Khảo sát thự trạng ô nhiễm độc tố vi nấm ochratoxin a trong ngô tại hà giang và đề xuất giải pháp giảm thiếu mức độ ô nhiễm

Phần II Phiếu điều tra y tế Trang 6 Tóm tắt đề tài nghiên cứu Nấm mốc đã đợc sử dụng rất lâu trong các sản phẩm thực phẩm lên men, trong khi đó một số chủng vi nấm phát triển trong cá

1.1 TÇm quan träng cña vÖ sinh an toµn thùc phÈm 5 1.1.1 Kh¸i niÖm vÒ thùc phÈm, vÖ sinh an toµn thùc phÈm vµ c¸c

1.3.1 ¶nh hëng cña « nhiÔm thùc phÈm nãi chung 9

1.4 CÊu t¹o, ph¬ng ph¸p ph©n tÝch, ®iÒu kiÖn ph¸t triÓn vµ

1.4.4 Tính chất Ochratoxin 13 1.5 Tình hình nghiên cứu Ochratoxin trên thế giới 14 1.5.1 Mức độ ô nhiễm sản phẩm nông sản và môi trờng 14

2.1 Đối tợng nghiên cứu 25

2.5.1 Các chỉ tiêu nông sản 30

3.1 Kết quả điều tra, phỏng vấn về tập quán thói quen sản

xuất, thu hoạch, bảo quản, sử dụng ngô và kiến thức của

3.1.6 Kiến thức của ngời dân về nấm mốc, tác hại của nấm mốc

3.2 Kết quả khảo sát mức độ ô nhiễm liên quan đến tập quán

sản xuất, thu hoạch, bảo quản, sử dụng, thời gian và kiến

3.2.1 Mức độ ô nhiễm liên quan đến tập quán sản xuất 41 3.2.2 Mức độ ô nhiễm liên quan đến tập quán thu hoạch 42 3.2.3 Mức độ ô nhiễm liên quan đến tập quán bảo quản 43

3.3 Kết quả phân tích và đánh giá mức độ ô nhiễm Ochratoxin

3.4 Kết quả điều tra và bàn luận về các bệnh nhân mắc bệnh

huyện Quản Bạ và Bệnh viện tỉnh Hà Giang liên quan đến

3.4.1 Kết quả điều tra các bệnh nhân mắc bệnh thận, gan tại nơi

3.4.2 Kết quả điều tra các bệnh nhân mắc bệnh thận, gan tại

trạm y tế xã Cán tỷ, Bệnh viện huyện Quản Bạ và Bệnh

Phụ lục 2 Phiếu điều tra tình hình sản xuất, chế biến, bảo quản, sử

dụng ngô và các sản phẩm ngô - Phần I Phiếu điều tra nông sản)

Phụ lục 3 Phần II Phiếu điều tra y tế

70

72

77

Tóm tắt đề tài nghiên cứu

Nấm mốc đã đợc sử dụng rất lâu trong các sản phẩm thực phẩm lên men, trong khi đó một số chủng vi nấm phát triển trong các hạt ngũ cốc đã sản sinh độc tố vi nấm Ochratoxin A là một trong số các độc tố vi nấm khá phổ biến Nhiều nghiên cúu đã chứng minh độc tố này nguy hiểm có thể gây viêm ,

thận, gây ung th thận, gan, gây quái thai, đột biến gen, tác động tiêu cực lên quá trình sinh hoá Với lý do trên, tôi tiến hành nghiên cứu đề tài “Khảo sát thực trạng ô nhiễm độc tố vi nấm Ochratoxin A trong ngô tại Hà Giang và đề xuất giải pháp giảm thiếu mức độ ô nhiễm” Với 4 mục tiêu cụ thể: Điều tra thói quen sản xuất, thu hoạch, bảo quản và sử dụng ngô, tìm nguyên nhân gây

ô nhiễm; Đánh giá mức độ ô nhiễm Ochratoxin A trong ngô; Điều tra số bệnh nhân gan, thận mãn bao gồm cả ung th; Đề xuất giải pháp can thiệp nhằm giảm thiểu ô nhiễm Ochratoxin A Đối tợng là: 160 hộ gia đình và 63 mẫu ngô Thời gian từ tháng 01-10/2008 Nghiên cứu theo phơng pháp cắt ngang

có phân tích

Kết quả nghiên cứu chỉ ra rằng: Mức độ ô nhiễm Ochratoxin A trên ngô

ở xã Cán Tỷ là rất nghiêm trọng (58,7%); Yếu tố nguy cơ gây ô nhiễm Ochratoxin A là nấm mốc; Nguyên nhân gây ô nhiễm Ochratoxin A là tập quán sản xuất lạc hậu (85%) để ngô khô dần ngoài nơng, phơng tiện bảo quản nghèo nàn; Để chứng minh ngô mốc tại Hà Giang gây bệnh cho số bệnh nhân đợc điều tra trên thì cần phải có thêm chứng cứ khoa học, trong nghiên cứu này chỉ dừng lại ở nhận xét là những vùng ăn ngô nhiều thì có số bệnh nhân ung th gan, thận cao Từ kết quả trên cho thấy, biện pháp chính để khắc phục tình trạng ô nhiễm Ochratoxin A trên ngô là: Thực hiện giáo dục truyền thông sâu rộng các biện pháp chủ động phòng tránh ô nhiễm nấm mốc độc phát triển và sinh độc tố vi nấm Ochratoxin A trong sản phẩm ngô

ABSTRACT Mold has been used for a long time in fermented food, in the meanwhile some fungi in cereals produce mycotoxin Ochratoxin A is one of popular mycotoxin Many studies shown that this mycotoxin was very toxic and it caused carcinogenic, gentoxicity, renal crystadenomas and adverse impact in biochemical process With above reasons, I had carried out “The survey on current situation of Ochratoxin A contamination in maize in Ha Giang province and proposed measures to minimize the contamination level”, with 4 objectives: Habit of production, harvesting, preserving and using of maize to find out the contamination causes; Assessment of contamination level of Ochratoxin A in maize; Investigation in patients with chronic liver and renal diseases including cancer; Proposal of intervention for minimizing Ochratoxin A contamination The subjects of study are: 160 household and 63 samples of maize Period of time: from Jan to Oct 2008 by using method of cross sectoral analysis.-

The results of study shown that: Level of Ochratoxin A contamination

is quite high in Can Ty commune (58.7%); the risk of contamination is mold; Reasons of contamination is backward practice (85%) of on site preservation -and poor equipment; for conclusion of causing diseases by mold in maize in

Ha Giang province, it is necessary to study further to get more scientific evidences Within this study, the only comment was made is that in the area that people eating more maize have more patients of liver and renal cancers From these above results, it is shown that the key measures to deal with the problem are: further education and communication on the active prevention of mold growth and producing Ochartoxin A in maize products

Mở đầu

Vệ sinh an toàn thực phẩm có tác động trực tiếp thờng xuyên đến sức khoẻ của mỗi ngời dân, ảnh hởng đến phát triển kinh tế, thơng mại, du lịch

và an sinh xã hội, về lâu dài còn ảnh hởng đến phát triển nòi giống dân tộc

Trong những năm qua, đợc Đảng, Quốc hội, chính phủ và toàn thể xã hội quan tâm, công tác bảo đảm vệ sinh an toàn thực phẩm đã có nhiều tiến

bộ, đặc biệt có sự chuyển biến tích cực về nhận thức, nâng cao trách nhiệm của lãnh đạo các cấp, các ngành, các tổ chức xã hội và ngời tiêu dùng, góp phần bảo vệ sức khoẻ nhân dân, phát triển kinh tế xã hội [5- ]

