Nghiên cứu thành phần hóa học cây lan kim tuyến ( anoectochilus setaceus blume) thu hái tại thanh hóa

VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC ed ici ne an dP rm ac y,  fM NGUYỄN NAM PHƯƠNG ho ol o NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY LAN KIM TUYẾN (Anoectochilus setaceus Blume) THU HÁI TẠI THANH HÓA py rig ht @ Sc KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Co Hà Nội – 2019 VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC rm ac y,  an dP Người thực hiện: NGUYỄN NAM PHƯƠNG ed ici ne NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY LAN KIM TUYẾN (Anoectochilus setaceus Blume) THU HÁI TẠI THANH HÓA ho ol o fM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa : QH.2014.Y ThS Hà Thị Thanh Hương Co py rig ht @ Sc Người hướng dẫn: PGS.TS Lê Quang Huấn Hà Nội – 2019 VN U LỜI CẢM ƠN ac y, Qua năm học tập rèn luyện Khoa Y Dược - Đại học Quốc gia Hà Nội, với bảo giảng dạy nhiệt tình Thầy Cơ giúp cho em tiếp thu kiến thức lý thuyết thực hành vơ hữu ích rm Khóa luận kết việc tiếp thu, vận dụng kiến thức học cố gắng nỗ lực thân em Khoa Y Dược - Đại học Quốc gia Hà Nội phịng Cơng nghệ Tế bào Động vật – Viện Công nghệ sinh học trực thuộc Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam an dP Em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc tới PGS.TS Lê Quang Huấn – phịng Cơng nghệ Tế bào Động vật – Viện Công nghệ sinh học trực thuộc ne Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam ThS Hà Thị Thanh Hương – Nghiên cứu viên Bộ môn Dược liệu – Dược học cổ truyền, Khoa Y Dược - Đại học Quốc gia Hà Nội trực tiếp hướng dẫn, tận tình giúp đỡ, quan tâm tạo điều kiện ed ici thuận lợi để em nghiên cứu hồn thành khóa luận fM Em xin chân thành cảm ơn Ban chủ nhiệm Khoa Y Dược - Đại học Quốc gia Hà Nội, Bộ môn Dược liệu – Dược học cổ truyền anh chị nghiên cứu viên ho ol o phịng Cơng nghệ Tế bào Động vật – Viện Công nghệ sinh học tạo điều kiện giúp đỡ em thực Khóa luận tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè, người ln theo sát động viên, quan tâm tạo điều kiện thời gian em thực khóa luận ht @ Sc Trong q trình nghiên cứu đề tài khó tránh khỏi thiếu sót Em mong nhận ý kiến đóng góp q báu Thầy Cơ để luận văn em hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! py rig Hà Nội, ngày 20 tháng 02 năm 2019 Sinh viên Co Nguyễn Nam Phương i Nghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoa Nghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoa VN U MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU CHỮ VIẾT TẮT iv ac y, DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH v rm ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG I TỔNG QUAN Vài nét chi Anoectochilus an dP 1.1 Đặc điểm hình thái 1.2.Phân bố 1.3 Công dụng tác dụng ne Tổng quan Lan kim tuyến ed ici 2.1.Vị trí phân loại 2.2.Đặc điểm hình thái fM 2.3.Sinh học sinh thái 2.4.Phân bố tình trạng ho ol o 2.5.Thành phần hóa học 2.6.Công dụng 10 Sc 2.7.Tác dụng sinh học số hợp chất Lan kim tuyến 10 2.7.1.Quercetin 10 ht @ 2.7.2.Isorhamnetin 11 2.7.3.Acid ferulic 12 rig 2.7.4.Các thuốc sản phẩm biết đến 13 2.8.Vấn đề cần giải 13 Co py CHƯƠNG II NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1.Nguyên liệu, hóa chất 14 ii Nghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoa Nghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoa VN U 2.2.Phương tiện nghiên cứu 14 2.3.Phương pháp nghiên cứu 14 2.3.1.Phương pháp chiết xuất cao Lan kim tuyến 14 ac y, 2.3.2.Phương pháp định tính 17 3.3.Phương pháp định lượng 17 rm CHƯƠNG III KẾT QUẢ 20 3.1.Kết định tính Quercetin, Isorhamnetin, Acid ferulic 20 an dP 3.2.