Báo cáo thí nghiệm kỹ thuật hóa sinh bài 1 hplc high performance liquid chromatography

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA KHOA KỸ THUẬT HĨA HỌC BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC  BÁO CÁO THÍ NGHIỆM KỸ THUẬT HÓA SINH LỚP A01 – CH5192 – HK221 GVHD: TS Huỳnh Ngọc Oanh SVTH: Huỳnh Ngọc Diễm Phúc 1914684 Ôn Nguyễn Minh Tâm 1912006 Phan Đức Thắng 1912092 Phan Huỳnh Thanh Trúc 1912336 Hoàng Trương Thanh Xuân 1910712 Thành phố Hồ Chí Minh – 2022 MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH ẢNH DANH MỤC BẢNG BÀI 1: HPLC - HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY Tổng quan 1.1 Giới thiệu 1.2 Nguyên lý hoạt động hệ thống HPLC: 1.3 Phân loại 1.4 Cấu tạo hệ thống HPLC 10 1.5 Hình dạng sắc ký đồ 11 1.6 Xử lý hai đường cong rửa giải 12 1.7 Ưu nhược điểm loại detector hệ thống HPLC 13 1.8 Ứng dụng 15 1.9 Các bước tiến hành 17 Kết phân tích EGCG phương pháp HPLC 18 2.1 Tổng quan EGCG 18 2.2 Kết lập đường chuẩn EGCG (40-200ppm) 19 2.3 Kết phân tích EGCG mẫu nguyên liệu trà Oolong 19 BÀI 2: PHÂN TÍCH HÀM LƯỢNG PHYTATE TRONG THỨC ĂN CHĂN NUÔI 22 Tổng quan 22 1.1 Giới thiệu phytic acid 22 1.2 Xử lý phytic acid enzyme phytase 23 Hóa chất thiết bị 24 2.1 Vật liệu: Mẫu thức ăn cho cá ( dạng viên) 24 2.2 Dụng cụ - Hóa chất 24 2.3 Giới thiệu KIT Sera PO4 25 Quy trình thực 27 3.1 Chuẩn bị enzyme 27 3.2 Tiền xử lý mẫu 27 3.3 Xử lý với enzyme phytase 27 3.4 Định tính phosphate 27 Kết 28 4.1 Kết định tính phosphate 28 4.2 Kết khảo sát phytic acid mẫu thức ăn chăn nuôi 29 Kết luận 30 BÀI 3: XÁC ĐỊNH ĐƯỜNG HUYẾT BẰNG MÁY ĐO 31 Tổng quan 31 1.1 Giới thiệu máy đo đường huyết 31 1.2 Lịch sử khám phá 31 1.3 Nguyên tắc vận hành 32 1.4 Một số loại máy đo đường huyết phổ biến 33 Quy trình thực đo đường huyết 34 2.1 Thiết bị: Máy đo đường huyết True Metrix Air 34 2.2 Quy trình đo đường huyết 35 2.3 Đối tượng thời điểm lấy mẫu 40 Kết đo đường huyết 40 Nhận xét bàn luận 40 BÀI 4: KIẾN TẬP HỆ THỐNG PHÁ MẪU VÀ THIẾT BỊ KJELDAHL ĐỊNH LƯỢNG NITƠ TỔNG 43 Tổng quan 43 1.1 Giới thiệu phương pháp định lượng nitơ tổng Kjeldahl 43 1.2 Nguyên tắc phản ứng 43 1.3 Hệ thống 44 1.4 Lĩnh vực ứng dụng 45 1.5 Tính tốn hàm lượng protein 45 1.6 Ưu - nhược điểm phương pháp Kjeldahl 46 Kiến tập thiết bị 47 2.1 Hóa chất cần dùng 47 2.2 Các thiết bị hỗ trợ 48 2.3 Các bước tiến hành 48 2.4 Thiết bị thực tế 52 BÀI 5: PHÁT HIỆN MALACHITE GREEN BẰNG ELISA KIT 54 1.Tổng quan 54 1.1 Giới thiệu malachite green 54 1.2 Giới thiệu ELISA 55 Hóa chất- thiết bị 56 2.1 Nguyên tắc phản ứng 56 2.2 Thông số kỹ thuật 57 2.3 Hóa chất 58 2.4 Dụng cụ - thiết bị 59 Vật liệu 73 Tiến hành thí nghiệm 73 4.1 Tiền xử lý mẫu 73 4.2 Quy trình thí nghiệm 74 4.3 Xử lý kết 77 4.4 Tính tốn giá trị nhóm 79 Kết luận 79 TÀI LIỆU THAM KHẢO 80 DANH MỤC HÌNH ẢNH BÀI Hình Cấu tạo hệ thống HPLC 10 Hình Đường cong rửa giải 13 