171 DANH SÁCH CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Trang 9 ACN Acetonitril ASTT Áp suất thẩm thẩu CA Cellulose acetat DC Dƣợc chất FDA Cơ quan quản lý thực phẩm và dƣợc
TỔNG QUAN
THUỐC GIẢI PHÓNG KÉO DÀI
Thuốc giải phóng kéo dài (GPKD) là chế phẩm giúp kéo dài quá trình giải phóng và hấp thu dược chất, duy trì nồng độ dược chất trong máu trong vùng điều trị lâu hơn Mục tiêu của GPKD là kéo dài thời gian tác dụng, giảm số lần sử dụng thuốc, giảm tác dụng không mong muốn và nâng cao hiệu quả điều trị Đồ thị giải phóng dược chất của các dạng thuốc được thể hiện trong hình 1.1.
Hình 1.1 Đồ thị biến thiên nồng độ dƣợc chất trong máu theo thời gian của một số dạng thuốc uống [2]
Trong đó: 1 Dạng quy ƣớc 2 Dạng giải phóng nhắc lại
3 Dạng giải phóng có kiểm soát 4 Dạng giải phóng kéo dài
- MEC: Nồng độ tối thiểu có tác dụng
- MTC: Nồng độ tối thiểu gây độc
1.1.2 Thuốc giải phóng kéo dài dạng cốt thân nước
Trong các dạng thuốc GPKD, cốt thân nước được sử dụng phổ biến, thường được bào chế dưới dạng viên nén hoặc viên nang Các viên này chứa các hạt hoặc pellet có cấu trúc cốt, trong đó dược chất được kết hợp với một hoặc nhiều polyme thân nước làm cốt mang thuốc Khi được tiêu thụ, cốt sẽ hòa tan từ từ trong đường tiêu hóa, giúp kéo dài thời gian giải phóng dược chất.
N ồng đ ộ dƣ ợc c h ất tr ong m ỏu (àg/ml)
Luận án tiến sĩ Dược học
Khi bào chế cốt thân nước, dược chất được hòa tan hoặc phân tán trong polyme tạo cốt Các nguyên liệu polyme sử dụng có phân tử lượng lớn, trương nở và hòa tan chậm trong nước, bao gồm natri alginat, gôm xanthan và gôm adragant.
Carbopol là một dẫn chất của cellulose, bao gồm các loại như MC, CMC, HPC, HPMC và NaCMC Bên cạnh các dạng viên nén và viên nang thông thường, hệ cốt thân nước GPKD còn chứa các thành phần khác như tá dược độn, tá dược dính và tá dược trơn, tạo nên sự đa dạng trong công thức.
GPKD có thể được bào chế bằng các phương pháp như dập thẳng, tạo hạt ướt hoặc tạo hạt bằng phương pháp đùn nóng chảy [35], [87]
1.1.2.2 Cơ chế giải phóng thuốc từ hệ cốt thân nước
Cơ chế giải phóng thuốc từ cốt thân nước đã được nghiên cứu rộng rãi [21],
Nguyên tắc cơ bản trong việc hòa tan của môi trường vào hệ cốt là sự phụ thuộc vào tá dược và dược chất Đối với các dược chất dễ tan, quá trình giải phóng từ hệ cốt diễn ra thông qua cơ chế khuếch tán và ăn mòn Tuy nhiên, đối với dược chất ít tan, cơ chế ăn mòn trở thành phương thức giải phóng chủ yếu trong giai đoạn b.
Sự giải phóng thuốc từ cốt thân nước được mô tả ở hình 1.2
Thời điểm ban đầu Thời điểm t
Hình 1.2 Mô hình sự giải phóng thuốc hệ cốt thân nước [2]
Cơ chế giải phóng dược chất diễn ra qua nhiều bước sau khi uống Đầu tiên, cốt hấp thụ nước và hòa tan dược chất tại bề mặt, giải phóng một lượng dược chất ban đầu Polyme trong cốt hút nước và trương nở, tạo thành hàng rào gel giúp kiểm soát quá trình giải phóng dược chất Môi trường hòa tan tiếp tục khuếch tán qua lớp gel, thẩm thấu vào bên trong cốt để hòa tan dược chất Cuối cùng, dung dịch dược chất khuếch tán ra ngoài qua lớp gel nhờ vào chênh lệch gradient nồng độ.
Dƣợc chất phân tán trong cốt
Luận án tiến sĩ Dược học
Quá trình giải phóng dược chất từ hệ cốt thân nước không chỉ phụ thuộc vào sự hòa tan của cốt mà còn bị ảnh hưởng mạnh mẽ bởi sự khuếch tán dược chất qua lớp gel Sự khuếch tán này được mô tả bằng phương trình Noyes - Whitney, cho thấy mối liên hệ giữa nồng độ dược chất và thời gian.
= h A.(C s -C) Trong đó: D là hệ số khuếch tán của dƣợc chất h là bề dày lớp khuếch tán
A là diện tích bề mặt tiếp xúc của hệ với môi trường hòa tan
C s là nồng độ bão hòa dƣợc chất
C là nồng độ dược chất trong môi trường hòa tan
Sự thay đổi của A và h trong quá trình giải phóng dược chất khiến hệ cốt khó đạt được động học bậc 0 Giải phóng thuốc từ cốt thân nước phụ thuộc vào thành phần hệ cốt, bao gồm bản chất polyme và tỷ lệ dược chất-tá dược, cũng như các yếu tố ngoại môi như pH và hệ enzym trong đường tiêu hóa Nghiên cứu cho thấy lực nén ít ảnh hưởng đến tốc độ giải phóng dược chất, do sự hút nước từ bản chất polyme Đối với các hệ cốt chứa dược chất ít tan (độ tan 0,250
Phân tích tỷ lệ phần trăm dược chất trong tổng khối lượng bột cho thấy lượng glipizid chỉ chiếm khoảng 5,36% trọng lượng, dẫn đến nguy cơ trộn không đều Ở quy mô nhỏ, với 200 viên hoặc 1000 viên mỗi mẻ, việc trộn bột ít và sử dụng dụng cụ chày cối thô sơ khiến sự khác biệt này không rõ ràng.
Kết quả đánh giá sự phân tán hàm lượng bột cho thấy hàm lượng cao ở vị trí trung tâm và cánh trộn, trong khi các vị trí xa cánh trộn 3, 4, 6 có hàm lượng thấp vượt quá khoảng cho phép (± 10%) Để khắc phục tình trạng phân tán hàm lượng không đồng đều này, cần thực hiện các biện pháp cải thiện quy trình trộn.
Luận án tiến sĩ Dược học
Để đạt được 103 đồng đều, trước tiên trộn sơ bộ glipizid với lactose, sau đó kết hợp với hỗn hợp bột HPMC K4M và K100 LV Tiến hành sàng qua rây 250 trước khi trộn bằng máy nhào trộn cao tốc.
Trình tự trộn: ở qui mô nhỏ trộn theo nguyên tắc trộn đồng lƣợng, ở qui mô lớn nếu trộn theo trình tự: lactose với glipizid, trộn HPMC K4M và HPMC K100
LV, sau đó trộn 2 hỗn hợp này với nhau
Giai đoạn trộn bột kép quy mô 10.000 viên/lô được thực hiện trên máy trộn và tạo hạt ướt cao tốc GHL-10 Quá trình này là bước quan trọng trong bào chế viên glipizid GPKD lô 1 ở quy mô sản xuất lớn.
Mỗi lô sản xuất có 10.000 viên để lựa chọn các thông số kỹ thuật như thời gian trộn, tốc độ cánh trộn và cánh cắt Tổng khối lượng bột được cho vào trộn khoảng 1,6931 kg, chiếm từ 60% đến 70% dung tích của máy trộn.
Lựa chọn thời gian trộn: Giai đoạn trộn bột khô lấy mẫu tại các thời điểm 5, 7,
Dựa vào kết quả đánh giá độ phân tán hàm lượng của lô 1 tại 6 vị trí lấy mẫu khác nhau, thời gian trộn khô thích hợp cho lô 2 và lô 3 được lựa chọn trong khoảng từ 10 đến 15 phút Kết quả này được thể hiện rõ ràng trong bảng 3.32.
