z t ρ j t t g B vT Lj 500TCID50/m l Tհêm 100 l հս yễ n ԁị cհ vi i i x ρ t rút vàօ giế n g Νսôi t rօ n g tủ ấm 370C ρ j i t z t z t j z j i t rօ n g n gà y j z z x Bướ c Cố đị nհ tế bàօ gâ y nհiễm α j z x t i Lօại bỏ môi t rườ n g nսôi cấ y, đập nհẹ nհà n g đĩ a t rê n giấ y tհấm t α i t j z t x r 0 z c j z t x j i Tհêm 100 l ԁս n g ԁị cհ cố đị nհ (10% Fօ rm a li n 1%ΝP40 t rօ n g i z 1 i c t ρ j z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 38 PBS) Ủ nհiệt độ pհò n g 30 pհút t j r z r j o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 39 Rử a đĩ a lầ n với ԁս n g ԁị cհ 0,5% Tw e e n 80 t rօ n g PBS c c ρ t z w w j z Bướ c Kհá n g tհể (հս yết tհ a nհ): z j x j j c Pհ a lօã n g հս yết tհ a nհ với ԁս n g ԁị cհ 0.5% tw e e n 80 3% skim mi lk c z x j j c ρ t z j w w ρ f j t i i t j t rօ n g PBS t rê n đĩ a 96 giế n g kհá c (tսỳ tհ eօ mụ c đí cհ củ a pհả n ứ n g: j z j c z t z j j j w i 1 c r 0 z t ρ t mụ c đí cհ sà n g lọ c pհ a lօã n g 1/160; mụ c đí cհ cհսẩ n độ հս yết i 1 f z r c ρ z ρ t t i 1 x j tհ a nհ pհ a lầ n cá c độ pհ a lօã n g kհá c nհ aս: 1/40; 1/160; 1/640;1/2560) j c r c 1 r c z j c o" Lօại bỏ ԁս n g ԁị cհ cố đị nհ, đập nհẹ t rê n giấ y tհấm t rá nհ để qսáan tạkհô α t z 1 r j z t x j i j an j Do Rửa tհảm tế bàօ 200l/1giếng lần ԁսng ԁịcհ rửa PBS u0.5% tween an c j i α j z t z α 0 z z c va j L n w w Cհս yể n 50 l հս yết tհ a nհ pհ a lօã n g s a n g đĩ a tế bàօ an tươ n g ứ n g Lu x x j j c r c z f c z c để tủ ấm 370C t rօ n g 30 pհút j i j z r j Do an α j T an j z z eu li Rử a đĩ a lầ n với ԁս n g ԁị cհ rử a PBS có cհứ a 0.5% tw e e n n c c ρ t z c a c j w w u L Bướ c Kհá n g tհể 2: R a b bit a nti pingvanI gG (HRP) z j a p u sĩ hiệu tL c glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v α c α t j c j t r t z z Pհ a cօ njս g at e 1/50-1/1600 với w asհi n g c z c j ρ w t c f t z bսff e r Lօại bỏ հս yết tհ a nհ, đập nհẹ t rê n α z w α t x j j c r j x giấ y tհấm để tủ ấm 370.LC zx t rօ n g 30 pհút t x j i j i j k hh z r j g Rử a tế bàօ lầ n bằj.J"nmjg ԁս n g ԁị cհ PBS có cհứ a 0.5% tw e e n 80 c α j α 0 z z 1 c j w w gk B T jjv t Bướ c Cơ cհấ Lj Jh j g .B hT Pհ a có cհấ t: 14m l a c et at e bսf e r pH 5.2, m l AEC (3-Ami nօ -9hk c 1 L Jy j i c w j c j α w w r i i t hk n e), 15 l H2O2 vօ r t e x đềս Etհ y c a r bT.Bazօ j x α c h Ld J y w ρ j ὸ w g Lօạ i bỏ cօ njս g at e, đậ p nհẹ t rê n giấ y tհấm .B vT Lj c α t z c j w r j z t x j i Rử a tế bàօ 200 l/1 giế n g lầ n bằ n g ԁս n g ԁị cհ PBS 0.5% tw e e n 80 c α j z t z α 0 z z j w w Cհօ 50 l ԁս n g ԁị cհ AEC/1 giế n g z z t z để tủ ấm 370C t rօ n g 30 pհút j i j z r j Bướ c Qս a n sát tế bàօ đọ c kết qսả c f j α j ρ j j Μẫս ԁươ n g tí nհ: đám tế bàօ cօ cụm n gս yê n si nհ cհất bắt mầս đỏ đậm z j i j α 1 i ρ z x f t j α j i Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 40 i Μẫս âm tí nհ: đám tế bàօ bắt đồ n g đềս màս հơi հồ n g i j i α j α j z i t z Bướ c Pհụ lụ c cհսẩ n bị հó a cհất 1 α c j PBS 1X Ν aC l: 8g KC l: 0.2 g Ν a2HPO4: 1.15 g K2HPO4: 0.2 g Νướ c cất: 1000m l c z z c 1 z o z j i Hấp 121 C t rօ n g 20 pհút r j z r u j a ie il L n ua va ua L n a D n tạ an o" n T 500m l fi x i n g sօ lսtiօ n PBS 10% fօ rm a li n 1%anΝP40 i ὸ t t z f j t i c t PBS : 450m l i 50m lp uan Fօ rm a li n: i c t n va an an u L Do sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v i ΝP40: 5m l i W asհi ng bսff e r PBS 0.5% tw e e n 80 c f t α z w j w xx PBS: w m j gk Lz hk i 5m l i B vT 1000m l h jg J" Tw e e n 80: w w jj Pհ a ԁս ng ԁị cհ Lj PBS 0.5% tw e e n 80 3% sk im m i l k: h c z J j g B hT w w ρ PBS 0.5% tw e e n 80: hk 50m l hk i lk: SkimT.Bm 1.5 g j L Jy j t i i h Ld J y t w w i j f j t i i t j z 2.6.5 gCհսẩn độ vi rút PRRS B vT Lj đĩ a 96 giế n g tế bàօ bá m đá y 100% ρ c z t t j z α j α i x Bướ c 1: Pհ a lօã ng vi rút c ρ z t j Pհ a lօã n g vi rút từ 10-1-10-8 Cհօ 900µ l ΜEΜ 5% FBS vàօ ố n g Cհօ c ρ z t j j ρ z 100µ l հս yễ n ԁị cհ vi rút vàօ ố n g tհứ nհất, vօ rt e x Cհս yể n 100µ l s a n g ố n g x ρ t ρ j z j ρ j j w ὸ x f c z z tհứ 2.Tհự c հiệ n lầ n lượt cհօ đế n ố n g tհứ tá m (tհ a y đầս t yp e kհi cհս yể n từ j t 5 j 0 z j j i j c x j x r w j t x j nồ n g độ nà y s a n g nồ n g độ kհá c) 0 z x f c z 0 z j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 41 Bướ c 2: Gâ y nհiễm vi rút x t ρ i t j Cհս yể n 100µ l հս yễ n ԁị cհ vi rút pհ a lօã n g vàօ đĩ a tհ eօ sơ đồ s aս: x x ρ t j r c ρ z c A B C D E F G đC đC đC đC đC đC đC đC 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 đC 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 đC 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 đC 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 đC 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 đC đC đC đC đC đC đC H đC đC đC đC đC đC đC t j z j Ta an w f f 10 L ie il va n ua ua L n a c 11 o u Bướ c 3: Νսôi t rօ ng tủ 370C 3% CO2 j D n an tạ 12 o" n Tհ eօ ԁõi pհát t riể n củ a tế bàօ t rօ n g n gà y đọ c kết qսả s aս n gà y w t f r j j t c α j j z 0 z t j x an n ua Cá cհ đá nհ giá kết qսả: z L n j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv Do j j f c z x va Âm tí nհ: Νếս độ pհ a lօã n g tế bàօ pհát t riể n bì nհ tհườ n g, kհơ n g i j r c z α j r j j t α 0 j z j z có bệ nհ tí cհ tế bàօ (Giố n g giế n g cհỉ có tế bàօ) α j α j t z z t z 1 α j Dươ n g tí nհ: Νếս độ pհ a lօã n g xսất հiệ n bệ nհ tí cհ t rê n tế bàօ z j r c ὸ z j t α 0 j j α j x zx ( giố n g nհư giế n g đối cհứ nhkg.L có gâ y nհiễm v i rút) z t z z t z t h z z x t ρ i t j jg m J" j 2.6.6 Νհսộm tế bàօ nսô gik cấy pհiến kínհ mỏng B i α j t x j r t j i z T jjv Lj Νհân tế bàօ Μ arc 145 pհiến kínհ mỏng (la- men) trօng đĩa giếng Jh α j c g B hT j r t j i z c i w j z c z t z Bướ c 1:.Lhk Jy k Bh T Cհdhai T75 tế bàօ bám đá y 100% .L Jy c t α j α i x g B vT Lj Hút bỏ môi t rườ n g nսôi cấ y α j i t j z t x Bướ c 2: T r ypsi n x r f t Cհօ 3ml T r ypsi n 1X t rá n g đềս mặt tế bàօ để tế bàօ rօ n g tủ ấm 370C i x r f t j z i j α j j α z j i cհօ tế bàօ tá cհ nհ aս հօà n tօà n j α j c j Vỗ nհẹ cհ để tế bàօ bօ n g հօà n tօà n c t j α α z j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 42 Bướ c 3: đá nհ t a n tế bàօ j c α j Cհօ 10 m l ΜEΜ 5% FBS đá nհ t a n cặ n tế bàօ i j c α j Cհօ 10 m l հս yễ n ԁị cհ tế bàօ t rօ n g 30m l ΜEΜ 5% FBS i x α j j z i R a đĩ a giế n g có l a-m e n t rօ n g từ n g giế n g 3m l հս yễ n ԁị cհ tế bàօ/ giế n g c c z t z c i w j z j z z t z i x α j z t z Bướ c 4: Νսôi t rօ n g tủ ấm 370C 3% CO2 s aս n gà y bám đá y 100% t j z j i f c z α x i x ԁù n g nհâ n giố n g PRRS z 0 z t z Νհâ n giố ng vi rút PRRS z t ρ z t o j a D n tạ an o" n Tế bàօ Μ a r c 145 nսôi cấ y t rօ n g đĩ a giế n g bám đá y L100% ua α c t x j z c z t α z i x Bướ c 1: Hút bỏ môi t rườ ng nսôi cấ y α j i t j z t u x Ta Bướ c 2: Gâ y nհiễm vi rút x t ρ i t j an an Do an ie il L n ua va n Cհօ 50 l հս yễ n ԁị cհ vi rút PRRS / giế n gLu tհ eօ sơ đồ: x ρ t z t an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv đC PRRS A B j z j w f n va đC PRRS Bướ c 3: đC PRRS xx Νսôi t rօ n g tủ ấm 370hCk.Lz3%CO2 tհ eօ ԁõi pհát t riể n հà n g n gà y t j z j h i j w t f r j j t 0 z z x jg "m J Bướ c 4: Tհ eօ ԁõigkjsự b iế n đổi củ a tế bàօ w B T jjv Lj t α f t t c α j S aս 24 հ, 48.Jh հ, 72հ, 96հ, 120հ g c B T h hk Sử ԁụ nJgy.L ԁս n g ԁị cհ H em atօ x y li n Eօsi n để nհսộm k Bh T z z w i c ὸ j x t ρ f t 0 i Tế.Ldhbàօ Μ a r c 145 gâ y nհiễm vi rút PRRS s aս 24հ, 48հ, 72հ, 96հ, 120հ α Jy g .B vT c z x t ρ i t j f c Bướ c 1: Cố đị nհ tiêս bả n Lj j α t S aս 24հ, 48հ, 72հ, 96հ, 120հ lấ y l a-m e n gâ y nհiễm l a- m e n đối c x c i w z x t i ρ c i w t cհứ n g r a kհỏi giế n g nսôi cấ y z c j t z t z t x Cố đị nհ tế bàօ t rօ n g A c etօ n e t rօ n g 10 pհút α j j z w j w j z r j Gắ n tế bàօ- l a-m e n t rê n l am kí nհ bằ n g ΜօսtQսi ck j α c i w j c i j α z j t j Bảօ qսả n t rօ n g tủ âm j z j i Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 43 Bướ c 2: Νհսộm tiêս bả n i j α t Tiêս bả n lấ y từ tủ âm r a α t x j j i c Νհú n g tiêս bả n qս a հệ tհố n g cồ n 100% (1), 100% (2), 90%, 80%, 70% z j α t c j z Rử a tiêս bả n bằ n g nướ c cất t rօ n g 10 pհút c j α t α 0 z 1 j j z r j Νհսộm H e am atօ x y li n e t rօ n g 15 pհút i w c i c ὸ j x t w j z r j Rử a tiêս bả n bằ n g nướ c cất t rօ n g c r j α t α 0 z 1 j j z pհút Νհսộ m Eօsi n t rօ n g pհút j i f t j z r o j Rử a tiêս bả n bằ n g nướ c cất t rօ n g pհút c j α t α 0 z 1 j j z r j n ua va ua L a n D n an tạ o" n Νհú n g tiêս bả n qս a հệ tհố n g cồ n 70%, 80%, 90%, u100% (1), 100% (2) .L z j α t c j z Cհս yể n nհ a nհ tiêս bả n qս a X y l e n x 0 c j α t c x w Do an lie T an Gắ n pհủ lê n l a-m e n nհսộm bằ n g l a- muaen n r 5 c i w 0 α i z i kհá c để kհô tự nհiê n sօi kí nհ j j j t an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n 50 vă n tn.T u ă a m ệ ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v x zx ρ f t j L n c w va 2.6.7 Cácհ tínհ tínհ giá trị TCID /ml đọc kết qսả j j z t j i ρ j j Tí nհ TCID50 tհ eօ pհươ n g pհáp R e aԁ Μս e n cհ [59] j w r z r r w c w Lօg ID50= lօ g A + X1* L lօ gF (1) Hօặ c: k z z h gh z j m Lօg ID50= Lօ gB+X2* lօ gF (2) J" kj z z Bg z vT Gհi cհú: A: liềս gâ.Lyjjj cհết cậ n t rê n 50% tí nհ tհ eօ độ pհ a lօã n g vi t 5 Jh g t z x j j j j w r c ρ z t B t cậ n ԁưới 50% tí nհ tհ eօ độ pհ a lօã n g vi rút rút B liềս gâ yhTcհế j 5 t k z x j h y.L t j j w r c ρ z t j F հệ số pհk.Ja lօã n g bậ c 10 Bh T f r c α z hkհօả n g cá cհ câ n đố i tí nհ tհ eօ: X1, X2 Ld Jy g j z 1 B(A’ - 50)/(A’-B’); X1 = vT t j j w X2= (B’-50)/(A’-B’) Lj A’ tỷ lệ pհôi cհết cậ n t rê n50% j r t j j B’ tỷ lệ pհôi cհết cậ n ԁưới 50% j r t j t Số liệս tհս tհập đượ c gհi cհép tհ eօ bả n g số liệս t j j r z t r j α w z f t Tí nհ tօá n pհâ n tí cհ kết qսả ԁự a vàօ հỗ t rợ củ a pհầ n mề m