Luận án tiến sĩ dược học nghiên cứu bào chế và sinh khả dụng viên nén metronidazol giải phóng tại đại tràng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THU QUỲNH NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VÀ SINH KHẢ DỤNG VIÊN NÉN METRONIDAZOL GIẢI PHÓNG TẠI ĐẠI TRÀNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI, NĂM 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THU QUỲNH NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VÀ SINH KHẢ DỤNG VIÊN NÉN METRONIDAZOL GIẢI PHÓNG TẠI ĐẠI TRÀNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH:CÔNG NGHỆ DƯỢC PHẨM VÀ BÀO CHẾ THUỐC MÃ SỐ: 62720402 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Thanh Hải GS TS Võ Xuân Minh HÀ NỘI, NĂM 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết luận án trung thực chưa công bố công trình Nguyễn Thu Quỳnh LỜI CẢM ƠN Để hồn thành Luận án này, nhận giúp đỡ tận tình có hiệu nhiều cá nhân tập thể, Thầy Cô giáo, đồng nghiệp, bạn bè gia đình Cho phép tơi bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: PGS TS Nguyễn Thanh Hải GS TS Võ Xuân Minh người Thầy trực tiếp hướng dẫn, hết lòng giúp đỡ động viên tơi tâm hồn thành luận án PGS TS Phạm Thị Minh Huệ toàn thể Thầy Cô anh chị em kỹ thuật viên Bộ môn Bào chế- Trường Đại học Dược Hà Nội cung cấp cho kiến thức quý báu, tạo điều kiện thuận lợi động viên trình nghiên cứu thực luận án Các Thầy Cơ anh chị em Bộ mơn Phân tích, Bộ môn Dược lý- Trường Đại học Dược Hà Nội; Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung Ương; Viện Công nghệ Dược phẩm Quốc gia; Bộ mơn Hóa Dược, Bộ mơn Dược lý- Trường Đại Học Y Dược Thái Nguyên tạo điều kiện giúp đỡ tơi hồn thành luận án Ban Giám Hiệu, Phòng Sau đại học- Trường Đại học Dược Hà Nội quan tâm, giúp đỡ trình học tập nghiên cứu Trường Ban Giám Hiệu- Trường Đại học Y Dược Thái Nguyên động viên tạo điều kiện công việc để tơi hồn thành luận án Tơi xin chân thành cảm ơn em học viên Cao học, sinh viên thực số nội dung luận án Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới Gia đình người thân chia sẻ, động viên tơi có đủ nghị lực, tâm hoàn thành luận án Hà Nội, ngày 20 tháng năm 2017 Nguyễn Thu Quỳnh MỤC LỤC DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ…………………………………………………………………… CHƯƠNG TỔNG QUAN 1 METRONIDAZOL………………………………………………………… 1.1.1 Cấu trúc hóa học……………………………………………………… 1.1.2 Tính chất lý hóa 1.1.3 Các phương pháp định lượng metronidazol 1.1.4 Dược động học 1.1.5 Tác dụng chế 1.1.6 Chỉ định 1.1.7 Tương tác thuốc 1.1.8 Tác dụng không mong muốn 1.1.9 Chống định 1.1.10 Các dạng bào chế metronidazol 1.2 THUỐC GIẢI PHÓNG TẠI ĐẠI TRÀNG 1.2.1 Đặc điểm sinh lý đại tràng liên quan đến dạng thuốc 1.2.2 Dạng thuốc giải phóng đại tràng 10 1.2.3 