Bảng 3.32 Bảng kết quả độ phân tán hàm lƣợng glipizid của các lô tại các thời điểm trộn
5 phút 7 phút 10 phút 15 phút 10 phút 10 phút
Luận án tiến sĩ Dược học
Kết quả từ bảng 3.32 cho thấy, sau khi trộn bột khô trong 5 phút, hàm lượng dược chất glipizid tại một số điểm lấy mẫu (3, 4, 6) vượt quá giới hạn cho phép (4,83 – 5,90%), với độ lệch chuẩn tương đối (RSD) cao lên đến 6,87%.
Tiếp tục trộn bột trong khoảng thời gian từ 7 đến 10 phút cho thấy hàm lượng dược chất đã được phân tán đồng đều, đạt từ 4,83 – 5,90% với RSD dưới 5%, trong đó thời điểm 10 phút có RSD thấp nhất là 1,04% Tuy nhiên, khi thời gian trộn kéo dài đến 15 phút, bột có nguy cơ phân tán dược chất không đều, thể hiện qua sự chênh lệch hàm lượng lớn (SD hơn 10%) tại một số vị trí và RSD cao (11%).
Dựa trên kết quả nghiên cứu, thời gian trộn được chọn là 10 phút cho 2 lô tiếp theo Độ phân tán hàm lượng của lô 2 và lô 3 sau 10 phút cho thấy RSD < 5% Bên cạnh đó, quá trình thẩm định giai đoạn nhào ẩm cũng đã được thực hiện.
Giai đoạn nhào ẩm đƣợc tiến hành trên máy nhào trộn tạo hạt cao tốc GHL –
10 Dựa vào cảm quan, đặc tính của khối ẩm và sự thuận tiện khi thao tác để lựa chọn các thông số máy
Để tránh nguy cơ cháy nổ khi sử dụng cồn cao độ, nghiên cứu đã lựa chọn ethanol 70%, 90%, và 96% để pha tá dược dính trong giai đoạn nhào ẩm Kết quả cho thấy, khi sử dụng cồn nồng độ thấp (có nhiều nước), HPMC xảy ra hiện tượng trương nở, làm tăng thể tích bột và gây khó khăn trong việc đảo trộn đều tá dược dính Sự gia tăng khối lượng bột cũng khiến bột dính vào thành bình trộn, làm cho cánh trộn không thể đảo đều Để khắc phục, có hai biện pháp: sử dụng cồn nồng độ thấp phải chia thành hai mẻ trộn, tuy nhiên điều này kéo dài thời gian trộn và sấy hạt; hoặc tiếp tục sử dụng cồn 96% hoặc isopropanol, trong đó cồn 96% được ưu tiên do giá thành rẻ và dễ tìm.
Luận án tiến sĩ Dược học
Lựa chọn tốc độ thêm tá dƣợc dính:
Tốc độ thêm tá dược dính (thể tích tá dược dính/thời gian) không ảnh hưởng đến mức độ phân tán đều của tá dược dính trong khối bột, theo kết quả khảo sát với các tốc độ 300 ml/phút, 250 ml/phút và 200 ml/phút Điều này có thể được giải thích bởi việc sử dụng máy nhào cao tốc với cánh cắt và cánh trộn, giúp bột chịu sự phân cắt nhào trộn ở tốc độ cao Để tiết kiệm thời gian, đề tài đã chọn tốc độ thêm tá dược dính là 300 ml/phút, lực cắt 30Hz và thổi khí, đồng thời thời gian nhào trộn được khảo sát và đánh giá mức độ ẩm của khối hạt bằng cảm quan.
Lựa chọn tốc độ cánh trộn và cánh cắt:
Tốc độ cánh trộn và cánh cắt ảnh hưởng đáng kể đến sự đồng đều của tá dược dính trong khối bột, quyết định sự phân tán và trộn đều của chúng Để đánh giá tác động này, các tốc độ khảo sát được chọn là 30 Hz, 40 Hz và 50 Hz Việc lựa chọn thông số phù hợp dựa trên đánh giá đặc tính của khối bột khi trộn và sự thuận tiện trong thao tác Kết quả chi tiết được trình bày trong bảng 3.33.
Bảng 3.33 Kết quả khảo sát tốc độ quay của máy nhào trộn cao tốc
Tốc độ cánh trộn Tốc độ cánh cắt
Tá dƣợc dính không phân tán đều, có sự vón cục và dính bết thành tảng, có bột mịn/khô
Bột đƣợc trộn đều tá dƣợc dính hơn, vẫn có xuất hiện một lƣợng nhỏ bột bị vón cục và dính bết, bột mịn/khô
Máy bị rung, kêu to
Lƣợng bột lớn khó đảo đều, có sự vón cục và dính bết, có bột mịn/khô
Hỗn hợp bột đƣợc đảo đều với tá dƣợc dính, không xuất hiện cục vón, ít bột mịn
Máy bị rung, kêu to
50 Hz Máy bị rung, kêu to Máy bị rung, kêu to Máy bị rung, kêu to
Luận án tiến sĩ Dược học
Kết quả trên bảng 3.33 cho thấy, ở tốc độ/tần số cánh trộn hoặc cánh cắt cao
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘ ỔN ĐỊNH VIÊN NÉN GLIPIZID GIẢI PHÓNG KÉO DÀI
3.4.1 Kết quả nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn cơ sở
3.4.1.1 Kết quả xây dựng tiêu chuẩn bán thành phẩm a- Hạt
Dựa trên kết quả bào chế ba lô nghiên cứu, mỗi lô gồm 10.000 viên, đã tiến hành đánh giá một số chỉ tiêu chất lượng hạt Tiêu chuẩn chất lượng hạt glipizid được đề xuất và thể hiện trong bảng 3.42.
Bảng 3.42 Tiêu chuẩn của hạt glipizid giải phóng kéo dài (TB±SD)
Tiêu chuẩn chất lƣợng Lô 1 Lô 2 Lô 3 Dự kiến TC
Khối lƣợng riêng biểu kiến (g/ml)
0,50 ± 0,04 0,52 ± 0,03 0,50 ± 0,04 0,45- 0,55 Độ ẩm (%) 2,8 ± 0,1 2,6 ± 0,2 2,7 ± 0,2 2- 4 % Độ trơn chảy (g/s) 14,7±0,9 13,2±1,2 15,6±0,8 9-18 Hàm lƣợng glipizid (%) 101,07±1,04 103,17±0,96 100,42±1,82 90-110 Phân bố KT hạt (%)
Viên nhân được bào chế với quy mô 10.000 viên theo phương pháp 2.2.1 Sau đó, tiến hành đánh giá tiêu chuẩn chất lượng để đề xuất tiêu chuẩn cơ sở cho viên nhân.
- Hình thức: viên nén, hình trụ lồi, màu trắng
Trong phần định lượng, pic chính trên sắc ký đồ của dung dịch thử cần có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu của pic glipizid trong sắc ký đồ của dung dịch chuẩn.
