Nghiên ứu á saponin triterpenoid ó hoạt tính sinh họ ủa một số ây thuố việt nam

Bảng 4.1: kết quả chiết cao cồn saponin của cỏc dược liệu Bảng 4.2: kết quả chiết cao saponin toàn phần từ 10g cao cồn saponin của cỏc dược liệu Bảng 4.3: kết quả chiết cao saponin toàn

Trường đại học bách khoa hà nội

******  ******

LUậN VĂN THạC Sĩ KHOA HọC

NGHIÊN CứU các SAPONIN TRITERPENOID

Có HOạT TíNH SINH HọC Của MộT Số

CÂY THUốC Việt nam

Ngành: công nghệ sinh học

Bùi thị minh giang

ư

Người hướng dẫn khoa học: T.S Đỗ THị HOA VIÊN

 Hà nội 2006

MỤC LỤC

PHẦN I: MỞ ĐẦU

PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU

II.1 TỔNG QUAN VỀ CÁC SAPONIN TRITERPENOID 4 II.1.1 Giới thiệu chung về saponin 4

II.1.2 Giới thiệu về các saponin triterpenoid 5

II.1.2.1 Các saponin triterpenoid pentacyclic (5 vòng) 5

II.1.2.2 Các saponin triterpenoid tetracyclic (4 vòng) 8

II.1.4 Tính chất hoá lý của các saponin 10

II.1.5 Hoạt tính sinh học và ứng dụng của các saponin 12

II.2 TỔNG QUAN VỀ 2 LOẠI CÂY ĐINH LĂNG 13

II.3 TỔNG QUAN VỀ NGƯU TẤT-CỎ XƯỚC 17

II.4 TỔNG QUAN VỀ HAI CÂY TIÊN MAO 21

II.6 CÁC SẢN PHẨM THỰC PHẨM CHỨC NĂNG 26

PHẦN III : NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

III.1.2 Hoá chất và thiết bị thí nghiệm 29

III.2.1 Phương pháp chiết cao cồn saponin 30

III.2.2 Phương pháp chiết cao Saponin toàn phần 30

III.2.3 Định tính xác định các saponin 31

III.2.4 Phương pháp thuỷ phân, chiết xuất sapogenin 32

III.2.5.1 Giới thiệu về các phương pháp sắc kí 34

III.2.5.2 Phân tích các thành phần saponin triterpenoid và sapogenin

III.3 NGHIÊN CỨU MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÁC

III.3.2 Phương pháp tiến hành 38

III.3.3 Các chỉ tiêu nghiên cứu và phương pháp định lượng 40

PHẦN IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

IV.1 QUY TRÌNH CHIẾT CAO SAPONIN TOÀN PHẦN 40

IV.1.1 Quy trình chiết cao saponin toàn phần bằng dung môi cồn 41

IV.1.2 Quy trình chiết cao saponin toàn phần dung môi n-Butanol 44

IV.1.3 Định tính các chất saponin trong các dược liệu 48

IV.1.4 Kết quả phân tích saponin triterpenoid 53

IV.2 QUY TRÌNH THUỶ PHÂN, CHIẾT XUẤT VÀ PHÂN TÍCH

IV.2.1 Quy trình thuỷ phân, chiết xuất các sapogenin 59

IV.2.2 Kết quả phân tích các sapogenin 63

IV.3 NGHIÊN CỨU MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA SAPONIN 75

IV.3.1 Ảnh hưởng của cao cồn dược liệu đến trọng lượng cơ thể chuột 76

IV.3.2 Ảnh hưởng của cao cồn đến sinh lực chuột thí nghiệm 78

IV.3.3 Ảnh hưởng của cao cồn saponin đến cơ quan sinh dục chuột đực

PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ

V.1 Về kết quả nghiên cứu saponin triterpenoid trong các dược liệu 83

V.2 Về kết quả nghiên cứu hoạt tính sinh học của các dược liệu 85

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 2.1: Một số sản phẩm bổ sung dinh dưỡng trong và ngoài nước có mặt

trên thị trường Việt Nam

Bảng 4.1: kết quả chiết cao cồn saponin của các dược liệu

Bảng 4.2: kết quả chiết cao saponin toàn phần từ 10g cao cồn saponin của các

dược liệu

Bảng 4.3: kết quả chiết cao saponin toàn phần từ 100g bột dược liệu

Bảng 4.4: kết quả thí nghiệm tạo bọt của cao cồn saponin các dược liệu Bảng 4.5: kết quả thuỷ phân, chiết thu các sapogenin từ 1g saponin toàn phần

Bảng 4.7: kết quả ảnh hưởng của cao cồn saponin đến trọng lượng chuột thí

Hình 2.13: Cấu trúc saponin của hạt Cỏ xước

Hình 2.15: Cây Tiên mao lá to

Hình 2.16: Cây Rau má

trong môi trường kiềm và axit

PHẦN I: MỞ ĐẦU

Trong thế kỉ 21 thì một trong những ngành khoa học công nghệ được đặc biệt chú ý đó là ngành khoa học công nghệ các chất bổ sung dinh dưỡng hay còn gọi là thực phẩm chức năng Các chất bổ sung dinh dưỡng đã được xác định là các sản phẩm có tác dụng hiệu lực bổ sung, điều chỉnh, nâng cao các hoạt động chức năng của các bộ phận riêng lẻ của cơ thể hay toàn bộ cơ thể mà mục đích là giúp cơ thể nâng cao khả năng miễn dịch, tăng sức đề kháng, tăng sinh lực để phòng chống các bệnh tật, chống lại các chất oxy hoá, chống lão hoá nhằm nâng cao tuổi thọ cho con người Các sản phẩm này không phải là thực phẩm vì không tạo ra năng lượng cho cơ thể cũng như không phải là thuốc vì vậy không có đặc tính hay phản ứng phụ cho người dùng nên được sử dụng thường xuyên và lâu dài

Ngành khoa học công nghệ các chất bổ sung dinh dưỡng vừa được hình thành và phát triển trong thời gian gần đây Lúc đầu nó được phát triển ở Nhật Bản dưới dạng các thực phẩm chức năng (Functional food), sau đó được phát triển rộng rãi ỡ Mỹ, ở Canada dưới dạng các chất bổ sung dinh dưỡng (Nutritional supplements), sau đó tiếp tục được phát triển ở Tây Âu dưới dạng thực phẩm - thuốc (Nutraceutics) và cuối cùng trong những năm lại đây chúng phát triển ra toàn thế giới

Nguồn nguyên liệu để sản xuất các sản phẩm bổ sung dinh dưỡng đa phần là các sản phẩm từ thiên nhiên như các cây cỏ, động vật nhất là các cây cỏ nhiệt đới Đông Nam Á, Đông Á, Châu Phi, Châu đại dương, Châu Mỹ Các nước Bắc Mỹ, Tâu Âu, Nhật phải nhập các sản phẩm này từ Trung Quốc, Ấn độ,

