Luận án tiến sĩ dược học nghiên cứu bào chế và bước đầu đánh giá tương đương sinh học của viên nén cefaclor 375mg giải phóng kéo dài

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y TRẦN XUÂN TRÍ NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VÀ BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC CỦA VIÊN NÉN CEFACLOR 375MG GIẢI PHÓNG KÉO DÀI Chuyên ngành: Công nghệ dược phẩm Bào chế thuốc Mã số: 62 72 04 02 LUẬNÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS Bùi Tùng Hiệp PGS.TS Nguyễn Minh Chính HÀ NỘI - 2017 LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới: PGS.TS Bùi Tùng Hiệp PGS.TS Nguyễn Minh Chính Những người thầy tận tình hướng dẫn hết lịng giúp đỡ tơi hồn thành luận án Tơi xin chân thành cảm ơnGS.TS Đỗ Quyết (Giám đốc Học Viện Quân Y) cho phép tạo điều kiện cho học tập thực luận án Tơi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Nguyễn Minh Chính,PGS.TS Trịnh Nam Trung, TS Nguyễn Văn Bạch đồng chí giảng viên, kỹ thuật viên, cán giáo vụ Trung tâm Đào tạo-Nghiên cứu Dược nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành luận án Tơi xin chân thành cảm ơn PGS TS.Trần Hải Anh, TS Nghiêm Danh Bảy, TS Nguyễn Văn Tuấn chuyên viên phòng Đào tạo sau đại học quan tâm giúp đỡ q trình học tập nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn TGĐ Kim Jong Sungcùng toàn thể nhân viên Công ty TNHH dược phẩm SHINPOONG DAEWOO – TP.BIÊN HỊA – Đồng Nai nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành luận án Tôi xin chân thành cảm ơn GĐ BSCKII Trần Văn Khanh tập thể Bác sĩ, Y sĩ, CN… Bệnh viện quận - TP.HCM nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành luận án Tơi xin chân thành cảm ơn Viện trưởng Nguyễn Ngọc Vinh toàn thể nhân viên Viện Kiểm nghiệm thuốc Tp.HCM – TP.HCM nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành luận án Tơi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Hồng Minh Châu cán giảng viên, kỹ thuật viên Bộ môn Công Nghệ Dược (Trường Đại học Y Dược TP HCM) nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành luận án Cuối cùng, tơi xin cảm ơn gia đình, bạn bè, đồng nghiệp ủng hộ động viên trình thực luận án Quảng ngãi, ngày 03 tháng 02 năm 2014 Nghiên cứu sinh Trần Xn Trí LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận án trung thực, chưa cơng bố cơng trình không thuộc đề tài nghiên cứu khoa học khác Tác giả TRẦN XUÂN TRÍ MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cảm ơn Lời cam đoan Mục lục Danh mục chữ viết tắt luận án Danh mục bảng Danh mục hình ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 THUỐC GIẢI PHĨNG KÉO DÀI 1.1.1.Hệ thống trị liệu giải phóng kéo dài 1.1.2 Ưu nhược điểm thuốc giải thích kéo dài 1.1.3 Cơ chế giải phóng dược chất từ hệ cốt thân nước 1.1.4 Các tá dược dùng cho viên giải phóng kéo dài 1.1.5 Một số yếu tố ảnh hưởng đến tốc độ giải phóng dược chất hệ cốt thân nước 1.2 CEFACLOR VÀ BÀO CHẾ VIÊN CEFACLOR GIẢI PHÓNG KÉO DÀI 11 1.2.1 Cefaclor 11 1.2.2 Các đặc tính kỹ thuật bào chế viên cefaclor giải phóng kéo dài 21 1.2.3.Một số nghiên cứu dạng bào chế giải phóng kéo dài chứa Cefaclor 1.3 ĐỘ ỔN ĐỊNH VÀ TUỔI THỌ CỦA THUỐC 23 27 1.3.1 Độ ổn định thuốc 27 1.3.2 Điều kiện nghiên cứu độ ổn định thuốc 29 1.3.3 Tuổi thọ thuốc 31 1.4 SINH KHẢ DỤNG VÀ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC 1.4.1 Khái niệm sinh khả dụng tương đương sinh học 32 32 1.4.2 Phương pháp đánh giá sinh khả dụng 1.4.3 Đánh giá tương đương sinh học in vitro 33 34 1.4.4 Đánh giá tương đương sinh học in vivo 35 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ VÀ ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 39 39 2.1.1 Nguyên liệu 39 2.1.2 Thiết bị dụng cụ 40 2.1.3 Thuốc đối chiếu thuốc thử 41 2.1.4 Người tình nguyện khỏe mạnh tham gia nghiên cứu 41 2.1.5 Địa điểm thời gian nghiên cứu 41 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1 Phương pháp nghiên cứu bào chế 41 41 2.2.2.Đề xuất tiêu chuẩn sở nghiên cứu độ ổn định viên nén cefaclor 375 mg giải phóng kéo dài 49 2.2.3 Nghiên cứu đánh giá tương đương sinh học 51 CHƯƠNG3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 63 3.1 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ 63 3.1.1 Thẩm định phương pháp định lượng hoạt chất thành phẩm 63 3.1.2 Khảo sát tiêu viên đối chiếu 67 3.1.3 Bào chế viên cefaclorgiải phóng kéo dài 69 3.1.4 Bao phim viên nhân giải phóng kéo dài chế phẩm cefaclor 375 mg 84 3.2 ĐỀ XUẤT TIÊU CHUẨN CƠ SỞ VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA VIÊN NÉN CEFACLOR 375 MG GIẢI PHÓNG KÉO DÀI 86 3.2.1 Nghiên cứu đề xuất tiêu chuẩn sở 86 3.2.2 Kết thẩm định 89 3.2.3 Độ ổn định tuổi thọ thuốc 92 3.3 ĐÁNH GIÁ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HOC 94 3.3.1 Thẩm định phương pháp định lượng hoạt chất huyết tương 94 3.3.2 Tương đương sinh học in vitro 107 3.3.3 Tương đương sinh học in vivo CHƯƠNG 4.BÀN LUẬN 107 116 4.1 KỸ THUẬT BÀO CHẾ 116 4.1.1 Thẩm định phương pháp định lượng cefaclor chế phẩm 116 4.1.2 Bào chế viên nén cefaclor 375mggiải phóng kéo dài 117 4.1.3 Kiểm nghiệm thành phẩm 123 4.2 ĐỀ XUẤT TIÊU CHUẨN CƠ SỞ VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA VIÊN NÉN CEFACLOR 375 MG GIẢI PHÓNG KÉO DÀI 124 4.2.1 Tiêu chuẩn sở viên nén cefaclor 375 mg giải phóng kéo dài 124 4.2.2 Độ ổn định chế phẩm 124 4.3 TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC 126 4.3.1 Thẩm địnhphương pháp định lượng cefaclor huyết tương 126 4.3.2 Tương đương sinh học in vitro 128 4.3.3 Tương đương sinh học in vivo 129 KẾT LUẬN 131 KIẾN NGHỊ 133 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CÔNG BỐ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ, KÝ HIỆU VIẾT TẮT TRONG LUẬN ÁN TT Phần viết tắt ACN Acetonitril Phần viết đầy đủ AUC Area Under Curve ( diện tích đường cong) BE Biological Equivalence( tương đương sinh học ) BP British Pharmacopoeia ( dược điển Anh ) Cmax Maximum Plasma Concentration ( nồng độ cực đại máu ) CEF Cefaclor CV Coefficient of Variation ( hệ số phân tán ) DC Dược chất 10 dd Dung dịch 11 DĐH Dược động học 12 DĐVN Dược điển Việt Nam 13 ĐT Đối tượng 14 FDA Food and Drug Administration ( quan quản lý thuốc thực phẩm ) 15 GMP Good manufacturing practice (thực hành sản xuất tốt) 16 GPKD Giải phóng kéo dài 17 HPLC High Performance Liquid Chromatography ( sắc ký lỏng hiệu cao ) 18 HPMC Hydroxypropyl metylcellulose 19 HQC Hight Quality Control sample (mẫu kiểm chứng giới hạn ) 20 