- Độ đồng đều khối lượng: Tiến hành theo DĐVN IV (phụ lục 11.3, phương pháp 1) kết quả đƣợc trình bày ở bảng 3.43:
Luận án tiến sĩ Dược học
Bảng 3.43 Độ đồng đều khối lƣợng của 3 lô
Viên thử Khối lƣợng viên (mg)
- Lực gây vỡ viên: Tiến hành theo phương pháp ghi ở mục 2.2.2 Kết quả được trình bày ở bảng 3.44
Bảng 3.44 Lực gây vỡ viên của 3 lô bào chế
STT Lực gây vỡ viên (kP)
- Độ hòa tan: Tiến hành theo phương pháp 2.2.2 Kết quả được trình bày ở bảng 3.45
Bảng 3.45 Kết quả độ hòa tan 3 lô sản xuất (n = 6; TB ± SD)
Thời gian (giờ) Lô 1 Lô 2 Lô 3
Kết quả cho thấy, viên nén thực nghiệm đều đạt yêu cầu về độ hòa tan
- Định lượng: Tiến hành theo phương pháp 2.2.2 Kết quả được trình bày bảng 3.46:
Bảng 3.46 Hàm lƣợng glipizid (%) của 3 lô sản xuất (n = 6; TB ± SD)
Hàm lƣợng glipizid (%) so với lƣợng ghi trên nhãn Lô 1 Lô 2 Lô 3
Kết quả cho thấy, cả 3 lô đều đạt yêu cầu về hàm lƣợng dƣợc chất nằm trong khoảng 90- 110% so với hàm lƣợng ghi trên nhãn
Dựa trên các chỉ tiêu chất lƣợng đã khảo sát, đề xuất tiêu chuẩn cơ sở viên nhân nhƣ trình bày ở bảng 3.47
Luận án tiến sĩ Dược học
Bảng 3.47 Đề xuất tiêu chuẩn chất lƣợng của viên nhân
Tiêu chuẩn Yêu cầu Phương pháp thử
Hình thức Viên nén hình trụ lồi, màu trắng
Cảm quan Độ đồng đều khối lƣợng ±7,5% DĐVN IV, phụ lục 11.3, phương pháp 1
5-9 kP Phương pháp đo lực gây vỡ viên Định tính Phải giống chuẩn Phương pháp HPLC Định lượng 90- 110% Phương pháp HPLC Độ hòa tan 4 giờ: 15-45 %
- Thiết bị: cánh khuấy Tốc độ khuấy:
- Môi trường thử: 900 ml dung dịch đệm phosphat pH 6,8
- Thời gian lấy mẫu: 4 giờ; 8 giờ; 16 giờ
3.4.1.2 Xây dựng một số chỉ tiêu chất lượng viên glipizid giải phóng kéo dài
Dựa vào kết quả kiểm nghiệm một số tiêu chuẩn chất lƣợng của 3 lô, mỗi lô 10
000 viên theo phương pháp ghi tại mục 2.2.1 Kết quả thu được như sau:
- Hình thức: Viên nén hình trụ lồi, bao phim màu trắng
- Độ đồng đều khối lượng: Tiến hành theo DĐVN IV, phụ lục 11.3, phương pháp 1 kết quả đƣợc trình bày ở bảng 3.48:
Bảng 3.48 Độ đồng đều khối lƣợng của 3 lô viên bao
Khối lƣợng trung bình viên Lô 1 Lô 2 Lô 3
Kết quả cho thấy, khối lƣợng giữa các viên chênh lệch ít và chênh lệch so với khối lƣợng trung bình nhỏ hơn 7,5%
Trong phần định lượng, pic chính trên sắc ký đồ của dung dịch thử cần có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu của pic glipizid trong sắc ký đồ của dung dịch chuẩn để đảm bảo kết quả chính xác (Phụ lục 8).
- Độ hòa tan: Tiến hành theo phương pháp 2.2.2 Kết quả được trình bày bảng 3.49
Luận án tiến sĩ Dược học
118 Bảng 3.49 Kết quả độ hòa tan 3 lô sản xuất (n = 6; TB ± SD)
- Định lượng: Tiến hành theo phương pháp 2.2.2 Kết quả được trình bày bảng 3.50:
Bảng 3.50 Hàm lƣợng glipizid (%) của 3 lô sản xuất (n = 6; TB ± SD)
Hàm lƣợng glipizid (%) so với lƣợng ghi trên nhãn Lô 1 Lô 2 Lô 3
104,4± 0,3 105,6 ± 0,2 106,1 ± 0,2 Kết quả cho thấy, cả 3 lô đều đạt yêu cầu về hàm lƣợng dƣợc chất nằm trong khoảng 90- 110% so với hàm lƣợng ghi trên nhãn
- Đề xuất tiêu chuẩn chất lượng viên glipizid giải phóng kéo dài
Dựa trên kết quả nghiên cứu, chúng tôi đề xuất tiêu chuẩn chất lượng cho chế phẩm viên nén glipizid giải phóng kéo dài, như được trình bày trong Bảng 3.51.
Tiêu chuẩn Yêu cầu Phương pháp thử
Hình thức Viên nén bao phim màu trắng hình trụ lồi
Cảm quan Độ đồng đều khối lƣợng
≤ 7,5% DĐVN IV, phụ lục 11.3, phương pháp 1 Định tính Phải giống chuẩn Phương pháp HPLC Định lượng 90- 110% Phương pháp HPLC Độ hòa tan 2 giờ: < 10 %
- Thiết bị: cánh khuấy Tốc độ quay:
- Môi trường thử: 900 ml dung dịch đệm phosphat pH 6,8
- Nhiệt độ môi trường thử: 37 0,5 0 C
- Thời gian lấy mẫu: Sau 2 giờ; 4 giờ; 8 giờ; 12 giờ, 16 giờ
Dựa trên kết quả kiểm nghiệm và tiêu chuẩn chất lượng đã đề xuất, tiêu chuẩn cơ sở cho viên nén glipizid giải phóng kéo dài đã được xác định Chế phẩm này đã được đánh giá đạt yêu cầu và có phiếu kiểm nghiệm từ VKNTTW.
Luận án tiến sĩ Dược học
3.5.2 Đánh giá độ ổn định a Theo dõi hình thức
Kết quả theo dõi mẫu viên sau 06 tháng bảo quản ở điều kiện thực và lão hóa cấp tốc cho thấy không có sự thay đổi về hình thức Đồng thời, việc theo dõi độ hòa tan cũng được thực hiện để đảm bảo chất lượng sản phẩm.
Kết quả đánh giá độ hòa tan dược chất từ viên bao cho thấy sau 06 tháng bảo quản ở điều kiện lão hóa cấp tốc và điều kiện thực, không có sự thay đổi đáng kể về mức độ và tốc độ hòa tan dược chất trong các mẫu thử nghiệm.
Bảng 3.52 Độ hòa tan (%) của 3 lô đƣợc bảo quản điều kiện thực sau 06 tháng (n= 6; TB± SD)
% glipizid giải phóng theo thời gian
2 giờ 4 giờ 8 giờ 12 giờ 16 giờ
Luận án tiến sĩ Dược học
Bảng 3.53 Độ hòa tan (%) của 3 lô đƣợc bảo quản điều kiện lão hóa cấp tốc sau
06 tháng (n= 6; TB± SD) Thời gian bảo quản
% glipizid giải phóng theo thời gian (giờ)
2 giờ 4 giờ 8 giờ 12 giờ 16 giờ
Bảng 3.54 Hàm lƣợng glipizid (%) sau 06 tháng bảo quản ở điều kiện thực (n= 6; TB±SD)
Thời gian bảo quản (tháng)
Bảng 3.55 Hàm lƣợng glipizid (%) sau 06 tháng bảo quản ở điều kiện lão hóa cấp tốc (n= 6; TB± SD)
Thời gian bảo quản (tháng)
Luận án tiến sĩ Dược học
Kết quả khảo sát cho thấy hàm lượng của viên bao glipizid giải phóng kéo dài không thay đổi đáng kể sau 06 tháng bảo quản trong điều kiện lão hóa cấp tốc và điều kiện thực.
KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG VIÊN NÉN GLIPIZID GIẢI PHÓNG KÉO DÀI
3.5.1 Kết quả đánh giá tương đương hòa tan in vitro so với viên đối chiếu
Thử nghiệm hoà tan viên nén glipizid GPKD được thực hiện trong ba môi trường pH 1,2; pH 4,5; và pH 6,8, theo phương pháp đã nêu trong mục 2.2.2 Chỉ số f2 được tính toán so với viên đối chiếu Ozidia, và kết quả được trình bày trong bảng 3.56.
Bảng 3.56 Tỷ lệ % glipizid giải phóng từ viên đối chiếu theo thời gian ở 3 môi trường pH (TB± SD, n)
Thời gian (giờ) Tỷ lệ glipizid hòa tan (%) pH 1,2 RSD pH 4,5 RSD pH 6,8 RSD 2,00 4,32±0,41 9,48 6,96±0,59 8,47 6,27±0,57 9,09 4,00 13,36±1,16 8,68 13,63±1,05 7,70 17,9±0,55 3,07 6,00 23,1±1,83 7,92 21,79±1,36 6,23 31,74±2,11 6,65 8,00 30,57±1,37 4,48 28,15±1,20 4,26 55,43±3,23 5,83 10,00 38,56±2,58 6,69 35,52±2,34 6,59 76,75±4,12 5,36 12,00 42,02±1,06 2,52 39,71±1,87 4,70 89,88±2,46 2,73 16,00 42,69±1,43 3,35 43,14±2,56 5,93 99,33±2,10 2,11 f 2 60,57 57,52 66,45
Kết quả từ bảng 3.56 cho thấy viên nén glipizid 10 mg có độ hòa tan in vitro tương đương với viên Ozidia trong cả ba môi trường pH 1,2; 4,5 và 6,8, với tất cả các giá trị f2 đều lớn hơn 50.
Luận án tiến sĩ Dược học
3.5.2 Xây dựng và thẩm định phương pháp định lượng glipizid trong huyết tương chó
Mẫu huyết tương được xử lý bằng phương pháp chiết lỏng – lỏng, bắt đầu bằng việc lấy 0,5 ml huyết tương (trắng, thử) và thêm 50 µl dung dịch chuẩn nội (tolbutamid 5 µg/µl) cùng với 850 µl HCl 0,05M Sau khi lắc trộn đều, thêm 5,0 ml diethyl ether và lắc xoáy trong 3 phút, sau đó ly tâm ở 4000 vòng/phút trong 10 phút Lấy lớp dầu và bốc hơi dung môi trong dòng khí N2 ở 40 độ C Cuối cùng, hòa tan cặn thu được trong 500 µl methanol và tiêm 20 µl vào thiết bị phân tích.
Kết quả từ việc chạy mẫu sắc ký cho thấy mẫu sạch, ít tạp chất và giảm sai số trong phân tích Dung môi diethyl ether với nhiệt độ bay hơi thấp và độ độc tính thấp đã giúp thu được mẫu chiết sạch Do đó, phương pháp chiết lỏng-lỏng được lựa chọn là phù hợp.
- Lựa chọn điều kiện sắc ký:
- Nhiệt độ phân tích: nhiệt độ phòng
- Pha động: ACN- đệm phosphat pH 3,5 (tỷ lệ thay đổi)
- Tốc độ dòng: 0,5 ml/phút
Kết quả khảo sát sơ bộ cho thấy, với tỷ lệ pha động 54:46, pic có hình dạng nhọn, gọn và cân đối, thời gian lưu ngắn (Glipizid khoảng 10,2 phút, tolbutamid khoảng 12,8 phút) Phân tích đạt được píc tách tốt và thời gian phân tích chỉ mất khoảng 15 phút.
Mẫu huyết tương trắng được lấy từ tĩnh mạch cổ của chó với khoảng 250 ml máu, sau đó cho vào ống nghiệm đã tráng heparin Tiến hành ly tâm ở tốc độ 4000 vòng/phút trong 10 phút để tách huyết tương Cuối cùng, bảo quản huyết tương ở nhiệt độ -20°C trong tủ lạnh sâu.
Mẫu huyết tương thêm chuẩn: Cân chính xác khoảng 100 mg glipizid (GLI) và tolbutamid (TOL), hòa tan và pha loãng trong methanol để có nồng độ cuối cùng
Nồng độ ban đầu là 10 àg/ml và 5,0 àg/ml, sau đó tiến hành pha loãng trong methanol để đạt các nồng độ 50, 200, 1000, 2000, 4000, và 5000 ng/ml Lấy 0,5ml từ các dung dịch này, cho bay hơi dung môi để thu được cặn, sau đó hòa tan cặn với 0,5ml huyết.
Luận án tiến sĩ Dược học
123 tương thu được các mẫu huyết tương thêm chuẩn có nồng độ tương ứng 50; 200;1000, 2000, 4000, 5000 ng/ml
- Độ chọn lọc - đặc hiệu của phương pháp
Tiến hành khảo sát chọn lọc và đặc hiệu của phương pháp, kết quả được trình bày ở hình 3.24 và bảng 3.57
Hình 3.24 Sắc ký đồ huyết tương trắng (a), huyết tương có chứa chuẩn và chuẩn nội (b) và huyết tương sau khi chó uống thuốc 2,5 giờ (c)
Luận án tiến sĩ Dược học
124 Bảng 3.57 Kiểm tra độ đặc hiệu-chọn lọc của phương pháp
STT Diện tích pic mẫu trắng (mAU) Tỷ lệ đáp ứng pic t R từ 9,8 – 10,3 phút t R từ 12,5 – 13,2phút Trắng/GLI Trắng/TOL
( “-“: không có tín hiệu đáp ứng)
Kết quả phân tích sắc ký cho thấy mẫu chuẩn xuất hiện hai pic được xác định là GLI và TOL, trong khi mẫu trắng không có pic tại các vị trí này Tại thời điểm trùng với thời gian lưu của GLI (9,8 đến 10,3 phút), diện tích pic của mẫu trắng nhỏ hơn hoặc bằng 20% diện tích pic của mẫu chuẩn GLI (27861 mAU) Trong khoảng thời gian lưu từ 12,5 đến 13,2 phút, diện tích pic mẫu trắng cũng nhỏ hơn hoặc bằng 5% diện tích pic chuẩn nội TOL (139634 mAU) Điều này chứng tỏ phương pháp phân tích đảm bảo nhận diện và phân biệt GLI với chuẩn nội, đồng thời không bị ảnh hưởng bởi các tạp chất trong huyết tương, đạt độ chọn lọc yêu cầu.
- Đường chuẩn và khoảng tuyến tính
Tiến hành pha chế các mẫu huyết tương chứa glipizid với nồng độ từ 50 - 5000 ng/ml và phân tích theo quy trình đã thiết lập Nghiên cứu xác định mối tương quan giữa nồng độ glipizid trong huyết tương và tỷ lệ diện tích pic GLI/TOL Kết quả mối tương quan này được trình bày chi tiết trong bảng 3.58 và hình 3.25.
Luận án tiến sĩ Dược học
Bảng 3.58 Mối tương quan giữa tỷ lệ diện tích pic của GLI/TOL với nồng độ của GLI trong huyết tương chó
Tỷ lệ diện tích pic
Kết quả nghiên cứu chỉ ra rằng có mối tương quan tuyến tính rõ rệt giữa nồng độ glipizid (GLI) và tỷ lệ diện tích pic GLI/TOL trong khoảng nồng độ từ 50 ng/ml đến 5000 ng/ml, với hệ số tương quan R² gần bằng 1 và giá trị p của độ dốc nhỏ hơn 0,05 Phương pháp định lượng trong huyết tương đạt tiêu chí độ chính xác theo quy định của FDA, với tỷ lệ từ 85,1% đến 101,8%, nằm trong giới hạn cho phép từ 80% đến 120% đối với nồng độ thấp nhất.
85 - 115 % cho các nồng độ còn lại Do vậy, phương trình hồi qui không đi qua điểm cắt được sử dụng để tính toán nồng độ glipizid trong huyết tương
Luận án tiến sĩ Dược học
- Giới hạn định lượng dưới (LLOQ)
Phân tích mẫu trắng và mẫu chuẩn với nồng độ thấp nhất (50 ng/ml) trong khoảng tuyến tính, xác định đáp ứng pic của cả hai mẫu Tính nồng độ GLI trong mẫu chuẩn dựa trên diện tích pic GLI và đường chuẩn, từ đó đánh giá độ đúng bằng cách so sánh với giá trị thực trong mẫu Kết quả xác định giá trị LLOQ của phương pháp được trình bày chi tiết trong bảng 3.59.
Bảng 3.59 Xác định giới hạn định lượng dưới (LLOQ)
STT Đáp ứng của mẫu chuẩn so với mẫu trắng
Nồng độ đo đƣợc (ng/ml) Độ đúng so với nồng độ thực (%)
Kết quả từ bảng 3.59 cho thấy rằng đáp ứng của mẫu chuẩn ở khoảng thời gian lưu của GLI (nồng độ 50 ng/ml) cao hơn 5 lần so với mẫu trắng Các nồng độ được tìm thấy so với giá trị thực đạt từ 89,8% đến 112,2%, nằm trong khoảng 80% đến 120%.
Mẫu chứa GLI với nồng độ 50 ng/ml đã đáp ứng yêu cầu về giới hạn định lượng dưới của phương pháp phân tích dịch sinh học, với độ lặp lại sau 6 lần phân tích RSD dưới 10%.