Ngộ độc thực phẩm là một hội chứng cấp tính, xảy ra đột ngột do ăn phải thức ăn có chất độc, biểu hiệu bằng những triệu chứng dạ dày – ruột (đau bụng nôn, ỉa chảy ) và những triệu chứng khác tuỳ theo đặc điểm của , …từng loại ngộ độc (tê liệt thần kinh, co giật, rối loạn hô hấp, tuần hoàn, vận

động…) Ngộ độc thực phẩm do độc tố vi nấm là một trong những nguyên nhân gây ngộ độc thực phẩm, ngộ độc này có thể là ngộ độc cấp tính, và có thể dẫn đên ngộ độc mãn tính làm ảnh hởng tới hệ thống miễn dịch, suy giảm chức năng các cơ quan quan trọng của cơ thể và dẫn đến ung th (gan, thận ), biến dị gen gây quái thai [11], [12]

Nấm mốc đã đợc sử dụng rất lâu trong các sản phẩm thực phẩm lên men, trong khi đó một số chủng vi nấm phát triển trong các hạt ngũ cốc đã sản sinh độc tố vi nấm Nấm mốc gây ô nhiễm ở khắp mọi nơi và độc tố thờng

đợc phát hiện trong các thực phẩm bị ô nhiễm do nấm mốc ký sinh trên ngô, lạc và các hạt ngũ cốc trong quá trình sản xuất, bảo quản trong kho, hạt ngô hoặc sản phẩm nông sản khác khi hàm lợng nớc trong chúng cao

Độc tố vi nấm là các chất độc đợc tạo bởi nấm mốc trên cánh đồng khi chúng đợc trồng trọt trong đất thích hợp với thời gian bảo quản Các chất này

có liên quan đến ung th gan ở ngời ở động vật, các tác hại ghi nhận là có hại đến gan, giảm khả năng sinh sản và tăng độ nhậy cảm với bệnh tật [11], [12] Ochratoxin A là một trong số các độc tố vi nấm khá phổ biến Ochratoxin A là một độc tố nguy hiểm có thể gây viêm thận, gây ung th thận, gan, gây quái thai, đột biến gen, tác động tiêu cực lên quá trình sinh hoá Ochratoxin A là sản phẩm chuyển hoá độc (toxic metabolites) đợc tách chiết

lần đầu năm 1965 từ chủng nấm mốc Aspergillus ochraceus Wish, A

sulphureus, A melleus từ năm 1970 và Penicilium viridicatum Westling từ năm 1969 [41]

Nớc ta nằm trong khu vực điều kiện khí hậu nhiệt đới, gió mùa, nóng

ẩm thờng xuyên có nhiệt độ cao và độ ẩm lớn, có thời gian ma kéo dài vào mùa hạ và bão lụt lại xảy ra thờng xuyên tại các vùng ven biển miền Trung,

đồng bằng Bắc Bộ, Nam Bộ nên độ ẩm trong các lơng thực, thực phẩm nh , gạo, ngô, đậu, cà phê thờng cao,… đã một mặt làm cho việc bảo quản các sản phẩm nông sản gặp rất nhiều khó khăn mặt khác tạo điều kiện thuận lợi cho nấm mốc độc phát triển nhanh Cha kể các loại sản phẩm trên thờng lại thu hoạch trong thời vụ dễ gặp ma dài ngày, đó là mối nguy cơ lớn cho vấn đề an toàn vệ sinh thực phẩm

Việt nam là nớc nông nghiệp, nên sản xuất nông nghiệp chiếm tỷ trọng khá lớn trong cơ cấu kinh tế của đất nớc, các sản phẩm nông nghiệp này, trong những năm qua, không những đã phục vụ cho nhu cầu tiêu dùng nội địa mà còn góp phần quan trọng cho việc xuất khẩu, giúp cho Việt nam thu đợc nhiều ngoại tệ mạnh để phục vụ cho sự nghiệp hiện đại hoá đ nớc ấ t

Một số nghiên cứu mức độ ô nhiễm do độc tố vi nấm chủ yếu là Aflatoxin, nhận thấy rằng ô nhiễm do độc tố vi nấm Aflatoxin gây ảnh hởng

đến sức khoẻ con ngời: Ung th gan, tổn thơng gan, dạ dày, giảm miễn dịch Nhng với độc tố vi nấm Ochratoxin A còn có rất ít nghiên cứu Năm

1996, Ts Nguyễn Thuỳ Châu, Viện Cơ điện nông nghiệp và Công nghệ sau thu hoạch đã khảo sát 8 mẫu ngô tại 3 tỉnh miền Bắc là Hà Bắc, Hoà Bình, Sơn

La có 7 mẫu bị nhiễm Ochratoxin A, trong đó có mẫu nhiễm đến 36 ppb, hàm lợng trung bình là 10 ppb [4], không phát hiện thấy Ochratoxin A trong 19 mẫu ngô tại 5 tỉnh Đồng Nai, An Giang, Lâm Đồng, Cửu Long, Sông Bé Từ tháng 1/2004 đến tháng 12/2005, Bộ Y tế (Cục An toàn vệ sinh thực phẩm) đã tiến hành nghiên cứu đề tài Khảo sát điều tra thực trạng ô nhiễm độc tố vi nấm Ochratoxin A trong ngô và các sản phẩm chế biến từ ngô tại Hà Giang và Cao Bằng, góp phần xác định mức độ ô nhiễm độc tố vi nấm Ochratoxin A và đề xuất ngỡng giới hạn ô nhiễm độc tố vi nấm Ochratoxin A trong thực phẩm

Với lý do trên, tôi tiến hành nghiên cứu đề tài “Khảo sát thực trạng ô nhiễm độc tố vi nấm Ochratoxin A trong ngô tại Hà Giang và đề xuất giải pháp giảm thiếu mức độ ô nhiễm”

Nội dung nghiên cứu bao gồm:

1 Khảo sát, điều tra thói quen sản xuất, thu hoạch, bảo quản và sử dụng ngô của ngời nông dân thuộc xã Cán Tỷ huyện Quản Bạ tỉnh Hà Giang

2 Đánh giá mức độ ô nhiễm Ochratoxin A trong ngô

3 Điều tra số bệnh nhân gan, thận mãn bao gồm cả ung th trong 5 năm gần đây (2000 2005) tại xã điều tra của- tỉnh Hà Giang Tìm mối liên quan giữa bệnh và ăn ngô mốc hoặc bệnh và vùng ăn ngô

4 Đề xuất giải pháp can thiệp nhằm giảm thiểu ô nhiễm Ochratoxin A trong ngô

Chơng I Tổng quan tài liệu

1.1 Tầm quan trọng của vệ sinh an toàn thực phẩm

1.1.1 Khái niệm về thực phẩm, vệ sinh an toàn thực phẩm và các bệnh truyền qua thực phẩm

Thực phẩm là những sản phẩm mà con ng ăời n, uống ở dạng tơi, sống hoặc đã qua chế biến, bảo quản [6], [22] Các nhóm chất dinh d ỡng chính mà thực phẩm cung cấp bao gồm: n ngă lợng, chất đạm, chất béo, các vitamin, khoáng chất, vi chất, ớc và chất xn ơ Có vô số các loại thực phẩm khác nhau, mỗi thực phẩm có thể cung cấp ồng thời nhiều chất dinh d ỡng cùng một đ lúc Tuy nhiên, mỗi thực phẩm th ờng có xu h ớng cung cấp một nhóm  chất dinh d ỡng chủ ạo trong số các nhóm chất kể trên, Hofvander chia thực  đphẩm thành 4 nhóm c bản: nhóm cung cấp n ng l ợng (tinh bột), nhóm cung ơ ă cấp chất đạm, nhóm cung cấp chất béo, nhóm cung cấp chất khoáng và vitamin [37]