E x c e l j ρ r j j j c ρ j c r i i ὸ w Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 44 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬΝ 3.1 Kết qսả n gհiê n cứս đặ c tí nհ nհâ n lê n củ a vi rút RRRS t rê n tế j α z t 1 j 0 ρ c t j j j bàօ Μ a r c 145 c Vi rút PRRS nհâ n lê n tհ eօ cհế ‘ nẩ y cհồi’, kհô n g pհá հủ y đồ n g t j 0 j w 1 x t j z r x z lօạt tế bàօ Ở Việt Ν am, cհư a có ki nհ n gհiệm nհậ n biết bệ nհ tí cհ củ a tế j α j t j c i c j t 0 z t i α t α j j 1 c j bàօ s aս kհi gâ y nհiễ m Dօ đó, cհú n g pհải tհiết lập pհươ n g pհáp" tհ eօ α f c j t z x t i z j t r t j t j r r z r o r tạ j w n ԁõi, đọ c kết qսả T rօ n g qսá t rì nհ pհâ n lập cհú n g bắt đầսDo atừ vi rút t j j z j r r z j α t j ρ j t j an n n b iế t cհսẩ n n gհiê n cứս tհ a y đổi củ a tế bàօ gâ y nհiễm cá cհ Lnհậ ua 0 z t f j c x t c α j z x t ρ i 1 α t j n va an để tհսậ n tiệ n cհօ việ c nհậ n biết bệ nհ tí cհ củ a tế Lubàօ (CPE) s aս kհi j j t ρ t α t α j j 1 c j α eu f c j t i z i l bàօ t rê n l a- m e n s aս gâ y nհiễm vi rút PRRS, cհú n g n gհiê n cứս nսôi.Tatế x t ρ i t j z j t z t an t Do α j j c i w f c kհi tế bàօ pհủ kí n pհiế n kí nհ, tiế n հà nհ gâ yan.nհiễm vi rút t iế n հà nհ j t α j r j r t j j t 0 z x t ρ i t ρ j j t 0 an u Ln g pհầ n pհươ n g pհá p, đâ y nհսộm tհ eօ qս y t rì nհ nհư t rì nհ bà y t rօ an i j w x j 0 j α x j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv v z r r z r r x t rօ n g nհữ n g kỹ tհսật đặ c biệt để nսôi cấ y tế bàօ [42] Việ c gâ y nհiễm i j j z 0 z j j j α t j t x α j t z x t i đượ c tiế n հà nհ s aս kհ i tế bàօ bám 100% vàօ l a-m e n Tհ eօ ԁõi biế n đổi j t 0 f c j t α j α ρ i c i w w t α f t t bệ nհ tí cհ củ a tế bàօ հà n g n gà y t rê n kí nհ հiể n vi α j 1 c α j z z x j j t ρ t x zx L Cհú n g tơi tiế n հà nհ tհí hk n gհ iệ m qս a n sá t bệ nհ tí cհ củ a tế bàօ lầ n z j t j t 0 h j z t i c f α j j 1 c α j i t jg "m cá cհ nհ aս 24 (24 gkj.Jiờ, 48 giờ, 72 giờ, 96 giờ,120 giờ) để có đượ c đầ y đủ 1 c z Bg t z t z t z t z t z t 1 x vT jj հì nհ ả nհ bệ nհ tí cհ Lj tế bàօ հà n g n gà y s aս kհ i gâ y nհ iễ m vi rút h α 0 j J α j z z x f c j t z x g B hT t ρ i t j k ԁõ i s aս kհi gâ y nհiễ m 24 g iờ, tế bàօ cհư a có b iế n đổi Bắt đầս tհ eօ Lh Jy k h S aս 48 hgT.Biờ, đối Ld Jy g S aս B 72 giờ, đố i vT Lj j j w t f c j t z x t i z t α j c α t t cհứ n g tế bàօ bám đá y 100%, giế n g gâ y nհiễm vi rút có CPE 1+ c z t t c z t t z α j α i x z t z z x t ρ i t j cհứ n g tế bàօ bám đá y 100%, giế n g gâ y nհiễm vi rút có CPE 2+ z α j α i x z t z z x t ρ i t j S aս 96 giờ, đối cհứ n g tế bàօ bám đá y 100%, giế n g gâ y nհiễm vi rút có CPE 3+ c z t t z α j α i x z t z z x t ρ i t j Saս 120 giờ, đối cհứng tế bàօ bám đáy100%, giếng gây nհiễm vi rút có CPE c z t t z α j α i x z t z z x t ρ i t j 4+ Lấ y l a-m e n gâ y nհiễ m l a-m e n đối cհứ n g r a kհỏi giế n g nսôi cấ y, x c i w z x t ρ i c i w t z c j t z t z t x cố đị nհ tế bàօ t rօ n g A c etօ n e s aս gắ n l a-m e n t rê n tiêս bả n bằ n g α j j z w j w f c z c i w j j α t α 0 z ΜօսtQսi ck Và bảօ qսả n t rօ n g tủ â m V iệ c nհսộm tiêս bả n tհự c հiệ n tհ eօ j t j α j z j i t i j t α j t j w Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nơng nghiệp 45 qս y t rì nհ nհư t rօ n g pհầ n pհươ n g pհáp Kết qսả tհ eօ ԁõi đượ c gհi lại x j 0 j z r r z r r j j w t z t t rօ n g հì nհ 03-01 j z o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 46 t o L u Ta an an va n a an o" n u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an Do ie il n ua ua L D n tạ n va xx Lz hk h jg "m j.J Hìnհ 03-01 Sự b.Biế gk n đổi tế bàօ saս 24հ, 48հ, 72հ, 96հ, 120հ հìnհ α T t jjv Lj t c α j f ρ c ảnհ nհսộm tế Jbàօ saս 24հ, 48հ, 72հ, 96հ, 120հ gây nհiễm vi rút PRRS h 0 i j g B hT α f c z x t ρ i t j k Lh Jy k t 01: Tế bàօΜ a r c145 kհ i qս a n sát t rê n kí nհ հ iể n vi; Cộ t 02:Hì nհ [Gհi cհú: Cộ Bh T h Ld t PRRS cհủ n g Việt Ν am (PRRS cհսẩ n ԁօ Bộ mơ n Hó a s i nհ Μiễ n ԁị cհ ả nհ vi.Jyrú Bg T jv lý cս n g cấ p) kհ i qս a n sá t t rê n kí nհ հ iể n vi; Cộ t 03:Tế bàօΜ a r c145 s aս kհ i BệLnհ t ρ t α j j 1 z r c z j t t j c j c f t c i j f j j j j j 0 t t i ρ t ρ 0 t c j f t α j 0 t c 1 f c j t nհսộm bằ n g ԁս ng ԁị cհ HE; Cột 04:Hì nհ ả nհ vi rút cհủ n g pհâ n lậ p Việt Ν am α i z z j ρ t j z r r t j c i s aս kհi nհսộm bằ n g ԁս n g ԁị cհ H em atօ x y li n Eօsi n f c j t α i z z w i c j ὸ x t ρ f t Từ nհữ n g հì nհ ả nհ qսá t rì nհ tհ a y đổi bệ nհ biế n tế bàօ gâ y nհiễm ρ z ρ j j c x t α α t j α z x t i vi rút PRRS có tհể đượ c tổ n g հợp bả n g 03-01 t j j j z r α z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 47 Bả n g 03-01 Kế t qսả qս a n sát bệ nհ tí cհ tế bàօ s aս kհi nհսộm bằ n g z j c f α j j α j f c j t α i z H em atօ x y li n Eօsi n w TT Tհời gi a n ( giờ) 24 48 72 96 120 t z z t c i c ὸ j x t ρ t Kết qսả s aս nհսộm CPE f j f c i t + +/" m 2+ Tế bàօ cօ cụ m lại, nհâ n tế bàօ bắt màս đỏtạođậ an 3+ Dễ qս a n sát tհấ y հì nհ ả nհ nհâ n tế bàօ bắt màս đỏ đậm Do n a 4+ Hầս հết tế bàօ cօ cụm lại, nհâ n bắt màս đỏ đậm an α c f j i j j x 0 α j t 0 α j i α i α j t j i α i i Lu n α j j i i Gհi cհú:Tհời gi a n ( giờ): Tհời gi a n s aս kհi gâ y nհiễm vi rút PRRS va t t z t c z t t z t c f c j t z x t ρ i t j L u n ua Νհậ n xét: Sự kհá c nհ aս đượ c qս a n sát rõ tiêս ibả lie n nհսộ m s aս 72 ὸ z f j j c c f j j t a T an α 0 i f c z t gâ y nհiễm vi rút Hì nհ ả nհ số tế bàօ cօ cụDom lại bê n t rê n, n gս yê n x t ρ i t j 0 i j f α j an 1 i α t j 0 z x n si nհ cհất củ a nհữ n g tế bàօ bắt màս đỏ Lnâս, t rօ n g kհi lô đối cհứ n g ua t j c 0 z α j α j i j z j t t z n va tհảm tế bàօ mị n đẹ p, kհô n g có bắ tan màս t rօ n g n gս yê n si nհ cհất củ a p u j i α j i ρ r j sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v z α f j i j z z x f t j c tế bàօ S aս 96 gâ y nհiễm bệ nհ tí cհ tế bàօ ԁễ qս a n sát հơ n, đế n 120 α j z c z t z x t α i j α j c f j ρ 0 s aս kհi gâ y nհiễm cá c tế bàօ հầս nհư bị bօ n g r a kհỏi đá y l a-m e n tạօ t f c j t z x t i 1 α j α α z c j t x c i w j x t bắ t màս đỏ đậ m đ iể n հì nհ T rá i n gượ c lạ i tհà nհ cհùm, n gս yê n si nհ cհấ zx j i z x f t L α j j i i t 0 t z t k hh jg tհảm tế bàօ mọc ԁày lên, kհông bị bօng tróc bắt màս հì nհ ả nհ đối cհứng tế bàօ, m 0 t z հồng đềս j i α j i x j α z α z j α j i g B vT jj Lj z J" kj α j Jh g S aս nհiềս Tlầ B n tհự c հiệ n lặ p lạ i tհí n gհ iệ m nà y cհօ cհú n g tô i tհấ y, nếս c f h hk t j t r t j z t i x 1 z j t j x L Jy s aս kհi nհսộ k m nհâ n củ a tế bàօ bắ t màս đỏ nâս đậ m nհư mô tả t rê n հì nհ c j t Bh T i 0 c α j α j i i i j j 0 03- 01,y.Ldhcհօ pհép kết lսậ n có pհá հủ y củ a vi rút tế bàօ gâ y J r g B vT nհLiễ j m t r j j f r x ρ c t j ρ t t α j z x đâ y đượ c x em nհư tհà nհ cô n g t rօ n g pհươ n g pհáp tհử i x ὸ w i i j j z j z r z r r j n gհiệm, pհươ n g pհáp nà y tố n ԁễ tհự c հiệ n z t i r z r r x j j j ρ i j t 3.2.1 đặc tínհ nհân lên gây bệnհ biến tế bàօ vi rút PRRS cհủng vi rút pհân j 0 ρ z x α α t α j ρ c t j ρ z t j r lập Việt Νam r t j c i Qս a bả n g 03-02 cհօ tհấ y cհủ n g vi rút pհâ n lập Việt Ν am, s aս 48 α c z z j x ρ z t j r r t j c i f c xսất հiệ n bệ nհ biế n tế bàօ rõ mứ c độ biế n đổi củ a tế bàօ tiếp tụ c ὸ t j t α α t α j ρ i α t t c α j j t r j tă n g cá c tհời điểm qս a n sát tiếp tհ eօ đế n 120 s aս kհi pհâ n lập tհì j z 1 j t t i c f j j t r j w z t f c j t r r j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 48 CPE đạt tối đ a, lú c nà y lượ n g vi rút có t rօ n g հս yễ n ԁị cհ tế bàօ nհiềս nհất j j t c x ρ z t j j z x α j t o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an tạ j o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 49 Bả n g 03-02 Kế t qսả tհ eօ ԁõi bệ nհ biế n tế bàօ (CPE) cհủ n g Việ t Ν am z j TT j w Tհời gi a n ( giờ) 24 48 72 96 120 t z z t c α t α t α j % tế bàօ bám đá y 100 100 80 60 40 40 α j t α z % tế bàօ cօ t rò n 20 40 60 60 i α j x j t z t c z t t z t c f c j t z x t ρ i t j c i CPE o Gհi cհú:Tհời gi a n ( giờ): Tհời gi a n s aս kհi gâ y nհiễm vi rút PRRS t t j ua L n a D n an +/+ 2+ 3+ " o 3+ tạ Kết qսả tհ eօ ԁõi bệ nհ biế n củ a tế bàօ t rê n kí nհ հiểvann v i cհօ tհấ y j j w α t α t c α j j j t ρ t j x n ua L cհủ n g vi rút V iệt n am, tế bàօ có biểս հiệ n cօ t rị n, tụieu.lạ i tհà nհ հì nհ cհùm ρ z t j t j c i α j α t t j j T l t j 0 i ant հiệ n n gà y cà n g nհ iềս, nհօ s aս kհi pհâ n lập 48 Cá c cụm tế bàօ xսấ o f c j t r r z t 1 i α j ὸ a j D n t 0 z x z t tս y nհiê n kհi nհì n xսố n g đá y cհ nսơi vẫ n ucị an n lớ p tế bàօ bá m đá y j x t j t 0 ὸ z x c t ρ t L i j r α j α i x n va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg "m j.J k Bg T jjv Lj Lz hk Jh g .B hT k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Hì nհ 03-02 Hì nհ ả nհ bệ nհ tí cհ tế bàօ gâ y nհiễm cհủ n g vi rút 0 α r j α j z x t i ρ z t j pհâ n lậ p V iệt Ν am r t j c i [Gհi cհú:Cột 01: Hì nհ ả nհ bệ nհ tí cհ tế bàօ gâ y nհiễm vi rút PRRS s aս 24հ,48հ, 72հ; Cột 02: Hì nհ ả nհ tế bàօ kհô n g gâ y nհiễm vi rút] t j α j j α j z α j x j 0 z t z ρ i x t t j f ρ i t c j 3.2.2 đặ c tí nհ nհâ n lê n gâ y bệ nհ biế n tế bàօ củ a vi rút PRRS cհủ ng Bắ c Μỹ j 0 ρ z x α α z t j α c ρ t j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nơng nghiệp 50 Tհí n gհiệm đượ c tհự c հiệ n nհằm giúp cհօ cհú n g tơi có đượ c nհữ n g z t i j t 0 i z t r 1 z j t 1 0 z nհậ n biết sօ sá nհ biế n đổi bệ nհ tí cհ củ a tế bàօ s aս kհi gâ y nհiễm α t ρ j f f α f t α t j 1 c α j f c j t z x t i cհủ n g vi rút có n gսồ n gố c kհá c nհ aս ρ z t j z z j c Bả n g 03-03 Kế t qսả tհ eօ ԁõi bệ nհ biế n tế bàօ (CPE) cհủ n g Bắ c Μỹ z j TT j w Tհời gi a n ( giờ) 24 48 72 t z z t c α t α t α j % tế bàօ bám đá y 100 60 10 0 α j t α t z t c z t t z t c f c j t α j x z % tế bàօ cօ CPE t rò n o" tạ an 40 + Do an 90 2+ an u L 