- Độ đúng - độ lặp lại trong ngày và khác ngày
Pha các mẫu LQC (200 ng/ml), MQC (2000 ng/ml) và HQC (4000 ng/ml) để tiến hành xử lý và phân tích sắc ký theo các điều kiện đã lựa chọn Xác định nồng độ GLI trong mẫu bằng phương pháp đường chuẩn, đồng thời tính tỷ lệ (%) giữa nồng độ xác định được và nồng độ lý thuyết Kết quả về độ chính xác, độ lặp lại trong ngày và giữa các ngày của phương pháp được trình bày chi tiết trong bảng 3.60.
Luận án tiến sĩ Dược học
127 Bảng 3.60 Khảo sát độ đúng và độ lặp lại trong ngày (n=6) và khác ngày (n)
Nồng độ (ng/ml) Độ đúng (%)
Nồng độ (ng/ml) Độ đúng (%)
Kết quả đánh giá độ đúng và độ lặp lại trong ngày và khác ngày cho thấy phương pháp phân tích đạt độ đúng cao với tỷ lệ từ 89,2 đến 112,4 % ở ba nồng độ LQC (200 ng/ml), MQC (2000 ng/ml) và HQC (4000 ng/ml) Độ lệch chuẩn tương đối nằm trong giới hạn cho phép từ 85-115 %, và độ lặp lại có giá trị RSD nhỏ (4,5 – 7,7 %), chứng tỏ phương pháp phân tích thuốc trong dịch sinh học đáp ứng yêu cầu về độ đúng và độ chính xác.
Luận án tiến sĩ Dược học
♦ Xác định tỷ lệ thu hồi của phương pháp
BÀN LUẬN
VỀ XÂY DỰNG CÔNG THỨC BÀO CHẾ VIÊN GLIPIZID GIẢI PHÓNG KÉO DÀI
4.1.1 Về lựa chọn dạng bào chế
Glipizid là thuốc điều trị bệnh tiểu đường tuýp II thuộc nhóm sulfonyl urê thế hệ 2, với nửa đời sinh học ngắn hơn, giúp giảm nguy cơ hạ đường huyết trầm trọng Thuốc có thời gian bán thải từ 2 đến 4 giờ và tác dụng kéo dài chỉ vài giờ, do đó cần sử dụng nhiều lần trong ngày Việc nghiên cứu và bào chế các chế phẩm giải phóng kéo dài chứa glipizid là cần thiết để nâng cao hiệu quả điều trị, giảm số lần dùng thuốc trong ngày và hạn chế tác dụng không mong muốn.
Hiện nay, một số chế phẩm chứa glipizid giải phóng kéo dài như Glucotrol XL, Glipizid XL, và Ozidia đã được sử dụng trong điều trị Những chế phẩm này có nhiều ưu điểm, bao gồm khả năng đạt động học bậc 0 và giải phóng dược chất không phụ thuộc vào pH, enzym, hay nhu động ruột Tuy nhiên, việc bào chế chúng yêu cầu kỹ thuật phức tạp, nhiều giai đoạn và thiết bị chuyên biệt như máy dập viên 2 lớp và máy khoan laser Do đó, không phải cơ sở nào cũng có thể bào chế thành công dạng bào chế này, một phần do thiếu thiết bị và một phần do nguồn lực nghiên cứu chưa đủ.
Các nghiên cứu gần đây đang tập trung vào việc bào chế glipizid giải phóng kéo dài với cấu trúc đơn giản hơn như cấu trúc thẩm thấu tự tạo vi lỗ và cấu trúc dạng cốt thân nước Mục tiêu là đa dạng hóa sản phẩm và đơn giản hóa kỹ thuật bào chế Tuy nhiên, các cấu trúc này gặp nhiều khó khăn trong việc kiểm soát giải phóng dược chất, nhằm đạt được hiệu quả tương đương với viên đối chiếu Glucotrol XL của Pfizer Để khắc phục vấn đề này, các nhà nghiên cứu đã đưa ra nhiều giải pháp khác nhau, nhưng kết quả vẫn chưa đồng nhất.
Luận án tiến sĩ Dược học
138 nghiên cứu bào chế glipizid dạng bơm thẩm thấu [7] và dạng cốt thân nước [6]
Thuốc GPKD có cấu trúc dạng cốt thân nước với ưu điểm là kỹ thuật bào chế đơn giản và dễ thực hiện Tuy nhiên, nhược điểm chính là khó đạt động học bậc 0 do sự thay đổi diện tích bề mặt trong quá trình giải phóng dược chất Giai đoạn đầu diễn ra hiện tượng giải phóng nhanh (burst release) do cơ chế ăn mòn từ lớp gel yếu mới hình thành, trong khi giai đoạn sau diễn ra chậm hơn nhờ cơ chế khuếch tán khi lớp gel bền vững đã hình thành Đặc biệt, với các dược chất ít tan như glipizid, hydrochlorothiazid, carbamazepin, và nifedipin, thường sử dụng polyme thân nước có độ nhớt thấp, dẫn đến giải phóng dược chất nhanh hơn ở giai đoạn đầu do quá trình ăn mòn mạnh Điều này tạo ra sự biến động lớn trong đồ thị hòa tan (SD/variable) khi thay đổi tốc độ khuấy, đặc biệt là ở tốc độ khuấy cao (150 vòng/phút), có thể gây ra sự khác biệt trong giải phóng dược chất trong thử nghiệm in vivo.
2 điều kiện đói và no (fast/fed) do nhu động ruột khác nhau (nhu động tăng khi no/fed) và dẫn tới sinh khả dụng có thể khác nhau [58], [79], [14], [117], [125],
Để kiểm soát tốc độ ăn mòn trong giai đoạn đầu giải phóng dược chất và giảm biến động ở tốc độ khuấy cao, nghiên cứu “Nghiên cứu bào chế và sinh khả dụng viên nén glipizid giải phóng kéo dài” đã được thực hiện Nghiên cứu này kết hợp cấu trúc cốt thân nước với bao màng kiểm soát giải phóng tự tạo kênh khuếch tán Hiện tại, chưa có nghiên cứu nào tại Việt Nam kết hợp dạng cốt thân nước chứa glipizid và bao màng kiểm soát giải phóng tự tạo kênh khuếch tán.
4.1.2 Về xây dựng công thức viên nhân dạng cốt thân nước chứa glipizid
Glipizid là một dược chất thuộc nhóm 2 theo phân loại BCS, có đặc tính ít tan và dễ thấm, thường được bào chế dưới dạng viên nén hoặc thuốc giải phóng kéo dài Tính tan của glipizid trong nước rất thấp (32,7 mg/l) và phụ thuộc vào pH; với pKa = 5,9, glipizid dễ tan trong môi trường pH trung tính và kiềm, nhưng lại khó tan trong môi trường acid.
Glipizid có thể được cải thiện độ tan trước khi đưa vào công thức bằng nhiều phương pháp khác nhau, chẳng hạn như tạo hệ phân tán rắn với PEG và PVP, hoặc thêm chất diện.
Luận án tiến sĩ Dược học
Glipizid có thể hòa tan và hấp thu nhanh chóng trong môi trường dịch ruột non, nơi pH dao động từ 6,8 đến 7,4, nhờ vào việc sử dụng các polyme thân nước và tá dược có tính kiềm Tuy nhiên, pH của đường tiêu hóa thay đổi từ môi trường acid của dạ dày đến môi trường kiềm của ruột non và ruột già.
Trong các dạng bào chế chứa glipizid, đặc biệt là dạng giải phóng kéo dài, có thể lựa chọn cải thiện độ tan hoặc không Mặc dù glipizid ít tan trong nước, nhưng ở pH 6,8, độ tan của nó cao hơn khi ở hàm lượng thấp, giúp glipizid hòa tan dễ dàng hơn Mục tiêu của việc kiểm soát giải phóng dược chất là để kiểm soát tốc độ giải phóng và hòa tan, từ đó điều chỉnh tốc độ và mức độ hấp thu dược chất từ dạng bào chế khi sử dụng.