Thực phẩm đợc ăn vào d i nhiều dạng, dạng tơi sống tự nhiên nhớ  trái cây, rau sống hoặc d ới dạng nấu chín nh  thịt, cá và rất nhiều thực phẩm sau các quá trình gia công, chế biến nh thịt hộp, cá hộp, bánh kẹo,  mứt Trong suốt quá trình từ sản xuất, chế biến, phân phối, vận chuyển, bảo quản và sử dụng, thực phẩm ều có thể có nguy cđ ơ bị ô nhiễm bởi các tác nhân sinh học, hoá học và vật lý nếu thực hành sản xuất không tuân thủ các quy ịnh vệ sinh an toàn Khi ó, thực phẩm có thể trở nên nguy hại cho sức đ đkhoẻ con ngời và là nguyên nhân dẫn ến ngộ ộc thực phẩm.đ đ

Vệ sinh an toàn thực phẩm là các điều kiện và biện pháp cần thiết để bảo đảm thực phẩm không gây hại cho sức khoẻ, tính mạng của con ngời Theo FAO và WHO ịnh nghĩa n m 1984 “Vệ sinh an toàn thực phẩm là việc đ ă

bảo đảm thực phẩm không gây hại cho sức khoẻ, tính mạng ng ời sử dụng, bảo đảm thực phảm không bị hỏng, không chứa các tác nhân vật lý, hoá học, sinh học hoặc tạp chất quá giới hạn cho phép, không phải là sản phẩm của

động vật, thực vật bị bệnh có thể gây hại cho sức khoẻ ng ời sử dụng” [50 ]

Thực phẩm bảo ảm chất lợng vệ sinh an toàn không những làm giảm đ

tỷ lệ bệnh tật, tăng c ờng khả n ăng lao động mà còn góp phần phát triển kinh

tế, văn hoá, xã hội và thể hiện nếp sống v n minh của một dân tộc Hội nghị ăChâu á lần thứ 3 về an toàn thực phẩm và dinh d ỡng tổ chức tại Bắc Kinh tháng 10/2002 đã dành nhiều thời gian thảo luận đến biện pháp đẩy mạnh công tác VSATTP trong những n m cuối thể kỷ 20 ể chuẩn bị b ớc vào thiên ă đ niên kỷ mới [45]

1.1.2 Vệ sinh an toàn thực phẩm và phát triển giống nòi

VSATTP không chỉ ảnh hởng trực tiếp đến sức khoẻ cộng đồng mà còn tá động đến quá trình điều hoà gen, ảnh hởng đến giống nòi Thực tế, c Nhật Bản đã rất thành công trong việc ”cải tạo giống nòi” thông qua chơng trình kiểm soát ATTP Trong 20 năm (từ 1957 1977) nhờ áp dụng chơng -trình này mà chiều cao của ngời Nhật trởng thành đã đợc gia tăng 4,3cm ở nam và 2,7cm ở nữ (trong khi quy luật chung chỉ là 2cm) [1]

1.1.3 Vệ sinh an toàn thực phẩm với phát triển kinh tế và xã hội

VSATTP là vấn đề có tầm quan trọng ặc biệt Sử dụng thực phẩm an đtoàn sẽ cải thiện đợc sức khỏe con ng ời và là quyền c ơ bản của con ng ời Bên cạnh ó, ATTP còn cung cấp một nền tảng cho n ng suất, hiệu quả phát đ ătriển kinh tế, thơng mại, du lịch và an ninh xã hội Bảo đảm VSATTP sẽ tăng

cờng nguồn lực, thúc ẩy phát triển và là nền tảng cho xoá ói giảm nghèo đ đTuy nhiên, thế giới lại ang ứng tr ớc nguy c ô nhiễm thực phẩm và ngộ đ đ  ơ

độc thực phẩm nghiêm trọng Các bệnh do thực phẩm gây ra không chỉ gây

ảnh h ởng ến sức khoẻ và cuộc sống của con ng ời mà còn gây thiệt hại về  đ kinh tế ối với cá nhân ng ời mắc bệnh, gia ình họ với cộng ồng và Chính đ  đ đphủ Các bệnh này ã tạo ra một gánh nặng lớn cho hệ thống ch m sóc sức đ ăkhoẻ và giảm đáng kể năng suất lao động [1]

Theo báo cáo của WHO năm 2006 dịch cúm gia cầm H5N1 đã xuất hiện ở 44 nớc ở Châu Âu, Châu á, Châu Phi và Trung ông gây tổn thất Đnghiêm trọng về kinh tế 40 nớc đã từ chối không nhập khẩu thịt gà từ Pháp gây thiệt hại 48 triệu USD/tháng Tại Đức, thiệt hại do cúm gia cầm cũng lên tới 140 triệu Euro Tại ý đã phải chi 100 triệu Euro cho phòng chống cúm gia cầm [1] Tại Mỹ ã phải chi 3,8 tỷ USD ể chống bệnh này Theo báo cáo của đ đFDA Mỹ n m 2006, trung bình cứ 1.000 dân có 175 ng ời bị ă  NĐTP mỗi năm

và chi phí cho 1 ca N TP mất 1.531 USD Đ ở úc, chi phí cho một ca bị NĐTP mất 1.679 đô la úc Còn ở Anh mất 789 bảng Anh [1], [49]

ở nớc ta, mặc dù cha có thống kê đầy đủ và rõ ràng nh ng những chi phí để cấp cứu các bệnh nhân bị NĐTP tại các bệnh viện là rất lớn Vụ NĐTP trên 200 ng ời mắc ở Thái Bình n m 1998 do n nem chạo nhiễm Salmonella  ă ăenteritidis là một ví dụ điển hình, chi phí cho một ca bị NĐTP lúc đó là không dới 200.000 đồng [ ].21

1.2 Ô nhiễm thực phẩm, ngộ độc thực phẩm

1.2.1 Ô nhiễm thực phẩm và nguyên nhân

Ô nhiễm thực phẩm là tình trạng bất kỳ một chất nào không đợc chú ý cho vào thực phẩm mà có mặt trong thực phẩm do kết quả của việc sản xuất, chế biến, xử lý, đóng gói, vận chuyển, lu giữ thực phẩm hoặc do ảnh hởng của môi trờng tới thực phẩm [11], [12]

Các chất ô nhiễm thực phẩm có thể là các vi sinh vật (vi khuẩn, virus,

ký sinh trùng, vi nấm), các hoá chất (các hoá chất bảo vệ thực vật, các kim

loại nặng, phụ gia, các d lợng kháng sinh, hormone ) và các tác nhân v… ật

lý (các mảnh thủy tinh, mảnh kim loại, chất phóng xạ…) [11], [12]

1.2.2 Ngộ độc thực phẩm và nguyên nhân gây ngộ độc thực phẩm

Ngộ độc thực phẩm là một hội chứng cấp tính, xảy ra đột ngột do ăn phải thức ăn có chất độc, biểu hiệu bằng những triệu chứng dạ dày – ruột (nôn, ỉa chảy ) và những triệu chứng khác tuỳ theo đặc điểm của từng loại …ngộ độc (tê liệt thần kinh, co giật, rối loạn hô hấp, tuần hoàn, vận động ) …[11], [12]