động thực vật rất phong phú và đa dạng, trong đó có nhiều loại đặc hữu có nhiều tiềm năng để tham gia vào việc sản xuất các sản phẩm bổ sung dinh dưỡng nhằm cung cấp cho nhu cầu tiêu dùng trong nước và có khả năng xuất khẩu các sản phẩm sang thị trường Nhật Bản, Bắc Mỹ, Tây Âu

Trong nhóm các sản phẩm bổ sung dinh dưỡng hiện nay thì nhóm sản phẩm thích nghi sinh học được sử dụng rất nhiều Thành phần chủ yếu của nhóm này là các saponin, alkaloid, flavonoid, steroid .mà trong đó nhóm saponin được sử dụng nhiều nhất là nhóm saponin triterpenoid Nhóm saponin triterpenoid mà được sử dụng nhiều nhất có trong các loại sâm (sâm Triều tiên, sâm Mỹ, sâm Xibêri, sâm Việt Nam, ), sau đó đến các loại khác như Tam thất, Ngưu tất, Cam thảo, Rau má Các saponin triterpenoid này có tác dụng bổ, tăng lực, tăng khả năng miễn dịch và tăng thích nghi sinh học Ngoài ra chúng còn có tác dụng bảo vệ gan, phòng và điều trị viêm gan, tác dụng an thần, chống viêm Những nghiên cứu mới đây còn xác định các saponin này có tác dụng ức chế và phòng một số bệnh ung thư

Xuất phát từ những vấn đề trên tôi đã chọn nghiên cứu đề tài:

“ Nghiên cứu các saponin triterpenoid có hoạt tính sinh học của

một số cây thuốc Việt Nam ”

Nhằm đưa ra cơ sở cho việc tiếp cận và ứng dụng hoạt chất này trong sản xuất một số sản phẩm thực phẩm chức năng để đáp ứng nhu cầu tăng cường sức khoẻ cho cộng đồng

* Đối tượng và phạm vi nghiên cứu:

- Đối tượng nghiên cứu trong đề tài này chúng tôi sử dụng một số cây thuốc Việt Nam:

1 Đinh lăng lá xẻ: lá (Polyscias fruticosa (L) Harm)

2 Đinh lăng lá tròn: lá và rễ (Polyscias balfouriana Bailey)

3 Ngưu tất: rễ (Achyranthes bidentata Blume)

4 Cỏ xước: toàn cây (Achyranthes aspera L)

5 Tiên mao lá to: thân rễ (Curculigo glacilis Hook.f)

6 Tiên mao lá nhỏ: thân rễ (Curculigo orchioides Gaertn )

7 Rau má: toàn cây (Centella asiatica Urb)

- Phạm vi nghiên cứu: nghiên cứu về phương pháp chiết xuất, định tính, định lượng, phân tích các thành phần và nghiên cứu về một số hoạt tính sinh học của một số saponin này

* Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài:

- Nghiên cứu về thành phần các saponin có trong dược liệu, hoạt tính sinh học của chúng nhằm đưa ra cơ sở cho việc tiếp cận và ứng dụng hoạt chất này trong sản xuất một số sản phẩm bổ sung dinh dưỡng để đáp ứng nhu cầu tăng cường sức khoẻ, phòng bệnh cho cộng đồng Cụ thể là góp phần vào các đề tài nghiên cứu sản xuất sản phẩm bổ sung dinh dưỡng Dinta (có chứa saponin triterpenoid của lá Đinh lăng lá xẻ và saponin steroid của cây Tật lê) có tác dụng tăng sinh lực đã được Bộ y tế cho phép sử dụng trong toàn quốc và Denton (có chứa saponin triterpenoid của rễ Ngưu tất, cao Thạch hộc và cao Ba kích) có tác dụng bổ gân cốt chống mệt mỏi do Phân viện Công Nghệ Mới - Bảo Vệ Môi Trường -Bộ Quốc Phòng đang nghiên cứu, phối hợp với xí nghiệp dược phẩm TW25 sản xuất Sẽ đưa vào sản xuất sản phẩm bổ sung dinh dưỡng từ saponin Rau má với tên Masapon do công ty dược phẩm Savipharm-TPHCM sản xuất

PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU

II.1 TỔNG QUAN VỀ CÁC SAPONIN TRITERPENOID II.1.1 Giới thiệu chung về saponin (2, 4, 6,19,37,42)

- Saponin hay còn được gọi là Saponosid do chữ la tinh sapo = xà phòng (vì

nó tạo bọt như xà phòng), là một nhóm glucosid lớn Saponin thường gặp trong thực vật, chúng có mặt trong hơn 90 loài thực vật và cũng có mặt trong một số động vật như Hải sâm, Sao biển

- Đa số các saponin có vị đắng trừ một số như: glycyrhizin có trong Cam thảo bắc, abruosid trong Cam thảo dây có vị ngọt

- Saponin tan trong nước nóng, trong rượu etylic, rất ít tan trong ete, aceton,

do đó người ta thường dùng các chất này để kết tủa saponin

- Saponin khó bị thẩm tích và người ta dựa vào tính chất này để tinh chế saponin trong quá trình chiết suất

- Saponin tạo bọt nhiều khi lắc mạnh với nước, bền trong môi trường nước

do có một đầu ưa nước và một đầu kị nước, đây là tính chất đặc trưng của saponin

- Cũng giống như các glucosid khác khi thuỷ phân bằng dung dịch axit loãng và nóng hoặc bằng enzym, saponin bị thuỷ phân tạo ra phần đường

và phần không đường gọi là aglycon hoặc sapogenin (37):

- Phần glycon của các saponin có thể là glucose, arabinose, xylose hoặc axit glucosonic Còn phần sapogenin thay đổi ở những nhóm saponin khác nhau Dựa vào cấu trúc cơ bản phần sapogenin người ta chia các saponin

thành hai nhóm chính là : Saponin triterpenoid và Saponin steroid Saponin triterpenoid có loại trung tính và loại axit còn saponin steroid thì

có loại trung tính và loại kiềm

- Các saponin là một trong những thành phần quan trọng của nhiều vị thuốc nam, thuốc Trung y và một số thuốc tân dược

II.1.2 Giới thiệu về các saponin triterpenoid (4,19,42)

- Các Saponin tritterpenoid phổ biến trong giới thực vật, phần nhiều trong cây hai lá mầm và chiếm hầu hết các saponin tìm thấy trong tự nhiên

- Các Saponin triterpenoid khi tác dụng với antimoin triclorua trong dung dịch chloroform rồi soi dưới đèn tử ngoại cho huỳnh quang mầu xanh (4)

- Các saponin triterpenoid là các glucosid mà phần sapogenin có cấu trúc triterpen với 30 nguyên tử C (cacbon) dựa vào số vòng cấu tạo khung cơ bản người ta chia saponin triterpenoid thành hai loại:

Các saponin triterpenoid pentacyclic và các saponin triterpenoid tetracyclic

II.1.2.1 Các saponin triterpenoid pentacyclic (5 vòng)