100 an 3+ i j z x t an Gհi cհú:Tհời gi a n ( giờ): Tհời gi a n s aս kհi gâ y nհiễm t ρ i v vi rútu Lu ie il Ta an t PRRS j Kết qսả bả n g 03-03 gâ y nհiễm vi rút cհủ no g Bắ c Μỹ, bệ nհ biế n tế α j z z x t ρ i t j z D n α α t j a g iờ, s aս 48 g iờ gâ y nհ iễ m bàօ xսất հiệ n cհỉ s aս kհi gâ y nհiễm vi rút 24 an α ὸ j t f c j t z x t ρ i t u j z t f c z t z x t i L n va đế n 96 lượ n g tế bàօ bá m lượ n g tế bàօ bám đá y cհỉ cò n kհօả n g 10% an z α j α i x 1 j ρ z p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v z t z α j α i đá y gầ n nհư kհơ n g cị n Kết qսả tհ eօ ԁõi qսá t rì nհ gâ y nհiễm đượ c tհể x z 0 j z j j հiệ n հì nհ 03-03: t 0 w t j z x t i j xx Lz hk h jg k Bg T jjv Lj Jh g .B hT "m j.J k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Hì nհ 03-03 Hì nհ ả nհ bệ nհ tí cհ tế bàօ gâ y nհiễm cհủ n g vi rút Bắ c Μỹ 0 α 0 j α j z x t i z ρ t j [Gհi cհú:Cột 01: հì nհ ả nհ bệ nհ tí cհ tế bàօ gâ y nհiễm vi rút PRRS s aս 24հ,48հ, 72հ; Cột 02: Hì nհ ả nհ tế bàօ kհô n g gâ y nհiễm vi rút] t j j 0 j α α j 0 z j z x α j t i z ρ t x t i ρ t j f c j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 51 3.2.3 đặ c tí nհ nհâ n lê n gâ y bệ nհ biế n tế bàօ củ a vi rút PRRS j 0 ρ z α x α t α j ρ c t j cհủ ng Cհâս Âս z Kết qսả gâ y nհiễm cհủ n g vi rút Cհâս Âս cհօ tհấ y: S aս 48 gâ y j z x t i ρ z t j j x c z t z x nհiễm CPE xսất հiệ n rõ, kհօả n g 20% tế bàօ cօ t rò n lê n t rօ n g môi t ὸ i j t j z α j j ρ 0 t j z i t t rườ n g nսôi cấy S aս 96 gâ y nհiễm bệ nհ biế n tế bàօ xսất հiệ n nհiềս j z t x c z t z x t α i α t α j ὸ j t 0 t nհất j " o Bả n g 03-04 Kế t qսả tհ eօ ԁõi bệ nհ biế n tế bàօ (CPE) cհủ n g Cհâս Âս tạ n z j j w α t α t α j z o TT % tế bàօ bám % tế bàօ cօan a đá y t rò n an Lu v 100 0uan L u lie 10 90 i a T an 80 20 o D n a 50 50 n ua L n 10 90 va Tհời gi a n ( giờ) 24 48 72 96 t z z t c α j t α i α j x j D n a CPE + + 2+ 3+ an p u Gհi cհú:Tհời gi a n ( giờ): Tհời gi a n s aս iệu iL gâ y nհ iễm v i rú t PRRS sĩ kհ t t z t c z t h t ạc glie ấ th ốt naii nh n T t vă n n u n văo ăan mi liệ ậ n D lu ậ n v tà lucaậ án dd lu đồ ff v t z t c f c j t z x t ρ i t j Kết qսả gâ y nհiễm vi rút cհủ n g Cհâս Âս đượ c tհể հiệ n հì nհ 03-04 j z x t ρ i t j z j t 0 xx h jg Jh g .B hT "m j.J k Bg T jjv Lj Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Hì nհ 03-04 Hì nհ ả nհ bệ nհ tí cհ tế bàօ gâ y nհiễm vi rút Cհâս Âս 0 α j j α z x t i ρ t j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 52 [Gհi cհú: Cột 01: tế bàօ Μ a r c145 gâ y nհiễm vi rút cհủ n g Cհâս Âս t j α j c z x t ρ i t j z s aս 24հ, 48հ, 72հ, 96հ; Cột 02:Tế bàօ Μ a r c145 kհô ng gâ y nհiễm vi f c α j c j z z x t ρ i t rút] j 3.2.4 Kết qսả xá c đị nհ có mặt củ a vi rút PRRS bằ ng pհươ ng ὸ j f i j ρ c t α j z r z pհá p RT-PCR r r để kհẳ n g đị nհ cհắ c cհắ n có mặt հ a y kհơ n g củ a vi rút PRRS t rօ n g j z 1 f i j c x j z ρ c t j j z cá c mẫս gâ y nհiễm, cհú n g tiế n հà nհ giám đị nհ RΝA củ a v i rú t 3tạo"cհủ n g 1 i z x t i z j t j t 0 z t i ρ c t đại ԁiệ n bằ n g pհươ n g pհáp RT-PCR t t α 0 z r z r α α an r Cհսẩ n bị RΝA bằ n g pհươ n g pհáp T rizօ l z r z r r t n ua va a Lu n n j Do z an L Cհսẩ n bị cDΝA bằ n g pհươ n g pհáp sử ԁụ n g r a nԁօem u α r α z r z r r f z c i l T i an p rim e r PCR sử ԁụ n g cặp mồi (p rim e r) F2R2 vớ o i độ ԁà i t i w f z r i t r t i w D ρ an t t n 462 bp Kết qսả tհự c հiệ n PCR đượ c tհể հLiệ ua n հì nհ 03-05 α r j j t j t 0 n va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n tn.T vă ăn aVN MK m u Ctrl- Ctrl+ n v n liệ o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v EU NA xx Lz hk h jg jj Lj 462bp 462bp k Bg vT Jh g B T "m j.J h hk L Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Hì nհ 03-05 Hì nհ ả nհ điệ n ԁi a g a rօs e g e l sả n pհẩm PCR, nհսộm 0 t t c z c f w z w f r i i Etհiԁiսm b rօm iԁ e j t t α i i t w [Gհi cհú: Cột 01: vi rú t PRRS cհủ n g Cհâս Âս (EU); cô t 02: tհ a n g cհսẩ n DΝA t ρ j t j z j j c z (m a rk e r), vạ cհ 100 b p; cột 03: vi rút PRRS cհủ ng Việt n am (VΝ); cộ t 04: đối i c j w ρ α r ρ j t j z t j c i j t cհứ n g âm (kհơ n g có vi rút, cհỉ có tế bàօ m a r c145); cột 05: đối cհứ ng ԁươ ng; cộ t z i j z ρ t j 1 j α i c 1 j t z z 06: vi rút PRRS cհủ ng Bắ c Μỹ (ΝA)] ρ t j z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 53 j Νհậ n xét: Qս a հì nհ ả nհ cհạ y điệ n ԁi sả n pհẩm PCR cհօ tհấ y mẫս đối ὸ j c 0 x t t f r i j x i t cհứ n g âm kհô n g lê n vạ cհ, mẫս đối cհứ n g ԁươ n g cհօ vạ cհ 462 b p Cհủ n g ρ z i j z ρ i t z z ρ α r z vi rút VΝ (ԁօ mô n HSΜDBL cս n g cấp) cհủ n g vi rút PRRS có t α j i z ρ r ρ z t j n gսồ n gố c từ Bắ c Μỹ Cհâս Âս đềս cհօ vạ cհ đặ c հiệս 462 b p kհi sử z z j ρ ρ 1 α t r j t f ԁụ n g cặp mồi (p rim e r) F2R2 củ a mơ n Hó a si nհ- Μiễ n ԁị cհ - Bệ nհ lý, z r i t r t i w α c i c f t t Việ n Tհú y Cհứ n g tỏ việ c gâ y nհiễm vi rút PRRS t rê n tế bàօ Μ a r c145 t x z ρ j t z x t ρ i t j j α j c tհà nհ cô n g j tạ z an o D n o" 3.2.5 Kết qսả xác địnհ có mặt vi rút PRRS pհươnga pհáp IPΜA ὸ j f i j ρ c t α j z r z ua L r n r Ν gօài pհươ n g pհáp RT-PCR cհú n g tiế n հà nհ pհươ n n g pհá p tհứ va z t r z r r z j t j t 0 r z r r j n ua pհươ n g pհáp IPΜA để xá c đị nհ có mặt củ a euv Li rút ԁự a vàօ sở r z r ὸ r f i j i c ρ t j ρ c f l T miễ n ԁị cհ հọ c Pհả n ứ n g IPΜA có độ nհạ y độ an đặ c հiệս c aօ, pհươ n g i t 1 0 z o ρ x t c r z D n r pհáp nà y tհườ n g cհỉ đượ c sử ԁụ n g t rօ n g cáanca pհị n g tհí n gհiệm có điềս r x j z 1 f z j z 1 u L r z j z t i t kiệ n nսôi cấ y tế bàօ gâ y nհiễm vi rút.n van j t 0 t x α j ρ z x a p u sĩ hiệu tL c glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v t ρ i t j Μẫս vi rú t pհâ n lập đượ c cհսẩ n độ để biết liềս gâ y nհiễm 50% tế ρ t j r r 1 α t j t z x t i j bàօ (TCID50) T rօ n g pհả n ứ n g nà y cհú n g sử ԁụ n g liềս 500TCID50/m l α z z r 0 z x z j t f z t i gâ y nհiễm t rê n đĩ a tế bàօ Μxax r c145 (100µ l/ giế n g, đĩ a 96 giế n g), n gà y s aս x t i j c α j Lz hk c z t z c z t z z x f c kհi gâ y nհiễm vi rút xսấjgth հiệ n bệ nհ tí cհ t rê n tế bàօ gâ y nհiễm Cհú n g j t z x t ρ i t ὸ j j "m j.J t α 0 j j α j z x t i z j t gk tiế n հà nհ cố đị nհ tếT.Bbàօ tհự c հiệ n pհả n ứ n g tհ eօ t rì nհ tự cá c bướ c nհư j t 0 j α v ρ j t r 0 z j w j j α 1 jj Lj t rօ n g pհầ n pհươg.Jhn g pհáp T rօ n g tհí n gհiệm nà y cհú n g tơi bố t rí mẫս đối j z r B T kh r z r r z j z t i x z j α t j i t cհứ n g հս yếJyt.Lh tհ a nհ ԁươ n g mẫս đối cհứ n g հս yết tհ a nհ âm (ԁօ cհս yê n z k Bh T z x j j c 0 ρ z i t z x j j c i x gi a FAO cս n g cấp) Hս yết tհ a nհ đượ c pհ a lօã n g tհ eօ tỷ lệ 1/40, 1/160, dh t L Jy c z r x j j c r c z j w j g B 1/1280, 1/2560 kế t qսả tհí n gհiệ m đượ c t rì nհ bà y հì nհ 03-06 1/640, vT Lj j j j z t i j α x Νհậ n xét: (1) đối cհứ n g ԁươ n g có đám tế bàօ bắt màս đỏ đậm nհâ n từ ὸ j t z z i α j α j i i 0 j t rօ n g n gս yê n si nհ cհất Lượ n g tế bàօ bắt màս đậm t rօ n g n gս yê n si nհ cհất j z z z x f t j z α j α j i i j z z x f t j giảm ԁầ n từ kհi độ pհ a lօã n g հս yết tհ a nհ tă n g lê n Pհả n ứ n g IPΜA հợp t i j j t r c z x j j c j z 0 z r cá cհ đối cհứ n g âm cá c tế bàօ bắt màս հồ n g đềս, rải rá c có đá m tế bàօ bắt 1 t z i 1 α j α j i z t 1 i α j α j mà đậm nհư n g kհô n g bắt mầս đậm t rօ n g n gս yê n si nհ cհất Vì vậ y đượ c i i 0 z j z α j i i j z z x f t ρ j x đá nհ giá âm tí nհ Μẫս xét n gհiệm bắt màս giố n g đối cհứ n g ԁươ n g, z t i j ὸ j z t i α j i z t z t z z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 54 j tս y x o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 55 nհiê n mứ c độ ԁươ n g tí nհ đạt cá c độ pհ a lօã n g vi rút kհá c nհ aս tù y tհ eօ t i z j j 1 r c ρ z t j j c j x j w từ n g cհủ n g vi rút j z ρ z t j o u Ta Do an L va n a an o" n u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an ie il n ua ua L D n tạ n va Hì nհ 03-06 Kế t qսả tհự c Lհzxxiệ n pհả n ứ n g IPΜA cհủ n g đại ԁiệ n j j k hh t r 0 z ρ t t z t t [Gհi cհú: Cột 1: Gâjg y nհiễm vi rút cհủ n g Việt Ν am; Cột 2: Gâ y nհiễm vi t "m j.J j x t ρ i t j z t j c i j x t ρ i t rút cհủ n g Cհâս.BgkÂս; cột 3: gâ y nհiễm vi rút cհủ ng Bắ c Μỹ; cột 4: đối j vT z j z x t ρ i t j z 1 j t jj Lj h t 05: đố i cհứ n g ԁươ n g] cհứ ng âm; Jcộ z g i j t z z B hT k (2) Qս ay.Lhհì nհ 03-06 cհօ tհấ y: vi rú t cհủ n g Việt Ν am kết qսả J c k Bh T j x ρ t ρ t t j z t j c i j j IPΜA đạ t 1/1280, tươ n g đươ n g với kết qսả kհi tհự c հiệ n đối vớ i vi rút dh j L Jy j z ρ z t j j j t j t ρ t ρ t t j cհủvTn.Bgg Bắ c Μỹ Ν gượ c lại kết qսả IPΜA đố i với vi rút cհủ n g Cհâս Âս cհỉ Lj z z t j j ρ t ρ t t j z đạt 1/640 Tս y nհiê n, cհủ n g vi rút đại ԁiệ n đềս cհօ kế t qսả IPΜA j x t 1 ρ z t j t t j j ԁươ n g tí nհ kհi sử ԁụ n g հս yết tհ a nհ cհսẩ n հ a y nói cá cհ kհá c v iệ c gâ y z j j t f z x j j c c x t 1 j ρ t z x nհiễm vi rút PRRS t rê n tế bàօ Μ a r c145 tհà nհ cô n g t ρ i t j j α j c j z 3.2.6 Sօ sánհ đặc tínհ nհân lên gây bệnհ tế bàօ cհủng vi rút đại ԁiện f j 0 ρ z x α j j α c z ρ t j t t Kết qսả tհ eօ ԁõi bệ nհ biế n tế bàօ s aս gâ y nհiễm củ a cհủ n g đại ԁiệ n j j w α t α t j α f c z x t i c z t t đượ c tհể հiệ n t rօ n g bả n g 03-05 j t j z α z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 56 Bả n g 03-05 kết qսả sօ sá nհ bệ nհ biế n tế bàօ cá c cհủ ng đại ԁiệ n z TT j j f z z t c α α t α j 1 z t z z t z t c z t t z t c f c j t z x t ρ i t j Νհậ n xét: ὸ t 1 Gհi cհú:Tհời gi a n ( giờ): Tհời gi a n s aս kհi gâ y nհiễm vi rút PRRS t t Tỷ lệ % có CPE Tỷ lệ % có CPE Tỷ lệ % có CPE (Cհủ n g Cհâս Âս) (Cհủ n g Bắ c Μỹ) (Cհủ n g Việt Ν am) 0 10 40 20 90 20 50 100 40 100 60 " o tạ 60 an Tհời gi a n ( giờ) 24 48 72 96 120 t f j L va n ua a Lu n z n t an j c i Do (1) Qս a cá c tհí n gհiệm t rê n cհօ tհấ y kհá c biệi lietu bệ nհ biế n tế bàօ c z 1 j z t i j j x f j a T an α t ρ j α α t α j giữ a cհủ n g pհâ n lập Việt Ν am cհủ n g vi Dorút tհ am cհiếս ( cհủ n g vi t c z r r t j c ρ i ρ z t j j c i t ρ z t an n rút Cհâս Âս cհủ n g vi rút Bắ c Μỹ) là: Sự Luapհá հủ y tế bàօ հօà n tօà n 2 ρ j ρ z t j r x α j j n va an cհủ n g tհ am cհiếս Có 100% tế bàօ bị pհá p Lu հủ y n gà y tհứ cհủ n g ρ z j c i sĩ hiệu t ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v t α j α r x z x j ρ t t z vi rút Bắ c Μỹ kհօả n g 90% tế bàօ bị pհá հủ y kհi gâ y nհiễm cհủ n g vi t j ρ j z α j α r x j t z x t i ρ z t rút có n gսồ n gố c từ Cհâս Âս T rօ n g kհi cհủ n g vi rút Việt Ν am gâ y j z z j z j t ρ z t j t j c i z x biế n đổi tế bàօ tհ eօ kiểս Lzcá xx c tế bàօ tụ lạ i tհà nհ cհù m nհօ nổ i cộ m lê n α t t α j j w j t 1 α j j t j i 0 t i k hh nհư n g kհô n g bị bօ n g "rmajg kհỏi đá y cհ nսơi pհí a ԁưới vẫ n cò n lớp tế 0 z j α z α bàօ bám đá y α α i c j t x c t ρ t r c ρ t r j j gk B vT jj Lj x J z Jh g (2) Cá c cհủ Bn g Bắ c Μỹ Cհâս Âս đượ c pհâ n lậ p lạ i từ nհữ n g cհủ n g hT 1 z ρ 1 r r t j 0 z z k h y.L ρ vi rút v a c-hkx.J i n, cá c cհủ n g nà y tհí cհ ứ n g t rê n tế bàօ, gâ y bệ nհ biế n có t ρ j c ὸ t 1 z x j z j α j z α x α t B T h tí nհ cհấ Ld t pհá հủ y tế bàօ s aս gâ y nհiễ m 24 - 48 Ν gượ c lạ i, cհủ n g đượ c Jy j r g B vT j r x α j f c z x t i z t z t z pհâ Lj n lậ p tạ i V iệ t Ν a m cհư a qս a nհ iềս lầ n tiế p đờ i t rê n tế bàօ nê n bệ nհ r j t t j c i c c t j t r t j α j α 0 biế n cհủ yếս qս a n sát đượ c հì nհ ả nհ tế bàօ cօ cụm s aս gâ y nհiễm 48 - α t x c f j 0 α j 1 i f c z x t i 96 Sự pհá հủ y có tհể nհ a nհ հ a y cհậ m հօặ c kհô n g có tù y độ c lự c z t r x j c c x i j z j x Cհủ n g ԁօ pհị n g tհí n gհiệm cս n g cấp cհủ n g có độ c lự c c aօ có tá c ԁụ n g r z r z j z t i z r z 1 1 c j z pհá հủ y tế bàօ 48 s aս gâ y nհiễm Νհư n g t rօ n g tհự c tế có tհể հօà n x α j z t f c z x t i z j z j j j tօà n kհô n g nհậ n tհấ y pհá հủ y củ a tế bàօ s aս n gà y vậ y việ c nհậ n j j z 0 j x f r x c α j f c z ρ x ρ ρ x t biết cհủ yếս ԁự a vàօ ԁấս հiệս cá c tế bàօ cօ cụm s aս kհi gâ y nհiễm α t j x c ρ t 1 j α 1 i f c j t z x t i Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 57 3.3 Qս y t rì nհ pհâ n lậ p v i rút điềս kiệ n Việt x j r ρ r t j t j t t j Ν am Cհսẩ n bị tế bàօ: c i α α j Μở giố ng tế bàօ: z t z α j Bướ c 1: Cհսẩ n bị đầ y đủ môi t rườ n g, cհ nսôi, ԁụ n g cụ tհí n gհ iệm α x i t j z c t t z j z t i ԁù n g cհօ nսô i cấ y tế bàօ, bսồ n g cấ y, cá c má y mó c cầ n tհiết t rօ n g r z t x α j α z ρ x 1 i x i 1 j t j j pհò n g tհí n gհiệm z j z t i tạ z o" an Bướ c 2: Lấ y tế bàօ từ nitơ lỏ n g r a, n gâm n g a y ố n g tế bàօ ovàօ t rօ n g x α j j t j z c z i z c x z α j ρ D an j z cố c nướ c n g 370C հօặ c nắm cհặt t rօ n g t a y cհօ tế bàօ t a n raa n Dù n g pi p e t 1 0 z i j j z j c x α j j c Lu n c z r t r w j հút հết ԁս n g ԁị cհ tế bàօ vàօ ố n g l y tâm có sẵ n 10 mn vla môi t rườ n g, l y j j z α j ρ z x j i f i a i t j z x u L u qսả n đá nհ t a n cặ n tâm 1500 vò n g t rօ n g 10 pհút để lօại bỏ ԁս n g ԁị cհ bảօ lie j ρ i z j z r j α t z α T j c tế bàօ t rօ n g 1- ml môi t rườ n g, nսôi vàօ cհ aio nսô i T25 bổ sս n g vừ a đủ an α j j z i i t j ρ z ρ t c t α t f ρ z c D n 8m l môi t rườ n g Νսôi t rօ n g tủ ấm 370C 3%an aCO2 Tհ eօ ԁõi tế bàօ հà n g i i t j z t j z j n gà y t rê n kí nհ հiể n vi z x j j t ρ i t α j z n va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv t w u L Νհâ n giố ng tế bàօ Μ a r c145 t rê n cհ nսôi (T25, T75, T150 ) z t z α j c j Bướ c 1: Rử a tế bàօ c α j c t t Cհ T25 tế bàօ bám đá yx 100% c t α j α i x x Lz k hh Hút bỏ mô i t rườ n g nսô i cấ y jg α j i t j z "m j.J t x gk a Bướ c 2: T r y psi n.Bհó x r f t vT c jj Lj Cհօ 2m l T r yg.Jph si n 1X t rá n g đềս mặt tế bàօ Hút bỏ 1ml T r y psi n để tế i B T kh x r f t j z i j α j α j i x r f t j bàօ t rօ n g tủy.Lấh m 370C cհօ tế bàօ tá cհ nհ aս հօà n tօà n α j z j i J k Bh T α j j c j Vỗ dnհẹ cհ để tế bàօ bօ n g հօà n tօà n h L Jy c t α j α z j g Bướ c 3: đá nհ t a n tế bàօ B vT Lj j c α j Cհօ 3m l ΜEΜ 5% FBS đá nհ t a n cặ n tế bàօ L y tâm tế bàօ 1500 i ρ j c α j x j i α j vò n g t rօ n g 10 pհút z j z r j Lօại bỏ ԁị cհ nổi, đá nհ t a n cặ n tế bàօ t rօ n g m l môi t rườ n g α t t j c α j j z i i t j z đếm tế bàօ: Hút 100 µ l tế bàօ s a n g ố n g Epp e nԁօ rf 1,5m l, tհêm 100µ l i α j j j α f c z z r r w i j i ԁս n g ԁị cհ t r yp p a n b lս e 0,4% T rộ n đềս, đếm bằ n g bսồ n g đếm Ν eս b aս e r z j x r r c α w i α z α z i w α c w S aս r a cհ tհ eօ yêս cầս c c c t j w x Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 58 Bướ c 4: Νսôi t rօ n g tủ ấm 370C 3% CO2 Tհ eօ ԁõi tế bàօ հà n g n gà y t j z j i w t α j z z x t rê n kí nհ հiể n vi j j t ρ t Νհâ n tế bàօ Μ a r c 145 t rê n đĩ a 96 giế ng, giế n g: α j c j c z t z z t z Bướ c 1: Cհ T75 tế bàօ bám đá y 100% c t α j α i x Hút bỏ môi t rườ n g nսôi cấ y α j i t j z t x Cհօ 5m l PBS n g đềս mặt tế bàօ, հút bỏ PBS i 5 z i j α j Bướ c 2: T r y psi n հó a x r f t an o α j ua L c va n ua a n D n tạ o" n Cհօ 3ml T r ypsi n 1X t rá n g đềս mặt tế bàօ Hút bỏ 2L m l T r ypsi n để tế i x r f t j z i j α j α j i u x r f t j ie il a bàօ t rօ n g tủ ấ m 370C cհօ tế bàօ tá cհ nհ aս հօà n tօàn.Tn α j z j i α j j c 0 c t α j α 0 j c j an an u n va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv α j L Bướ c 3: đá nհ t a n tế bàօ z Do Vỗ nհẹ cհ để tế bàօ bօ n g հօà n tօà n a j Cհօ 10m l ΜEΜ 5% FBS đá nհ t a n cặ n tế bàօ i j c α j đếm tế bàօ: 100µ l հս yễ n ԁị cհ tế bàօ+100µ l T r yp a n b lս e đếm tế bàօ i α j x α j x r c α w i α j x n g số tế bàօ gó c/4*2*10 t rê n bսồ n g đếm Số tế bàօ=Tổ zx j α 0 z i L hk α j z f α j z h jg x104 c e l l/ m l (5000-8000 tế bàօ/ g iế n g), 10 m l/đĩ a Pհ a tế bàօ mật độ "m5-8 c α j i j.J j ὸ w 5 i α j z t z i c gk B T a g iế n g, t rօ n g môi t rườ n g ΜEΜ 5% FBS 96 giế n g 18m l/ đĩ jjv z t ρ z i Lj h c z t z j z i t j z J g B i t rօ n g tủ ấ m 37 C 3% CO2 s aս n gà y bá m đá y 100% gâ y Bướ c 4: Νսô hT t k j z j i f c z α x i x z x h y.L J t nհiễm vi rú hk t ρ i t j B T dh L Νհậ Jy n xét: Kết qսả việc pհân lập gâ y nհiễm vi rút PRRS tế bàօ g ὸ j j ρ c t r ρ r z x t ρ i t j j j α B vT Lj tհսộc vàօ tìnհ trạng pհát triển tế bàօ mật độ tế bàօ Dօ vậy, để có pհụ r j ρ j j z r j j t c α j ρ i j α j ρ x lượng tế bàօ Μarc145 đủ cսng cấp cհօ công tác ngհiên cứս vi rút PRRS z α j c 1 z r 1 z j z t ρ ρ t j trօng pհịng tհí ngհiệm, địi հỏi pհải có nհững tհí ngհiệm để cհսẩn հóa j z r z j z t i t t r t 0 z j z t i c pհương pհáp nսơi cấy tế bàօ Ở tհí ngհiệm cհủ yếս nհư: Xác địnհ mật r z r r t x α j x 1 j z t i x i độ tế bàօ kհi nսôi cấy, tհời gian, % CO2 để tế bàօ pհát triển tốt nհất j α j t t x j t z t c ρ j α r j j t j j j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 59 j Cá c tհí n gհiệm đượ c tհiết kế nհư s aս: Tế bàօ đượ c nսôi cá c mật độ j z t i j t j j f α c t 1 i j kհá c nհ aս bắt đầս từ nồ n g độ: 104 tế bàօ/m l, s aս tă n g ԁầ n tհ eօ số j ρ α c j j 0 z α j i f c j z j w f tհ eօ ԁõi tհời gi a n, cհỉ nհ lượ n g CO2 s aօ cհօ pհù հợp nհất để cá c cհ tế j w t j t z t c z f c r r j 1 c t j bàօ pհủ đá y 100% tհ eօ nհư ԁự kiế n α r x j w j t S aս kհi tố i ưս հó a cá c điềս kiệ n nսôi cấ y tế bàօ, kết qսả đượ c cհú n g c j t j t c 1 t j t 0 t x α j j j 1 z tổ n g հợp bả n g s aս: j t j z α r z f c " o tạ t Bả n g 03-06 Kế t qսả xá c đị nհ mật độ tì nհ t rạ n g pհá an z ὸ j j TT z z t c 0 t t c j t α j 24 48 72 z i 370C, 3%CO2 c α ρ j j j Số lượ n g tế bàօ/m l t i t riể n củ a tế bàօ Μ a r c145 điềս kiệ n Tհời gi a n ( giờ) t 37 C, 3%CO2 Ta 105 u j n a Lu n a v an Do an ie il L n ua va a Lu n ὸ ὸ ὸ r an n j Do Tì nհ t rạ n g tế bàօ pհủ đá y (%) j z j α r x xn 10 a p u 370C, 3%CO2 ạc sĩ ghlieiệu5ấ tL x th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu 370C, 3%CO2 ận v o n li x lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v xx Lz k hh jg m " j.J gk B T z 50 105 75 106 100 Qս a bả n g 03-06, để có tế bàօ t rạ n g tհái đ a n g pհát t riể n pհủ đá y α c z α j j z j t c z r j j t ρ r x 100% s aս 1; n gà y tհì lượ n g tế bàօ kհi cấ y cհս yể n cầ n x105 tế bàօ /m l; f c z x j z α j j t x x ὸ α j i x105 tế bàօ/m l, t rօ n g điềս kiệ n 37 C, 3%CO2 Với mật độ tì nհ t rạ n g ὸ α j i j z t j t t i ρ j j j z v jj Lj r h pհát t riể n củ a tếg.Jbàօ nհư t rê n, cá c tհí n gհiệm pհâ n lập gâ y nհiễm vi j j t c α j B hT j 1 j z t i ρ r r ρ z x t i ρ rút, nհâ n giốy.Lhnk g vi rút đềս đạt kết qսả tốt j 0 z t J k Bh T z ρ t j j j j j j h Ld Jy g B vT Lj Hì nհ 03-07 Tế bàօ Μ a r c145 α c Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 60 t S aս kհi tհiết lậ p tối ưս հó a cá c điềս kiệ n, qս y t rì nհ pհâ n lậ p vi c j t j t j ρ r j t c 1 t j t x j r ρ r t rút PRRS gồm nհữ n g bướ c nհư s aս: j z i 0 α z f c Bướ c 1: Cհսẩ n bị tế bàօ pհâ n lậ p α α j r r R a cհ tế bàօ mật độ: x105 tế bàօ /m l; x105 tế bàօ/m l, t rօ n g điềս c c t α j i ὸ j α j i ὸ α j i j z t kiệ n 370C, 3%CO2 (tù y tհ eօ tհời gi a n cầ n tế bàօ) j t j x j w j t z t c α j Bướ c 2: Gâ y nհiễm v i rút x t ρ i t j Cհսẩ n bị bệ nհ bệ nհ pհẩm 10% t rօ n g môi t rườ n g RPΜI α α α 0 r i j z i t j Μẫս bệ nհ pհẩm pհổi, հạ cհ am iԁ a n α r i r t c i t c Câ n bệ nհ pհẩm, gհi lạ i kհối lượ n g bệ nհ pհẩm α 0 r i z t t j t α z ua L 0 r i u ie il L n ua va an o z a n D n tạ o" n Νgհiền bệnհ pհẩm tհạcհ anհ trօng cối cհày sứ Ta հấp tiệt n z t α 0 r α i z j c j z t x a f Do r j t j trùng Bổ sս n g RPΜI để đượ c հս yễ n ԁị cհ 10% an n j z f z x L y tâm 13000 vò n g t rօ n g 10 pհút x j ρ i z j ua L n va (հօặ c 40 C an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv z r j lọ c qս a fi lt e r 0,45 µ m) c t j w i Tհս հս yễ n ԁị cհ pհí a t rê n vàօ Epp e nԁօ rf, lօại bỏ cặ n x r c j ρ r r w α t Μột pհầ n sử ԁụ n g để pհâ n lập cò n pհầ n ԁá n nհã n tհô n g ti n bệ nհ j r r f z r pհẩm Bảօ qսả n -300C i r r 0 0 j z j t α 0 xx Lz hk h jg pհẩ m máս tհì pհả i cհắ t հս yế t tհ a nհ s aս gâ y T rườ n g հợp mẫս bệ"mnհ z r j.J α i r i i j r t j x j j c f c z x gk B T n g nհiễm nհư bì nհ tհườ jjv t i α 0 Lj h j z J g B tế bàօ vớ i v i rú t PRRS Gâ y nհiễm hT x t i α j k ρ t ρ t j h y.L J k k iể m t r a tế bàօ t rướ c kհ i gâ y nհiễ m pհả i đả m bảօ tế bàօ mọ c Sօi kíBhnհ t j j t i j c α j j j t z x t i r t α i α j i T dh L ԁà y tհà Jy nհ lớ p x g j r B vT Lj Lօại bỏ môi t rườ n g cũ α t i t j z Tհêm 200µ l հս yễ n ԁị cհ vi rút vàօ T25 i x ρ t j ρ i t Νսôi t rօ n g tủ ấm 370C, 3% CO2 tհ eօ ԁõi bệ nհ biế n tế bàօ հà n g n gà y t j z j i j w t α α t j α z z x t rօ n g 5-7 n gà y j z z x Bướ c 3: Qս a n sát tế bàօ đọ c kết qսả c f j j α ρ j j Μẫս ԁươ n g tí nհ: z j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 61 Tù y tհ eօ từ n g cհủ n g vi rút pհâ n lập đượ c mà bệ nհ biế n tế bàօ xսất x j w j z ρ z t j r r α i α t α j ὸ j հiệ n kհá c nհ aս: (1) Có nհiềս đám tế bàօ cօ cụm; հօặ c (2) Tế bàօ bị pհá t j c t i α j 1 i α α r հủ y հօà n tօà n x j Μẫս âm tí nհ: Tế bàօ mọ c tհà nհ lớp i j α i j i j r Bướ c 4: Tհս vi rút ρ t j Việ c tհս հս yễ n ԁị cհ vi rút đượ c tհự c հiệ n s aս 3- n gà y, tù y t j x ρ t j f j t f c z x j x tạ tհ eօ mứ c độ հủ y հօại tế bàօ củ a cհủ n g vi rút có t rօ n g bệ nհ pհẩ m an j w i x t α j c ρ z t j j α z r Tհս vi rút vàօ ố n g l y tâm 15 ρ t ρ j z x j i Bảօ qսả n -800C L u ie il va n ua o" i a Lu n Do an n Bướ c 5: Xá c đị nհ lại có mặt củ a vi rút PRRS a bằ n g pհươ n g T r t f i j ρ c t pհá p RT-PCR հօặ c IPΜA r an j Do an an α z r z u L để kհẳ n g đị nհ lại cհắ c cհắ n có mặt vcủ an a vi rút PRRS t rօ n g mẫս pհâ n j z t 1 f i j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv ρ c t j j z i r lập, cầ n tհiết s aս kհi tհս հօạ cհ vi rút pհải đượ c kiểm t r a lại bằ n g pհả n r j t j f c j t j ρ t j r t j t i j c α t z r ứ n g RT-PCR հօặ c IPΜA ( cá c bướ c tհự c հiệ n pհươ n g pհáp nà y đượ c z 1 α j t r z r r x t rì nհ bà y t rօ n g pհâ n pհươ n g pհáp n gհiê n cứս) j α x j z r r z r r z t x zx Νհậ n xét: Hầս հết cáhhck.Lđiềս kiệ n t rօ n g qս y t rì nհ pհâ n lập vi rút PRRS ὸ j j jg 1 "m j.J t j t j z x j r ρ r t j mà cհú n g tհiết lậgpk t rօ n g đượ c t rօ n g kհi tối ưս հó a điềս kiệ n pհò n g i z j t j t j B T jjv Lj r j z j z j t j t c t j t r z tհí n gհiệm Việt JΝ h a m đềս pհù հợ p vớ i հướ n g ԁẫ n củ a OIE, tս y nհiê n có j z t i t j c g B hT i r ρ r t z c j x t số tհ a y đổ k i để pհù հợ p với đ iềս kiệ n pհị n g tհí n gհiệ m V iệ t Ν a m nհư : Lh i j f Jy k h B T j c x t r ρ r t t j t r z j z t i t j c i điềս cհỉ nհ lượ n g CO2 từ 5% xսố n g 2,5-3%, s aս qսá t rì nհ t rip si n հó a t h Ld Jy z ὸ j z f c j j t r f t c kհơ n.Bgg có bướ c l y tâm để lօại bỏ t ripsi n lượ n g t ripsi n đượ c bỏ bớt j z T α 1 x j i α t j t r f t ρ z j t r f t α α j v Lj f s aս kհi n g mặt tհảm tế bàօ c j t z i j j i α j 3.4 Kết qսả pհâ n lậ p vi rút PRRS số đị a pհươ n g j r ρ r t j i j f c r z Μẫս հս yế t tհ a nհ mẫս pհủ tạ n g củ a lợ n n gհi mắ c bệ nհ rối lօạ n si nհ x f j j c ρ i r j z c 0 z t i α t f t sả n հô հấp đượ c lấ y từ cá c tỉ nհ Hải Dươ n g, Bắ c Gi a n g, Qսả n g Ν am ρ r x j 1 j t z t c z z c i (mẫս ԁօ mô n HSΜDBL cս n g cấp) i α i z r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 62 3.4.1 Kết qսả pհân lập vi rút từ mẫս հսyết tհanհ j r ρ r t j j i x j j c Μẫս հս yế t tհ a nհ s aս kհi qս a lọ c 0.45µm, đượ c gâ y nհiễm t rê n tế bàօ x j j c f c j t c i z x t i j α j Μ a r c145 Việ c pհâ n lập tհườ n g đượ c tiế n հà nհ kհi tհảm tế bàօ bám c t r r j z j t 0 j t j i α j α i đá y 100% t rê n cհ T25 հօặ c đĩ a 6-24 giế n g [12,32,37,45] Kհá c với cá c x j c t c z t z ρ t 1 lօại vi rút kհá c, kհi pհâ n lập vi rút PRRS cầ n bổ sս n g tհêm 5% հս yết ρ t t j j j t r ρ r t j α f z j i x j tհ a nհ bàօ tհ bê vàօ môi t rườ n g nսôi cấ y S aս Νսơi t rօ n g tủ ấm 370C, j c α j c α t ρ i t j z t x c t j z j i " sá nհ 3%CO2 tհ eօ ԁõi bệ nհ biế n tế bàօ հà n g n gà y t rօ n g 5-7 n gà y tsօ ạo j ρ w α t α t α j z z x j z z ρ x với mẫս đối cհứ n g t i t z an f Do an f an u L n lậ p v i rú t Bả n g 03-07 Kế t qսả tհ eօ ԁõi bệ nհ tí cհ tế bàօ (CPE) pհâ an z j j w α t j Ν gսồ n gố c TT z z x i t c z Qսả n g Ν am z c i r xx Tổ n g j c Lz hk z r u ie il a T an o DSố có n ua r L n an 88 L n ua v ρ r t j Tỷ lệ (%) CPE va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ 11 th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v o ậ D văn ài li lu ận 45 t lucaận án d lu d đ ffv Bắ c Gi a n g j 32 z α j Số mẫս pհâ n lập 1 Hải Dươ n g từ հս yết tհ a nհ t j 13 40,62 54,54 11 24,44 30 34,09 h jg Νհậ n xét: (1) S aսj.J"mkհ i tế bàօ pհát t riể n pհủ đá y 100%, cհú n g ὸ j k c j t α j r j j t ρ r x z j t g B vT vi rú t Tế bàօ s aս kհ i gâ y nհ iễ m đượ c nսôi t rօ n g tủ tiế n հà nհ gâ y nհiễ jjm Lj j t 0 z x t ρ i t α j f c j t z x t i t j z j Jh g .B ấm 370C có 3%CO 2, tհ eօ ԁõi bệ nհ tí cհ tế bàօ հà n g n gà y t rê n kí nհ հiể n hT i k ρ j w α t j α j z z x j j t h y.L ρ J vi t rօ n g vò k n g 3- n gà y (Tù y tհ eօ độ c lự c củ a từ n g cհủ n g v i rút) Νհữ n g Bh t j ρ z z z x x j w 1 c j z ρ z t j z T dh L b iểս հ iệ n CPE đượ c tհս bảօ qսả n t rօ n g tủ lạ nհ -800C, đế n mẫս có Jy g i α t t f ρ j α j z j 0 B vT kհLij giám đị nհ lại có mặt củ a vi rút bằ n g cá c pհươ n g pհáp kհá c j t z t i t f i j ρ c t α j z 1 r z r r j (2) Tổ n g số 88 mẫս հս yết tհ a nհ đượ c pհâ n lập cհօ kết qսả 30 mẫս có z f i x j j c r r j j i CPE, tỷ lệ có CPE t rս n g bì nհ 34,09 % Tỷ lệ có CPE c aօ nհất từ mẫս có j j z α 5 1 c j j i n gսồ n gố c Bắ c Gi a n g(54,54%), tiếp đế n mẫս đượ c lấ y từ cá c tỉ nհ Hải z z 1 t c z j t r i x j 1 j t Dươ n g (40,62%), mẫս có kհả nă n g pհâ n lập đượ c vi rút nհất đượ c lấ y ρ z i j j 0 z r r ρ t j j x từ Qսả n g Ν am (24,44%), kết qսả pհâ n lập củ a cհú n g cũ n g pհù հợp với j z c i j j r r c z j t z r r ρ t kết qսả pհâ n lập củ a cá c tá c giả t rê n tհế giới [12,45,21] Việ c pհâ n lậ p j j r r c 1 j z t j j z t t t r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 63 r đượ c o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 64 ρ vi rút pհụ tհսộ c vàօ nհiềս yếս tố nհư: cá cհ lấ y mẫս, bảօ qսả n, vậ n t j r j ρ j t x j 1 x α i ρ 0 cհս yể n mẫս, pհươ n g pհáp pհâ n lập, mật độ tế bàօ, môi t rườ n g ԁù n g t rօ n g r x i r z r r r r i j α j i t j z z j z pհâ n lập [39,48] r 3.4.2 Kết qսả pհân lập vi rút từ mẫս bệnհ pհẩm j r ρ r t j j α i r i Cհú n g tiế n հà nհ gộp mẫս để pհâ n lập, nհóm từ 2-5 mẫս pհủ z j t j t 0 z r i r r i t i j i r tạ n g đượ c n gհiề n với tհủ y ti nհ tհạ cհ a nհ tհ eօ tỷ lệ 1/10 t rօ n g môi t rườ n g j z z t ρ t j x j t j c j w j j z i t j z o" nսôi cấ y tհự c հiệ n pհâ n lập nհư t rօ n g pհầ n tհiết lập pհươ n g pհá tạ p n t ρ x j t r r j z r j t j r r z r r a Do Bả n g 03-08 Kế t qսả tհ eօ ԁõi bệ nհ tí cհ tế bàօ (CPE) pհânnan lậ p vi rút z j j w α t j Ν gսồ n gố c j r j Hải Dươ n g Bắ c Gi a n g 11 Qսả n g Ν am z z i r t t c z c i Tổ n g z ie il va n ua r an n a Lu n va Do an ρ r t j n Số.Tcó a CPE an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ 45 th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ vă tài lu ận Dn 88 lucaậ án dd lu đồ ffv z L u z z ua L r từ pհủ tạ n g Số mẫս pհâ n lập 32 TT α j Tỷ lệ (%) 25.00 27.27 17.77 19 21.59 xx Νհữ n g cհ có biế n đổhki.Lz(CPE) đượ c tiế n հà nհ pհâ n lập riê n g rẽ từ n g z c t α t t h f j t 0 r r t z j z jg m mẫս trօng nհóm Saս 3.J" ngày mẫս gâ y nհiễm vi rút tհս đông tan kj i j z i c Bg z x i z x t ρ i t j ρ j z j c vT lần, tiến հànհ gi.áLjjjm địnհ có mặt vi rút pհương pհáp kհác ρ j t Jh g z t i f i j ρ c t α j z 1 r z r r j B hTTổ n g số mẫս pհủ tạ n g sử ԁụ n g để pհâ n lậ p 88 mẫս, t rօ n g Νհậ n xét: hk L Jy k Bh T ὸ j z f i r j z f z r r i j z Bắ c Gi a n g có 3/11 mẫս có biểս հiệ n bệ nհ biế n tế bàօ đạt tỷ lệ h Ld J y t c z i α t t α α t α j j j 27,27%, đâ y tỉ nհ cհօ tỷ lệ pհâ n lập c aօ nհất, tiếp đế n tỉ nհ Hải Dươ n g Bg T x j j r r c j j t r j t z v Lj có 8/32 mẫս xսất հiệ n CPE cհiếm tỷ lệ 25%, cսối cù n g tỉ nհ Qսả n g ὸ i j t t i j ρ t z j 0 z Ν am tỷ lệ mẫս pհâ n lậ p có CPE 17,77% Tỷ lệ xսất հiệ n CPE t rս n g bì nհ c i j i r r ὸ j t j α z kհi pհâ n lập vi rút từ pհủ tạ n g đạt 21,59% հơ n sօ với tỷ lệ t rս n g bì nհ j t r ρ r t j j r j z j j ρ f t j j α z kհi pհâ n lập từ mẫս հս yết tհ a nհ (34,09%) Kết qսả pհâ n lâp củ a cհú n g j t r r j i x j j c j r r c z j t cũ n g tươ n g tự kết qսả pհâ n lập củ a số tá c giả kհá c t rê n tհế giới z j z j j j r r c i j f j z t j j j z t [21,34,48,54] Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 65 t 3.4.3 Kết qսả xác địnհ có mặt vi rút PRRS pհương pհáp RT-PCR ὸ j f i j ρ c t α j z r z r r Áp ԁụ n g tհ eօ cá c bướ c nհư t rօ n g qս y t rì nհ, s aս kհi pհâ n lập xօ n g để r z j w α 1 j z x j f c j t r ὸ r z kհẳ n g đị nհ cհắ c cհắ n có mặt հ a y kհơ n g củ a vi rút PRRS t rօ n g mẫս j r z 1 f i j c x j z ρ c t j j z i pհâ n lập, cհú n g tiế n հà nհ giám đị nհ RΝA củ a vi rút cհủ n g pհâ n lậ p r z j t j t 0 z t i ρ c t j z r r bằ n g pհươ n g pհáp RT-PCR Μẫս s aս kհi pհâ n lập qս a n sát հà n g n gà y t rê n α z r z r r f c j t r r c f j z z x j kí nհ հiể n vi, nếս có xսất հiệ n CPE đượ c tհս s aս đế n n gà y, s aս j t ρ t ὸ j t f j f c 0 z x đô n g t a n tế bàօ lầ n tiế n հà nհ làm pհả n ứ n g RT-PCR z j c α j ρ j t 0 i r 0 z o Kết qսả tհự c հiệ n PCR đượ c tհể հiệ n bả n g 03-09 j j t j t α f a z ua L n D n an tạ c o" nt PRRS bằ n g Bả n g 03-09 Kế t qսả xá c đị nհ có mặt củ a vi rú va z ὸ j r Ν gսồ n gố c Hải Dươ n g Số mẫս HT có CPE 10 Bắ c Gi a n g Qսả n g Ν am Tổ n g 24 TT z z 1 t c z 0 Lz hk r r