Phương pháp bào chế dạng thuốc giải phóng đại tràng 15 1.2.4 Phương pháp đánh giá dạng viên giải phóng đại tràng 29 1.3 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU VỀ VIÊN NÉN METRONIDAZOL GIẢI PHÓNG TẠI ĐẠI TRÀNG 35 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 39 2.1 NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ VÀ NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 39 2.1.1 Nguyên liệu 39 2.1.2 Thiết bị dụng cụ 40 2.1.3 Động vật thí nghiệm 41 2.1.4 Địa điểm thời gian nghiên cứu 41 2.1.5 Nội dung nghiên cứu 41 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 42 2.2.1 Phương pháp bào chế 42 2.2.2 Phương pháp đánh giá tiêu chuẩn chất lượng 46 2.2.3 Phương pháp đánh giá in vivo viên nén metronidazol giải phóng đại tràng chó thí nghiệm 54 2.2.4 Phương pháp xử lý số liệu 61 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 62 3.1 KẾT QUẢ XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG METRONIDAZOL BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ TỬ NGOẠI VÀ PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 62 3.1.1 Phương pháp quang phổ tử ngoại 62 3.1.2 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 64 3.2 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG CÔNG THỨC 66 3.2.1 Kết xây dựng công thức viên metronidazol giải phóng đại tràng phương pháp bao dập 66 3.2.2 Kết xây dựng công thức viên metronidazol giải phóng đại tràng phương pháp bao bồi 80 3.2.3 Bao màng bảo vệ 105 3.2.4 So sánh phương pháp bao dập bao bồi 105 3.3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH BÀO CHẾ VIÊN NÉN METRONIDAZOL GIẢI PHÓNG TẠI ĐẠI TRÀNG Ở QUI MƠ 5000 VIÊN 107 3.3.1 Mơ tả quy trình sản xuất viên nén metronidazol giải phóng đại tràng phương pháp bao dập 107 3.3.2 Thẩm định quy trình sản xuất viên nén metronidazol giải phóng đại tràng 3.4 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ VÀ ĐỘ ỔN 109 ĐỊNH VIÊN NÉN METRONIDAZOL GIẢI PHÓNG TẠI ĐẠI TRÀNG 119 3.4.1 Kết nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn sở 119 3.4.2 Đánh giá độ ổn định 120 3.5 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ IN VIVO 121 3.5.1 Xác định vị trí viên metronidazol giải phóng đại tràng đường tiêu hóa chó thí nghiệm 121 3.5.2 Định lượng metronidazol giải phóng dịch đại tràng 123 3.5.3 Định lượng metronidazol huyết tương chó thí nghiệm 129 CHƯƠNG BÀN LUẬN 138 4.1 XÂY DỰNG CÔNG THỨC BÀO CHẾ VIÊN METRONIDAZOL GIẢI PHÓNG TẠI ĐẠI TRÀNG 138 4.1.1 Viên nhân 138 4.1.2 Xây dựng cơng thức lớp bao kiểm sốt giải phóng dược chất đại tràng 138 4.2 QUI TRÌNH BÀO CHẾ 146 4.2.1 Quy mơ phịng thí nghiệm 146 4.2.2 Nâng quy mô 147 4.3 PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ IN VITRO VÀ IN VIVO 149 4.3.1 Đánh