Hình Kết lập đường chuẩn 19 Hình Kết phân tích EGCG mẫu nguyên liệu trà Oolong diệt men 120 độ C 20 Hình Kết phân tích EGCG mẫu nguyên liệu trà Oolong bổ sung 10% enzyme 20 Hình Kết phân tích EGCG mẫu trà lên men đống 21 BÀI Hình Nguyên tắc phản ứng định tính phosphate 23 Hình Thức ăn cho cá hãng AF-PRO 24 Hình Bộ Test PO4 Sera thang so màu 26 Hình Kết định tính phosphate 28 BÀI Hình Máy đo đường huyết True Metrix Air 34 Hình Bút, kim lấy máu thao tác sử dụng 36 Hình Cách cắm que thử máu hình máy đo đường huyết sau cắm que 37 Hình Nhỏ giọt máu lên que thử đọc kết 38 Hình Thang chuẩn in hộp que thử 38 BÀI Hình Hệ thống Kjeldahl phịng thí nghiệm 44 Hình Viên xúc tác KjelCAT KJELDATHERM®/VAPODEST® 49 Hình Thêm axit đặc pipet tự động 49 Hình Đóng nắp ống Kjeldahl 50 Hình Dung dịch phá mẫu chuyển thành màu đen 50 Hình Ảnh hưởng nồng độ acid boric lên áp suất riêng phần NH3 51 Hình 7a Thiết bị thực tế 52 Hình 7b Thiết bị thực tế 53 BÀI Hình Cơng thức hóa học Malachite Green 54 Hình Nguyên lý 55 Hình Mẫu Malachite Green ELISA Kit 56 Hình Đường chuẩn Malachite Green (0-0.4ppb) 57 Hình 5a Hướng dẫn sử dụng máy ELISA 60 Hình 5b Hướng dẫn sử dụng máy ELISA 61 Hình 5c Hướng dẫn sử dụng máy ELISA 62 Hình 6a Hướng dẫn sử dụng máy ủ lắc 63 Hình 6b Hướng dẫn sử dụng máy ủ lắc… 64 Hình 6c Hướng dẫn sử dụng máy ủ lắc 65 Hình 7a Hướng dẫn sử dụng máy rửa Microplate 66 Hình 7b Hướng dẫn sử dụng máy rửa Microplate 67 Hình 7c Hướng dẫn sử dụng máy rửa Microplate 68 Hình 7d Hướng dẫn sử dụng máy rửa Microplate 69 Hình 7e Hướng dẫn sử dụng máy rửa Microplate 70 Hình 7f Hướng dẫn sử dụng máy rửa Microplate 71 Hình 7g Hướng dẫn sử dụng máy rửa Microplate 72 Hình 78 DANH MỤC BẢNG BÀI Bảng So sánh phương pháp HPLC Bảng Ưu nhược điểm loại detector 13 BÀI Bảng Dụng cụ, hóa chất thiết bị thí nghiệm 24 Bảng Thông số kỹ thuật 25 Bảng Thành phần KIT dự đốn hóa chất 25 Bảng Thành phần chất phản ứng 27 Bảng Kết khảo sát phytic acid 29 BÀI Bảng Thông số kỹ thuật 34 Bảng Chỉ số đo đường huyết hai sinh viên (sáng 1/12/2022) 40 Bảng Bảng đường huyết chuẩn tham khảo (đơn vị mmol/L) 40 BÀI Bảng CF - hệ số chuyển đổi số loại thực phẩm 45 Bảng Hóa chất cần dùng 47 BÀI Bảng Bảng tổng hợp hóa chất 58 Bảng Dung dịch 1: Pha loãng Reconstitution Buffer 73 Bảng Dung dịch 2: Pha loãng Wash Buffer 73 Bảng Dựng đường chuẩn 75 Bảng Kết dựng đường chuẩn 78 Bảng Kết Malachite Green ELISA KIT từ mẫu nhóm 79 BÀI 1: HPLC - HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY Tổng quan 1.1 Giới thiệu HPLC đời khoảng năm 1967 – 1968 dựa sở phát triển cải tiến từ phương pháp sắc ký cột cổ điển Định nghĩa: Sắc ký lỏng HPLC kỹ thuật để tách hỗn hợp chất thành thành phần riêng biệt dựa tương tác chất phân tích với pha động pha tĩnh Pha động mang theo chất cần phân tích di chuyển qua pha tĩnh Các thành phần tương tác mạnh với pha tĩnh di chuyển chậm so với thành phần có tương tác yếu 1.2 Nguyên lý hoạt động hệ thống HPLC: - Nguyên tắc: Tách mẫu gồm hỗn hợp thành phần thành phận cấu thành dựa khác biệt lực phân tử khác với pha động pha tĩnh sử dụng trình tách - Pha động dung môi nước cất Cột sắc ký (pha tĩnh) thường nhồi từ hạt rắn silica polymer - Các thành phần hỗn hợp tách khỏi mức độ tương tác chúng với hạt hấp thụ khác Điều làm cho tốc độ rửa giải chất hỗn hợp khác tạo nên phân tách thành phần chúng khỏi cột - Trong phương pháp HPLC, máy bơm đẩy dung môi hay pha động qua cột áp suất cao (có thể lên đến 400 atm) Q trình bơm dung mơi qua khử khí nhằm loại bỏ bọt khí ngồi trộn bể trộn - Sau đó, hệ thống bơm phân phối dung môi qua phận tiêm mẫu, pha động mang chất phân tích qua cột sắc ký có chứa pha tĩnh đầu dò để phát chất khỏi cột Dữ liệu phát lưu trữ phân tích phận ghi nhận tín hiệu, sau tiến hành xả bỏ 1.3 Phân loại Dựa chế tách pha tĩnh, HPLC có loại sau: 1.3.1 HPLC thuận (NP-HPLC) Sắc ký pha thuận sử dụng pha tĩnh phân cực pha động không phân cực Pha tĩnh thường silica, Pha động điển hình hexane, methylene clorua, chloroform, dietyl ete hỗn hợp chất Các chất phân cực giữ lại bề mặt cực cột pha thuận lâu hơn, chất không phân cực khỏi cột trước 1.3.2 HPLC pha đảo (RP-HPLC) Pha tĩnh không phân cực (kỵ nước), pha động chất lỏng phân cực, ví dụ hỗn hợp nước metanol acetonitril Ngược lại với pha thuận, chất không phân cực giữ cột pha đảo lâu nên ra khỏi cột sau.Các chất phân cực cột trước 1.3.3 HPLC rây phân tử Cột nhồi vật liệu có kích thước lỗ rỗng chọn lọc xác hạt phân tách theo kích thước phân tử Các phân tử lớn nhanh chóng rửa qua cột; phân tử nhỏ qua lỗ rỗng hạt nên đường lâu cột lâu 1.3.4 HPLC trao đổi ion Bề mặt pha tĩnh phủ điện tích ion tích điện trái dấu với ion mẫu Kỹ thuật sử dụng gần độc quyền với mẫu ion ion hóa Điện tích mẫu mạnh bị hút mạnh vào bề mặt ion đó, nhiều thời gian để rửa giải Pha động dung dịch đệm, kiểm soát pH cường độ ion Bảng So sánh phương pháp HPLC Đặc điểm Pha tĩnh Sắc ký hấp phụ Pha động khơng/ít cực phân cực Nước, dung Nước, đệm, Dung mơi mơi phân pH, chất tạo khơng/ít cực phức phân cực Chất không Các dạng Chất không phân cực kỵ nước Chất phân tử bề mặt phân nước phân cực, phân bố Lỏng, Khơng/ít khơng/ít Sắc ký rây Cấu tạo ion, Phân cực, Dung môi Sắc ký ion Sắc ký không phân phân cực ion, phân ly phân cực, cực phân cực thành ion phân cực Thường Chất vô cơ, Chất vô cơ, Chất vô cơ, chất hữu hữu hữu hữu Ưu/Nhược Ảnh hưởng Độ ổn định, Độ ổn định, Độ ổn định, điểm độ ẩm lặp lại cao lặp lại cao lặp lại Phạm vi Cơ chế Trao đổi Hấp phụ ion Cấu tạo loại NP-HPLC RPHPLC Dung môi hữu Các chat phân tử lớn >1000 đvC Lĩnh vực polymer - Rây theo Phân bố kích thước phân tử Hình 7b Hướng dẫn sử dụng máy rửa Microplate 67 Hình 7c Hướng dẫn sử dụng máy rửa Microplate 68 Hình 7d Hướng dẫn sử dụng máy rửa Microplate 