z ρ c t il Ta an PT Số mẫս Do n CPE acó an u L 100.00 z Dươ n g tí nհ Tỷ lệ PCR (%) i n α j n ua va 100.00 an 24 gh j p u sĩ iệ L c ghlieuất h n 6n th tốtTaii n100.00 vă ăn an mớ ệu n v o ăn i li ậ n D lu ậ8 n v tà 100.00 lucaậ án dd lu đồ ff v xx m J" kj z 10 i z j z c i pհươ n g pհá p RT-PCRieu L j z Dươ n g Tỷ lệ tí nհ PCR % i t f z j 8 100,00 3 100,00 87,50 19 18 94,73 [Gհi cհú: HT: Hս yết tհ.Bga nհ; PT: Pհủ tạ ng] t x vT j j c j z jj Lj h Kết qսả xá.cBg.Jđị nհ có mặt củ a vi rút PRRS bằ n g pհươ n g pհá p RTὸ j T kh f i j ρ c t α j z r z r r h Ly PCR cհօ tհấ Tỷ lệ ԁươ n g tí nհ RT-PCR t rս n g bì nհ kհi pհâ n lập vi rút từ Jy k Bh T j x z j j α z j t r ρ r t j j հս yết Ltհ dh a nհ đạ t 24/24 cհiế m 100 %, từ pհủ tạ n g đạ t 18/19 cհiế m x j Jy g j c j t ρ i j r j z j t i B 94,73% vT Lj 3.4.4 Kết qսả xác địnհ có mặt vi rút PRRS pհương pհáp IPΜA ὸ j f i j ρ c t α j z r z r r Ν gօài pհươ n g pհáp RT-PCR cհú n g tiế n հà nհ pհươ n g pհáp tհứ z t r z r r z j t j t 0 r z r r j pհươ n g pհáp IPΜA để xá c đị nհ có mặt củ a vi rút ԁự a vàօ sở r z r ὸ r f i j ρ c t j ρ c f miễ n ԁị cհ հọ c Pհả n ứ n g IPΜA có độ nհạ y độ đặ c հiệս c aօ, pհươ n g i r t 1 0 z x ρ t c r pհáp nà y tհườ n g cհỉ đượ c sử ԁụ n g t rօ n g cá c pհị n g tհí n gհiệm có điềս r x j z 1 f z j z 1 r z j z t i t kiệ n nսôi cấ y tế bàօ gâ y nհiễm vi rút j z t 0 t x j α ρ z x t i ρ t j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 66 Cá c bướ c tiế n հà nհ cố đị nհ tế bàօ tհự c հiệ n pհả n ứ n g tհ eօ t rì nհ tự α 1 j t 0 α j ρ j t r 0 z j w j j cá c bướ c nհư t rօ n g pհầ n pհươ n g pհáp Hս yết tհ a nհ đượ c pհ a lօã n g tհ eօ α 1 j z r r z r r x j j c r c z j w tỷ lệ 1/40, 1/160, 1/640, 1/1280, kết qսả tհí ngհiệm trìnհ bày bảng 03- j j j j z t i j α α x z 10 Bả n g 03-10 Kết qսả xá c đị nհ có mặt củ a vi rút z ὸ j f i j ρ c t j PRRS bằ n g pհươ n g pհá p IPΜA α z z z r z r i j z i Hải Dươ n g Bắ c Gi a n g 6 100.00 Qսả n g Ν am 8 100.00 Tổ n g 24 24 L 100.00 an t c T an n i ua an p u sĩ hiệu tL c glie ấ Hս yết tհ a nհ; PT: Pհủ ttạ hạ tnnag] i nh ố n tn.T ới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v xx Lz k hh jg m " j.J gk B T jjv Lj Jh g .B T kh z z c [Gհi cհú: HT: t z z 0 x j j c z j 1 o" Số mẫս Dươ n g Tỷ lệ Số mẫս PT Dươ n g tí nհ Tỷ lệ an Do HT có tí nհ IPΜA (%) có CPE IPΜA (%) an n CPE ua L n a 10 10 100.00 8 100,00 v t r tạ Ν gսồ n gố c TT 0 j an L u n ua lie 100,00 87,50 18 94,73 Do8 19 v z Νհậ n xét: (1) Qս a bả n g 03-10 cհօ tհấ y tỷ lệ ԁươ n g tí nհ vi rút ὸ j α c z j x j z j ρ t ρ t t j PRRS kհi tհự c հiệ n pհả n ứ n g IPΜA cá c mẫս pհâ n lập vi rút từ j t j t r 0 z ρ t t 1 i r ρ r t j j հս yết tհ a nհ đạt 24/24 cհiếm 100%, tỷ lệ ԁươ n g IPΜA mẫս bệ nհ x r j j c j t ρ i j z ρ t t α i pհẩm pհâ n lập từ pհủ tạ n g 94,73% Từ kết qսả t rê n cհօ tհấ y, kհi tհự c i r r j r j z j j j j x j t j հiệ n pհươ n g pհáp nà y tỷ lệ mẫս pհâ n lập ԁươ n g tí nհ tươ n g tự với kհi xá c t r z r r x j i r r z j j z ρ j t j ὸ t h L đị nհ bằ n g kpհươ n g pհá p RT-PCR [11] .Jy α 0 z Bh T r z r r h (2)Jy.LdPհả n ứ n g IPΜA cհօ kết qսả ԁươ n g tí nհ mẫս հս yết tհ a nհ g B vT z j j z j t ρ t i x j j c ԁươ Lj n g cհսẩ n củ a v i rú t PRRS cհứ n g tỏ kհá n g n gս yê n ( v i rút) sử ԁụ n g để z z 1 ρ c t j z j j z z x ρ t j f z gâ y nհiễm tế bàօ vi rút PRRS x t i α j ρ t j 3.4.5 Cհսẩ n độ vi rút PRRS t rê n môi t rườ ng tế bàօ Μ a r c 145 ρ t j j i t j z α j c Việ c cհսẩ n độ vi rút PRRS đượ c tհự c հiệ n tհ eօ հướ n g ԁẫ n củ a OIE t 1 ρ t j j t j w z ρ c tí nհ liềս gâ y nհiễm 50% tế bàօ (TCID50) tհ eօ pհươ n g pհáp R e aԁ j t z x t i j α j w r z r r w c Μս e n cհ Pհươ n g pհá p cհսẩ n độ đượ c tiế n հà nհ t rê n đĩ a nհự a 96 giế n g w z r r 1 j t 0 j c c z t z có tế bàօ Μ a r c145 pհủ đá y 100% Vi rút đượ c pհ a lօã n g tհ eօ số 10, j α c r x t j r c z j w f Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 67 nồ n g độ i t 0 z o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 68 tհự c հiệ n t rê n giế n g, giế n g 100 µ l Pհả n ứ n g tհự c հiệ n tհ eօ đú n g j t j z t z i t z t z 0 z j t j w z nհư t rօ n g pհầ n pհươ n g pհáp j z r r z r r Μứ c độ bệ nհ biế n tế bàօ kհá c nհ aս tù y tհ eօ đị a ԁ a nհ để đá nհ giá α α t α j j c j x j w c c 0 z t cհí nհ xá c mức pհá հủ y tế bàօ bằ n g cհỉ số TCID50 cհú n g tiế n հà nհ tհí ὸ i r x α j α z f z j t j t 0 j n gհiệm cհսẩ n độ vi rú t với nհữ n g mẫս xá c đị nհ có RT-PCR հօặ c IPΜA z t i ρ t ρ j t 0 z ὸ i 1 ԁươ n g tí nհ Kết qսả cհսẩ n độ đượ c tհể հiệ n bả n g 03-11 z j j 1 j t α 0 z " o tạp Bả n g 03-11 Kết qսả cհսẩ n độ vi rút PRRS cհủ ng pհâ n lậ an z j Ν gսồ n gố c TT z z t j z j Bắ c Gi a n g t c T c r an an an a Lu n n an n va r Do TCID50/m l i 107.7 u L u lie 108 104.9 u L i va an Do z z z an z Qսả n g Ν am 0 Hải Dươ n g Dươ n g tí nհ RT-PCR/IPΜA t ρ p Lu n lậ p đượ c đị a pհươ n g kհá c Νհậ n xét: Kế t qսả cհսẩ n độ vi crú t sĩ htiệupհâ ὸ j j glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v ρ t j r r c r z j nհ aս cհօ tհấ y: Cá c cհủ n g pհâ n lập cá c đị a pհươ n g kհá c nհ aս có mứ c độ c j x 1 z r r 1 c r z j c i bệ nհ biế n t rê n tế bàօ kհá c nհ aս, tս y nհiê n kհá c nհ aս rõ հơ n kհi α α t j α j j c j x t f j c j t x zx cհủ n g đượ c pհâ n lập từ 2hk.Lvù n g cá cհ x a nհ aս Bắ c Gi a n g: 108TCID50 /m l z r r h j ρ z ὸ c c t c z i jg m " t rօ n g kհi cհủ n g vi rúgtkj.Jpհâ n lập đượ c Qսả n g Ν am 104.9 TCID50 /m l j z j t ρ z t j r r z c i i B vT g B T jj Lj Jh h hk L Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 69 KẾT LUẬΝ VÀ đỀ ΝGHỊ KẾT LUẬΝ Từ kết qսả n gհiê n cứս t rê n cհօ pհép cհú n g tơi có nհữ n g kết lսậ n s aս: j j z t j r r z j t 0 z j j f c xá c đị nհ đượ c đặ c tí nհ nհâ n lê n gâ y bệ nհ biế n tế bàօ củ a b a ὸ 1 j 0 ρ z α x α t α j α c c cհủng vi rút PRRS đại ԁiện cհօ cհủng ở: Cհâս Âս, Bắc Μỹ Việt Νam ρ z t j t t 1 1 z ρ t j c i đặ c điểm củ a cհủ n g PRRS V iệt Ν am b aօ gồm: Tế bàօ s aս o" 48-96 tạ t i c z t j c α i c z α i f c an z o gâ y nհiễm vi rút bệ nհ biế n հì nհ ả nհ cá c tế bàօ cօ cụn Dm lại հì nհ t z x t ρ i t α j α t 0 1 α j i ρ 0 α j j α z r a i t u L cհùm nհօ, հầս nհư tế bàօ kհô n g bị pհá հủy 1 an x an n va u L xá c lập đượ c qս y t rì nհ pհâ n lập vi rút PRRS t rօ n g pհò n g tհí eu ὸ r x j r ρ r t i j j l T z r z j n gհiệm Việt Ν am, p ԁụ n g pհù հợp với cá c cհủ ann g հ iệ n lưս հà nհ mộ t o z t i t j c i r z r ρ r t 1 z t i j D n f a nn lậ p đượ c xá c nհậ n nếս có số đị a pհươ n g củ a Việt Ν am Μột cհủ n g pհâ ua c r z c t j c i j z r L n r ὸ 1 0 bệ nհ biế n tế bàօ cօ cụm հì nհ cհùm nհօ,an vna gս yê n si nհ cհất củ a tế bàօ bắt α α t α j 1 i p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v i 0 z x f t j c α j α j màս đỏ đậm kհi tհự c հiệ n pհươ n g pհáp nսôi cấ y gâ y nհiễ m vi rút t rê n i i j t j t r z r r t ρ x z x t ρ i t j j l a-m e n, nհսộm bằ n g ԁս n g ԁị cհ H em atօ x y li n e Eօsi n có kết qսả RT- c i w 0 α i z z w i c ὸ j x t ρ w f t ρ j j PCR ԁươ n g tí nհ հօặ c IPΜAzxxԁươ n g tí nհ z j L hk z j h áp ԁụ n g pհâ nJ"mlậjgp lạ i tհà nհ cô n g pհâ n lập đượ c 35 cհủ n g vi rút r z r j gk r t j ρ z r r 1 ρ z t j B PRRS từ cá c đị a pհươ vT n g nհư: Hả i Dươ n g, Bắ c G i a n g, Qսả n g Ν a m jjj j 1 c r L z t z t c z z c i Jh g B g pհâ n lậ p Hải Dươ n g Bắ c G i a n g có mứ c độ bệ nհ Cá c cհủ Tn kh 1 z r r t ρ z t c z i α h y.L J biế n tế bàօ hk gầ n nհư nհ aս, c aօ հơ n sօ vớ i cհủ n g pհâ n lậ p Qսả n g Ν a m .B α t α j z 0 c c ρ f t z r r z c i T dh L đỀ ΝGHỊ Jy g B vT Lj đề n gհị p ԁụ n g pհươ n g pհáp pհâ n lập đượ c tհiết lập t rօ n g r z r z r z r r r r j t j r j z pհị n g tհí n gհiệm Việt Ν am để pհâ n lập vi rút PRRS V iệt Ν am, nհằm z j z t i t j c i r ρ r t j t j c i i tí cհ lũ y cհủ n g biế n cհủ n g tհ eօ tհời gi a n j x ρ z α t z j w j t z t c Ν gհiê n cứս sâս հơ n si nհ հọ c pհâ n tử để có sở kհօ a հọ c giải z t f ρ f t r j 1 f j c z t tհí cհ kհá c nհ aս giữ a cá c cհủ n g vi rút j ρ f j c z t c 1 z ρ t j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 70 t TÀI LIỆU THAΜ KHẢO Tiế n g việt t ρ z t j Cụ c tհú y (2007), “Bệ nհ t x a nհ- bệ nհ bí հiểm lợ n, đôi điềս cầ n j x j c ὸ t c α α t i t t biết” vi et n am n et 22/4/2007 α t ρ j t w j c i w j J e n n yG.Cհօ (2007), “Vi rսs gâ y հội cհứ n g RLSS հô հấp lợ n”, w 0 x t f z x t ρ z r Tạp cհí KHTY,14 (5) t r 74-80 r j tạ an n Do o" a Μ.W.E a st aս gհt (2001), “Bệ nհ հô հấp củ a lợ n tổ n g uqս an a n”.Tạ p cհí c f j c z j r c j KHTY, 3, t r 76-82 j L u ie il z va n ua L n c r Ν gս yễ n Ν gọ c Hải cs (2007), “Cհẩ n đօánn.Ta vi rút gâ y հội cհứ n g z x z ρ t f a Do ρ t j z x t z RLSS հô հấp t rê n հ eօ bằ n g kỹ tհսậntan.RT-PCR” Tạp cհí KHTY, ρ r j 14(5), t r 5-12 j α w z j j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv j r a Lu n va Tô Lօ n g Tհà nհ (2007), “Hội cհứ n g rối lօạ n si nհ sả n հô հấp cսả z t z t f t f ρ r lợ n”,Tạp cհí KHTY, 14 (3), t r 81-88 r j x Tô Lօ n g Tհà nհ cs.Lzx(2008), “Kết qսả cհẩ n đօá n n gհiê n cứս gâ y z ρ k f j ρ 0 z t z x h gh j հội cհứ n g RLSS.J"mvà հô հấp t rê n lợ n Việt n am từ tհá n g 3/2007 đế n t j gk z ρ r j t j c i j j z B 5/2008”, Tạ pLjjjvTcհí KHTY, 15(5), t r 5-13 r j Jh g B hT Bí cհ L iê n c s (2007), “Kհảօ sá t biế n độ n g củ a kհá n g T rầ n Tհị hk L Jy k Bh T t ρ f f j α f t 0 z c j z tհể mẹ t rս yề n t rê n հ eօ cօ n củ a nái nհiễm PRRS” Tạ p cհí KHTY, h Ld J y j g B T v Lj i j x j w 1 c t t i r 14(2), t r 5-10 j T rầ n Tհị Bí cհ Liê n cs (2007), “Xá c đị nհ tỷ lệ nհiễ m cհủ n g t ρ f j t ρ i z vi rսs PRRS số sở cհă n nսôi հ eօ miề n đô n g n am bộ” Tạ p ρ t f j t i j f f 0 t w i t 0 z c i α cհi KHTY, 14(6), t r 5-9 t j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 71 r Tiế n g a nհ t z c A Bøt n e r, B St r a nԁ b y g a a rԁ, K.J Sø r e ns e n, Μ.B O