- Loại này gồm các nhóm : Olean, Ursan, Lupan, Hopan (2,4,6,13,19,20)

Phần aglycon thường có 5 vòng và thường là dẫn chất của 3-β hydroxy olean 12-ene, tức là β-amyrin Một vài aglycon làm ví dụ:

Axit oleanolic: R1 = R2 = R4 = R5 = -CH3, R3 = -COOH

Hederagenin: R2 = R4 = R5 = -CH3, R1 = -CH2OH, R3 = -COOH

- Mạch đường có thể nối vào vị trí C3 theo dây nối acetal, có khi mạch đường nối vào vị trí C28 theo dây nối este

10

7 8

12 13

22 20

1 nhóm metyl C30 không đính vào vị trí của C20 mà lại đính ở vị trí của C19 Các saponin của nhóm này ít gặp hơn nhóm Olean

- Các sapogenin của nhóm ursan thường là dẫn chất của 3-β hydroxy ursan 12-ene, tức là α-amyrin Asiaticosid có trong rau má là saponin thuộc nhóm này

6 cạnh giống như các nhóm trên nhưng chỉ khác vòng E là vòng 5 cạnh,

C20 ở ngoài vòng và thường có nối đôi ở vị trí 20-29

Hình 2.3: Khung Lupan

I.1.2.2 Các saponin triterpenoid tetracyclic (4 vòng)

- Loại này gồm các nhóm cơ bản là : Dammaran, Lanostan và Cucurbitan

cấu tạo 4 vòng và một mạch nhánh Khi tác dụng bởi axit thì mạch nhánh đóng vòng tạo thành vòng tetrahydropyran

2

3 5

10

7 8

13 9

4 6 1

11

15 16

- Nhóm này có đại diện là các saponin của Nhân sâm, trong hạt táo và Rau đắng biển

Hình 2.4: Khung Hopan

Hình 2.5: Khung Dammaran

b Nhóm Lanostan (VI): là một trong những saponin có trong các loài Hải

sâm – Holothuria spp

2

3 510

7

8 9

4 6 1

11

15 16

18 13

họ Cucurbitaceae Ở đây nhóm CH3 gốcthay vì ở vị trí C10lại đính ở C9

11

15 16

28 29

30

12

14 17

9

Hình 2.7: Khung Cucurbitan Hình 2.6: Khung Lanostan

- Cho đến nay đã biết khá nhiều các saponin triterpenoid trong tự nhiên, trong đó phần lớn thuộc về khung olean

- Để nhận biết saponin triterpenoid thì dùng phản ứng Libermann-Burchard cho mầu nâu đỏ đến tím Ngoài ra còn có thể dùng phản ứng tạo bọt, phản ứng dung huyết, phản ứng với vanillin 1% trong HCl và hơ nóng sẽ cho màu hoa cà hoặc các thuốc thử khác như: axit photphomolipdic, axit silicotungstic .(4)

- Saponin triterpenoid có chứa trong các loại cây như các loài Sâm (Panax), các cây trong họ Nhân sâm (Đinh lăng, Ngũ gia bì ), Rau má, Tiên mao

và chúng còn có trong rất nhiều cây khác như: Cam thảo, Bồ kết

II.1.3 Các saponin steroid (4,19)

- Các saponin steroid có cấu trúc steroid 4 vòng Có rất nhiều loại saponin steroid nhưng chúng chủ yếu thuộc 3 nhóm chính : Spirostan, Spirosolan, Solanidan

- Nhóm saponin này thường gặp trong những cây một lá mầm, chúng có trong các họ như: Amaryllidaceae, Dioscoreaceae, Liliaceae .Khi thuỷ phân các saponin này thì thu được các sapogenin Các sapogenin này có cấu tạo steroid Các saponin steroid trong cây Tật lê được dùng làm thuốc hướng sinh dục, còn một số saponin steroid được dùng làm nguyên liệu để bán tổng hợp các chất testosteron, estradiol, progesteron, thuốc tránh thai cho phụ nữ và các cortricoid - các thuốc chống viêm

II.1.4 Tính chất hoá lý của các saponin (4,19)

- Các saponin làm giảm sức căng bề mặt, tạo bọt nhiều khi lắc với nước, có tác dụng nhũ hoá và tẩy sạch do phân tử saponin có cùng một lúc một đầu

ưa nước, một đầu kị nước Đây là một đặc tính đặc trưng nhất của các saponin

- Các saponin có tính phá huyết (làm vỡ hồng cầu ngay ở nồng độ rất loãng)

- Chúng Có thể tạo phức với cholesterol hoặc với các chất hydroxysteroid khác

3-β Saponin đa số có vị đắng trừ một số glycyrrhizin có trong cam thảo bắc,

abrusosid trong cam thảo dây và oslandin trong cây Polypodium vulgare

có vị ngọt

- Saponin tan trong nước, alcol, rất ít tan trong aceton, ether, hexan do đó người ta có thể sử dụng các dung môi này để tủa saponin Saponin còn bị tủa với chì acetat, bari hydroxyd, ammoni sulfat

- Saponin khó bị thẩm tích, người ta dựa vào nó để tinh chế saponin trong quá trình chiết xuất

- Axit sunfuric đặc hoà tan saponin và cho màu thay đổi từ vàng, đỏ, lơ, xanh lá cây hay lơ tím Phản ứng với axit sunfuric là phản ứng nhạy cảm nhất của saponin Nếu cho saponin vào axit sunfuric đặc với một lượng cồn 960 với lượng bằng nhau và đem đun nóng thì sẽ xuất hiện màu vàng, dần dần chuyyển sang đỏ và để 30 phút sẽ cho màu đỏ tím, nếu thêm vài giọt clorua sắt thì sẽ cho màu xanh

- Với saponin triterpenoid khi tác dụng với antimoin triclorua trong dung dịch chloroform rồi soi dưới đèn tử ngoại thì cho huỳnh quang màu xanh

II.1.5 Hoạt tính sinh học và ứng dụng của các saponin

a Hoạt tính sinh học chung của các saponin (2,4,6,23,33)

- Tác dụng sinh học của các saponin đã được con người nhận biết và ứng dụng từ rất lâu qua quá trình sử dụng các thảo dược Những nghiên cứu mới đây của viện Linus Pauling ở Mỹ (Linus Pauling-nhà hoá học Mỹ nhận 2 giải Nobel) đã đưa ra nhiều hoạt tính đáng chú ý của các saponin là:

- Một số nhà khoa học cho rằng nhờ có các saponin mà cây cối được bảo vệ khỏi mối mọt Người ta sử dụng các thuốc có chứa saponin để diệt côn trùng, các sản phẩm này có lợi là không độc với người và động vật