giá giải phóng in vitro 149 4.3.2 Đánh giá in vivo 151 4.4 ĐÁNH GIÁ ĐỘ ỔN ĐỊNH 155 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 156 KẾT LUẬN 156 ĐỀ XUẤT 158 DANH SÁCH CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC PHỤ LỤC PHU LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT AC Aceclofenac ACN Acetonitril CAP Cellulose acetat phthalat CAR Carbamazepin CD Cyclodextrin DCC Dicyclohexyl carbodiimit DMSO Dimetyl sulfoxyd ĐT Đại tràng EC Ethyl acetat Eu Eudragit FDA Cơ quan quản lý thực phẩm dược phẩm Mỹ (Food Drug Administration) GPTĐT Giải phóng đại tràng HL Hàm lượng HPMC Hydroxy propyl methyl cellulose HPMCAS Hydroxy propyl methyl cellulose acetat succinat HPMCP Hydroxy propyl methyl cellulose phthalat HQC Mẫu kiểm tra nồng độ cao (High Quality Control) IPA Alcol isopropylic KL Khối lượng KLRBK Khối lượng riêng biểu kiến LLOQ Giới hạn định lượng (Lower Limit Of Quantification) LQC Mẫu kiểm tra nồng độ thấp (Low Quality Control) MCC Microcrystalline cellulose MeOH Methanol MgS Magnesi stearat MQC Mẫu kiểm tra nồng độ trung bình (Midium Quality Control) MTZ Metronidazol PEG 400 Polyethylen glycol 400 PVAP Polyvinylacetat phthalat QC Mẫu kiểm soát chất lượng (Quality Control) SKD Sinh khả dụng SSG Sodium starch glycolat TD Tá dược TEA TEC Triethylamin Triethylcitrat Tlag Thời gian tiềm tàng WHO Tổ chức Y tế Thế Giới (World Health Organization) DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Một số biệt dược chứa metronidazol Bảng 1.2 Thuốc giải phóng đại tràng bào chế kỹ thuật bao màng mỏng 25 Bảng 1.3 Mơ hình thử giải phóng in vitro dựa sở Tlag- pH 30 Bảng 1.4 Mơ hình thử giải phóng in vitro dựa sở Tlag- pH- vi sinh vật đại tràng 31 Bảng 1.5 Mơ hình thử giải phóng in vitro sử dụng Tlag- pH- enzym đại tràng 32 Bảng 2.1 Các nguyên liệu hóa chất sử dụng nghiên cứu 39 Bảng 2.2 Thành phần dịch bao lót 44 Bảng 2.3 Thành phần bột bao dịch phun 45 Bảng 2.4 Một số mơ hình động học giải phóng với Tlag 52 Bảng 3.1 Độ hấp thụ dung dịch MTZ môi trường HCl pH 1,2 đệm phosphat pH 7,4 62 Bảng 3.2 Độ hấp thụ dung dịch MTZ môi trường đệm phosphat pH 6,8 có enzyme Pectinex ultra SP-L (λ= 320 nm) 63 Bảng 3.3 Độ hấp thụ dung dịch MTZ mơi trường đệm phosphat pH 6,8 có enzym Pectinex ultra SP- L (λ= 378 nm) 64 Bảng 3.4 Các thông số trình sắc ký 64 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp 65 Bảng 3.6 Kết khảo sát tính phương pháp 66 Bảng 3.7 Cơng thức viên nhân với tá dược dính khác 67 Bảng 3.8 Tỷ lệ (%) MTZ giải phóng mẫu viên thay đổi tá dược dính (n=6, TB±SD) 67 Bảng 3.9 Công thức viên nhân với tá dược rã khác 68 Bảng 3.10 Thành phần viên nhân thay đổi tỷ lệ tá dược trơn 69 Bảng 3.11 Một số tiêu chất lượng viên nhân 70 Bảng 3.12 Tlag viên có lớp