Các nguyên nhân gây NĐTP: Ngộ độc thực phẩm do vi sinh vật (vi khuẩn, virus, ký sinh trùng, vi nấm), do hoá chất (các hoá chất bảo vệ thực vật, các kim loại nặng, phụ gia, các d lợng kháng sinh, hormone ), do bản thân …thức ăn chứa các chất độc tự nhiên do thức ăn bị biến chất [11], [12]

1.3 Tác hại ô nhiễm độc tố vi nấm nói chung và ô nhiễm Ochratoxin

1.3.1 ảnh hởng của ô nhiễm thực phẩm nói chung

Ô nhiễm thực phẩm nói chung ảnh hởng tới sức khoẻ Sử dụng thực phẩm ô nhiễm có thể dẫn đến hoặc ngộ độc thực phẩm cấp tính mà biểu hiện thông thờng là nôn, đau bụng, ỉa chẩy và các triêu chứng khác tuỳ theo tác nhân gây ngộ độc (ví dụ ngộ độc do hoá chất BVTV, do nấm độc có thêm các triệu chứng thần kinh ), hoặc khi ăn phải các tác nhân gây độc ở mức vừa phải cha đủ liều gây cấp tính thì sẽ bị ngộ độc thực phẩm mãn tính, các chất độc, hoăc các chất chuyển hoá trung gian của tác nhân gây độc tích luỹ vào các phủ tạng nh gan, thận làm rối loạn dần dần các chức năng sống của cơ thể dẫn đến các bệnh mãn tính, suy gan, suy thận, ung th Hậu quả của ngô độc thực phẩm sẽ không những ảnh hởng tới phát triển thể lực, thể chất, giống nòi mà ảnh hởng cả đến sự phát triển kinh tế – xã hội nh hàng hoá ô nhiễm

bị trả lại , ảnh hởng phát triển thơng mại, ảnh hởng tới du lịch, không tiêu thụ đợc sản phẩm thực phẩm [11], [12].

1.3.2 Tác hại của độc tố vi nấm

Ngộ độc thực phẩm do độc tố vi nấm là một trong những nguyên nhân gây ngộ độc thực phẩm, có thể gây nên ngộ độc cấp tích, ngăn cản hệ thống miễn dịch, gây suy giảm các chức năng của cơ thể và gây nên bệnh ung th

1.4.1 Cấu tạo: Ochratoxin A, B, C, D là sản phẩm chuyển hoá độc

(toxic metabolites) đợc tách chiết lần đầu năm 1965 từ chủng nấm mốc

Aspergillus ochraceus Wish A sulphureus, A melleus , từ năm 1970 và

Penicilium viridicatum Westling từ năm 1969 [41] Nấm mốc gây ô nhiễm ở khắp mọi nơi và độc tố thờng đợc phát hiện trong các thực phẩm bị ô nhiễm

do nấm mốc ký sinh trên ngô, lạc và các hạt ngũ cốc đợc bảo quản trong kho, hạt ngô hoặc nguồn thực vật bị thối rữa

Ochratoxin A là độc tố phổ biến có công thức C20H18ClNO6 [(R){(5-chloro-3,4- dihydro- 8- hydroxy- - 3 methyl-1- oxo-1H-2- benzopyran- - 7yl) carbonyl}- -L phenylalamine] (hình 1.1, 1.2) Ochratoxin A có dạng kết tinh tinh thể từ xylene nhiệt độ chảy (mp) 169oC Phát mầu (exhibits) huỳnh quang xanh lá cây (green fluorescence): [α]D - 118o (C=1,1 trong CHCl3); (bớc sóng hấp thu cực đại) λmax (dung môi ethanol): 215, 333 nm; (khả năng hấp thu của phân tử tại λmax) ε 34000; 2400 (Van der Merwe)

-N-Độc tố Ochratoxin A còn gặp ở dạng kết tinh có nhiệt độ chảy (mp) 90o

từ benzen (một mole benzen kết tinh, one mole of benzen of crystallization) λmax: 213, 332 nm (ε 36800; 6400) (Steyn Holzapfel) LD50 trên chuột đờng uống 20 22 mg/ kg (Purchase Theron).-

Hình 1.1: Công thức Ochratoxin A and Ochratoxicoses heo Leonov AN (t

Methyl ester của OA R1: CH3 R2: Cl R3: H Methyl-ethyl ester của OB R1: CH3 hoặc C2H5 R2: H R3: H

Hình 1.2: Công thức Ochratoxin A (theo bách khoa toàn th thuốc các chất sinh học, hoá học Merck Index Hoa Kỳ xuất bản lần thứ 12 năm 1996)[39]

Ochratoxin A là độc tố vi nấm đợc cấu thành từ dẫn xuất có liên kết

rất bền của isocoumarin và L- -β phenylalamine (hình 1.1) đợc chiết xuất dới

dạng acid và methyl, ethyl este từ các nấm độc thuộc chủng Aspergillus

ochraceus, A alliaceus, A ostiamus, A mellus và Penicillium viriditicum, P cyclopium [41]

Ochratoxin A:

Ochratoxin B: C20H19NO6 [(R)-N-{(3,4 dihydro- - 8- hydroxy 3- - methyl-1- oxo-1H-2- benzopyran- - 7 yl) carbonyl}- -L phenylalamine] Là dẫn xuất không có chloro của Ochratoxin A nên ít độc hơn Kết tinh từ methanol

có nhiệt độ chảy (mp) 221oC (Van der Merwe), theo Nesheim là 208 09-2 o Phát huỳnh quang mầu xanh da trời (blue fluorescence): [α]D - 35o (C=0,15); λmax (ethanol): 218, 318 nm; 37200; 6900.ε

O

O

OH

N H COOH O

CH 3

Cl

Ochratoxin C: C22H22ClNO6 [(R)-N-{(5 chloro 3,4- - - dihydro- 8- hydroxy- 3- methyl-1- oxo-1H-2- benzopyran- - 7 yl) carbonyl}- -Lphenylalamine ethyl ester] Thể vô định hình ethyl ester của Ochratoxin A có

độc tính tơng đơng, max (ethanol) 333 nm, 6500.λ ε

1.4.2 Phơng pháp xác định

Trung tâm nghiên cứu ung th quốc tế đã chọn lọc 2 phơng pháp để phân tích xác định Ochratoxin A [32]:

TLC phân tích bán định lợng với giới hạn của phơng pháp là 10mg/g

để xác định Ochratoxin A trong đại mạch và hạt cà phê xanh (green coffee), lúa mỳ, yến mạch, ngô, quả nho để chế biến rợu vang, đậu hạt, gan, thận và mô cơ bắp

HPLC phân tích định lợng, xác định đợc chính xác hàm lợng tồn d Ochratoxin A trong nông sản ở lợng rất thấp, hiện nay là phơng pháp phổ biến đợc dùng ở các Labor phân tích

1.4.3 Điều kiện phát triển

Điều kiện lý tởng phát triển nấm mốc sản sinh ra độc tố vi nấm Ochratoxin A ở nhiệt độ 30oC và hoạt độ ớc a n w=0,956 [39 ]

Năm 1985, Tong CH và cộng sự đã thử nghiệm và nhận thấy tại pH 4,5

khả năng phát triển và sản sinh Ochratoxin A từ chủng A sulphureus và P

viridicatum bị ức chế hoàn toàn (97 99%) bởi Potassium sorbate, 0,067% methyl paraben và 0,2% sodium propionate [46]