IS Internal Standard ( chuẩn nội ) 21 KLTB Khối lượng trung bình TT 22 Phần viết tắt LLOQ Phần viết đầy đủ Lower Limit Of Quantification ( giới hạn định lượng 23 LQC thấp ) Lower Quality Control sample (mẫu kiểm chứng giới hạn ) 24 MEC Minimum Effective Concentration (nồng độ tối thiểu có hiệu quả) 25 MTC Minimum Toxic Concentration (nồng độ tối thiểu có gây ngộ độc) 26 MQC Middle Quality Control sample (mẫu kiểm chứng giới hạn ) 27 MRT Mean Retention Time ( thời gian lưu trung bình ) 28 NTN Người tình nguyện 29 PEG Polyethylenglycol 30 PPĐL Phương pháp định lượng 31 PTHC Phóng thích hoạt chất 32 GPKD Giải phóng kéo dài 33 QC Quality Control sample (mẫu kiểm chứng) 34 RH Relative Humidity ( độ ẩm tương đối ) 35 RP Reverse Phase ( pha đảo ) 36 RSD Relative Standard Deviation ( độ lệch chuẩn tương đối ) 37 SD Standard Deviation ( độ lệch chuẩn ) 38 SDH Sinh dược học 39 SKD Sinh khả dụng ( Biological Availability ) 40 TB Trung bình 41 TBAH Tetrabutyl ammoniumhydroxide TT Phần viết tắt 42 TD Tá dược 43 TDKD Tác dụng kéo dài 44 TĐSH Tương đương sinh học Phần viết đầy đủ 45 46 Tlag Tmax Lag time (thời gian tiềm tàng) Time point of maximum plasma concentration (Thời điểm đạt nồng độ cực đại) 47 TT Thứ tự 48 USP United States Pharmacopoeia (dược điển Mỹ) 49 UV Ultraviolet ( tử ngoại ) 50 WHO World Health Organization (Tổ chức Y tế giới) 51 SW Standard Work (chuẩn làm việc ) Phụ Lục 15: Biểu mẫu cam kết tham gia nghiên cứu NTN CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập- Tự do- Hạnh phúc - BẢN CAM KẾT TÌNH NGUYỆN THAM GIA NGHIÊN CỨU Tên tơi là: Tuổi: Giới: Nghề nghiệp: Địa liên hệ: Đồng ý tình nguyện tham gia đề tài: “Nghiên cứu bào chế bước đầu đánh giá tương đương sinh học viên nén cefaclor 375mg giải phóng kéo dài” Sau thông báo việ c tuyển người tham gia nghiên cứu Bệnh Viện quận 2, TP.HCM, thông báo hiểu mục tiêu, nội dung nghiên cứu, quyền lợi trách nhiệm tham gia nghiêm cứu sau: Mục tiêu nghiên cứu: - Xây dựng qui trình đánh giá tương đương sinh học viên nén phóng thích kéo dài hoạt chất Cefaclor 375 mg người tình nguyện Việt Nam - Đánh giá tương đương sinh học chế phẩm cefaclor sản xuất nước so với chế phẩm ngoại nhập - Bổ xung liệu cho dự thảo qui chế đánh giá TĐSH Việt nam Nội dung nghiên cứu: 2.1 Thông tin thuốc cefaclor Cefaclor kháng sinh thuộc nhóm cephalosporin có tác dụng diệt khuẩ n trình ức chế thành tế bào.Các thử nghiệm in vitro chứng minh cefaclor nhạy cảm với phần lớn vi khuẩn sau : - Vi khuẩn hiếu khí, gram dương: Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes - Vi khuẩn hiếu khí, gram âm : Cirobacter diveresus, Eschrichia coli, Haemophilus influenzae, … - Vi khuẩn kỵ khí : Peptococcus niger, Peptostreptococcus sp, Propiopnibacteria acnes Chỉ định:Cefaclorđược định cho nhiễm trùng sau: Nhiễm trùng đường hô hấp, viêm tai giữa, nhiễm trùng da mô mềm, nhiễm trùng đường tiết niệu bao gồm viêm bể thận viêm bàng quang, viêm xoang Chống định:Không dùng cefaclor thời kỳ mang thai, trừ thật cần Thận trọng: - Khơng dùng có tiền sử chống phản vệ với thuốc - Thận trọng tiền sử mẫn cảm với cefaclor, cephalosporin, penicilin - Ở bệnh nhân suy thận nặng - Ở người lớn: liều thông thường 375mg, lần ngày Đối