bao pectin 104 đơn pectin 104-HPMC K4M 71 Bảng 3.13 Tỷ lệ % metronidazol giải phóng từ mẫu viên bao pectin 104 đơn (n = 6; TB ± SD) 71 Bảng 3.14 Tỷ lệ % metronidazol giải phóng từ mẫu viên bao pectin 104 HPMC K4M (n = 6; TB ± SD) 71 1.3.4 Độ hòa tan Lượng metronidazol (C6H9N3O3) hòa tan so với lượng ghi nhãn phải đạt: - Giai đoạn pH 1,2: Sau giờ: Không 10% - Giai đoạn đệm phosphat pH 7,4: Sau : Không 10% (Tổng phần trăm metronidazol giải phóng mơi trường ≤10% ) - Giai đoạn đệm phosphat pH 6,8 có enzym Pectinex: Sau : Không 75% (Tổng phần trăm dược chất giải phóng mơi trường pH 6,8 giai đoạn giai đoạn đệm phosphat pH 7,4 ≥ 75%) Sau giờ: Không 85% (Tổng phần trăm dược chất giải phóng mơi trường pH 6,8 giai đoạn giai đoạn đệm phosphat pH 7,4 ≥ 85%) 1.3.5 Định lượng Hàm lượng metronidazol (C6H9N3O3) viên phải đạt từ 95,0 % đến 105,0 % so với lượng ghi nhãn, tính theo khối lượng trung bình viên PHƯƠNG PHÁP THỬ 2.1 Tính chất Kiểm tra cảm quan, chế phẩm phải đạt yêu cầu nêu 2.2 Định tính 2.2.1 Thuốc thử: Theo DĐVN IV - Methanol - Nước tinh khiết 2.2.2 Cách thử: Cân lượng bột viên vào bình định mức 100ml, thêm khoảng 50 ml methanol (TT), lắc máy lắc 30 phút, pha loãng methanol (TT) vừa đủ đến vạch Để yên dung dịch cho tá dược lắng xuống Hút ml lớp dung dịch cho vào bình định mức 100 ml, pha lỗng pha động đến thể tích, trộn lọc qua màng lọc 0,45µm Tiêm 10µl vào cột HPLC (điều kiện mục 2.5) Thời gian lưu metronidazol phải trùng với thời gian lưu dung dịch chuẩn sắc ký đồ 2.3 Độ đồng khối lượng 185 Cân riêng biệt 20 viên lấy ngẫu nhiên, tính khối lượng trung bình Khơng có q hai viên có khối lượng nằm ngồi khoảng khối lượng trung bình ± 5% khơng có viên có khối lượng vượt gấp đơi khối lượng trung bình ± 5% 2.4 Độ hòa tan 2.4.1 Thuốc thử - Dung dịch acid hydrocloric 0,1N - Dung dịch kali dihydrophosphat 0,2 M - Dung dịch natri hydroxyd 0,1 M - Dinatri hydrophosphat - Enzym Pectinex 2.4.2 Cách thử Giai đoạn pH 1,2: - Thiết bị: Kiểu cánh khuấy - Môi trường hòa tan: 900 ml dung dịch HCl pH 1.2 - Tốc độ quay: 100 vòng/phút - Nhiệt độ: 37±0,50C - Thời gian: Dung dịch HCl pH 1.2: Pha loãng 8,5ml acid HCl đặc vào nước cất cho vừa đủ 1000ml Điều chỉnh pH cần Dung dịch thử: Tiến hành hút 10 ml mơi trường hịa tan, lọc Hút xác 5,0 ml dịch lọc vào bình định mức 10 ml, pha loãng dung dịch HCl pH 1.2; lắc Dung dịch chuẩn: Cân xác khoảng 22,2 mg metronidazol chuẩn vào bình định mức 100 ml, hòa tan thêm vừa đủ dung dịch HCl pH 1.2; lắc Hút 10 ml dung dịch vào bình định mức 100 ml, pha lỗng dung dịch HCl pH 1.2 ; lắc Đo độ hấp thụ dung dịch chuẩn, dung dịch thử thiết bị quang phổ tử ngoại khả kiến (Phụ lục 4.1, DĐVN IV) bước sóng 277 nm cốc đo dày cm, dùng dung dịch HCl pH 1.2 làm mẫu trắng 186 