Về phương pháp định lượng, nghiên cứu sử dụng phương pháp quang phổ
Phương pháp UV VIS được sử dụng để định lượng glipizid trong chế phẩm và mẫu thử hòa tan, được nhiều tác giả áp dụng trong nghiên cứu xây dựng công thức ban đầu Phương pháp này đã được thẩm định và đáp ứng yêu cầu về độ đúng và độ chính xác (PL 1.3 và PL 1.4) Kết quả từ phương trình hồi quy trong ba môi trường pH 1,2; 4,5; 6,8 cho thấy giá trị p 0,05 và độ dốc < 0,05 Do đó, nồng độ glipizid trong mẫu thử được tính toán bằng cách so sánh với nồng độ glipizid trong mẫu chuẩn, đạt khoảng 10 µg/ml để định lượng glipizid trong chế phẩm.
4.1.2.1.Về lựa chọn polyme tạo cốt
Glipizid có đặc điểm ít tan, đặc biệt ở môi trường pH thấp, nhưng tan tốt ở pH 6,8 và trong môi trường kiềm Với hàm lượng mỗi viên thấp và độ hòa tan dược chất cao từ viên quy ước và nguyên liệu, việc lựa chọn tá dược chính cho viên cốt là các polyme thân nước là hợp lý Trong nghiên cứu này, HPMC được sử dụng vì nó là tá dược an toàn, dễ kiếm và phổ biến.
Luận án tiến sĩ Dược học
HPMC (Hydroxypropyl Methylcellulose) là một polyme thân nước, có khả năng trương nở và hòa tan trong nước, với nhiều loại khác nhau về khối lượng phân tử và độ nhớt Polyme này không chỉ tạo cốt thân nước mà còn kiểm soát giải phóng dược chất, đồng thời cải thiện tính chất sơ nước của glipizid, giúp bề mặt glipizid dễ hòa tan hơn Để đạt được mục tiêu kiểm soát giải phóng, nghiên cứu sử dụng phối hợp HPMC K4M (độ nhớt cao) với HPMC K100 LV (độ nhớt thấp), nhằm tăng tính thấm nước của glipizid và kiểm soát quá trình giải phóng dược chất Trong cấu trúc cốt, polyme kiểm soát giải phóng thông qua trương nở và ăn mòn, và polyme độ nhớt thấp cũng được ứng dụng để kiểm soát quá trình ăn mòn với các dược chất ít tan như hydroclorothiazid và carbamazepin.
Kết quả đánh giá cho thấy loại, tỷ lệ polyme và tỷ lệ phối hợp polyme đều ảnh hưởng đến mức độ và tốc độ hòa tan dược chất từ viên Khi sử dụng các loại HPMC khác nhau, đặc tính hòa tan của glipizid thay đổi với tốc độ khác nhau; cụ thể, HPMC có độ nhớt cao hơn làm chậm quá trình hòa tan glipizid, theo thứ tự HPMC K100M > HPMC K15M > HPMC K4M > HPMC K100LV Kết quả này tương đồng với nghiên cứu của Jamzad và cộng sự về các polyme thân nước kiểm soát giải phóng dược chất.
Khi tăng tỷ lệ polyme trong viên thì tốc độ giải phóng dƣợc chất giảm, điều này cũng giống nhƣ kết quả nghiên cứu của các tác giả khác [125]
4.1.2.2.Về lựa chọn tá dược độn
Tá dược độn trong viên cốt thường sử dụng tá dược sơ nước hoặc thân nước, với tùy chọn tá dược không tan hoặc tan trong nước Trong nghiên cứu này, lactose được chọn làm tá dược độn cho viên glipizid giải phóng kéo dài do tính chất rẻ tiền, dễ kiếm và khả năng phối hợp linh hoạt.
Luận án tiến sĩ Dược học
VỀ XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUI TRÌNH BÀO CHẾ VIÊN GLIPIZID GIẢI PHÓNG KÉO DÀI QUI MÔ 10000 VIÊN
Dược chất glipizid là bột màu trắng, khó nghiền mịn và dễ dính bết khi rây, dẫn đến hiệu suất rây thấp, đặc biệt là ở quy mô 10.000 viên Việc rây qua rây 0,125mm gặp nhiều khó khăn và tốn thời gian Để cải thiện hiệu suất rây và không ảnh hưởng đến độ hòa tan của viên cốt, đề tài đã chọn rây 0,180mm và sử dụng máy rây rung với tần số 1-1,2 mm/s.
Luận án tiến sĩ Dược học
Kết quả phân tích kích thước bột glipizid cho thấy hơn 40% bột có kích thước từ 0,125 - 0,180 mm, trong khi hơn 18% bột có kích thước nhỏ hơn 0,125 mm và hơn 30% bột lớn hơn 0,180 mm Do đó, việc rây bột qua rây 0,180 mm và sau đó nghiền bột bằng máy xay dao sẽ giúp rút ngắn thời gian sản xuất.
- Về nguy cơ ảnh hưởng đến độ đồng đều hàm lượng trong giai đoạn trộn khô
Lượng dược chất trong bột chỉ chiếm khoảng 5% tổng khối lượng, dẫn đến nguy cơ trộn không đều Ở quy mô nhỏ như 200 viên và 1000 viên, việc trộn bằng cối và dụng cụ chày cối thô sơ không cho thấy sự khác biệt rõ rệt trong quá trình này.
Khi nâng quy mô lên 10.000 viên, kết quả đánh giá cho thấy hàm lượng bột phân tán không đồng đều, với hàm lượng cao ở vị trí trung tâm và cánh trộn, trong khi vị trí xa cánh trộn 5,6 có hàm lượng thấp ngoài khoảng cho phép (± 10%) Để khắc phục tình trạng này, cần thực hiện trộn sơ bộ glipizid với lactose, sau đó kết hợp với hỗn hợp bột HPMC K4M và K100 LV, và cuối cùng cho qua sàng 250mm trước khi trộn bằng máy nhào trộn cao tốc.
Giai đoạn trộn bột kép cho quy mô 10.000 viên/lô được thực hiện trên máy trộn và tạo hạt ướt cao tốc GHL-10 Quy trình bào chế viên glipizid GPKD lô 1 nhằm tối ưu hóa các thông số kỹ thuật như thời gian trộn, tốc độ cánh trộn và cánh cắt Tổng khối lượng bột sử dụng trong quá trình trộn khoảng 1,69 kg, chiếm 60%-70% dung tích của máy trộn.
- Lựa chọn thời gian trộn
Thời gian trộn bột khô có ảnh hưởng quan trọng đến độ phân tán của dược chất trong khối bột Kết quả thực nghiệm cho thấy, khi trộn bột khô trong 5 phút, hàm lượng dược chất tại một số điểm lấy mẫu bị biến động.
6) nằm ngoài khoảng cho phép (90 – 110%) và RSD cao (6,87%), các vị trí này đều nằm ở vị trí xa cánh trộn và cánh đảo Đến thời điểm trộn 7 và 10 phút, kết quả phân tích độ phân tán hàm lƣợng cho thấy bột đã phân tán dƣợc chất đồng đều, hàm lƣợng dƣợc chất trong khoảng 90 – 110%, RSD < 5% đạt với yêu cầu, trong đó, thời điểm 10 phút cho RSD nhỏ nhất (1,04%) Khi tiếp tục trộn đến 15 phút, bột có nguy cơ phân tán dƣợc chất không
Luận án tiến sĩ Dược học
Kết quả cho thấy có sự chênh lệch đáng kể về hàm lượng với độ lệch chuẩn (SD) trên 10% tại một số vị trí và hệ số biến động (RSD) lên đến 11% Vì vậy, thời gian trộn khô được xác định là 10 phút.
Tiến hành nhào ẩm bằng máy nhào trộn tạo hạt cao tốc GHL – 10, cần dựa vào cảm quan và sự thuận tiện trong thao tác Việc chọn các thông số máy cũng phụ thuộc vào đặc tính của khối ẩm.