- Một số nguyên liệu chứa saponin dùng để pha nước gội đầu, giặt len dạ, tơ lụa

- Nhóm saponin quan trọng nhất là các saponin của sâm Triều Tiên, sâm Trung Quốc, sâm Mỹ, sâm Nhật Bản, sâm Việt Nam Các saponin này thuộc nhóm triterpenoid và có cấu tạo hoá học gần gũi với nhau Chúng có tác dụng bổ, tăng lực, tăng khả năng miễn dịch và tăng thích nghi sinh học Ngoài ra chúng còn có tác dụng bảo vệ gan, phòng và điều trị viêm gan và tác dụng an thần, chống viêm Những nghiên cứu mới đây còn xác định các saponin của sâm có tác dụng ức chế và phòng một số bệnh ung thư

- Các cây có chứa saponin triterpenoid của Việt Nam gồm có: Tam thất, sâm Việt Nam, Ngũ gia bì, Đinh lăng, Rau má, Tiên mao là các dược liệu

có tác dụng bổ, tăng sinh lực, chống lão hoá

+ Rau má có tác dụng thanh nhiệt, chống loét, làm mau lành vết thương, điều trị viêm loét dạ dày Công ty mỹ phẩm Thái Dương đã sử dụng kết

hợp hoạt chất của Rau má với hoạt chất của Nghệ tạo ra loại kem làm đẹp cho nữ; Xí nghiệp dược phẩm TW 3 Hải phòng đã sản xuất viên cao Rau

má và xí nghiệp dược phẩm TW25 thành phố Hồ Chí Minh sản xuất thuốc viên Centula gồm cao Nghệ, cao Rau má, để điều trị các bệnh về gan, mật

và làm tăng chuyển hoá lipid

+ Đinh lăng có tác dụng bổ, tăng sinh lực Ở Hà Tây sử dụng nước ép lá Đinh lăng cho các đô vật trước khi bước vào trận đấu để tăng lực, tăng sức dẻo dai Xí nghiệp dược phẩm Hà Nội đã sản xuất chè hạ huyết áp từ hoa hoè, cúc hoa, lá đinh lăng; Xí nghiệp dược phẩm 25 sản xuất Uphaton

từ bạch tật lê, dâm dương hoắc, rễ đinh lăng để tăng sinh lực, chống lão hoá .Nhiều cơ sở đã sản xuất thuốc Hoạt huyết dưỡng não có chứa cao lá ngân hạnh và cao rễ Đinh lăng lá xẻ

+ Tiên mao lá nhỏ và Tiên mao lá to theo kinh nghiệm dân gian chúng được sử dụng làm thuốc bổ, tăng sinh lực và chữa bệnh yếu sinh lí của nam giới (5,8)

II.2 TỔNG QUAN VỀ 2 LOẠI CÂY ĐINH LĂNG

- Ở Việt Nam có nhiều loại cây Đinh lăng như: Đinh lăng lá xẻ, Đinh lăng lá tròn, Đinh lăng lá ráng .Trong đó 2 loại cây Đinh lăng lá xẻ và Đinh lăng

lá tròn thường được dùng làm thuốc trong y học cổ truyền [2, 5, 8, 10, 15,

16, 24, 39]

II.2.1 Đinh lăng lá xẻ

- Đinh lăng lá xẻ trong dân gian còn được gọi với các tên khác như : cây gỏi

cá, Nam dương lâm

- Đinh lăng lá xẻ có tên khoa học là : Polyscias fruticosa (L) Harm hay

Nothopanax fruticosum (L)

- Thuộc họ Nhân sâm Araliaceae

a Mô tả

- Đây là loại cây nhỏ cao 0,5-2m, tán lá sum

suê, xanh tốt quanh năm Thân nhẵn không

gai, mầu xám, nhiều vết sẹo to Lá mọc so le,

kép lông chim 2-3 lần, dài 20-40cm; lá chét

có răng cưa nhọn, đôi khi chia thuỳ, gốc và

đầu thuôn nhọn; cuống lá dài, phát triển

thành bẹ ở phần cuối

- Cụm hoa mọc ở ngọn thành hình chuỳ ngắn

7-18mm, gồm nhiều tán gộp lại Mỗi tán

mang nhiều hoa nhỏ, có cuống ngắn

- Hoa có 5 cánh hình trứng, dài khoảng 2mm, có nhị Quả dẹt, hình trứng rộng, mầu trắng bạc

b Phân bố, thu hái và chế biến

- Đinh lăng lá xẻ có nguồn gốc ở vùng đảo Polynesia ở Thái Bình Dương Cây được trồng ở Malaysia, Indonesia, Lào, Việt Nam Ở Việt Nam, Đinh lăng lá xẻ được trồng phổ biến ở nhiều nơi làm cảnh, làm thuốc, làm rau gia vị

- Đinh lăng lá xẻ ưa đất cao ráo, hơi ẩm, nhiều mùn và chúng tái sinh mạnh bằng cành, hạt

- Trong nhân dân thì chủ yếu dùng rễ và lá Đinh lăng lá xẻ Rễ củ thu hái vào mùa thu lúc rễ mềm và nhiều hoạt chất Lá được thu hái vào mùa thu

là lúc lá có nhiều hoạt chất nhất và lúc này cây cũng nhiều lá nhất Lá, rễ sau khi thu hái được rửa sạch, phơi khô ở bóng râm, hoặc sấy khô ở nhiệt

độ <=800

c Thành phần hoá học

- Trong lá và rễ của Đinh lăng lá xẻ có chứa các saponin triterpenoid, khi thuỷ phân sẽ cho axit oleanolic (C30H48O3) và các thành phần khác như alkaloid, các glucosid, tanin, tinh dầu, vitamin B1 và còn có cả các axit amin như lyzin, methionin

H O

C O O H

COOH

- Ở Hà Tây để tăng sức khoẻ cho các đô vật người ta còn sử dụng nước của

lá Đinh lăng lá xẻ cho các đô vật uống trước trận đấu

- Ở Ấn Độ lá Đinh lăng lá xẻ còn được sắc uống có tác dụng lợi tiểu, chữa sỏi thận, sỏi bàng quang

II.2.2 Đinh lăng lá tròn

- Đinh lăng lá tròn có tên khoa học là:

Polycias balfouriana Bailey (P

rumphiana Harms), còn được gọi bằng tên

Đinh lăng viền bạc

- Thuộc họ Nhân sâm Araliaceae

a Mô tả

- Cây cao 0,5-3m, tán lá sum suê, xanh tốt

quanh năm Thân xù xì nhiều sẹo màu xám

Lá kép thường chỉ có 3 lá chét trên một

cuống lá dài, cuống lá dài phát triển thành bẹ ở gần cuối ôm thân Lá chét

có phiến xoan tròn, có chiều dài từ 4-12cm, chiều rộng từ 6-13cm, các mép lá

có răng cưa bè viền trắng trên nền lá xanh lục Có những lá các viền trắng ăn sâu từ 2-3cm từ mép lá vào lá

b Phân bố, thu hái và chế biến

- Đinh lăng lá tròn phân bố ở vùng nhiệt đới, á nhiệt đới đặc biệt là vùng đảo ở Thái Bình Dương, là cây nhập trồng ở Việt Nam Thường được trồng làm cảnh vì có tán lá đẹp Cây dễ trồng bằng cách tách bụi

c Thành phần hoá học: Chúng tôi chưa thấy có tài liệu nào công bố về vấn

đề này

d Công dụng: Theo dân gian thì được sử dụng như Đinh lăng lá xẻ

II.3 TỔNG QUAN NGƯU TẤT - CỎ XƯỚC

- Ở nước ta có hai loài là: Ngưu tất và Nam ngưu tất (Cỏ xước) Trong dân gian thường được sử dụng chữa bệnh và theo các tài liệu công bố thì chúng

có chứa nhiều saponin triterpenoid (1, 4, 5, 8, 14, 22, 26, 27)