Giai đoạn đệm phosphat pH 7,4: - Thiết bị: Kiểu cách khuấy - Mơi trường hịa tan: 900 ml đệm phosphat pH 7,4 - Tốc độ quay: 100 vòng/phút - Nhiệt độ: 37±0,50C - Thời gian: Dung dịch đệm pH 7,4: Thêm 250 ml dung dịch kali dihydrophosphat 0,2 M (TT) vào 393,4 ml dung dịch natri hydroxyd 0,1 M (TT) Điều chỉnh pH cần Dung dịch thử: Sau giai đoạn hòa tan mơi trường pH 1,2; thay mơi trường hịa tan dung dịch đệm phosphat pH 7,4 Tiến hành hòa tan giờ, hút 10 ml mơi trường hịa tan, lọc Hút xác ml dịch lọc cho vào bình định mức 10 ml, pha lỗng dung dịch đệm phosphat pH 7.4, lắc Dung dịch chuẩn: Cân xác khoảng 22,2 mg metronidazol chuẩn vào bình định mức 100 ml, hòa tan thêm vừa đủ dung dịch đệm phosphat pH 7,4 Hút 10 ml dung dịch vào bình định mức 100 ml, pha loãng dung dịch đệm phosphat pH 7.4, lắc Đo độ hấp thụ dung dịch chuẩn, dung dịch thử thiết bị quang phổ tử ngoại khả kiến (Phụ lục 4.1, DĐVN IV) bước sóng 229 nm cốc đo dày cm, dùng dung dịch đệm phosphat pH 7,4 làm mẫu trắng Giai đoạn đệm phosphat pH 6,8 chứa Pectinex: - Thiết bị: Kiểu cánh khuấy - Mơi trường hịa tan: 500 ml dung dịch đệm phosphat pH 6,8 chứa Pectinex - Tốc độ quay: 50 vòng/phút - Nhiệt độ: 37±0,50C - Thời gian: 1, Dung dịch đệm pH 6,8 chứa Pectinex: Hòa tan 28,80 g dinatri hydrophosphat (TT) 11,45 g kali dihydrophosphat (TT) nước vừa đủ 1000 ml Điều chỉnh pH cần Thêm vào dung dịch đệm 3,3 ml dung dịch enzym Pectinex, khuấy Lấy 500 ml dung dịch làm mơi trường thử hịa tan Sau giai đoạn hịa tan mơi trường pH 7,4; thay mơi trường hòa tan 187 dung dịch đệm phosphat pH 6,8 Hút 5,0 ml mơi trường hịa tan giờ, lọc Lấy xác 5,0 ml dịch lọc pha loãng với vừa đủ 200,0 ml dung dịch đệm 6,8 chứa enzym pectinex; lắc đều, thu dung dịch đo Dung dịch chuẩn: Cân xác khoảng 22,2 mg metronidazol chuẩn vào bình định mức 100 ml, hịa tan thêm vừa đủ dung dịch đệm phosphat pH 6,8 chứa enzym pectinex; lắc Hút xác ml dịch cho vào bình định mức 100 ml, pha loãng dung dịch đệm phosphat pH 6,8 chứa enzym pectinex, lắc Đo độ hấp thụ dung dịch chuẩn, dung dịch thử thiết bị quang phổ tử ngoại khả kiến (Phụ lục 4.1, DĐVN IV) bước sóng 320 nm cốc đo dày cm, dùng dung dịch đệm phosphate pH 6,8 chứa enzym pectinex làm mẫu trắng 2.4.3 Cách tính kết ị ã ã Trong đó: At : Độ hấp thụ dung dịch thử Ac : Độ hấp thụ dung dịch chuẩn Cc : Nồng độ dung dịch chuẩn (mg/ml) fc; ft: Độ pha loãng dung dịch chuẩn dung dịch thử V: Thể tích mơi trường thử (ml) mMTZ/nhãn: khối lượng MTZ ghi nhãn Cchuẩn/nhãn: Nồng độ chất chuẩn ghi nhãn (%) 2.5 Định lượng: Tiến hành phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3, DĐVN IV) 2.5.1 Hóa chất thuốc thử - Methanol: Loại dùng cho HPLC - Nước: Loại tinh khiết dùng cho HPLC 2.5.2 Điều kiện sắc ký Cột sắc ký: Cột C18 (4,6ì150mm), ng kớnh ht 5,0àm Nhit ct: 250C Pha động: Nước - methanol (80 : 20) Có thể điều chỉnh tỉ lệ cần thiết 188 Detector quang phổ tử ngoại đặt bước sóng 254 nm Tốc độ dịng: ml/phút Thể tích tiêm: 10 l 2.5.3 Cách tiến hành Dung dịch chuẩn: Cân lượng khoảng 0,05g chuẩn metronidazol cho vào bình định mức 100 ml Thêm 60 ml pha động, siêu âm 30 phút, sau để nguội nhiệt độ phịng thêm pha động vừa đủ, lắc đều, lọc qua màng 0,45 µm, thu dung dịch có nồng độ khoảng 0,5 mg/ml Dung dịch thử: Cân nghiền viên bao chuyển vào bình định mức 200ml, thêm khoảng 150 ml methanol (TT), siêu âm 30 phút, để nguội, pha loãng methanol (TT) đến vạch, trộn đều, lọc Hút xác ml dịch lọc cho vào bình định mức 20 ml, pha loãng pha động đến vạch, trộn đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm, thu dung dịch có nồng độ 0,5mg/ml Tiêm dung dịch thử dung dịch chuẩn vào máy sắc ký Tiến hành sắc ký điều kiện nêu, ghi lại thời gian lưu diện tích pic metronidazol dung dịch 2.5.4 Kết Hàm lượng (mg) metronidazol viên tính theo khối lượng trung bình thuốc viên bao metronidazol tính theo cơng thức: Hàm lượng MTZ/viên (%) = ã Trong đó: - St, Sc diện tích pic mẫu thử mẫu chuẩn - mt¸ mc khối lượng cân mẫu thử mẫu chuẩn - mtbv khối lượng trung bình viên - Pc hàm lượng chất chuẩn MTZ (Viện KNTW) - mnhãn lượng MTZ có viên theo lý thuyết (mnhãn = 0,2 g) - ft, fc độ pha loãng mẫu thử mẫu chuẩn 189 ĐÓNG GÓI, GHI NHÃN, BẢO QUẢN - Đóng lọ thủy tinh màu, lọ 30 viên - Bảo quản nơi khô mát, tránh ánh sáng - Nhãn NGƯỜI XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN Ngày tháng 190 năm 191 192 Phụ lục MỘT SỐ SỐ LIỆU NGHIÊN CỨU ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA CHẾ PHẨM PL5.1 Kết thử hịa tan lơ điều kiện lão hóa cấp tốc (400C± 20C; 75± 5%), (n = 6, TB ± SD) Thời gian (giờ) 10 10 tháng tháng Thời gian bảo quản LÔ tháng tháng tháng tháng tháng 3,5 ± 0,04 57,0 ± 3,08 2,9 ± 0,10 1,7 ± 0,07 4,3 ± 0,05 6,2 ± 0,08 5,4 ± 0,13 6,7 ± 0,11 56,7 ± 3,14 61,1 ± 2,07 58,4 ± 3,65 55,8 ± 2,00 60,9 ± 1,94 54,6 ± 2,83 78,0 ± 0,73 81,0 ± 1,76 78,0 ± 1,04 80,9 ± 0,81 85,7 ± 2,51 80,8 ± 1,96 77,6 ± 0,36 91,0 ± 1,55 101,5 ± 2,70 97,7 ± 2,08 98,3 ± 0,76 98,4 ± 1,32 96,3 ± 2,07 87,7 ± 1,78 101,7± 1,50 102,5 ± 2,25 101,3 ± 2,25 98,2 ± 2,94 97,0 ± 0,50 97,2 ± 1,78 92,2 ± 0,64 101,6± 1,89 103,9 ± 0,55 99,5 ± 0,95 100,0 ± 0,66 LÔ 98,0 ± 1,59 96,0 ± 1,40 95,7 ± 1,50 2,5 ± 0,19 3,3 ± 0,86 2,4 ± 0,06 4,1 ± 0,27 5,7 ± 0,75 4,2 ± 0,72 5,7 ± 0,68 61,0 ± 3,57 65,9 ± 2,92 61,1 ± 3,14 54,0 ± 3,69 58,6 ± 2,32 65,6 ± 4,77 58,5 ± 2,84 83,0 ± 1,62 92,3 ± 3,29 81,8 ± 1,85 81,9 ±1,43 88,9 ± 0,68 83,6 ± 1,18 79,8 ± 0,25 92,5 ± 1,96 99,8 ± 2,08 94,7 ±3,06 94,8 ± 4,34 98,7 ± 1,56 93,9 ± 4,52 88,5 ± 1,85 103,4± 