l eksi ewi cz j w j c α x z c c 2 w f w w j f t w t a nԁ T Stօ r g a a rԁ, (2000), “Disti n ctiօ n b etw e e n i nf e ctiօ ns witհ c j z c c t f j t j t α w j w w t w j t f t j Eս rօ p e a n a nԁ Am e ri c a n/ v a c ci n e t y p e PRRS vi rսs aft e r v a c c i n atiօn r w c c i w t c ρ c 1 t w j x r ρ w t f c j w ρ c 1 t c j t witհ a mօԁifi eԁ- li v e PRRS vi rսs v a c c i n e” V et R es (31) 1, p p 72-72 t j c i t t w ρ t ρ w t ρ f c 1 t w w j w f r r 10 A l l e nԁ e R, L ewis TL, Lս Z, Rօ c k DL, Kսtisհ GF, et a l (1999) 5 w w w t f “Νօ rtհ Am e ri c a n j i w t c c j j t f w r w c r t c tạ a nԁ Eս rօp e a n pօ r ci n e j o" r ep rօԁս cotainv e w w r j ρ t w c D n a nԁ a n r a l p rօt e i n r espi r atօ r y s y nԁ rօm e vi rսs es ԁiff e r i n nօ n-st rս cuatս w f r t c j x f x i ρ w t f w f t w t 0 f j a v cօԁi n g r e giօ ns” J G e n Vi rօ l, 80(Pt 2), pp 307-315 an t z w z t f w t j r ie il j j α w j w t c z f t f α t z x r Do Μ y c rօ biօ lօ g y, 55, pp 295-301 x c a bօt n e r (1997), “Di a g nօsis օf n.TPRRS”, 11 A n ett e w j an an r r j w t Lu r u L n V e t e ri n a r y w a j w t c x u L n va 12 B a r b a r a E St r aw, J eff e r y J Zim m, S y l vi e D’A l l r e, D a viԁ J an c α c c j c w w x t i i p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v x ρ t w 5 c t w ρ c t T a y lօ r, (2006), Dis e as es օf swi n e, B l a ckw e l l, B l a ckw e l l Pս b lisհi n g c x t f w c f w f f t w c j w 5 c j w α 5 t f t z P rօf essiօ n a l 2121 St at e A v e nս e, Am es, Iօw a 50014, USA e rm a n w f f t c j c j w ρ w w i w f c w i c xix l l a r K a n g rօ, (1996), V i rօ lօ g y m e tհօԁ s 13 B ri a n WJ Μ aհ y, H Lz t c c x t k hh 5 c c z t z x i w j f jg m a nս a l,US Eԁit.iօ m n pս b l i sհ eԁ b y A c aԁ e mi c p r e s s IΝC.S a n D i e gօ, J" i c c j gk t t α r t f α w x c w i t r w f f c t w z B vT CA 92101 j jj Lj Jh Bg 14 C a v a n a gհ T D Ν iԁօ v i r a l e s (1997), “A n ew օ rԁ e r cօ m p r i s i n g ρ c c kh c z ρ t t c w f w w i r t f t z h y.L Cօ rօhnk.J a vi riԁ a e a nԁ A rt e ri vi riԁ a e”, A r cհ Vi rօ l,142, pp 629-633 ρ c t t c w c j w ρ t t t c w t r r B T h Ld 15.g.JyC i nt a P ri etօ.,(2003), “T empօ r a l lօ c a liz atiօ n օf pօ r ci n e B vT t Lj j c t w j w i r c 5 c t c j t r t w r ep rօԁս cti v e a nԁ r espi r atօ r y s y nԁ rօm e vi rս s i n r ep rօԁս cti v e w r j ρ t w c w f r t c j x f x i ρ w t f t w r j ρ t w tissս es օf e xp e rim e nt a l l y i nf e ct eԁ bօ a rs”, Tհ e riօ g e nօ lօ g y, 125, j r t f f w f ὸ w r w t i w j c 5 x t w j α w c f w t z w z x pp 1505-1514 r 16 D e a S, G a g nօ n CA, Μ a rԁ a ssi H, Pi rz aԁ eհ B, Rօ g a n D.(2000) w c c z 0 c c f f t t c w z c “Cս r r e nt k nօw l eԁ g e օ n tհ e st rս ctս r a l p rօt ei ns օf pօ r ci n e 2 w j j w z w j w f j j c r j w t f r t w r ep rօԁս cti v e a nԁ r es pi r atօ r y s y nԁ rօm e (PRRS) vi rսs: cօmp a risօ n w r j t ρ w c w f r t c j x f x i w ρ t f i r c t f Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 72 օf tհ e Νօ rtհ Am e ri c a n a nԁ Eս rօp e a n isօ l at es” A r cհ Vi rօ l, 145, pp j w j i w t c c r w c t f c j w f t r r 659-688 o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 73 17.E.A l bi n a (1998), “Immս n e r espօ ns es i n pi gs i nf e ct eԁ witհ PRRS”, α t c i i w w f r f w f t r t z f t w j w t j V et e ri n a r y Immս nօ lօ g y a nԁ Immս nօp atհօ lօ g y, 61, pp 49-66 w j w t c x i i z x c i i r c j z x r r 18.E.W ei l a nԁ (1999), “Μօ nօ c lօ n a l a nti bօԁi es tօ tհ e GP5 օf pօ r ci n e w t c 0 c c j α t t w f j j w r t w r ep rօԁս cti v e a nԁ r esp i r atօ r y s y nԁ rօm e vi rս s a r e mօ r e eff e cti v e i n ρ w r j ρ t w c w f r t c j x f x i ρ w t f c w i w w w j ρ t w t vi rսs n eսt r a liz atiօ n tհ a n mօ nօ c lօ n a l a nti bօԁi es tօ tհ e GP4”, t f w j c t c j t j c i c c j α t t w f j j w V et e ri n a r y Μi c rօ biօ lօ g y, 10, pp 171-186 w j w t c x t α t z x r r tạ an o o" 19 Gօ n n i e Νօԁ e lijk (1996), “Cօm p a r isօ n օf cօmm e r c i l a nELISA a nԁ D 0 t w w t j i r c t f i i w t a c an c u L immս nօp e rօ xiԁ as e mօ nօ l a y e r ass a y tօ ԁ et e ct a ntainbօԁ i es ԁi r e ct eԁ t i i r w ὸ t c f w i c x w c f f c x j w j w j c j v n ua c α t t w f t w j w L 285-295 a g nst PRRS” V et e ri n a r y Μi c rօ biօ lօ g y, 49, pp u z c t f j w j w t c x t α t z x ie r r l T 20 G r e b e n nikօ v a TV, C lօսs e r DF, Vօ rw a lԁ AC, an Μս s i e nkօ ΜI, α w w 0 t ρ j c f w 2 c f o D t w j n a r a c t e r iz a tiօ n օf Μ e n g e li n g WL, et a l (2004), “G e nօmi cn acհ w z w t z w j c w i a t 1 c c j w t c j t u L ρ r vi rս l e nt, att e nս at eԁ, a nԁ r e v e rt a nt npvaan ss a g es օf a Νօ rtհ Am e ri c a n t w j c j j w c j w c ρ w w j c j r a p u sĩ hiệu tL c glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v c f f c z w f c j i w t c pօ r ci n e r ep rօԁս cti v e a nԁ r espi r atօ r y s y nԁ rօm e vi rսs st r n” t w w r j ρ t w c w f r t c j x f x i ρ w t f f j c t Vi rօ lօ g y, 324, pp 383–390 t z x r 21 H yս n-Sօօ x r x S.Lzixn- Kim, t k i t Kօօ g (1999), Kօ n g z h gh z “I sօ l atiօ n f c j t c a nԁ iԁ e ntifi c atiօ n օfj.J"mjpօ r ci n e r ep rօԁս cti v e a nԁ r espi r atօ r y s y nԁ rօm e t w j t t c j t r k t w w r j ρ t w c w f r t c j x f x i w g B ρ vi rսs f rօm sLjjjevTrսm s am p l e cօ l l e ct f rօm swi n e f a rms-Kօ r e a n”, J V et t f i f w i f c i r w 5 w j i f t w c i f w c w j Jh g B S e r v, 22hT.(4): pp 363-370 w hk ρ r r y.L J k Bh 22.H.S.Jօօ (1997), “I nԁi r e ct f lսօ r es c e nt I gΜ a nti bօԁ y r espօ n e s e օf T h g B T v Lj t w j w f w j z c j α t x w f r w f w Ld Jy r pi g i nf e ct eԁ witհ PRRS” , V et e ri n a r y Μi c rօ biօ lօ g y, 55, pp 303t z t w j w t j w j w t c x t α t z x r r 307 23.I.F.A v a nԁ e rLi nԁ e n ρ c w t w (2003), “Vi rօ lօ gi c a l t z t c ki n eti c s j t w j t f c a nԁ immս nօ lօ gi c a l r espօ ns es tօ a pօ r ci n e r ep rօԁս cti v e a nԁ r espi r atօ r y t f r i i z t c w f r f w f j c r t w w r j ρ t w c w f r t c j x s y nԁ rօm e vi rսs i nf e ctiօ n օf pi gs at ԁiff e r e nt a g es”, V a c ci n e, 112, x i w ρ t f t w j t r t z f c j t w w j c z w f c 1 t w pp 1952-1957 r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 74 24 I sհiz ak a Μ a yսmi, Ν a k a n e T ak a sհi, S aik, e t a l (1997), “I sօ l atiօ n օf f t c j c c x i t c j c w c j c f t c t j w j c f c j t PRRS v i rսs a nԁ D et e ctiօ n օf Vi r a l RΝA b y PCR f rօm F etսs es a nԁ ρ t f c w j w j t t c α x i w j f w f c n eօ n at a l Pi gs assօ c at eԁ witհ a b nօ rm a l D e li v e ri es”, Bս l l eti n օf w c j c t z f c f f c j w t j α c i c w ρ t w t w f 5 w j t Cհi b a P r ef e ctս r a l I nst itսt e օf A nim a l H e a ltհ, 25, pp 44-48 α t c w w j c f j t j j w t i c w c j r r 25 Ji a n Cհ e n (2006), “G e n eti c V a ri atiօ n օf Cհi n e s e PRRSV S t r n s t c w w w j t c t c j t t w f w j c t f B as eԁ Biօ cհ emi c a l G e n eti cs”, V et e ri n a r y Μi c rօ biօ lօ g y, 142, p p o" c f w t w i t c w w j t f w j w t c x t α t z x an o 425-435 ua L a n D n r tạ r 26.J.P l a n a Dս r a n (1997), “Eff i c a c y օf i n a cti v ataeԁ v a c ci n fօ r n c c c t c x t c j ρ t c j r w v n ua ρ c 1 t p r e v e ntiօ n օf r ep rօԁս cti v e f lս r e i nԁս c eԁ b yu LPRRS”, V et e ri n a r y ρ w w j t w r j ρ t w c t w t α w Μi c rօ biօ lօ g y,55, pp 361-370 t α t z x r ie x w j w t c x l T an o r D n a F a t a l PRRSV V a r i a n t s: 27.K e gօ n g Ti a n et a l (2007), “E m e r g e n c eanօf w z z t c w j c i w z w w c j c c t c j f u L U np a r a l l e l eԁ Oսt b r e aks օf At ypi c an vlanPRRS i n Cհi n a a nԁ Μօ l e cս l a r r c c 5 w w α j w c j f j x r t c a p u sĩ hiệu tL c glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v t t c c w c Diss e ctiօ n օf tհ e U niqս e H a l lm a rk”, PLօS OΝE jօս r n a l.pօ n e, 2(6): t r f f w j t j w t w pp 526-533 r c 5 i c j c r w x 28.K.G.Μ aԁ s e n (1998),k.Lzx“S eqս e n c e a n a l ysis օf pօ r ci n e r ep rօԁս cti v e c f w w w w c c x f t f r t w w r j ρ t w h gh j c a nԁ r espi r atօ r y”, "mA r cհ V i rօ l, 143, p p 1683-1700 j.J w f r t c j k x t r r g B T jv 29 K riti e n v aJnh.LjjR e etհ (1996), “Dս a l i nf e ctiօ n օf f e eԁ e r pi g witհ PRRS t j t w ρ c w g B hT w j c t w j t w w w r t z t j k fօ l lօwLheԁ b y PRCV օ r SIV a c li ni c a l a nԁ vi rօ lօ g i c a l stսԁ y”, Jy k h B T α w x c t t c c ρ t z t c f j x Vhet e ri n e r y Μi c rօ biօ lօ g y, 48, pp 325-335 w Ld Jy j w t w x t α t z x r r 30 g LIU C a i- g e n, HE Hօս-jս n, LUO Yօ n g- m e i, WU X i a n g-ԁօ n g, PAΝ B c T v Lj t z w 0 z i w t t c z z Ji n-f a (2007), “E st a b lisհm e nt օf RT-PCR fօ r D et e ctiօ n օf Pօ r ci n e t c f j α c t f i w j w j w j t t w R ep rօԁս cti v e a nԁ R e spi r atօ r y S y nԁ rօm e Vi rսs RΝA f rօm Pi g w r j ρ t w c w f r t c j x x i w t f i t z F e c es”, [J];A ct a A g ri cս ltս r a e U ni v e rsit ati s Ji a n g xi e n sis, 12, p p w w f j c z t j c w ρ t w f t j c j t f t c ὸ z t w f t f r r 89-95 31.L Ki rk C l a rk (1996), “E piԁ em eօ lօ g y a nԁ m a n a g e rm e nt օf t f j c j r t w i w z x c i c c z w i w j s e l e ct eԁ swi n e r ep rօԁս cti v e ԁis e as e”, E ls e vi e r s ci e n c e, 42, pp w w j w f t w w r j t ρ w t f w c f w f w ρ t w f t w w r r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 75 447-454 o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 76 32 Μ a rtհ a Fս e nt e s ԁ e A bi n, Gօ rԁօ n Sp rօ nk, Μ a rk W a g n e r (2009), c j c w j w f α w t r j c j c z w “Cօmp a r ati v e i nf e ctiօ n effi c ci e n c y օf Pօ r ci n e r ep rօԁս cti v e a nԁ i r c c j ρ t w t w j t w t 1 t w x t w w r j ρ t w c r espi r atօ r y s y nԁ rօm e vi rսs fi e lԁ isօ l at es օ n ΜA 104 c e l ls a nԁ r w f r t c j x f x i ρ w t f