II.3.1 Ngưu tất

- Ngưu tất trong dân gian còn được gọi với các tên khác như: Hoài ngưu tất

- Tên khoa học là: Achyranthes bidentata Blume

- Thuộc họ Rau dền Amaranthaceae

a Mô tả

- Cây Ngưu tất là một loại Cỏ xước (nên thường nhầm với cây Cỏ xước

L) Ngưu tất là cây thảo sống nhiều năm, cao 1-2m

Thân mảnh, hơi vuông, rễ củ hình trụ dài Lá mọc đối có cuống, dài 12cm, rộng 2-4cm, phiến lá hình trứng,

5-đầu nhọn, mép nguyên Cụm hoa mọc

thành bông ở đầu cành hoặc kẽ lá Quả

nang, lá bắc còn lại và nhọn thành gai

b Phân bố, thu hái và chế biến

- Hiện nay, nước ta đang trồng giống

Ngưu tất di thực của Trung Quốc, có rễ

to hơn cây Cỏ xước mọc hoang ở khắp

nơi ở nước ta

- Ngưu tất được trồng khắp nơi ở nước ta Đồng bằng thì trồng vào tháng

9-10, thu hoặch vào tháng 2-3 Vùng núi trồng vào tháng 2-3 và thu hoạch vào tháng 9-10

- Bộ phận sử dụng là rễ Rễ Ngưu tất được thu hoặc khi cây bắt đầu úa vàng, đào rễ về và rửa sạch, phơi hoặc sấy khô

c Thành phần hoá học

- Rễ có chứa các saponin triterpenoid, khi thuỷ phân sẽ cho axit oleanolic

C30H48O3 và galactose, rhamnose, glucose Ngoài ra còn có chứa

ecdysteron, inokosteron và muối kali

- Theo y học cổ truyền rễ Ngưu tất có tác dụng bổ can thận, mạnh gân cốt Được dùng chữa đau lưng, huyết áp cao

Hình 2.11: Cây Ngưu tất

- Rễ Ngưu tất đã được GS Đoàn Thị Nhu và cộng sự chứng minh có tác

dụng hạ cholesterol máu và có tác dụng hạ huyết áp .và đã được sản xuất

làm thuốc với tên Bidantin

II.3.2 Cỏ Xước

- Cỏ xước trong dân gian còn gọi với tên

Nam ngưu tất

- Tên khoa học là: Achyranthes aspera L

- Thuộc họ Rau dền Amaranthaceae

a Mô tả

- Cây Cỏ xước cũng giống cây Ngưu tất,

cây này là cây mọc hoang ở khắp nước

ta Là cây cỏ có thân mảnh, hơi vuông,

thường chỉ cao 1m Lá mọc đối có

cuống, dài 7-15cm, rộng 5-8cm, phiến lá

hình trứng, đầu nhọn, mép lá có khía răng cưa Cụm hoa mọc thành bông ở đầu cành hoặc kẽ lá

- Quả nang, lá bắc còn lại và nhọn thành gai Rễ Cỏ xước cũng nhỏ hơn rễ

của Ngưu tất

b Phân bố, thu hái và chế biến

- Cỏ xước mọc hoang ở khắp nước ta, rễ Cỏ xước nhỏ hơn rễ cây Ngưu tất

nhưng có thể sử dụng rễ Cỏ xước thay cho rễ Ngưu tất được

- Bộ phận sử dụng là toàn cây, được thu hái về rửa sạch, phơi hoặc sấy khô

Hình 2.12: Cây Cỏ xước

- Cỏ xước được sử dụng toàn cây làm thuốc

- Theo dân gian thì rễ Cỏ xước có thể sử dụng thay thế rễ Ngưu tất có tác dụng bổ gan thận, mạnh gân cốt Được sử dụng trị sốt rét, quai bị Ở Ấn

Độ, người ta sử dụng toàn cây trị bệnh phù, trĩ, nhọt, đau bụng

Hình 2.13: Cấu trúc saponin của hạt Cỏ xước

R R 1

A: -glc A4 – glc 4 – rha -H B: -glc A4 – glc 4 – rha -gal C: -glc A4 – rha -glc A D: -glc A4 – glc 4 – rha -glc A

II.4 TỔNG QUAN VỀ HAI CÂY TIÊN MAO

- Tiên mao gồm có 14-15 loài ở các vùng nhiệt đới Nam bán cầu Ở nước ta

có 8 loài, thông thường là: Tiên mao lá to (Cồ nốc mảnh), Tiên mao lá nhỏ (Cồ nốc lan), Cồ nốc hoa đầu, Cồ nốc song đính, Tiên mao lá rộng (Cồ nốc

lá rộng) và trong dân gian thường sử dụng 2 loài là Tiên mao lá to và tiên mao lá nhỏ để chữa bệnh ( 5, 8, 21, 30, 31, 32, 41)

II.4.1 Tiên mao lá nhỏ

- Tiên mao lá nhỏ trong dân gian còn được gọi với các tên khác như : Ngải cau, Tiên mao, Cồ nốc lan

- Tiên mao lá nhỏ có tên khoa học là : Curculigo orchioides Gaertn, thuộc

họ thuỷ tiên Amaryllidaceae

a Mô tả

- Đây là loại cây cỏ cao khoảng 40

cm, sống lâu năm Thân rễ hình trụ

dài, dạng củ đường kính khoảng

1-2cm, có rễ phụ nhỏ, vỏ thô mầu nâu

nhạt, trong mầu trắng ngà Lá hình

mác hẹp, hai đầu nhọn, nhiều gân

song song Dài khoảng 15-40 cm,

rộng 12-35 mm, cuống lá dài 10

cm, xếp nếp giống như lá cau

- Hoa màu vàng mọc thành từng cụm ngắn, nằm trong bẹ lá quả nang thuôn, dài 1,5cm

Hình 2.14: Cây Tiên mao lá nhỏ

b Phân bố, thu hái và chế biến

- Tiên mao lá nhỏ mọc phổ biến ở nhiều tỉnh miền Bắc nước ta, còn thấy mọc ở một số nước như : Ấn độ, Campuchia, Malaysia, Philippines, Thái lan, Trung quốc, Nhật, Lào, Indonesia, Myanmar, Pakistan