0,82 102,8 ± 2,78 101,0 ± 2,66 97,6 ± 1,85 98,3 ± 0.35 96,8 ± 3,11 94,1 ± 2,62 103,3± 1,31 103,3 ± 3,21 100,4 ± 1,01 99,3 ± 1,50 LÔ 98,0 ± 1,59 96,5 ± 3,73 94,5 ± 3,15 1,6 ± 0,70 4,6 ± 0,46 3,9 ± 0,17 3,08 ± 0,53 5,06 ± 0,49 2,5 ± 0,15 7,1 ± 0,21 53,7± 2,64 80,8 ± 1,15 58,3 ± 3.60 57,0 ± 3,14 54,0 ± 2,44 55,1 ± 3,07 64,3 ± 2,18 58,1 ± 2,26 92,6 ± 2,12 85,2 ± 1,85 81,0 ± 1,45 86,6 ± 2,18 83,4 ± 2,32 79,5 ± 2,14 89,7 ± 1,46 99,5 ± 2,00 95,9 ± 2,92 97,1 ± 2,80 96,1 ± 0,97 92,3 ± 2,35 88,5 ± 1,85 98,9 ± 2,19 99,8 ± 0,23 99,2 ± 0,81 97,2 ± 1,21 96,8 ± 1,60 93,8 ± 1,54 93,0 ± 1,99 10 97,8 ± 0,97 99,8 ± 1,31 99,9 ± 1,22 98,9 ± 1,65 193 97,5±1,25 94,1 ± 1,39 93,9 ± 3,07 PL5.2 Kết thử hòa tan lô điều kiện thường 24 tháng Thời gian bảo quản (tháng) 12 15 18 21 24 % MTZ giải phóng LƠ (giờ) (giờ) (giờ) (giờ) (giờ) 10 (giờ) 3,5 ± 0,04 4,2 ± 0,40 3,6 ± 0,32 4,2 ± 0,36 3,3 ± 0,47 3,8 ± 1,15 5,3 ± 1,19 4,2 ± 1,45 3,5 ± 0,78 57,0 ± 3,08 56,5 ± 3,24 52,4 ± 2,22 55,3 ± 3,00 52,8 ± 1,29 56,0 ± 2,42 53,2 ± 2,32 51,7 ± 1,90 52,7 ± 2,60 78,0 ± 0,73 77,9 ± 0,88 79,2 ± 0,34 80,0 ± 1,21 77,7 ± 0,47 79,7 ± 0,9 79,6 ± 0,89 81,9 ± 1,05 78,3 ± 0,60 91,0 ± 1,55 89,5 ± 1,05 93,0 ± 1,21 89,9 ± 0,44 89,1 ± 1,01 89,6 ± 1,15 88,0 ± 1,00 93,8 ± 1,82 93,3 ± 1,49 101,7 ± 1,50 100,4 ± 0,17 99,7 ± 2,70 99,4 ± 0,90 99,4 ± 1,06 98,6 ± 0,82 97,9 ± 0,74 97,4 ± 0,26 96,0 ± 0,36 101,6 ± 1,89 100,8 ± 1,49 99,9 ± 1,29 99,5 ± 1,53 99,0 ± 1,70 99,1 ± 1,04 97,9 ± 1,49 97,7 ± 1,35 96,1 ± 1,92 92,5 ± 1,96 88,9 ± 2,87 95,0 ± 1,56 91,7 ± 1,85 89,0 ± 2,67 89,9 ± 1,73 87,6 ± 4,33 91,9 ± 4,00 92,6 ± 2,78 103,4 ± 0,82 101,0 ± 1,19 99,7 ± 2,70 99,8 ± 1,44 99,4 ± 2,97 98,9 ± 1,32 97,6 ± 1,37 95,7 ± 2,35 94,1 ± 3,59 103,3 ± 1,31 100,8 ± 1,49 99,9 ± 1,29 99,5 ± 2,53 99,0 ± 1,70 98,0 ± 1,50 97,9 ± 1,49 97,7 ± 1,35 95,7 ± 1,18 89,7 ± 1,46 88,8 ± 1,91 91.6 ± 1,23 89,1 ± 1,03 87,9 ± 1,48 88,0 ± 1,35 85,8 ± 0,85 90,7 ± 1,13 89,7 ± 1,95 98,9 ± 2,19 98,8 ± 2,75 98,9 ± 2,94 99,4 ± 0,90 98,5 ± 2,37 97,9 ± 1,95 97,1 ± 2,11 95,9 ± 2,43 94,2 ± 2,77 97,8 ± 0,97 97,6 ± 1,90 98,8 ± 1,42 98,7 ± 1,11 98,4 ± 1,45 97,7 ± 1,77 97,0 ± 2,00 97,4 ± 1,81 95,7 ± 1,59 12 15 18 21 24 2,5 ± 0,19 2,1 ± 0,55 2,8 ± 1,15 3,0 ± 2,20 3,9 ± 0,40 4,6 ± 0,62 4,8 ± 2,40 4,6 ± 0,76 6,5 ± 0,70 61,0 ± 2,57 57,4 ± 1,84 59,1 ± 3,14 58,8 ± 4,85 48,1 ± 3,70 58,0 ± 1,26 58,0 ± 1,91 51,6 ± 2,84 53,6 ± 2,01 12 15 18 21 24 1,6 ± 0,70 2,2 ± 0,55 3,0 ± 0,72 3,5 ± 2,15 4,6 ± 0,91 5,0 ± 0,17 5,2 ± 1,76 4,3 ± 1,27 4,6 ± 1,74 53,71 ± 2,64 55,7 ± 3,67 50,0 ± 1,33 57,1 ± 2,57 47,3 ± 3,24 52,9 ± 1,84 55,3 ± 3,48 48,5 ± 2,38 49,5 ± 2,81 LÔ 83,0 ± 1,62 80,1 ± 1,00 82,4 ± 1,35 81,4 ± 1,77 78,6 ± 1,10 79,7 ± 1,17 80,2 ± 1,08 83,7 ± 1,33 80,4 ± 1,21 LÔ 80,8 ± 1,55 77,4 ± 0,35 79,0 ± 0,33 