-1.4.4 Tính bền vững

Ochratoxin A chịu đợc nhiệt, nhiệt độ sôi bình thờng không huỷ

đợc Ochratoxin A [3 ].9

1.5 Tình hình nghiên cứu Ochratoxin trên thế giới

1.5.1 Mức độ ô nhiễm sản phẩm nông sản và môi trờng

Thực phẩm bị nhiễm Ochratoxin đợc phát hiện nhiều ở ngô, lúa mỳ, lúa mạch, gạo, đậu, cà phê, bia, nho khô, nớc nho, rợu vang, ca cao và thuốc lá khi bảo quản ở độ ẩm cao và nhiệt độ thuận lợi

Tại khu vực Balkan nơi bị dịch viêm thận địa phơng do độc tố vi nấm Ochratoxin A (Balkan endemic mephrophathy), Pavlovic M và cs (1979) đã nhận thấy trong 768 mẫu bánh và ngũ cốc đợc lấy mẫu tại Nam T bị nhiễm Ochratoxin A cao hơn các nớc khác và mức độ ô nhiễm trung bình là 8,7% Thống kê hàng năm mức ô nhiễm Ochratoxin A trong ngũ cốc là 43% [42]

Ngoài ra trong thức ăn gia súc Skrinjar M và cộng sự khảo sát năm

1992 trong thân cây ngô, củ cải đờng và cỏ hô alfafa có d lợng kOchratoxin A là 400 ppb Nếu quá trình bảo quản, chế biến, hạt cà phê đợc

xử lý rửa sạch và phơi sấy khô kịp thời, có thể giảm ô nhiễm Ochratoxin A tới 90% [44]

Năm 2003 Mortensen GK và cộng sự đã xác định trong đất tại Đan Mạch có 0,2 30 mcg/kg trọng lợng khô (dry weight) Ochratoxin A, và 1- -100 mcg/kg trọng lợng khô Zearalenone (ZON) [40]

Tại Kenya bột ngô đợc xem là thành phần lơng thực chính với lợng

sử dụng trung bình 400g/ ngời/ ngày Ngoài ra cũng là nguồn thức ăn chính của gia cầm và gia súc Mariuki GK và cộng sự đã chọn 168 mẫu bột ngô của

2 hãng Ugali và Jogoo để xác định sự ô nhiễm nấm mốc và độc tố vi nấm Kết quả khảo sát nhận thấy có 2 chủng Aspergillus flavus, A sulphureus, 1 chủng

Fusarium monoliforme và 2 chủng Penicillium stoloniferum và P cyclopium

Hầu nh tất cả các mẫu đều bị nhiễm Aflatoxin B1, B2 với d lợng 0,4 20 mcg/kg, Ochratoxin A (50-1000 mcg/ kg) và Zearalenone 2500 5000 mcg/- kg [38]

-Fazekas và cộng sự năm 2001 theo dõi thực trạng nhiễm Ochratoxin A tại Hungary [28] trong hạt ngũ cốc, cà phê và thực phẩm cho ngời (36 mẫu bánh mỳ, 16 mẫu bột mỳ và 6 mẫu ngô); thức ăn gia súc (30 mẫu bột mỳ, 32 mẫu ngô và 20 mẫu đại mạch); cà phê thơng phẩm (30 mẫu), xác định bằng phơng pháp IAC HPLC (Immuno affinity column high performance liquid - - chromatography), giới hạn xác định của phơng pháp 0,1 ng/g, các tác giả đã nhận thấy mức ô nhiễm Ochratoxin A trong các thực phẩm nh sau:

Bảng 1.2 Mức độ ô nhiễm Ochratoxin A trong các thực phẩm [28] Thực phẩm Tỷ lệ mẫu ô nhiễm (%) D lợng ô nhiễm trung bình

% bị ô nhiễm

Mức ô nhiễm(ppb)

Tài liệu tham khảo (xuất xứ) Trong thực phẩm

(Shotwell và

cs 1971)

7 §¹i m¹ch (Barley) 182 12.6 10- 29 USA

(Osborne 1980)

-Penicillium sản sinh Trong sữa mẹ Skang MA và cộng sự đã kiểm tra 38/115 mẫu (33%) và nhận thấy d lợng là 10-130 mg/lit [28], [41]

1.5.3 Độc tính

LD 50 của Ochratoxin A trên chuột theo đờng uống từ 20 22 mg/- kg gây độc với cả thận và gan [31] Động vật uống Ochratoxin A bị độc carcinom tiểu quản thận (tubular cell carnocimas) trên chuột cái, chim và động vật có vú khác, đã gây thành dịch địa phơng với bệnh thận của lợn tại Đan Mạch, Thuỵ

Điển và một số nớc khác thuộc cộng đồng châu Âu [33]

1.5.4 Ochratoxin ở bệnh thận

Tại Tuynidi đã sử dụng khá nhiều hạt ngũ cốc trong hỗn hợp thức ăn cho cá bị nhiễm Ochratoxin A, trong các bệnh nhân bị viêm thận đã phát hiện thấy xuất hiện nồng độ cao Ochratoxin A trong các mẫu máu và bệnh viêm thận đã có dấu hiệu xuất hiện thành dịch địa phơng và có liên quan đến khí hậu thời tiết giống nh tại vùng Balkan [33]

Theo dõi kiểm tra các lò mổ tại Đan Mạch và Thuỵ Điển đã nhận thấy

1.5.6 Ochratoxin gây quái thai dị dạng -

Tác động gây quái thai đã đợc kiểm tra trên chuột với liều 40 mg/kg Ochratoxin trong 45 tuần Ngời ta đã thử nghiệm gây quái thai (teratogen) và ung th trên động vật [ 4]3

1.5.7 Khả năng gây ung th

Ochratoxin A có thể gây ung th (anticipated) Seventh Annual Report

of Carcinogens (PB 95 109781, 1994) Taurine-

Trong chơng trình nghiên cứu độc học tại Hoa Kỳ năm 1988, Viện Y

tế sức khoẻ Hoa Kỳ đã thử nghiệm gây ung th trên chuột chủng F344/N độc

tố vi nấm Ochratoxin A sản sinh từ A ochraceus và một số chủng nấm mốc khác Trong các kết quả thử nghiệm đã xác định độc tố Ochratoxin A đã gây canxinôm tế bào thận trên chuột cái [14], [16]

1.5.8 Tác động sinh hoá

Năm 1994 Harvey RB và cs đã thử nghiệm trên lợn sữa có trọng lợng

18 kg/ con sử dụng độc tố Ochratoxin A và T 2 Nhóm 1 đối chứng không bổ sung Ochratoxin A và T 2 Nhóm thử nghiệm đợc chia làm 2 lô sử dụng -chung hỗn hợp 2,5 mg Ochratoxin A + 8 mg T 2 trên 1 kg thức ăn gia súc -trong 30 ngày (lô 2a) và lô 2b sử dụng riêng biệt 2,5 mg Ochratoxin A/ kg thức ăn (2b1) và 80 mg T-2 (2b2)