- Bộ phận dùng là thân rễ - Rhizoma Curculiginis và thường được gọi là tiên mao và thường được thu hái vào mùa hè thu, đào thân củ về, rửa sạch và phơi khô

- Ở Ấn độ, người ta xem cây này có tính chất nhầy dịu, lợi tiểu, bổ kích dục, được sử dụng chữa bệnh trĩ, vàng da, hen suyễn, lậu

- Theo nghiên cứu của dược lý học hiện đại, Tiên mao la nhỏ có tác dụng tăng cường công năng miễn dịch, nâng cao năng lực hoạt động của tuyến sinh dục, chống lão hoá, kháng viêm, chống nấm, chống ung thư ngoài

ra, nó còn có tác dụng cường tim và làm giãn mạch vành

II.4.2 Tiên mao lá to

- Tiên mao lá to trong dân gian còn được gọi với các tên khác như : Cây lòng thuyền, Tiên mao hoa thưa, Cồ nốc mảnh, Tam lăng, dân tộc Dao còn gọi là Nòm giang

- Tiên mao lá to có tên khoa học là: Curculigo gracilis (Kurz) Hook.f

- Thuộc họ Thuỷ tiên: Amaryllidaceae

- Cây thảo sống lâu năm, thân rễ hình trụ

dài, dạng củ đường kính khoảng 2-5cm ,

có rễ phụ nhỏ, vỏ thô mầu nâu đậm,

trong mầu vàng ngà Lá dài tới 1m kể cả

cuống, phiến dài 45-60cm, rộng 5-7cm

màu lục, có nhiều gân, nhọn hai đầu

Cụm hoa trên cuống đầy lông, hoa thành

chùm màu vàng

b Phân bố, thu hái và chế biến

- Loài này có ở Nam Trung Quốc, Nêpan, Việt Nam Ở nước ta, cây mọc ở những nơi có độ cao trên 1000m từ Lào cai, Hà Tây qua Ninh Bình tới Quảng Trị

- Bộ phận dùng là thân rễ - Rhizoma Curculiginis gracilis

- Tiên mao lá to thường được thu hái vào mùa hè thu, đào thân củ về, rửa sạch và phơi khô

Hình 2.15: Tiên mao lá to

c Thành phần hoá học: Chúng tôi chưa thấy có tài liệu nào công bố về vấn

II.5 TỔNG QUAN VỀ RAU MÁ

- Rau má trong dân gian còn được gọi với các tên như : Tích tuyết thảo, Liên tiền thảo, Phắc chèn (Tày)

- Rau má có tên khoa học : Centella asiatica (L.) Urb

- Thuộc họ Hoa tán Apiaceae (1, 4, 5, 6, 8, 12, 17, 18, 28)

- Cây cỏ, thân mảnh mọc bò, phân

nhánh nhiều ở mặt đất, bén rễ ở các

mấu của thân Lá mọc so le hoặc tụ

tập nhiều lá ở một mấu, cuống lá dài

khoang 2-4cm, phiến lá hình thận

hoặc gần tròn, mép khía tai bèo Cụm

hoa hình tán đơn mọc ở kẽ lá, mang

1-5 hoa nhỏ, không cuống màu trắng

hoặc phớt đỏ Quả dẹt có sống hơi rõ

Hình 2.16: Cây Rau má

b Phân bố, thu hái và chế biến

- Là loài cây nhiệt đới, mọc hoang ở khắp các nước vùng nhiệt đới như Đông Nam Á, Trung Quốc, Ấn độ, Mỹ Ở Việt Nam, Rau má mọc hoang ở khắp nơi và cũng trồng được

- Rau má thường mọc ở những chỗ ẩm mát, có thể thu hái quanh năm Có thể sử dụng tươi hoặc khô Bộ phận dùng là toàn cây Khi tươi có vị đắng, mùi hơi khó chịu nhưng khi khô thì có mùi thơm, không còn vị đắng

- Ở thành phố Hồ Chí Minh, Phú Quốc đã trồng Rau má từ nhiều năm nay

để sản xuất nước giải khát từ Rau má và xuất khẩu Rau má khô sang Pháp

- Các hoạt chất chính là các saponin triterpenoid nhóm ursan Chất quan trọng nhất là asiaticosid, khi thuỷ phân cho phần aglycon là axit asiatic Saponin thứ 2 là madecassosid, chất này có phàn aglycon là axit madecassic Ngoài ra còn một số saponin khác với hàm lượng thấp

- Ngoài ra trong Rau má còn chứa tinh dầu, dầu béo, alcaloid hydrocotylin, chất đắng Vellarin, Vitamin C, và một số flavonoid

R1

COOR2

- Y học hiện đại nghiên cứu thấy saponin toàn phần của Rau má làm tăng tổng hợp collagen và fibrohectin, tác dụng này giải thích được khả năng chóng làm lành vết thương của Rau má

- Ở Pháp và một số nước Châu Âu đã sản xuất một số chế phẩm uống, tiêm hoặc sử dụng ngoài da từ Rau má để điều trị vết bỏng, vết thương hoặc vết phẫu thuật và các tổn thương ở da và niêm mạc với tên Madecassol

II.6 CÁC SẢN PHẨM BỔ SUNG DINH DƯỠNG - THỰC PHẨM CHỨC NĂNG [7,9,23,36]

- Trong 20 năm gần đây, ở các nước tiên tiến đã hình thành và phát triển mạnh mẽ một nghành khoa học công nghệ mới, đó là nghành khoa học nghiên cứu sản xuất các sản phẩm thực phẩm chức năng (các chất bổ sung dinh dưỡng ) nhằm giúp con người có sức khoẻ tốt hơn, sống trường thọ hơn Các sản phẩm này ngày càng được sử dụng rộng rãi ở Bắc Mỹ, Tây

Âu, Nhật, Úc Theo báo Nutrition Business Joural, năm 2000 toàn thế giới sử dụng khoảng 65 tỷ đô la Mỹ các sản phẩm bổ sung dinh dưỡng

- Trong thời gian gần đây, Việt Nam cũng đã nhập khẩu các sản phẩm thực phẩm chức năng từ Âu Mỹ, Hàn Quốc, Nhật Bản và Trung Quốc .Các sản phẩm này chủ yếu là sản phẩm tăng sinh lực chế biến từ Đông trùng hạ

thảo, sâm Triều tiên, sâm Mỹ, một số sản phẩm từ cây Lô hội, quả Nhàu, sụn cá Mập, các axit béo chứa nhiều dây nối đôi từ một số loài cá biển để chống lão hoá và đặc biệt là các chế phẩm có chứa β-caroten, vitamin E, vitamin C ở dạng viên nang, nước uống tăng lực

- Hiện nay, Việt Nam cũng có một số cơ sở đã và đang bước vào sản xuất các chế phẩm bổ sung dinh dưỡng như: Cục quân y, xí nghiệp dược phẩm