79,8 ± 0,90 77,4 ± 0,40 77,7 ± 0,65 79,1 ± 0,62 82,5 ± 1,97 78,9 ± 0,76 194 PL5.3 Hàm lượng Tlag viên bao điều kiện lão hóa cấp tốc Thời Lơ gian Hàm lượng Tlag bảo 01 103,6(%) ± 0,45 (giờ) 5,98 quản 02 102,6 ± 0,46 6,00 (tháng) 03 100,2 ± 0,75 5,95 Lô Lô Hàm lượng 99,4(%) ± 0,55 Tlag (giờ) 6,00 Hàm lượng 100,2(%) ± 0,75 Tlag (giờ) 5,89 99,7 ± 0,75 6,11 100,0 ± 0,55 6,06 98,6 ± 0,75 5,96 99,7 ± 0,75 5,91 04 99,7 ± 0,75 5,99 97,5 ± 0,95 5,99 99,2 ± 0,75 5,99 05 99,2 ± 0,72 5,90 96,1 ± 0,75 5,95 98,5 ± 0,70 5,92 06 99,1± 0,80 5,00 95,4 ± 0,55 5,85 97,9 ± 0,78 5,87 PL5.4 Hàm lượng Tlag viên bao bảo quản điều kiện thường Thời gian bảo quản (tháng) Hàm lượng (%) Tlag (giờ) Hàm lượng (%) Tlag (giờ) Hàm lượng (%) Tlag (giờ) 103,2 ± 0,46 5,311 101 ± 1,14 5,422 100 ± 0,98 5,510 101,6 ± 0,81 5,273 99,4 ± 0,46 5,364 100,2 ± 0,75 5,550 100,7 ± 1,01 5,241 100,4 ± 0,76 5,640 98,6 ± 0,52 5,602 99,5 ± 0,86 5,493 99,6 ± 0,79 5,352 98,0 ± 0,64 5,344 12 99,5 ± 0,79 5,463 99,1 ± 0,67 5,616 97,5 ± 0,42 5,613 18 98,9 ± 0,72 5,478 98,5 ± 0,55 5,277 97,1 ± 0,28 5,109 24 98,1 ± 0,27 5,564 97,4 ± 0,19 5,556 96,7 ± 0,31 5,609 LÔ LÔ 195 LÔ Phụ lục MỘT SỐ SẮC KÝ ĐỒ ĐỊNH LƯỢNG METRONIDAZOL TRONG CHẾ PHẨM PL6.1 Sắc ký đồ metronidazol chuẩn 0,5 mg/ml PL6.2 Sắc ký đồ metronidazol viên nhân PL6.3 Sắc ký đồ mẫu định lượng metronidazol viên nén giải phóng đại tràng 196 Phụ lục MỘT SỐ SỐ LIỆU ĐÁNH GIÁ IN VIVO PL7.1 Sắc ký đồ mẫu chuẩn metronidazol 20 µg/ml huyết tương MTZ 200 200 100 100 mAU mAU CAR 0 Minutes PL7.2 Sắc ký đồ mẫu chuẩn metronidazol 10 µg/ml huyết tương 150 150 CAR MTZ 50 50 0 mAU 100 mAU 100 Minutes PL7.3 Sắc ký đồ mẫu chuẩn metronidazol 0,2 µg/ml huyết tương 150 150 CAR 50 50 mAU 100 mAU 100 MTZ 0 Minutes 197 PL7.4 Sắc ký đồ mẫu chuẩn metronidazol 0,9 mg/ml dịch đại tràng MTZ 50 50 0 mAU 100 mAU 100 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 Minutes PL7.5 Sắc ký đồ mẫu chuẩn metronidazol 0,3 mg/ml dịch đại tràng MTZ 50 50 25 25 0 mAU 75 mAU 75 10 Minutes 198 15 Bảng PL2.4 MTZ giải phóng từ mẫu viên CT91 CT55 mơi trường chứa enzym khác (n= 6; TB±SD) Nồng độ enzym (%) 0,11 0,22 0,33 Thời gian CT91 CT55 CT91 CT55 CT91 CT55 CT91 CT55 0,1 ± 0,0 0,0 ± 0,0 0,1 ± 0,0 0,1±0,0 0,0±0,0 0,1±0,0 0,1±0,0 0,1±0,0 0,3 ± 0,0 0,1 ± 0,0 0,1 ± 0,0 0,1±0,0 0,2±0,0 0,2±0,0 0,1±0,0 0,1±0,0 12,9 ± 3,18 0,1 ± 0,0 30,4 ± 2,86 0,2±0,11 35,8±4,08 0,3±0,01 45,3±4,51 0,3±0,01 37,4 ± 4,13 0,4 ± 0,01 47,9±3,62 0,4±0,01 55,2±3,40 1,6±1,02 77,9±2,85 6,8±1,30 78,7 ± 2,85 14,6 ± 1,57 89,5±3,11 19,5±2,06 88,1±2,98 29,9±2,51 94,6±1,96 45,7±2,69 92,3 ± 1,52 37,0 ± 1,64 98,3±2,08 47,1±1,43 97,7±1,59 58,4±2,07 99,1±2,52 64,2±2,98 10giờ 95,8 ±2,19 33,8 ± 1,75 99,4±3,97 54,9±2,81 99,6±2,46 72,5±2,54 99,3±3,01 73,8±2,05