-Sau 30 ngày thử nghiệm, kiểm tra các chỉ tiêu nhân trắc, sinh hoá và bệnh lý nhận thấy: trọng lợng cơ thể của nhóm thử nghiệm có sử dụng độc tố Ochratoxin A và T-2 đều giảm so với nhóm đối chứng Trọng lợng gan lợn của nhóm sử dụng độc tố Ochratoxin A và độc tố hỗn hợp có giảm nhng trọng lợng thận của nhóm sử dụng Ochratoxin A lại tăng Ochratoxin A đã làm giảm cholesterol huyết thanh, phốt pho vô cơ, giảm giá trị phosphatase kiềm, giảm khối lợng tế bào (mean cell volume), nồng độ hemoglobin và đại thực bào (macrophage phagocytosis) và tăng giá trị créatinin và protein tổng

số Nhóm sử dụng riêng T 2 đã giảm hemoglobin và giá trị huyết thanh phosphatase kiềm Sử dụng kết hợp 2 độc tố Ochratoxin A và T 2 đã giảm -cholesterol huyết thanh, gamma glutamyltransferase, alkaline phosphatase,

-khối lợng tế bào, hepatocrit và hemoglobin, sinh u nguyên bào lympho và đại thực bào và tăng nồng độ créatinin huyết thanh (lymphoblastogenensis)

Từ các số liệu trên, tác giả đã kết luận: Độc tố vi nấm Ochratoxin A và T-2 đã gây ô nhiễm đơn độc hoặc kết hợp trên lợn sữa đều tác động đến sự thay đổi triệu chứng lâm sàng, nhân trắc học, sinh hoá, huyết học và miễn dịch [30], [31] Cùng thời gian đó Harvey RB và cs đã kiểm tra mức độ độc hại của Ochratoxin A tới khả năng miễn dịch trên lợn sữa có trọng lợng trên

20 kg với lợng ăn vào trong thức ăn gia súc là 2,5 mg Ochratoxin A/ kg thức

ăn gia súc Theo dõi trong 35 ngày, các tác giả trên đã nhận thấy lợn sữa nhiễm độc tố Ochratoxin A đã giảm khả năng cảm ứng a base da (cutaneous basophil hypersensitivity) tới sự đáp ứng PHA (ngng kết tố hồng cầu thực vật phytohemagglutinin) giảm và làm chậm sự tăng mẫn cảm tới tuberculin, giảm kích thích tới sản sinh nguyên bào lympho, giảm sự hình thành interleukin-2 khi tế bào lympho đợc kích thích bởi concanavalin (hoạt chất đợc tách từ

đậu Jack bean- Canavalia ensiformis Papilionate đợc sử dụng làm tác nhân gây động lực trên bề mặt và phân chia tế bào) gây giảm số lợng cùng hoạt tính thực bào (phagocytic activity) của đại thực bào (macrophage) Các số liệu thu đợc đã chỉ rõ Ochratoxin A có thể ức chế tế bào gián tiếp đáp ứng miễn dịch (cell mediate- d immune response) với lợn sữa [30], [31]

1.5.9 Tác động làm giảm độc tính

Borjecki A và cộng sự năm 2001 đã thử nghiệm tác động của vitamin E trên chuột bị nhiễm Ochratoxin A và nhận thấy nếu sử dụng vitamin E cùng với liều gây nhiễm Ochratoxin A (nhóm III) so với nhóm II (không sử dụng vitamin E) giá trị hồng cầu, huyết cầu tố hemoglobin và thế tích huyết cầu (hematocrit) không bị giảm và gần tơng tự nh nhóm đối chứng (nhóm I) [26]

1.5.10 Quy định mức d lợng

Quy định với thực phẩm: Walkev B và cộng sự năm 2002 đã thông báo giới hạn của JECFA lợng ăn vào 100mcg/kg bw perweek (Trọng lợng cơ thể/tuần) ; 1,5-5,7 m g/kg trọng lợng cơ thể/ngày theo quy định của Canada c

và 5m g/kg trọng lợng cơ thể/ngày theo quy định của cộng đồng EEC [47c ]

Quy định với thức ăn chăn nuôi: Tại Liên Xô cũ năm 1980 đã có quy

định trong thức ăn gia súc, gia cầm đối với các loại tuổi không đợc vợt quá

50 ppb Ochratoxin A Với các hạt ngũ cốc nh ngô, lúa mỳ, mạch dùng làm thức ăn gia súc, lợng Ochratoxin A không đợc vợt quá 3 4 m- cg/ kg (ppb) [36]

1.5.11 Nhận xét chung

Ochratoxin A có độc tính rất cao có thể gây nhiễm độc thận, quái thai, nhiễm độc gen sinh ung th , độc với thận và nhiều biến đổi sinh hoá khác

1.6 Tình hình nghiên cứu Ochratoxin A ở Việt Nam

Nớc ta nằm trong khu vực nhiệt đới có khí hậu và độ ẩm cao, có thời gian ma kéo dài vào mùa hạ và bão lụt lại xảy ra thờng xuyên tại các vùng ven biển miền Trung, đồng bằng Bắc Bộ sông Hồng và Nam Bộ tạo điều kiện thuận lợi cho nấm mốc độc phát triển nhanh và gây ô nhiễm độc tố vi nấm tới lơng thực, thực phẩm nh gạo, ngô, đậu và cà phê đều là các mặt hàng có khả năng xuất khẩu truyền thống và tiêu dùng nội địa cao lại thu hoạch trong thời

vụ dễ gặp ma dài ngày

Hà Giang là một tỉnh miền núi cao nằm ở cực bắc tổ quốc, phía Bắc giáp các tỉnh Vân Nam và Quảng Tây – Trung Quốc, phía Nam giáp tỉnh Tuyên Quang, phía Đông giáp tỉnh Cao Bằng, phía Tây giáp tỉnh Yên Bái và Lào Cai Diện tích tự nhiên là 7.884,37 km2 Hà Giang mang đặc điểm khí hậu nhiệt đới gió mùa, chịu ảnh hởng của khí hậu lục đại Bắc á Trung Hoa, có

hai mùa rõ rệt, mùa hè nóng ẩm, ma nhiều và mùa đông lạnh, khô hạn Hà Giang có 778.473 ha diện tích đất tự nhiên, đất nông nghiệp có 134.184 ha chiếm 17% diện tích đất tự nhiên, đất lâm nghiệp có 334.100 ha, chiếm 42,4%, đất cha sử dụng có 310.064 ha, chiếm 39,3%, còn lại là đất chuyên dùng và đất ở Theo kết quả điều tra thổ nhỡng, toàn tỉnh có 9 nhóm đất chính, trong đó chủ yếu là nhóm đất xám rất thích hợp để trồng các loại cây công nghiệp, cây dợc liệu và cây ăn quả

Nớc ta là nớc nông nghiệp, có khí hậu nhiệt đới nóng ẩm, việc bảo quản lơng thực thực phẩm là một trong các vần đề lớn để tránh h hỏng lơng thực thực phẩm, nhất là gần đây việc tăng nhanh sản lợng ngô, lạc và các sản phẩm chế biến nhằm thỏa mãn nhu cầu tiêu dùng cho nội địa và xuất khẩu, đã đặt yêu cầu cho các ngành nông nghiệp, y tế phải quan tâm đến vấn

đề đảm bảo chất lợng an toàn cho LTTP và các sản phẩm chế biến khỏi ô nhiễm trớc hết đối với độc tố vi nấm là quan trọng và cần thiết để bảo vệ sức khoẻ ngời tiêu dùng

Bộ Y tế đã xây dựng giới hạn d lợng Aflatoxin trong thực phẩm và sữa theo Quyết định 867/QĐ BYT là 35 ppb [2], trong đó có Ochratoxin A là-

điều cha hợp lý vì gần đây theo khuyến cáo của tổ chức FAO/WHO nhiều nớc đã giới hạn với Ochratoxin A là từ 2 10 ppb do đã phát hiện Ochratoxin -