TW 25 Thành phố Hồ Chí Minh, Công ty Traphaco

- Sau đây là một số sản phẩm bổ sung dinh dưỡng trong và ngoài nước có mặt trên thị trường Việt Nam

Bảng 2.1: Một số sản phẩm bổ sung dinh dưỡng trong và ngoài nước có

mặt trên thị trường Việt Nam

Tribestan Tribulus terrestris L Sopharma Bungari

Helsinki Phần Lan

GeniX

Tribulus terrestris L

Polycyas fruticosum, Epimedium grandiflorum

GeniX Mỹ

hoắc, rễ đinh lăng phẩm TW 25 XN dược Việt Nam

Tiên Dung

Tribulus terrestris L, Panaxpseu doginseng, Pueraria thomsonii

XN dược phẩm TW 25 Việt Nam

Dinta Cao lá Đinh lăng, cao Bạch

tật lê

XN dược phẩm TW 25

Việt Nam

Ho ạt huyết

dưỡng não Cao quả Đinh lăng, cao Bạch Hopharco Việt Nam

TV& TP Việt Nam

Việt Nam

PHẦN III : NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP

NGHIÊN CỨU

III.1 NGUYÊN LIỆU

III.1.1 Đối tượng nghiên cứu

 Lá Đinh lăng lá xẻ: Polyscias fruticosa, được mua ở Hà Tây

 Đinh lăng lá tròn (lá và rễ): Polyscias balfouriana, được mua ở Hà Nội

 Rễ Ngưu tất: Achyranthes bidentata, mua Hà Nội

 Cây Cỏ xước: Achyranthes aspera, mua ở Hà Nội

 Thân rễ Tiên mao lá to: Curculigo glacilis, lấy ở núi Ba Vì Hà Tây

 Thân rễ Tiên mao lá nhỏ: Curculigo orchioides, mua ở Hà Nội

 Cây Rau má: Centella asiatica, được mua ở Hà Nội

- Tất cả các nguyên liệu trên sau khi được thu hái thì rửa sạch, phơi khô hoặc sấy ở 800C và tán nhỏ thành bột Bột dược liệu thu được cho vào trong túi polyetylen kín, sạch và đem bảo quản ở nơi khô ráo

III.1.2 Hoá chất và thiết bị thí nghiệm

- Hoá chất được sử dụng trong quá trình nghiên cứu gồm : nước cất, cồn

900, cồn 400, chloroform, n-Butanol, HCl, Na2SO4, silicagel G, bản sắc kí silicagel 60F254,

- Thiết bị thí nghiệm gồm : tủ sấy, thuyền tán, bình chiết nóng, bình chiết ngấm kiệt, bình triển khai sắc kí lớp mỏng, ống đong các loại, cân kỹ thuật, đèn tử ngoại, máy cất quay và một số dụng cụ thí nghiệm khác

III.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

III.2.1 Phương pháp chiết cao cồn saponin (2,3,4,6,10)

- Trong đề tài này chúng tôi sử dụng dung môi để chiết saponin là cồn 400

vì có nhiều ưu điểm như: hoà tan ít các tạp chất nên có khả năng hoà tan chọn lọc, độ sôi thấp nên khi cô đặc dịch chiết thì hoạt chất trong dược liệu

ít bị phân huỷ Là dung môi thích hợp với phương pháp ngấm kiệt vì không làm trương nở dược liệu như nước và không dễ gây cháy

- Trong đề tài này chúng tôi sử dụng phương pháp chiết cao cồn bằng phương pháp ngấm kiệt hay còn gọi là phương pháp ngâm nhỏ giọt vì với phương pháp này các hoạt chất của dược liệu được chiết kiệt

- Trước hết cho bột dược liệu khô vào bình thuỷ tinh miệng rộng cùng với một lượng cồn 400 vừa đủ, tiến hành trộn đều, ủ trong 2h cho dược liệu ngấm đều dung môi Tiếp đó tiến hành cho bột dược liệu đã được ủ vào bình chiết ngấm kiệt, sau đó bổ sung thêm dung môi cho ngập phần dược liệu 2-4cm, để ngâm 24h Sau 24h tiến hành mở van cho chảy nhỏ giọt để thu dịch chiết và bổ sung dung môi đến khi thu được dịch chiết theo tỉ lệ 1:8 Dịch chiết được cô cách thuỷ bằng máy cất quay có áp suất giảm, sau

đó đem sấy khô ở 800C đến khối lượng không đổi và thu được cao có chứa saponin, cao này được gọi là cao cồn saponin

III.2.2 Phương pháp chiết cao Saponin toàn phần (2,4,6,10)

- Theo nguyên tắc các saponin tan trong n-Butanol mà không tan trong chloroform vì vậy đầu tiên dùng n-butanol để chiết saponin có trong cao cồn, sau đó dùng chloroform dể loại tạp chất

- Từ cao cồn saponin thu được, tiến hành chiết nóng bằng n-butanol hai lần

• Lần 1: Tỉ lệ cao cồn : n-butanol là 1:8, đun hồi lưu trong 1h ở 1000C và

có khuấy từ Lọc nóng dịch chiết và thu được dịch chiết lần 1, còn phần cao thu được đem chiết lần 2

• Lần 2: Với tỉ lệ cao cồn : n-butanol là 1:5, đun hồi lưu trong 1h ở 1000C

và có khuấy từ Lọc nóng dịch chiết và thu được dịch chiết lần 2, bỏ bã cao

- Dịch chiết lần 1+2 đem cô đặc bằng máy cất quay có áp suất giảm Dịch chiết đã cô được sấy ở 800C đến khối lượng không đổi và thu được cao thô saponin (cao có chứa hỗn hợp các saponin ) Dung môi n-butanol được thu hồi

- Cao thô saponin được tinh sạch bằng chloroform 2 lần

• Lần 1: Với tỉ lệ là cao thô saponin : chloroform là 1:7 Cho chloroform vào cao thô và khuấy đều, để trong vòng 15-20 phút cho chloroform hoà tan hết tạp chất có trong cao thô, gạn bỏ dịch thu được cao saponin lần 1

• Lần 2: Cao saponin thu được ở lần 1 tiếp tục cho chloroform vào với tỉ

lệ 1:5 để tinh sạch lần 2 Cho chloroform vào cao, khuấy đều, để trong thời gian 15-20 phút sau đó gạn dịch và sấy khô đến khối lượng không đổi Cao thu được là cao saponin toàn phần, cao này có chứa hỗn hợp các saponin

III.2.3 Định tính xác định các saponin (2,4,6,10)

- Để phát hiện nhanh các saponin người ta thường dựa vào tính tạo bọt của chúng khi lắc với nước Đa số các saponin triterpenoid tạo bọt bền trong môi trường axit còn saponin steroid tạo bọt bền trong môi trường kiềm

Dựa vào phản ứng này có thể phát hiện sơ bộ 2 loại saponin triterpenoid và saponin steroid