69 Hình 7e Hướng dẫn sử dụng máy rửa Microplate 70 Hình 7f Hướng dẫn sử dụng máy rửa Microplate 71 Hình 7g Hướng dẫn sử dụng máy rửa Microplate 2.5 Bảo quản hạn sử dụng Bảo quản dụng cụ nhiệt độ 2-8℃ Khơng đóng băng thành phần xét nghiệm Cho giếng chưa sử dụng vào túi giấy bạc ban đầu chúng niêm phong chúng lại với chất hút ẩm cung cấp lưu trữ thêm 2-8 ℃ Hạn sử dụng: hạn sử dụng ghi hộp 72 Vật liệu Mẫu nước ao, hồ nuôi tôm đựng chai nhựa, để nhiệt độ phòng Tiến hành thí nghiệm - Để tất thuốc thử mẫu nhiệt độ phòng (25℃) trước sử dụng - Mở đầu đọc vi (máy đọc ELISA) trước, làm nóng thiết bị cài đặt thơng số thí nghiệm - Lưu ý: Dụng cụ thí nghiệm phải pipet phải dùng lần để tránh nhiễm chéo q trình thí nghiệm Khơng sử dụng bút đánh dấu gốc dầu trình đánh dấu để tránh làm nhiễm bẩn mẫu 4.1 Tiền xử lý mẫu a Chuẩn bị thuốc thử (96 giếng) Bảng Dung dịch 1: Pha loãng Reconstitution Buffer Dung dịch Tỷ lệ Thể tích cần lấy (ml) Reconstitution Buffer 10× Nước khử ion 15 Methanol 12 Tổng: 30 Bảng Dung dịch 2: Pha loãng Wash Buffer Dung dịch Tỷ lệ Thể tích cần lấy (ml) Wash Buffer 20× Nước khử ion 19 114 Tổng: 120 b Xử lý mẫu Tiền xử lý mẫu mỡ (carassius auratus, cá trắm bạc, tơm): (1) Loại bỏ da, xương mỡ cá, tôm Trộn mẫu, sử dụng sử dụng máy đồng hóa 73 (2) Cân g thịt đồng cho vào ống ly tâm 50 mL Thêm 0,3 mL Acetonitril 6mL Ethyl axetat, vortex phút để đảm bảo thịt khơng bị vón cục (3) Ly tâm 4000 vịng/phút 10 phút nhiệt độ phòng Lấy mL phần phía sang ống nghiệm khơ, thêm 50 μL chất oxy hóa, vortex phút thêm 50 μL Cosolvent (Không vortex) (4) Làm khô 50℃ thiết bị cô mẫu nitơ nồi cách thủy (Nên có giọt chất đáy ống sau sấy khô.) (5) Thêm mL Reconstitution Buffer (Dung dịch 1) trộn Ly tâm 4000 vòng/phút 10 phút nhiệt độ phòng, loại bỏ lớp chất béo phía (6) Lấy 50 μL chất bên để phân tích (Tránh hút phải lớp chất béo) Lưu ý: Hệ số pha loãng mẫu: 2, giới hạn phát hiện: 0,1 ppb 4.2 Quy trình thí nghiệm Khôi phục tất thuốc thử mẫu nhiệt độ phòng (25℃) trước sử dụng Tất thuốc thử phải trộn kỹ cách xoay nhẹ trước dùng pipet Tránh tạo bọt Tấm ELISA Microtiter chưa dùng nên niêm phong sớm tốt bảo quản 2-8 ℃ Dung dịch chuẩn có nồng độ thấp khơng ổn định, chuẩn bị dung dịch chuẩn trước sử dụng Bước Chuẩn bị dung dịch chuẩn - Lấy mL Reconstitution Buffer (Dung dịch 1) cho vào chai ppb - Lấy 1,5 mL Reconstitution Buffer (Dung dịch 1) vào chai 0,025 ppb, chai 0,05, chai 0,1 ppb, chai 0,2 ppb - Lấy 2,88 mL Reconstitution Buffer (Dung dịch 1) cho vào chai 0,4 ppb (1) Chất chuẩn 6: Lấy 120 μL Chất chuẩn nồng độ cao (10 ppb) cho vào chai 0,4 ppb, sau trộn đầy đủ Nồng độ Chất Chuẩn 0,4 ppb (2) Chất chuẩn 5: Lấy 1,5 mL Chất chuẩn cho vào chai 0,2 ppb, sau trộn Các nồng độ Chất chuẩn 0,2 ppb 74 (3) Chất chuẩn 4: Lấy 1,5 mL Chất chuẩn cho vào chai 0,1 ppb, sau trộn Các nồng độ Chất chuẩn 0,1 ppb (4) Chất chuẩn 3: Lấy 1,5 