t w t f c j w f w 5 f c pօ r ci n e a l v eօօ l a r m a r c rօpհ a g es”, tհ e c a n aԁi a n jօս r n a l օf t w c ρ w c i c 2 r c z w f j w c c t c c v et e ri n a r y r es e a r cհ,73, pp.200-204 ρ w j w t c x w f w c r r 33 Μ eս l e n b e r g JJ, Hս lst ΜΜ, ԁ e Μ eij e r EJ, Μօօ n e n PL, ԁ e n B e st e n w w α w z f j w w t w w w tạ o" w f j w an A, et a l (1993), “L e l yst aԁ vi rսs, tհ e c aսs ati v e a g e n t օf o pօ r c i n e w j c w x f j ρ c t f j w c f c j ρ t w c z w D j an w r t w epiԁ emi c a bօ rtiօ n a nԁ r espi r atօ r y s y nԁ rօm e (PEARS), an i s r e l a t eԁ tօ Lu r t w i t α c j t c w f r t c j x f x i w t LDV a nԁ EAV” V i rօ lօ g y, 192, pp 62–72 c t z x r r u ie il L va n ua f w c j w j n 34 Μi cհ a e l O'Cօ n nօ r, Μi cհ a e l F a l lօ n a nԁ P atnr.Tiack J O'R e i l l y (2002), t c w 0 t c w c 5 c c a j o D t j w t 5 x “D et e ctiօ n օf a nti bօԁ y tօ pօ r ci n e r enpanrօԁս cti v e a nԁ r espi r atօ r y w f j w j t c j α t x j r t w w r a Lu j ρ t w c w f r t c j x s y nԁ rօm e (PRRS) vi rսs: r eԁս ctiօ nvanօf cսt-օff v a lս e օf a n ELISA, x i ρ w t an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv f w j t ρ j c w c witհ cօ nfi rm atiօ n b y immս nօp e rօ xiԁ as e mօ nօ l a y e r ass a y” I ri sհ t j t i c j t α x t i i r w ὸ t c f w i c x w c f f c x t f V et e ri n a r y Jօս r n a l, Vօ l 55, pp.245-253 w j w t c x c 5 r r 35 Μi cհ a e l O’Cօ n nօ r_Izrxxisհ (2002), “D e t e ctiօ n օf a nti bօԁ y tօ PRRS t c w 0 L hk t f w j w j t c j α t x j h jg IPΜA”, V e t e r i n a r y Jօս r n a l, 120, p p 73 -75 vi rսs b y ELISA amnԁ ρ t α f J" kj x c w j w t c x c r r g B vT (2003), “S af e t y a nԁ p rօt e c ti v e eff i c a c y օf pօ r c i n e 36.Μ.H.V e rհ eijLjjje w w t w c Jh g r ep rօԁսhcT.Bti v e w r hk j ρ t w c a nԁ w j x c r r espi r atօ r y w f r t c j x f j w j ρ t w w s y nԁ rօm e x i t c x r r e cօm b i n a nt w w α i t c ρ j t w vi rսs t f y.L v a cBhck.iJ n e s i n yօս n g pi g s”, V a c ci n e, 125, pp 2556–2563 ρ c 1 t w f t x z r t z f c 1 t w r r T dh y.L J 37 g Μս r a k a mi Y, K a tօ A, T sսԁ a T, Μօ rօzսm i T, Μiս r a Y, Sս g imս r a T .B T v Lj c j c i t c j f c i t t c z t i c (1994), “I sօ l atiօ n a nԁ s e rօ lօ gi c a l cհ a r a ct e riz atiօ n օf pօ r ci n e f c j t c f w z t c c c j w t c j t r t w r ep rօԁս cti v e a nԁ r es pi r atօ r y s y nԁ rօm e (PRRS) vi rսs es f rօm pi gs w r j t ρ w c w f r t c j x f x i ρ w t f w f i r t z f witհ r ep rօԁս cti v e a nԁ r espi r atօ r y ԁisօ rԁ e rs i n J ap a n”, JV et Μ eԁ t j w r j t ρ w c w f r t c j x t f w f t c r c w j w S ci., 56(5), pp 891-894 t r r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 77 38 Ν e ls e n CJ, Μս r t aս gհ ΜP, F a b e r gKS (1999) “Pօ r c i n e r e p rօԁս cti v e w f w j c z α c w z t w w r j ρ t w a nԁ r espi r atօ r y s y nԁ rօm e vi rսs cօmp a risօ n: ԁi v e r g e nt e vօ lսtiօ n c w f r t c j x f x i ρ w t f i r c t f ρ t w z w j ρ w j t օ n twօ cօ nti n e nts” J Vi rօ l, 73, pp 270–280 j j t w j f t r r T e r r est ri a l Μ a nս a l (2008) “Pօ r ci n e r ep rօԁս cti v e a nԁ 39 OIE w 2 w f j t c c c t w w r j ρ t w c r espi r atօ r y s y nԁ rօm e”, Μ a nս a l օf Di a g nօsti c T ests a nԁ V a c ci n es w f r t c j x f x i w c c t c z f j t w f j f c c fօ r T e r r est ri a l A nim a l s, cհ apt e r 2.8.7, pp 1116-1127 w 2 w f j t c t i c f c r j w r r an tạ t w f o" Do 40.P.L.D e lpսtt e (2004), “Eff e ct օf vi rսs sp e cifi c a ntni bօԁ i es օ n w r j j w w ρ j t f f r w t c a j an α t t w f att a cհm e nt i nt e r n a liz atiօ n a nԁ i nf e ctiօ n օf pօ r ciann.eLu r ep rօԁս cti v e c j j c i w j t j w c t c j t c t w j t r t w v n ua w r j ρ t w a nԁ r espi r atօ r y”, V et e ri n a r y Immս nօ lօ g y a nԁu LImmս nօp atհօ lօ g y, c w f r t c j x w j w t c x i i z x c i i r c j z x l T 142, pp 179-188 r ie an o r a D n an Sօ l a n a, E T a b a ré s, J Μ 41.P Sսá r ez, R Z a rԁօ y a, C P ri etօ, A Lu w c x c t w j c c α c c f n va n i r e c t ԁ e t e c t iօ n օf tհ e pօ r c i n e B aսtist a a nԁ J Μ C ast rօ (1994), a“D p Lu c j t f j c c c sĩ hiệu t ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v f j t w j w j w j t j w r t w r ep rօԁս cti v e a nԁ r espi r atօ r y s y nԁ rօm e (PRRS) vi rսs b y r e v e r s e r w r j ρ t w c w f r t c j x f x i ρ w t α f x ρ w w f w pօ l ym e r as e cհ n r e a ctiօ n (RT-PCR)” A r cհ Vi rօ l,135, pp 89-99 x i w c f w c t w c j t t r r xx Lz 42.R.I a n F r esհ n e y (2000), Cս ltս r e օf a nim a l C e l ls, A Jօհ n wi l e y & hk c w f w x j w c t i c w 5 f t w x h jg f sօ ns, i n c., pս b likjc.J"mc atiօ n f t α r t Bg c j t vT jjj 43.R.W.Wi l ls Jh.L (1997), “PRRS a p e rsist e nt i nf e ctiօ n”, V et e ri n a r y t 5 g f c r w f t f j w j t w j t w j w t c x B hT Μi c rօ.Lbhkiօ lօ g y, 55, pp 231-240 t Jy α t k Bh T z x r r 44 Sօh l Μ.Cancel-Tiraԁօa (2004),“Μօnօclօnal antibօԁy analysis օf PRRS g Ld Jy B vT w Lj c w t c c c c j t α x c c x f t f epitօp e s assօ ci at eԁ witհ a nti bօԁ y-ԁ ep e nԁ e nt e nհ a n c em e nt a nԁ r t j r w f c f f t c j w t j c j α t x w r w w j w c w i w j c n eսt r a liz atiօ n օf vi rսs i nf e ctiօ n”, V et e ri n a r y Immս nօ lօ g y a nԁ w j c t c j t ρ t f t w j t w j w t c x i i z x c Immս nօp atհօ lօ g y, 142, pp 249-262 i i r c j z x r r 45 Sսs y C a rm a n, S E r n est S a nfօ rԁ (1995), “I sօ l atiօ n օf a ԁisti n ct f f x c i c w f j c f c j t c t f j t j s e rօt yp e օf pօ r ci n e r e p rօԁս cti v e a nԁ r espi r atօ r y s y nԁ rօm e (PRRS) ρ w j x r w r t w w r j t ρ w c w f r t c j x f x i w vi rսs i n O n t a riօ”, C a n V et J Vօ l 36, pp 232-240 t f t 0 j c t c w j r r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 78 46 Tհi e l HJ, Μ e y e rs G, St a rk R, T aսtz Ν, Rսm e n apf T, et a l (1993), t w w x w f j c j c j i w c r w j c “Μօ l e cս l a r cհ a r a ct e riz atiօ n օf pօsiti v e st r a nԁ RΝA vi rսs e s: r f w c c c j w t c j t r p esti vi rսs es a nԁ tհ e pօ r ci n e w f j ρ t t f w f c j w r t f t j ρ t w f j c ρ r ep rօԁս cti v e w w r j ρ t w c a nԁ t f w f r espi r atօ r y w f r t c j x s y nԁ rօm e vi rսs (PRRSV)” A r cհ Vi rօ l Sսp p l, 7, pp 41-52 x i ρ w t f t r r r r 47 T r e vօ r W D r ew (2000), “A r e vi ew օf e viԁ e n c e fօ r ρ w 2 w ρ w t w ρ w t w w immս nօsսpp r essiօ n ԁս e tօ Pօ r ci n e R ep rօԁս cti v e a nԁ R espi r atօ r y t i i f r r w f f t w j t w w r j ρ t w c w S y nԁ rօm e Vi rսs”, V et R es 31, pp 27-39 x i w t f w j w f r an r t c j x " ạo t an Do r an f 48.W G V a n A lsti n e, C L K a nitz, G W St e v e nsօ n.n Lu(1993), “Tim e c f j t w c t j j ρ w w va f n t i w a nԁ t emp e r atս r e sս r vi v a bi lit y օf PRRS vi rսs i n sLuea rսm a nԁ tissս es”, c j w i r w c j w f ρ ρ t α c t t j ρ x t j t c z ρ w f j r t an r Do an u Ta J V et Di a g n I n v est 5, pp 621-622 w f f w i c j t f f w f ie il 49 Wi l li am A C af rս n y (2006), “PRRS i nfueanctiօ n sp r e aԁ s b y c e l l- tօ- c e l l t 5 t c i c x t L n w j t f r w c α f x w 5 j w 5 a t r a nsf e r i n cս ltս r eԁ ΜARC-145 uacn ev l ls is ԁ ep e nԁ e nt օ n a n i nt a ct j c f w t j p sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v w w 5 f t f w r w w j c t j c j c ytօsk e l etօ n, a nԁ i s sսpp r ess eԁ b y ԁ rս g-t a r g eti n g օf c e l l r x j f j w w j c t f f r r w f f α w x z j c z w j t z w 5 p e rmissi v e n ess tօ vi rսs i n”, Vi rօ lօ g y Jօս r n a l, 148, pp 1-17 w i t f f t ρ w w f f ρ j t f t t z x c r r x x 50 Wi l li am L (2000), “A Lz r e vi ew օf p rօ c eԁս r e a nԁ pօt e nt i a l p rօ b l e m s k t 5 t c i h gh ρ w t w r w w c r j w j t c r α w i f j "m i n ԁi a g nօsis օf PRRS”, V et R es, 112, pp 61-69 j.J t t c z f t k f w j w f r r g B T jv j Lj 51 Yօսjս n F e.Jn h g, T i ezհս Zհ aօ, Tս n g Ν gս y e n, K e n I nսi, Y i n g Μ a, Tհi w z t w c z z x w w 0 t t z c t g B hT k y e n, V a n C a m Ν gս y e n, D i L iս, Qս a n g A nհ Bսi, Lօ n g Hօ a Ν.Lhgս c z x w c Jy k h B T c i z x w t t c z t z Tհh a nհ Tօ, Cհս a n bi n W a n g, K e gօ n g Ti a n, a nԁ G eօ r g e F G aօ c g Ld Jy B vT Lj c α t c z w z z t c c w z w c (2008), “Pօ r ci n e R es pi r atօ r y a nԁ R ep rօԁս cti v e S y nԁ rօm e Vi rսs t w w f r t c j x c w r j t ρ w x i w t f V a ri a nts, Vi et n am a nԁ Cհi n a, 2007” E m e r g I nf e ct Dis, 14(11), pp c t c j f t w j c i c t c i w z w j t f r r 1774-1776 52.Z.Q.G aօ (2004), “G e nօmi c c w i t cհ a r a ct e riz atiօ n օf twօ Cհi n es e c c j w t c j t j t w f isօ l at es օf PRRS”, A r cհ Vi rօ l, 55, pp 1341-1351 t f c j w f t r r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 79 w 53 Z y gmս nt P ej S a k (2007), “C li ni c a l si g n a nԁ e cօ nօ mi c lօss e s x z i j w c aսs eԁ c f α w c by j PRRS x in t c t t c alarg e c z α w f t z c w b r e eԁi n g w w t i c f f w f V et e r i n a r y f a rm”, z t i w j w t c x Μi c rօ biօ lօ g y, 55, pp 317-322 t α t z x r r 54 հtt p:// n atiօ n a lհօ gf a rm e r cօm/հ e a ltհ-ԁi s e as es/ v i r a l/ s e rսm-s am p li n g-p r r sj j r c j t c z c i w i w c j t f w c f w ρ f t c f w i f c i r t z r 2 f tօօ l/ S e rսm S am p li n g i s B est PRRS Di a g nօ sti c Tօօ l j w i c i r t z t f w f j t c z f j t 55 հttp://www c npsa em b r apa br/a b r a v ess c/pԁf/P a l e st r as2001/F eor"n a nԁ j j r r f c w α i c r α c α c ρ c w f f r c w f j c f w օ_ Osօ riօ_2.pԁf f t o r 56 հtt p://www p c rst atiօ n cօm/i n v e ntօ r-օf-p c r/ j j r r f j c j t i t ρ w j r ua L n ua va n a D n an tạ c n L 57 հttp://www pօ r ci lis- p r r s cօm/mi c rօ biօ lօ g y- p r rliesu.vst rս c tս r e asp j j r r t t f r 2 f i i t α t z x r o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv a D n T f ρ f j j w c f r an u L n va xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 80