- Phản ứng cổ điển được áp dụng nhiều nhất là phản ứng Lieberman Buchard: lấy vài mg saponin toàn phần (hoà tan 1ml cồn 960) + 1ml anhydrid acetic + 1ml chloroform và thêm một giọt axit sunfuric đặc Nếu

là saponin triterpenoid thì phản ứng sẽ cho mầu nâu đỏ, còn nếu là saponin steroid sẽ cho màu xanh lá cây

III.2.4 Phương pháp thuỷ phân, chiết xuất sapogenin (2,4,6,10,38)

 Từ 1g cao saponin toàn phần của các dược liệu trên chúng tôi tiến hành thuỷ phân thu sapogenin tương ứng với phương pháp như sau:

- Dùng axit HCl 10% để thuỷ phân saponin với tỉ lệ thích hợp Đun hồi lưu trong 4h ở 1000C, có khấy từ, sau đó để nguội

 Từ dịch thuỷ phân trên tiến hành chiết thu sapogenin như sau:

- Dịch thuỷ phân thu được cho vào bình chiết, cho thêm 50ml chloroform lắc đều, để 5-10 phút và thu dịch chloroform (sapogenin đã tan trong chloroform)

- Dịch thuỷ phân còn lại cho thêm 30ml chloroform, lắc đều, để trong 5-10 phút và thu dịch chloroform lần 2

- Gộp dịch chloroform thu được cho vào bình chiết cùng với 50ml nước cất, lắc đều (để axit lẫn trong dịch chiết chloroform hoà tan vào trong nước),

để trong 5 phút, thu phần chloroform và loại nước Phần chloroform thu được thêm 50ml nước cất và làm tương tự như trên, loại nước thu lại dịch chiết chloroforom có chứa sapogenin

- Dịch chiết chloroform sau khi đã được rửa sạch bằng nước cất 2 lần + 10g

Na2SO4 khan (đã được rang khô và để nguội), để trong 30 phút Mục đích

là dể Na2SO4 sẽ hút nước còn trong dịch chiết chloroform

- Lọc dịch chiết chloroform và đem bốc hơi, sấy khô thu được hỗn hợp sapogenin

III.2.5 Phương pháp sắc kí

III.2.5.1 Giới thiệu về các phương pháp sắc kí (2,3,6,11)

- Tất cả các phương pháp sắc kí đều dựa trên nguyên tắc : mẫu phân tích gọi

là chất tan được cho tiếp xúc với hai pha khác nhau về tính chất vật lý là pha động và pha tĩnh Pha động có thể là chất khí hoặc chất lỏng, đẩy mẫu qua vùng chứa pha tĩnh rắn hoặc lỏng gọi là chất hấp phụ Pha tĩnh thay đổi từ phương pháp sắc kí này đến phương pháp sắc kí khác Tuy nhiên, nó

có thể được coi như có khả năng “giữ” một vài dạng chất hoà tan

- Mẫu phân tích có thể chứa một hoặc nhiều cấu tử, khi tiếp xúc với pha tĩnh các cấu tử thành phần phân bố vào hai pha động và tĩnh Nếu một vài cấu

tử nào đó có ái lực nhiều với pha tĩnh thì chúng sẽ bị giữ lâu hơn trong pha tĩnh do vậy chúng sẽ ra khỏi hệ thống sắc kí muộn hơn Ngược lại những cấu tử nào có ái lực ít với pha tĩnh sẽ bị loại ra khỏi hệ thống nhanh hơn

- Pha động chứa nhiều cấu tử hoà tan của mẫu phân tích, có thể được thu lại như một hàm thời gian ở cuối hệ thống sắc kí Nếu quá trình sắc kí đạt hiệu quả các phân đoạn thu được của pha động ở các khoảng thời gian khác nhau sẽ chứa những cấu tử khác nhau của mẫu phân tích Các cấu tử này được tách ra là do chúng khác nhau về ái lực đối với hai pha động và tĩnh

a Phương pháp sắc kí bản mỏng (2,3,6,11)

- Là phương pháp sử dụng rộng rãi trong nhiều lĩnh vực khoa học và công nghiệp khác nhau, đặc biệt là trong hoá hữu cơ, hoá sinh và hoá dược nhờ những ưu điểm về khả năng có thể tách được những hỗn hợp phức tạp nhiều cấu tử, các loại hợp chất vô cơ, hữu cơ khác nhau, độ nhạy cao (có thể phát hiện các hợp chất siêu vi lượng với độ tin cậy cao), lượng mẫu phân tích nhỏ, tốc độ phân tích nhanh, có thể tiến hành hàng loạt và kỹ thuật tiến hành đơn giản, thiết bị rẻ tiền phù hợp với điều kiện nghiên cứu

ở nước ta

- Mục đích của phương pháp là nhận biết, định lượng các chất có trong hỗn hợp Ngoài ra, sắc kí bản mỏng còn được dùng nhiều cho mục đích khác như: làm giàu trong phân tích vết các đối tượng nghiên cứu, điều chế một lượng nhỏ các chất tinh khiết để làm chất chuẩn hay kiểm tra độ tinh khiết của các chất .cũng như hỗ trợ các phương pháp sắc kí khác tìm hệ dung môi sắc kí thích hợp

- Nguyên tắc của sắc kí bản mỏng: quá trình tách hỗn hợp xẩy ra khi cho pha động di chuyển qua pha tĩnh, nhưng trong phương pháp này thì chất hấp phụ (pha tĩnh) được tráng thành lớp mỏng trên tấm kính hoặc lớp kim loại Trong quá trình chuyển động qua lớp chất hấp phụ, nhờ các quá trình hấp phụ giải hấp phụ được lặp đi lặp lại, và do hệ số phân bố khác nhau các cấu tử được dịch chuyển trên lớp mỏng theo hướng pha động với những tốc độ khác nhau Kết quả thu được sắc đồ trên lớp mỏng

+ Bản mỏng là silicagenl 60F254 được tráng trên lớp nhôm mỏng (loại bản sắc kí này thường được mua bản tráng sẵn) Bản sắc kí này thường được

sử dụng phân tích định tính các hợp chất có trong nguyên liệu và sử dụng

để lựa chọn hệ dung môi thích hợp

+ Bản mỏng là silicagenl tráng trên bản thuỷ tinh 20x20cm, thường được

sử dụng để phân tích định lượng và tinh chế các chất có trong hỗn hợp

Chromatography) (2,3,6,11)

- Phương pháp này thường có khả năng tách các hợp chất đặc thù như:

+ Các hợp chất cao phân tử và ion thuộc các đối tượng nghiên cứu y học, sinh học

+ Các hợp chất tự nhiên

+ Các hợp chất kém bền

- Sắc kí lỏng cao áp còn có những ưu điểm như: tốc độ nhanh, độ tách tốt,

độ nhạy cao, cột tách dùng được nhiều lần

- Thiết bị sử dụng có các thông số kỹ thuật sau :