mL Chất chuẩn cho vào chai 0,05 ppb, sau trộn Các nồng độ Chất chuẩn 0,05 ppb (5) Chất chuẩn 2: Lấy 1,5 mL Chất chuẩn cho vào chai 0,025 ppb, sau trộn Các nồng độ Chất chuẩn 0,025 ppb (6) Chất chuẩn 1: Sử dụng trực tiếp Reconstitution Buffer Nồng độ Chất chuẩn ppb Bảng Dựng đường chuẩn Mẫu chuẩn Dung dịch Nồng độ MG (ppb) Reconstitution Buffer (mL) Chất chuẩn nồng độ cao (μL) Pha loãng từ chất chuẩn nồng độ cao Tổng thể tích cuối (mL) 0,025 0,05 0,1 0,2 0,4 1,5 1,5 1,5 1,5 2,88 - - - - - 120 1,5mL 1,5mL 1,5mL 1,5mL từ chất từ chất từ chất từ chất chuẩn chuẩn chuẩn chuẩn 1,5 1,5 1,5 - - 1,5 Bước Đánh số Đánh số mẫu chất chuẩn theo thứ tự (nhiều giếng) lưu hồ sơ chất chuẩn giếng khoan giếng mẫu Chất chuẩn Mẫu cần có số liệu trùng lặp Bước Thêm mẫu Thêm 50 μL chất chuẩn mẫu cho giếng, sau thêm 50 μL dung dịch kháng thể hoạt động (Antibody Working Solution), đậy máy hàn tấm, dao động nhẹ giây để trộn kỹ Ủ 25℃ 30 phút ánh sáng thấp 75 Bước Rửa Mở nắp đậy cẩn thận, loại bỏ chất giếng Thêm 300 μL dung dịch Wash Buffer (Solution 2) cho giếng rửa Lặp lại quy trình rửa lần, 30 giây Úp ngược đĩa vỗ nhẹ lên đĩa dày giấy thấm (Nếu có bong bóng giếng dùng đầu tăm để loại bỏ) Bước Thêm chất liên hợp HRP: Thêm 100 μL HRP Conjugate vào giếng, ủ 25℃ 30 phút nơi khơng có ánh sáng trực tiếp Bước Rửa Lặp lại bước Mở nắp đậy cẩn thận, loại bỏ chất giếng Thêm 300 μL dung dịch Wash Buffer (Solution 2) cho giếng rửa Lặp lại quy trình rửa lần, 30 giây Úp ngược đĩa vỗ nhẹ lên đĩa dày giấy thấm Bước Phát màu Thêm 50 μL thuốc thử Cơ chất A (Subtrate A) vào giếng, sau thêm 50 μL thuốc thử chất B (Subtrate B) Lắc nhẹ giây để trộn kỹ Ủ 25℃ 15 phút ánh sáng che Thời gian phản ứng kéo dài theo thay đổi màu sắc thực tế Bước 8: Dừng phản ứng Thêm 50 μL Stop Solution vào giếng, lắc nhẹ để trộn Bước Đo OD Xác định mật độ quang (giá trị OD) giếng bước sóng 450 nm bước sóng 620 nm với đầu đọc vi Bước hoàn thành sau 10 phút sau dừng phản ứng lại Lưu ý sai số Giá trị OD tổng thể thấp thuốc thử chưa đưa nhiệt độ phòng trước sử dụng nhiệt độ phòng 25℃ Nếu giếng bị khơ q trình rửa, dẫn đến đường chuẩn tuyến tính xấu độ lặp lại Thực bước sau rửa 76 Trộn rửa đĩa Tính đồng quy trình rửa ảnh hưởng đến khả tái tạo kit ELISA ELISA Microplate nên bao phủ plate sealer Tránh để ánh sáng mạnh Mỗi thuốc thử tối ưu hóa để sử dụng E-FS-E013 Không thay thuốc thử từ nhà sản xuất khác vào dụng cụ thử nghiệm Không kết hợp thuốc thử từ E-FS-E013 khác với số lô khác Thuốc thử nên loại bỏ chuyển sang màu xanh lam Khi giá trị OD chất chuẩn (nồng độ 450nm＜0,5), điều cho thấy thuốc thử bị giảm chất lượng Dung dịch kết thúc chất ăn da, tránh tiếp xúc với da mắt Vì giá trị OD đường chuẩn thay đổi tùy theo điều kiện xét nghiệm thực tế hiệu suất (ví dụ: người vận hành, kỹ thuật pipet, kỹ thuật rửa hiệu ứng nhiệt độ), người vận hành nên thiết lập đường chuẩn