Để tránh nguy cơ cháy nổ khi sử dụng cồn cao độ, nghiên cứu lựa chọn cồn 70%, 90% và 96% để pha tá dược dính trong giai đoạn nhào ẩm Tuy nhiên, cồn có độ thấp hơn (nhiều nước) gây trương nở HPMC, làm tăng thể tích bột và khó khăn trong việc đảo trộn đều Khối lượng bột tăng cũng khiến bột dính vào thành và phía trên bình trộn, làm cánh trộn không hoạt động hiệu quả Để khắc phục, biện pháp 1 là chia thành 2 mẻ trộn nếu sử dụng cồn thấp độ, nhưng điều này có thể kéo dài thời gian trộn và sấy hạt Biện pháp 2 là tiếp tục sử dụng cồn 96% hoặc isopropanol, với lựa chọn cồn 96% do giá thành rẻ và dễ tìm.
- Lựa chọn tốc độ thêm tá dược dính
Tốc độ thêm tá dược dính có thể ảnh hưởng đến mức độ phân tán của tá dược trong khối bột, nhưng khảo sát sơ bộ cho thấy tốc độ 300 ml/phút, 250 ml/phút và 200 ml/phút không làm thay đổi mức độ phân tán trong quá trình trộn ướt Sự không ảnh hưởng này có thể do máy nhào cao tốc sử dụng cánh cắt và cánh trộn, giúp bột được phân cắt và trộn với tốc độ cao Để tiết kiệm thời gian, đề tài đã chọn tốc độ thêm tá dược dính là 300 ml/phút, với lực cắt 30Hz và có thổi khí Thời gian nhào trộn được khảo sát và mức độ ẩm của khối hạt được đánh giá bằng cảm quan.
- Lựa chọn tốc độ cánh trộn và cánh cắt
Dự đoán ảnh hưởng của tốc độ cánh trộn và cánh cắt đến sự đồng đều của tá dược dính trong khối bột là yếu tố quyết định quan trọng Tốc độ trộn và cắt có thể tác động trực tiếp đến chất lượng sản phẩm cuối cùng, do đó việc kiểm soát các yếu tố này là cần thiết để đảm bảo sự đồng nhất trong quá trình sản xuất.
Luận án tiến sĩ Dược học
Kết quả thực nghiệm cho thấy việc phân tán và trộn đều tá dược dính trong khối bột bị ảnh hưởng bởi tốc độ cánh trộn và cánh cắt Ở tốc độ 50Hz (300 vòng/phút) hoặc cánh cắt cao 50Hz (3000 vòng/phút), hiện tượng rung máy và tiếng kêu lớn xảy ra Khi giảm tốc độ cánh trộn xuống 30Hz (180 vòng/phút) và đặt tốc độ cánh cắt ở 30Hz hoặc 40Hz, tá dược dính không được phân tán đều, dẫn đến sự hình thành nhiều cục vón và bột mịn.
Khi tăng tốc độ cánh trộn lên 40Hz (240 vòng/phút), bột được trộn đều với tá dược dính hơn ở tốc độ cánh cắt 30Hz, nhưng vẫn xuất hiện sự vón cục và một phần bột mịn Tuy nhiên, khi tốc độ cánh cắt đạt 40Hz, hiện tượng vón cục không còn, cho thấy tá dược dính đã được trộn đều Dù vậy, vẫn còn một tỷ lệ bột mịn tại các vị trí mà cánh trộn chưa tiếp cận.
Từ kết quả nghiên cứu ở trên, tốc độ cánh trộn 40 Hz (240 vòng/phút), tốc độ cánh cắt 40 Hz (2400 vòng/phút) đã đƣợc chọn cho giai đoạn nhào ẩm
- Lựa chọn thời gian nhào ẩm
Thời gian nhào ẩm được xác định qua quan sát sau 6 phút, khi khối ẩm đạt độ kết dính đồng đều Nếu kéo dài thời gian nhào, nhiệt độ khối ẩm sẽ tăng, dẫn đến bột trở nên rời rạc và hình thành các tiểu phân nhỏ Nguyên nhân là do sự bay hơi của dung môi cồn 96% khi thời gian trộn kéo dài, làm giảm khả năng kết dính của tá dược PVP và tạo ra nhiều bột mịn Ngoài ra, ma sát trong quá trình trộn cũng làm tăng nhiệt độ, ảnh hưởng xấu đến độ ổn định của dược chất và gia tăng tốc độ bay hơi của cồn, gây khô bột và khó khăn cho giai đoạn xát hạt sau Do đó, khối bột ẩm cần được bảo quản ngay trong túi nylon hoặc thùng kín để ngăn ngừa bay hơi của dung môi.
4.2.3 Giai đoạn xát hạt, sấy hạt, sửa hạt
- Giai đoạn tạo hạt trên máy xát hạt lắc
VỀ BƯỚC ĐẦU XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘ ỔN ĐỊNH
4.3.1 Về xây dựng tiêu chuẩn chất lƣợng
Dựa trên kết quả đánh giá các tiêu chuẩn chất lượng viên bao glipizid GPKD 10mg, đề tài đã đề xuất tiêu chuẩn chất lượng cho bán thành phẩm (hạt, viên nhân) và viên bao glipizid với các chỉ tiêu như định tính, độ đồng đều khối lượng, định lượng và độ hoà tan Các phương pháp phân tích được sử dụng có độ chính xác cao và dễ áp dụng trong điều kiện thực tế tại Việt Nam Tiêu chuẩn cơ sở của viên đã được xây dựng phù hợp với quy định chung về viên GPKD, và dự thảo tiêu chuẩn này sẽ là cơ sở đảm bảo chất lượng ổn định cho bán thành phẩm và thành phẩm viên bao màng KSGP chứa glipizid trong quá trình bào chế khi thay đổi quy mô Viên bao glipizid GPKD 10mg đã được kiểm tra và có phiếu kiểm nghiệm sản phẩm từ Viện kiểm nghiệm thuốc trung ương.
Luận án tiến sĩ Dược học
4.3.2 Về nghiên cứu đánh giá độ ổn định
Nghiên cứu độ ổn định của viên glipizid GPKD nhằm đánh giá sự thay đổi chất lượng viên dưới tác động của các yếu tố môi trường và chế phẩm thuốc, từ đó dự đoán tuổi thọ của thuốc Các yếu tố như tính chất lý hóa của glipizid và tá dược, dạng bào chế, quy trình bào chế, độ kín và bản chất bao gói có thể ảnh hưởng đến chất lượng thuốc Độ ổn định của viên glipizid GPKD đã được đánh giá trong điều kiện lão hóa cấp tốc và thực tế trong 6 tháng Kết quả cho thấy viên thực nghiệm đạt yêu cầu chất lượng sau 6 tháng bảo quản Tuy nhiên, để có kết luận chính xác về tuổi thọ của thuốc, cần theo dõi độ ổn định trong thời gian dài hơn.
VỀ ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG VIÊN NÉN GLIPIZID GIẢI PHÓNG KÉO DÀI
4.4.1 Về đánh giá sinh khả dụng in vitro và so sánh với viên đối chiếu
Việc đánh giá tương đương hòa tan in vitro trong 3 môi trường hòa tan pH
Việc so sánh viên thử với viên đối chiếu có các chỉ số 1,2; 4,5 và pH 6,8 là điều kiện tiên quyết bắt buộc trước khi tiến hành đánh giá sinh khả dụng và tương đương sinh học Điều này là quan trọng vì sự tương đương trong hòa tan in vitro của viên thử có thể chỉ ra khả năng tương đương trong hòa tan in vivo.
Viên bao glipizid 10mg đã được thử nghiệm hòa tan trong ba môi trường pH 1,2; pH 4,5; và pH 6,8 với thiết bị cánh khuấy 100 vòng/phút ở nhiệt độ 37°C Kết quả cho thấy, viên glipizid 10mg có chỉ số f2 lớn hơn 50 so với viên đối chiếu Ozidia trong cả ba môi trường, chứng tỏ rằng viên bào chế này có khả năng giải phóng kéo dài tương đương với viên Ozidia Đây là cơ sở quan trọng để tiến hành nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng tiếp theo, nhằm xem xét khả năng giải phóng, hòa tan và hấp thu in vivo của viên glipizid.