với nhiễm trùng trầm trọng viêm phổi, hay nhiễm trùng gây vi khuẩn nhạy cảm tăng liều gấp đơi - Ở trẻ em: liều thông thường 20mg/kg/ngày chia làm lần cách Đối với nhiễm trùng trầm trọng hơn, viêm tai nhiễm trùng cho vi khuẩn nhạy cảm tăng liều gấp đôi Tương tác thuốc: - Đã có báo cáo tăng tác dụng chống đơng phối hợp cefaclor với thuốc uống chống đông - Cũng với kháng sinh ß –lactam khác, thải trừ cefaclor qua ống thận bị chậm lại phối hợp với probenecid 2.2 Tình hình sử dụng thuốc Việt nam: Cefaclor dùng điều trị VN hàng chục năm qua Theo dõi trình sử dụng, chưa thấy có phản ứng phụ nghiêm trọng thông báo Đối tượng phương pháp nghiên cứu 3.l Đối tượng nghiên cứu - Mẫu thử: + Viên nghiên cứu chứa hoạt chất cefaclor 375 mg (CEF) bào chế PTKD Hàm lượng trung bình 375,18 mg/viên + Thuốc đối chứng: Viên Ceclor® SR số lơ 070141, hạn dùng 21/09/2013, hãng sản xuất Eli Lilly Suzhou Pharmaceutical Co, Ltđ.Hàm lượng trung bình 375,43 mg/viên Mẫu thử kiểm tra đạt tiêu chuẩn chất lượng nhà sản xuất - Người tình nguyện: +Tiêu chuẩn Nam giới khỏe mạnh tuổi 18-45, kiểm tổng quát tiêu: cân nặng, chiều cao, tim mạch, huyết áp, nhịp thở Chỉ số tương quan cân nặng – chiều cao nằm 80-120%;; tiền sử không dị ứng với cefaclor, bệnh dày, khơng nghiện thuốc lá, khơng uống rượu, không sử dụng chất gây nghiện, không mắc lệch mãn tính huyết áp cao, đái đường, bệnh tin mạch, suy giảm chức thận, bệnh di truyền, bệnh lao, không nhiễm HIV/AIDS, HgsAg; không mắt bệnh nhiễm trùng Trong vòng tuần trước tham gia vào thử nghiệm, người tình nguyện phải đảm bảo không sử dụng loại thuốc + Các xét nghiệm: hồng cầu, bạch cầu, đường huyết, xét nghiệm chức gan, thận Chỉ người đạt tiêu chuẩn nêu đuợc tham gia nghiên cứu NTN thơng tinh đầy đủ đến q trình nghiên cứu; mục đích nghiên cứu; tác dụng dược lý thuốc; rủi ro xảy sử dựng thuốc, lấy máu; quyền lợi trách nhiệm tham gia nghiên cứu NTN tự viết vào Bản cam kết tinh nguyện tham gia nghiên cứu theo mẫu Hội đồng Khoa học Hội đồng đạo đức thông qua ký vào cam kết sở nghiên cứu NTN với có mặt nguời làm chứng 3.2 Phương pháp nghiên cứu - Nghiên cứu thăm dò: Tiến hành khảo sát người tình nguyện, cho uống thuốc lấy mẫu máu để thăm dò khoảng nồng độ thuốc máu, thời gian đạt nồng độ tối đa (Tmax) để có thêm thơng tin cho việc thiết kế thời điểm lấy mẫu - Thiết kế nghiên cứu: Thí nghiệm thức tiến hành tiên NTN khoẻ mạnh Tiến hành ki ểm tra sức khoẻ theo tiêu nêu NTN chia làm nhóm, uống thuốc thử thuốc chứng Sau nghỉ tuần để đảm bảo thải trừ hết thuốc Giai đoạn lặp lại giai đoạn 1nhưng đổi thuốc nhóm Thuốc đượ c mã hố, NTN khơng biết uống loạ i thuốc số thuốc qui định Lấy máu trước thời thềm sau dùng thuốc để phân tách xác đị nh nồng độ thuốc máu Các kết xử lý tính theo phương pháp thống kê để đánh giá mức độ tương đương theo hướng dẫn đánh giá tương đương sinh học qui định - Cho uống thuốc lấy mẫu: NTN đuợc uống thuốc viên (thuốc thử thuôc chứng) 375mg/lần/ngày vào buổi sáng Bữa tối trước ngày dùng thuốc, NTN ăn nhẹ trước đêm; nước uống theo nhu cầu Ngày dùng thuốc, ngườ i tình nguyện khơng ăn sáng Kiểm tra l ại sức khỏe để đảm bảo tình trạng sức khỏe tốt Mỗi NTN uống viên thuốc thử thuốc đối chứng với 200ml nước, duới giám