Định lượng Quercetin, Isorhamnetin, Acid ferulic 21 3.2.1.Định lượng Quercetin, Isorhamnetin dịch chiết HPLC 21 3.2.1.1.Điều kiện sắc ký 21 ne 3.2.1.2.Kiểm tra độ thích hợp hệ thống 21 ed ici 3.2.1.3.Định lượng Quercetin, Isorhamnetin 22 3.2.1.4.Kết định lượng Quercetin, Isorhamnetin 25 3.2.2.Định lượng Acid ferulic dịch chiết HPLC 26 fM 3.2.2.1.Điều kiện sắc ký 26 ho ol o 3.2.2.2.Kiểm tra độ thích hợp hệ thống 27 3.2.2.3.Định lượng Acid ferulic 28 3.2.2.4.Kết định lượng Acid ferulic 30 Sc BÀN LUẬN 31 KẾT LUẬN 33 ht @ KIẾN NGHỊ 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO 34 Co py rig PHỤ LỤC iii Nghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoa Nghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoa Sắc ký lớp mỏng hiệu cao HPLC Dung dịch ACN Acetonitril MeOH Methanol PBS Muối đệm phosphate IC50 Nồng độ ức chế 50% RLAR Enzyme Lens Aldose Reductase (NH4)2SO4 Amoni sunfat KH2PO4 Kali đihiđrophotphat MgSO4.7H2O Magie sulfat CaCl2.2H2O Calcium Chloride CV ht @ Vis rig ed ici ne an dP Sc UV py fM ho ol o Natri clorua Nồng độ C rm dd NaCl Co ac y, (High Performance Liquid Chromatography) VN U DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU CHỮ VIẾT TẮT Giá trị nồng độ Tử ngoại Khả kiến STT Số thứ tự TB Trung bình Area Diện tích píc RT Thời gian lưu Tailling factor Hệ số kéo đuôi iv Nghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoa Nghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoa VN U BÀN LUẬN Chiết xuất cao Lan kim tuyến Công nghệ sử dụng nghiên cứu để thu nhận cao có hoạt ac y, chất quý, có tác dụng chữa bệnh từ Lan kim tuyến công nghệ lên men Trong công nghệ lên men ứng dụng đề tài nghiên cứu sử dụng rm chủng nấm để thu nhận chất thay cho công nghệ tách chiết truyền thống nước cồn nhằm tăng hiệu tách chiết tăng tính đa dạng chất có hoạt tính an dP sinh học sản phẩm chiết xuất Theo công nghệ truyền thống việc chiết xuất hoạt chất từ thảo dược thực công nghệ chiết sử dụng nước sử dụng cồn Khi sử dụng nước: ne dịch chiết thu chứa chủ yếu chất ưa nước (các chất hòa tan nước), ed ici sử dụng cồn lại chủ yếu thu chất khơng hịa tan nước Vì vậy, việc sử dụng cơng nghệ lên men xem cơng nghệ khắc phục fM hạn chế nêu Công nghệ lên men nhiều nhà khoa học nước ho ol o ứng dụng để tạo sản phẩm có giá trị kinh tế chữa bệnh đồng thời tiết kiệm nguồn nguyên liệu khả chiết xuất gần tối đa hợp chất quý nguyên liệu ban đầu Sc Để đạt hiệu tách chiết tạo cao chứa hợp chất có tác dụng chữa bệnh từ Lan kim tuyến, cần khảo sát để lựa chọn điều kiện lên men tối ưu (như ht @ nhiệt độ, nồng độ chủng giống, cách xử lý nguyên liệu ban đầu trước lên men, thời gian lên men, thu nhận sản phẩm sau lên men,…) để thu nhận cao từ Lan kim tuyến rig đạt yêu cầu chất lượng Co py Quy trình thu nhận cao ổn định áp dụng vào sản xuất 31 Nghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoa Nghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoaNghien.cuu.thanh.phan.hoa.hoc.cay.lan.kim.tuyen.(.anoectochilus.setaceus.blume).thu.hai.tai.thanh.hoa VN U Định tính định lượng hợp chất có hoạt tính sinh học dịch lên men Lan kim tuyến  Có thể sử dụng phổ hấp thụ UV-Vis để sơ xác định hợp chất quan trọng ac y, mẫu cao Lan kim tuyến  Phổ hấp thụ mẫu cao Lan kim tuyến cho thấy đỉnh hấp thụ rõ ràng, tập rm trung bước sóng