cho phép thử Ngay nhà sản xuất nhận kết khác hai thí nghiệm riêng biệt Để có kết tái sử dụng, bước xét nghiệm phải kiểm soát 10 Đối với phương pháp chiết xuất mẫu nhanh hiệu nêu phần mô tả dụng cụ Vui lòng tham khảo hỗ trợ kỹ thuật khả ứng dụng cần kiểm tra mẫu khác 11 Bộ kit sử dụng để sàng lọc nhanh mẫu thực tế Nếu kết xét nghiệm dương tính, thiết bị phương pháp HPLC, LC/MS, v.v sử dụng để xác nhận định lượng 4.3 Xử lý kết 4.3.1 Độ hấp thụ Độ hấp thụ (%) = A/A0×100% A: Độ hấp thụ trung bình chất chuẩn mẫu A0: Độ hấp thụ trung bình ppb chất chuẩn 77 4.3.2 Vẽ tính toán đường chuẩn Tạo đường cong chuẩn cách vẽ phần trăm độ hấp thụ chuẩn trục y nồng độ logarit trục x, để vẽ đồ thị bán logarit Thêm trung bình giá trị độ hấp thụ mẫu vào đường chuẩn để có nồng độ tương ứng Nếu mẫu có pha lỗng, nồng độ tính tốn từ đường chuẩn phải nhân với hệ số pha lỗng Hình Kết đo đường chuẩn Bảng Kết dựng đường chuẩn Mẫu Giá trị OD 450nm 1.305 1.483 1.268 0.842 0.442 0.458 Nồng độ (ppb) 0.025 0.05 0.1 0.2 0.4 Mẫu 0.4 ppb có giá trị không đáng tin nên bị loại bỏ khỏi đường chuẩn Như vậy, đường chuẩn dựng với nồng độ malachite green từ 0.025-0.2ppb, phương trình đường chuẩn có dạng logarit với y = -40.37ln(x) – 30.068, R2= 0.9813 78 4.4 Tính tốn giá trị nhóm Bảng Kết Malachite Green ELISA KIT từ mẫu nhóm Mẫu nước nuôi tôm thẻ - chợ Phước Long (Thủ Đức) Mẫu Giá trị OD 450nm 1.043 1.202 1.077 1.088 1.167 1.376 Nồng độ (ppb) 0.0706 0.0481 0.0650 0.0633 0.0523 0.0316 Hệ số pha loãng 10 102 103 104 105 Kết định tính, giá trị OD450nm nằm đường chuẩn (0.0316 - 0.0706 ppb), malachite green có xuất mẫu nước nuôi tôm thẻ chợ Phước Long (Thủ Đức) Về định lượng, mẫu nước đạt giá trị malachite green cao 0.0706 ppb (ng/µL), tương đương 0.0706 µg/L Tuy nhiên, dù pha loãng với hệ số khác nhau, tín hiệu OD450nm nhóm tương tự Điều sai sót q trình thao tác (rửa mẫu không sạch, không đồng nhất, ủ mẫu q lâu, pha lỗng đệm khơng xác, thao tác nạp giếng) Kết luận Malachite Green thành phần dư lượng nhóm triphenylthane bị Bộ Y tế cấm thành phần thức ăn nuôi tôm (0.0316 - 0.0706 ppb), vậy, có mặt chất nước nuôi tôm thẻ chợ vấn đề nhức nhối ngành chăn nuôi đánh bắt thuỷ sản Tình trạng cố tình sử dụng green malachite cịn xảy làm ảnh hưởng đến môi trường, sức khỏe động vật người nghiêm trọng 79 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] P Vats and U C Banerjee, "Production studies and catalytic properties of phytases (myo-inositolhexakisphosphate phosphohydrolases): an overview," Enzyme and Microbial Technology, vol 35, no 1, pp 3-14, 2004 [2] N R Reddy, S K Sathe, and D K Salunkhe, "Phytates in legumes and cereals," Adv Food Res, vol 28, pp 1-92, 1982, doi: 10.1016/s0065-2628(08)60110-x [3] J Erdman, "Oilseed phytates: nutritional implications," Journal of the American Oil Chemists’ Society, vol 56, no 8, pp 736-741, 1979 [4] B L O'Dell, A R De Boland, and S R Koirtyohann, "Distribution of phytate and nutritionally important elements among the morphological components of cereal grains," Journal of Agricultural and Food Chemistry, vol 20, no 3, pp 718-723, 1972 [5] R J Wodzinski and A H Ullah, "Phytase," Adv Appl Microbiol, vol 42, pp 263302, 1996, doi: 10.1016/s0065-2164(08)70375-7 [6] M Jorquera, O Martinez, F Maruyama, P Marschner, and M de la Luz Mora, "Current and future biotechnological applications of bacterial phytases and phytaseproducing bacteria," Microbes Environ, vol 23, no 3, pp 182-91, 2008, doi: 10.1264/jsme2.23.182 [7] F Yano, T Nakajima, and M Matsuda, "Reduction of nitrogen and phosphorus from livestock waste: A major priority for intensive animal production-Review," Asian-Australasian Journal of Animal Sciences, vol 12, no 4, pp 651-656, 1999 [8] Niptdanang.com n.d [ONLINE] Available at: https://niptdanang.com/chi-soduong-huyet-an-toan-sau-an-la-bao-nhieu/ [Accessed 10 December 2022] [9] Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd n.d The relationship between blood sugar level and GI | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd [ONLINE] Available at: https://www.otsuka.co.jp/en/health-and-illness/glycemic-index/glucose-level/ [Accessed 13 December 2022] [10] Y Ishii, F Shimizu, M Ogawa, T Takao, and A Takada, "Gender differences in foods uptakes, glycemic index, BMI, and various plasma parameters between young men and women in Japan," Integr Food Nutr Metab, vol 3, no 5, pp 427-430, 2016 80 [11] J P Frias, G B Macaraeg, J Ofrecio, J G Yu, J M Olefsky, and Y T Kruszynska, "Decreased susceptibility to fatty acid-induced peripheral tissue insulin resistance in women," Diabetes, vol 50, no 6, pp 1344-50, Jun 2001, doi: 10.2337/diabetes.50.6.1344 [12] R Basu et al., "Effects of age and sex on postprandial glucose metabolism: differences in glucose turnover, insulin secretion, insulin action, and hepatic insulin extraction," Diabetes, vol 55, no 7, pp 2001-14, Jul 2006, doi: 10.2337/db05-1692 [13] F Mauvais-Jarvis, "Gender differences in glucose homeostasis and diabetes," Physiol Behav, vol 187, pp 20-23, Apr 2018, doi: 10.1016/j.physbeh.2017.08.016 [14] THIẾT BỊ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ n.d phương pháp xác định nito tổng – THIẾT BỊ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ [ONLINE] Available at: https://thietbikhoahoccongnghe.com.vn/phuong-phap-xac-dinh-nito-tong.html [Accessed 10 December 2022] [15] Gerhardt.de n.d [ONLINE] Available at: https://www.gerhardt.de/en/products/kjeldatherm-block-digestion-unit/ [Accessed 10 December 2022] [16] T Michałowski, A G Asuero, and S Wybraniec, "The titration in the Kjeldahl method of nitrogen determination: base or acid as titrant?," Journal of Chemical Education, vol 90, no 2, pp 191-197, 2013 81