sát bác sỹ người nghiên cứu.Trong vòng sau uống thuốc, dùng nước tinh khiết Sau giờ, NTN ăn nhẹ sau ăn bữa theo phần quy định suốt thời gian tiến hành lấy máu,NTN không uống sữa, nước chè, cà phê, coca loại nước tăng lực Dùng kim luồn tĩnh mạch vô khuẩn đặt vào tính mạch chân tay NTN cố định cho khơng cản trở hoạt động bình thường chân tay Sử dụng kết nghiên cứu thăm dị NTN chọn tường trình lấy mẫu thích hợp đảm bảo tối thiểu lấy mẫu trước cực đại 6mẫu sau cực đại Mỗi lần lấy khoả n ml máu cho vào ống nghi ệm đánh số chứa s ẵn lượng Heparin (5UI/ml) thích hợp, sau 15 – 20 phút, ly tâm lấy riêng huyết tương Bảo quản mẫu huyết tuơng tủ đá có nhiệt độ - 25oC, thời gian bảo quản tùy thuộc vào kết khảo sát độ ổn định mẫu thử huyết tương Cho uống thuốc l mẫu máu thực phòng lấy mẫu đặt Bệnh Việ n Phòng lấy mẫu trang bị đầy đủ giường, tủ thuốc phương tiện c ấp cứu Bác sĩ y tá Khoa Chống độc, Bệnh viện có cộng tác nghiên cứu tr ực theo dõi, giám sát, chăm sóc y t ế cho ngườ i tình nguyện suốt q trình lấy mẫu Nếu có phản ứng bất lợi, sốc phản vệ xử lý sơ cứu chỗ Các biện pháp theo dõi xử trí: Trường hợ p có phản ứ ng bất l ợi, sốc phản vệ xử lý sơ cứu chỗ theo phác đồ hướng dẫn Bộ y tế: cho thở Oxy, tiêm epinephrin steroid tĩnh mạch Trường hợp nặng gửi tới Khoa chống độc bệnh viện (hoặc gọi cấp cứu 115) Trách nhiệm quyền lợi NTN: Quyền lợi: Khi tham gia nghiên cứu, NTN trả thù lao cho việc tham gia nghiên cứu với số tiền 40.000 VNĐ/ lần lấy máu nhận kết thúc phần lấy mẫu Trườ ng hợp NTN tự ý ngừng tham gia nghiên cứu lý cá nhân mà khơng phả i tác dụng phụ thuốc hoặ c ý ki ến ngườ i nghiên cứu s ẽ không hưởng thù lao nghiên cứu Trường hợp NTN ngừng tham gia nghiên cứu có lý do: tâm lý, kết nghiên c ứu tác dụng phụ thuốc hưởng thù lao tính theo thời gian tham gia nghiên cứu NTN yêu c ầu xử trí phản ứng bất lợi xảy trình nghiên cứu Những trường hợ p nặ ng điều trị bệnh viện, chi phí cho điều trị quan chủ trì nghiên cứu chi trả theo viện phí Các thông tin NTN kế t xét nghiệm, nghiên cứu gi ữ bí mật hồ sơ nghiên cứu Tên, địa chỉ, hình ảnh NTN s ẽ không công bố báo cáo kết quả, báo, tạp chí khơng đồng ý NTN Trách nhiệm: Tình nguyện tham gia nghiên cứu tuân thủ yêu cầu bên nghiên cứu Cung c ấp thơng tin xác bệnh sử, tình trạng sức khoẻ cho nhóm nghiên cứu Tình nguyện ký vào Bản cam kết tình nguyện tham gia nghiên cứu Trong trường hợ p khơng muốn tiếp tục tham gia nghiên cứu, phải có thông báo trước văn cho bên nghiên cứu CAM KẾT Tôi đọc kỹ thông tin thấy đủ tiêu chẩn để tham gia Tơi xin tuân thủ tuyệt đối mọiqui định nhóm nghiên cứu Tôi ký vào cam kết với ý thức hồn tồn tự nguyện Tơi: đồng ý khơng đồng ý ghi tên thật vào báo cáo nghiên cứu Ngày: Người tình nguyện Người làm chứng (Ký ghi rõ họ, tên) (Không cán nghiên cứu) Chúng thông báo đầy đủ thông tin cho NTN, đồng ý tiếp nhận tham gia vào nghiên cứu Chúng cam kết thực điều nêu tuân thử theo qui chế đạo đức nghiên cứu y sinh Ngày: Thay mặt nhóm nghiên cứu (Ký ghi rõ họ, tên) Mẫu Bản cam kết tình nguyện tham gia nghiên thông qua phiên họp Hội đồng đạo đức Bệnh Viện Thay mặt hội đồng đạo đức Chủ tịch (ký tên & đóng dấu ) Phụ Lục 16:Kết sử lý TĐSH phần mềm Equitest Viện kiểm nghiệm thuốc TP.HCM