A gây ung th thận và gan phổ biến trên động vật và ngời tại các nớc vùng Balkan và một số nớc tại cộng đồng châu Âu

Năm 1996, Ts Nguyễn Thuỳ Châu, Viện Cơ điện nông nghiệp và Công nghệ sau thu hoạch đã khảo sát 8 mẫu ngô tại 3 tỉnh miền Bắc là Hà Bắc, Hoà Bình, Sơn La có 7 mẫu bị nhiễm Ochratoxin A, trong đó có mẫu nhiễm đến 36 ppb, hàm lợng trung bình là 10 ppb, không phát hiện thấy Ochratoxin A trong 19 mẫu ngô tại 5 tỉnh Đồng Nai, An Giang, Lâm Đồng, Cửu Long, Sông Bé.[4]

Năm 2000, Lâm Thanh Hiền, Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh, đã khảo sát 56 mẫu cà phê nhân tại 4 tỉnh Đắclắc (23 mẫu), Gia Lai (14 mẫu), Lâm Đồng (12 mẫu), Đồng Nai (7 mẫu), kết quả cho thấy 50/56 mẫu bị nhiễm

độc tố Ochratoxin A với hàm lợng trung bình rất thấp 0,38ppb, và biến thiên

từ 0,04 – 7,74ppb [15]

Năm 2006, Ths Nguyễn Minh Trí, Khoa chế biến Trờng Đại học Thuỷ sản Nha Trang, đã khảo sát 64 mẫu gạo tại 4 chợ tại Nha Trang: Chợ Đầm, Chợ Xóm mới, Chợ Vĩnh Hải, chợ Phớc Thá , kết quả cho thấy 22/64 mẫu inhiễm độc tố Ochratoxin A với hàm lợng trung bình là 0,63ppb [20]

Tóm lại các nghiên cứu về Ochratoxin A còn rất ít nghiên cứu Một số nghiên cứu đều chỉ ra rằng việc ô nhiễm độc tố Ochratoxin A xảy ra nhiều tỉnh thành trên toàn quốc đối với nhiều sản phẩm (ngô, cà phê, gạo) với các mức ô nhiễm khác nhau Đặc biệt đối với một số vùng miền cao (Hà Giang, Sơn La, Lai Châu, Cao Bằng) là các tỉnh trồng nhiều ngô nhất, ngời nông dân còn nghèo, dân trí thấp, nguồn thức ăn chủ yếu là ngô, thời tiết thuận lợi cho nấm mốc phát triển nhanh và gây ô nhiễm độc tố vi nấm

Chơng 2 Phơng pháp nghiên cứu 2.1 Đối tợng nghiên cứu

- Ngời nông dân (thói quen sản xuất, thu hoạch, bảo quản và sử dụng ngô)

- Mẫu ngô sau khi thu hoạch và bảo quản dùng làm thức ăn cho ngời

và gia súc (phân tích mức ô nhiễm OchratoxinA) trong 1 vụ:

+ Ngô thờng: Hạt ngô thờng có màu vàng, trắng, đỏ, tím Màu vàng

là do nội nhũ có chứa hợp chất carotenoid, xanthophyl và zeaxanlin, ngô có hạt màu đỏ hay hồng là có chứa chất màu antoxian [18] Mỗi cây có từ 1-3 bắp, mỗi bắp cho từ 300 1000 hạt Thành phần hoá học của các loại ngô đợc -thể hiện ở bảng 2.1 [18]

Bảng 2.1 Thành phần hoá học của các loại ngô(% chất khô) [18] Loại ngô Tinh bột Protein Chất béo Chất tro

2.2 Địa điểm:

Nơi điều tra:

- Tại xã Cán Tỷ huyện Quản Bạ tỉnh Hà Giang

Nơi phối hợp điều tra:

- Tại Cục An toàn vệ sinh thực phẩm,

Hà Giang làm địa điểm nghiên cứu Tại Hà Giang, dựa vào danh sách các huyện, bốc thăm ngẫu nhiện chọn huyện Quảng Bạ Dựa danh sách các xã của Quảng Bạ, bố thăm ngẫu nhiên chọn xã Cán Tỷ.c

- Chọn hộ gia đình điều tra phỏng vấn: dựa vào danh sách các hộ do Uỷ ban xã cung cấp, và dựa vào bảng số ngẫu nhiên, chọn đủ số hộ cần nghiên cứu [17] [19]

Trong đó: n: số hộ gia đình cần điều tra

Z (1-α/2) = 1,96 (hệ số tin cậy ở mức xác xuất 0,05)

p: tỷ lệ ớc đoán hộ gia đình có kiến thức VSATTP = 0,5

sử dụng ngô Cán bộ đi phỏng vấn là cán bộ y tế cấp xã, cấp huyện, cấp tỉnh, trớc khi đi phỏng vấn đợc tập huấn cẩn thận về cách thu thập thông tin trong phiếu điều tra

- Điều tra hồi cứu kết hợp điều tra cắt ngang số lợng ngời bị bệnh ung th và bệnh viêm thận mãn tại xã điều tra của huyện Quản Bạ Nguồn số liệu thu thập từ Trạm y tế xã, Trung tâm Y tế huyện, Bệnh viện tỉnh Hà Giang Tìm mối liên quan giữa số lợng bệnh nhân của các vùng có mức tiêu thụ ngô khác nhau, (phụ lục 3) Thống kê Y tế thực hiện ở tất cả các tuyến của địa phơng, vì vậy để tránh trùng lặp nhóm nghiên cứu đã loại các hồ sơ của các bệnh nhân theo nguyên tắc chỉ tính một lần duy nhất ở tuyến cao nhất, nếu các

tuyến dới cũng có hồ sơ của bệnh nhân đó thì loại khỏi danh sách thống kê

2.4.2 2 Phơng pháp phân tích mẫu

- Hoá ch t: Tất ả hoá hất (chlorua kali, acid chlohydric, a idấ c c c

pho h isp or c,… ở ) mức PA Tất c ả dung môi (methanol, chlorof rm, oacetonitrile, propanol-2-ol, -n hexane) ở mức HPLC  c khử ion đợc N ớ

sử dụng để chuẩn ị các b dung dị ch dùng trong quá trình tách chiết, tinh chế

và phân tích trên HPLC

- Chuẩn bị các dung ch hudị c ẩn: Các dung dịch huẩn ợc huẩn bị c đ c 10

mg OTA/ml methanol Một loạt các dung dịch huẩn từ c 0,3 đến 100 ngOTA/ml đợc chuẩn bị bằng pha loãng ồng N độ ủa c dung dịch chuẩn gốc

đợc xác định bằng đ ấộ h p phụ tia c c ự tím (A) theo công thứ :c

ε Trong đó : ρ nồng đ cộ ủa độc tố chu n trong d ng dẩ u ịch

ma trọng lợn pg hân tử

ε khả ăng ấp thu của phn h ân tử ại λmax t

λmax bớc sóng ấp thu ch ực đ ại

Độ tc ố ma (g/mol) Dung môi λmax ε m(c 2 mol-1)

- Định lợng OTA trên HPLC:

Sử dụng thiết bị HPLC của Nhật

Để tối u hoá độ nhạy cả m khi phân tích OTA sử dụng c c á thông số

hu nh quaỳ ng kích ích th và phát xạ khác aunh (OTA 335 và 465 nm ) Phân tích đợc tiến ành trên ộth c C18 (3àm C18, 0,46 x 25 cm)