Luận án tiến sĩ Dược học
165 giải phóng kéo dài có cùng một mô hình động học giải phóng với viên đối chiếu như kết quả đánh giá mô hình động học trước đó
4.4.2 Về xây dựng và thẩm định phương pháp định lượng glipizid trong huyết tương chó bằng phương pháp HPLC
Phương pháp thẩm định được thực hiện theo hướng dẫn của FDA, tập trung vào các tiêu chí như tính chọn lọc, đặc hiệu, giới hạn định lượng dưới, khoảng tuyến tính, độ đúng, độ chính xác và độ ổn định của mẫu trong việc định lượng dược chất trong dịch sinh học.
Kết quả khảo sát cho thấy phương pháp chiết lỏng – lỏng có nhiều ưu điểm như tạo ra mẫu sạch hơn, ít tạp chất và giảm sai số trong phân tích Dung môi chiết diethyl ether, với nhiệt độ bay hơi thấp và ít độc hại, giúp đảm bảo mẫu chiết được sạch Do đó, phương pháp chiết lỏng-lỏng sử dụng diethyl ether là lựa chọn tối ưu, được nhiều tác giả áp dụng trong xử lý mẫu huyết tương.
Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng các chất nội chuẩn như glimepizid, gliclazid, tolbutamid và carbamazepin có thể được sử dụng trong định lượng glipizid trong dịch sinh học Trong đó, tolbutamid được lựa chọn làm nội chuẩn do có độ ổn định cao và thời gian phân tích mẫu chỉ khoảng 15 phút, phù hợp cho nghiên cứu tương đương sinh học với số lượng mẫu lớn Điều kiện sắc ký được thiết lập với nhiệt độ cột 25°C, bước sóng 225 nm và lưu lượng dòng 1,0 ml/phút Pha động sử dụng acetonitril và đệm phosphat pH 3,5 với tỷ lệ 54:46, đảm bảo tách pic tốt và thời gian lưu hợp lý Phương pháp định lượng glipizid trong huyết tương chó đã được thẩm định và đạt yêu cầu về độ chọn lọc, độ chính xác, với giới hạn định lượng dưới là 50 ng/ml.
Luận án tiến sĩ Dược học
166 chó có tương quan tuyến tính với tỷ lệ diện tích pic GLI/TOL trong khoảng 50–
Nồng độ 5000 ng/ml của đường chuẩn cho thấy hệ số tương quan xấp xỉ bằng 1, với mẫu huyết tương ổn định trong và sau quá trình xử lý Kết quả này tương đồng với nghiên cứu của Ung Woo Bae, mặc dù giới hạn định lượng thấp hơn 25 ng/ml Phương trình hồi quy của phương pháp định lượng huyết tương được kiểm tra bằng T-test, cho thấy giá trị p đối với điểm cắt > 0,05 và độ dốc < 0,05 Kết quả thẩm định độ đúng và độ lặp lại của phương pháp đều đáp ứng yêu cầu theo hướng dẫn của FDA, cho phép sử dụng phương trình hồi quy không đi qua gốc tọa độ để tính toán nồng độ trong huyết tương.
4.4.3 Về đánh giá sinh khả dụng viên nén glipizid giải phóng kéo dài
4.4.3.1 Về thiết kế thí nghiệm, lựa chọn đối tượng thử và lựa chọn viên đối chiếu
Nghiên cứu SKD viên nén glipizid GPKD được thực hiện trên chó thí nghiệm với thiết kế chéo đôi, đơn liều, hai giai đoạn nhằm giảm thiểu biến thiên giữa các cá thể Chó được chia thành hai nhóm ngẫu nhiên, mỗi giai đoạn nhận chế phẩm thử hoặc chế phẩm đối chiếu, với thời gian giữa hai giai đoạn là 1 tuần để đảm bảo loại bỏ hoàn toàn thuốc từ giai đoạn trước Mẫu huyết tương của chó được phân tích ngay sau khi lấy mẫu theo quy trình và phương pháp định lượng đã được thẩm định, xác định nồng độ glipizid dựa vào đường chuẩn và thực hiện song song trong ngày Quá trình phân tích tuân thủ hướng dẫn của FDA về phân tích mẫu trong dịch sinh học Thuốc đối chiếu sử dụng là Ozidia 10mg, tên khác của Glucotrol XL, sản phẩm của Pfizer, được chọn làm thuốc đối chiếu trong nhiều nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng của các dạng bào chế GPKD chứa glipizid.
4.4.3.2 Về xác định thông số dược động học
Nghiên cứu cho thấy sự biến thiên nhỏ trong các thông số dược động học, chỉ ra rằng khả năng hấp thu glipizid giữa các cá thể có sự khác biệt không đáng kể Giá trị C max trung bình trong huyết tương của chó sau khi uống glipizid được ghi nhận.
Luận án tiến sĩ Dược học
Cmax của thuốc thử là 3595,4 ± 391,5 (ng/ml) và của thuốc ĐC là 3532,2 ± 584,2 (ng/ml) Sự dao động Cmax giữa nhóm chó uống thuốc thử (RSD = 15,3%) và nhóm chó uống thuốc ĐC (RSD = 12,2%) cho thấy mức độ ổn định tương đối trong cả hai nhóm.
Giá trị AUC khi uống thuốc thử là 34007,8 ± 2172,1 (ng.h/ml) và khi uống thuốc ĐC là 34812,6 ± 2559,1 (ng.h/ml), cho thấy sự dao động nhỏ trong diện tích dưới đường cong từ 0 đến 24 giờ RSD của AUC 0-24h cho nhóm chó uống thuốc thử và thuốc ĐC lần lượt là 6,4% và 7,4% Thời gian đạt nồng độ cực đại trong huyết tương (T max) trung bình cho thuốc thử là 9,3 ± 1,1 giờ và cho thuốc ĐC là 10,7 ± 1,6 giờ T max của thuốc thử dao động từ 7,9 đến 10,1 giờ, trong khi của thuốc ĐC dao động từ 9,1 đến 12,3 giờ Các thông số DĐH cho thấy các chó trong thí nghiệm tương đối đồng đều, với sự dao động nhỏ giữa các cá thể.
4.4.3.3 Về phân tích thống kê và so sánh sinh khả dụng của viên nén glipizid giải phóng kéo dài với viên đối chiếu Đề tài sử dụng phần mềm Phoenix WinNonlin 8.0 để xác định các thông số DĐH của viên nén glipizid 10mg GPKD và thuốc đối chứng theo qui định của FDA và DĐVN IV và so sánh giá trị MRT, C max và AUC 0-∞ và xác định khoảng tin cậy 90 % (CI) cho tỷ lệ thuốc thử so với thuốc chứng, tính trên số liệu đã chuyển logarit sẽ cho kết quả nhanh, chính xác cao hơn so với phương pháp tính thủ công, thuận tiện cho quá trình nghiên cứu và giúp đơn giản hóa việc xử lý và phân tích số liệu
Kết quả phân tích phương sai cho thấy không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê về C max giữa các trình tự thử, chế phẩm thử và các chó thí nghiệm (p > 0,05) Khoảng tin cậy 90% của tỷ lệ C max giữa hai mẫu T và R nằm trong giới hạn 80 – 125.
% (92,02%; 114,12%) Điều này có nghĩa là hai giá trị C max tương đương nhau theo qui định của DĐVN IV (với độ mạnh của test là 0,9276)
Kết quả phân tích phương sai cho thấy không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê giữa các chế phẩm thử (mẫu thử và đối chứng) và các chó thí nghiệm đối với tỷ số ln[AUC 0-∞] (p> 0,05) Tuy nhiên, sự khác nhau giữa các giai đoạn thử thuốc lại có ảnh hưởng đáng kể đến AUC 0-∞.
Luận án tiến sĩ Dược học
Kết quả thống kê cho thấy tỷ lệ AUC 0-∞ giữa hai mẫu T và R có khoảng tin cậy 90% nằm trong giới hạn 80 – 125 % (89,32%; 102,39%), với độ mạnh của test đạt 0,9985 Điều này chứng tỏ hai giá trị AUC 0-∞ là tương đương theo quy định của DĐVN IV.
Kết quả phân tích phương sai cho thấy sự khác biệt giữa các chó thí nghiệm (CTN) không có ý nghĩa thống kê (p>0,05), trong khi sự khác biệt giữa các loại thuốc, trình tự thử và giai đoạn thử thuốc có ý nghĩa thống kê (p