Hệ thống đợc ph n â tích ớv i phase động H3PO4 (0,33 M)/ acetonitrile/ prop no -2 (650/ 00/50 ; tốc độ dò 0,5 ml/ phút Th gian a l 4 ) ng ời

đối với OTA là 56 phút Cá sắ ký ồ ợ phân c c đ đ c tích dựa vào phần mềmClass L- C10 của Shim zu versi n 1.60 ad o

+ Ch ết uất: Thêmi x 10 ml dung ch dị KCl 4% (pH 1,5) vào 20 g ẫu m

đã đợc nghiền nhỏ R đồi ợc thêm vào 90 ml acetonitrile, lắc 20 phút Chất hiết c đợc lọcqua giấ ylọc nhờ út chân kh ng h ô

+ Tinh chế: 1 00 ml - ex ne đ ợc th m vào dịch c lắc hút, n h a  ê lọ , 5 psau khi để ắng, bỏ lớp trên, l lặp lại bớc này 1 lần nữa Thêm vào ớ l p dới

50 ml nớc khử ion, và 100 ml chloroform Lớ dp ung môi trên đ c chiết ợlại 2 lần với 50 ml chloroform T n chung chlrộ oroform chiết đợc

Cho bay hơi trong cô quay cho đến khi gần khô ở 400C, tránh

ánh sáng Bình chứa chlorof rm đợc tr ng o á rửa bằ ng choloroform chuy ển

sang ống ghiệm và m khô ớ khí nit 2ml methanol đ c thêm vào, n là d i ơ ợ

đánh siêu âm, lọc qua giấy lọc có kích thớc lỗ lọc nhỏ hơn 0,45àm Làm khô d iớ khí nit 500 ơ àl methanol đợc thêm vào và đem phân tích trên HPLC (phụ lục 1)

2.5 Các chỉ tiêu điều tra nghiên cứu

2.5.1 Các chỉ tiêu về nông sản

- Tổng hộ điều tra: 160/ 696 hộ toàn xã

- Tổng nhân khẩu: 956/ 3.707 ngời toàn xã

- Dân tộc Mông: 100%

- Tổng số ngô điều tra trong 1 vụ:

+ Tổng thu toàn xã là 776.950 kg/696 hộ, số ngô trực tiếp điều tra là 245.000 kg/160 hộ ngô lai: 98.000 (40%); ngô thờng:147.000 [ (60%)] trong đó:

+ Ngô chất lợng tốt: 212.170 kg (86,6%) [lai: 80.000; không lai: 132.170]

+ Chất lợng kém (mốc): 32.830 kg (13,4%) [lai: 18.000; không lai:14.830]

- Các hình thức thu hoạch

- Các hình thức bảo quản

- Các hình thức sử dụng ngô mốc

- Thời gian ngô mốc đối với ngô thờng và ngô lai

- Kiến thức của ngời dân về nấm mốc, tác hại của nấm mốc và cácbiện pháp phòng chống

- Nguồn thông tin gia đình tiếp cận đợc về ngô trồng

- Tổng số thôn điều tra: 8/8 thôn của xã

- Thức ăn chính: ngô (100%)

- Mức sống bình quân: 150.000 đồng / tháng

2.5.2 Các chỉ tiêu liên quan tới các bệnh

- Triệu chứng về bệnh gan:

- Cảm giác mệt mỏi, ăn không ngon

- Đau tức hạ sờn phải

- Cảm giác mệt mỏi, ăn kém ngon

- Đái buốt, đái rắt

- Huyết áp cao

- Sốt

- Sụt cân

2.5.3 Các chỉ tiêu đánh giá ô nhiễm

- Mẫu ô nhiễm: mẫu có chứa Ochratoxin A trong sản phẩm nông sản

đợc tính theo mcg/kg sản phẩm (ppb)

- Mức độ ô nhiễm: là số mẫu bị ô nhiễm Ochratoxin A trong tổng số

mẫu lấy phân tích để kiểm tra

- Ô nhiễm vợt mức cho phép: Lấy chỉ số quy định trong Quyết định

867/QĐ BYT năm 1998 (35 ppb) cho phép mức tồn d độc tố v- i nấm mốc chung cho các loại độc tố vi nấm (trong đó không có chứa Aflatoxin để so sánh)

- Mẫu vợt độ ẩm cho phép: Lấy chỉ số quy định trong Quyết định

867/QĐ BYT năm 1998 (14%) để so sánh Nếu lớn hơn 14% là vợt mức cho phép

-2.6 Xử lý và phân tích số liệu

Số liệu sau khi thu thập đợc xử lý trên chơng trình và SPSS SPSS là phần mềm chuyên dụng xử lý thông tin sơ cấp (thông tin đợc thu thập trực tiếp từ đối tợng nghiên cứu (ngời trả lời bằng câu hỏi) thông qua một bảng câu hỏi đợc thiết kế sẵn Thông tin đợc xử lý là thông tin định lợng (có ý nghĩa về mặt thống kê)

Chơng 3 Kết quả và thảo luận

3.1 Kết quả điều tra, phỏng vấn về tập quán thói quen sản xuất, thu hoạch, bảo quản, sử dụng ngô và kiến thức của ngời dân

3.1.1 Đối tợng điều tra

Đối tợng điều tra là 956 ngời của 160 hộ gia đình bao gồm cả nam cả nữ

Bảng 3.1 Đặc điểm về tuổi, giới tính và nghề nghiệp

Tuổi Trong độ tuổi lao động (18 55 )

-Ngoài tuổi lao động <18 và >55

406

550

42,5 57,5 Nghề

nghiệp

Học sinh Cán bộ Nông nghiệp

53

12

891

5,5 1,3 93,2 Kết quả bảng trên cho thấy số ngoài độ tuổi lao động chiếm hơn 50%

Số cán bộ và học sinh thấp (1,3 – 5,5%), trong khi đó chủ yếu là lao động nông nghiệp thuần túy chiếm 93,2%

3.1.2 Tập quán sản xuất

Ngời nông dân tại nơi điều tra, trồng hai loại ngô thờng và ngô lai Trên cơ sở điều tra cơ cấu giống ngô sản xuất tại địa phơng, nghiên cứu đợc

tiến hành tại 160 hộ với khối lợng thu hoạch 245000kg ngô trong đó 40% ngô lai và 60% ngô thờng

3.1.3 Tập quán thu hoạch

Ngời nông dân tại nơi điều tra thu hoạch ngô theo hai hình thức là bẻ bắp tơi và để bắp khô cùng cây tại nơng (để bắp khô cùng cây tại nơng sau

3.1.4 Tập quán bảo quản

Ngời dân tại nơi điều tra ngô sau thu hoạch đợc ngời dân bảo quản theo bốn hình thức sau:

- Chất lên gác có tiếp xúc với khói bếp

- Chất lên gác không đợc tiếp xúc với khói bếp

- Bóc lật bẹ, treo

- Chất đống trên sàn nhà

Đối với trờng hợp thu hoạch bẻ bắp tơi, ngời ta phơi sơ bộ cho gần khô sau đó bảo quản Riêng đối với hình thức bóc lật bẹ, thì treo luôn (vừa phơi vừa bảo quản)

Tơng tự, đối với ngô để khô tại nơng thì sau khi thu hoạch, ngời ta cũng tiến hành bảo quản theo 4 cách trên

Tơng quan tỷ lệ các hình thức bảo quản đợc trình bày ở bảng 3.4, 3.5

Bảng 3.4 Thực trạng bảo quản ngô thu hoạch bằng cách bẻ bắp tơi