(Tiểu luận) bài 3 kiểm nghiệm coliforms, coliforms phân và e coli bằng phương pháp mpn

TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG BÁO CÁO THÍ NGHIỆM KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM (603113) BÀI KIỂM NGHIỆM Coliforms, Coliforms phân E coli BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN Người hướng dẫn: Ph D NGUYỄN NGỌC TUẤN Người thực hiện: NHĨM S6-N2 LÊ CƠNG ĐỨC – 620H0024 LÊ NGỌC TUYỀN – 620H0167 VŨ THỊ KIỀU OANH – 620H0103 VÕ HUỲNH KHÁNH VY – 620H0260 THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2023 i MỤC LỤC MỤC LỤC .i CHƯƠNG VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 1.1 Dụng cụ 1.2 Môi trường 1.3 Thuốc thử CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Xử lí mẫu 2.2 Pha loãng mẫu 2.3 Phương pháp phân tích Coliforms .3 2.3 Phương pháp phân tích Coliforms phân 2.3 Phương pháp phân tích Ecoli .4 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 3.1 Kết .5 3.1.1 Coliforms 3.1.2 Coliforms phân .6 3.1.3 E.Coli 3.2 Kết luận TÀI LIỆU THAM KHẢO 10 CHƯƠNG VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 1.1 Dụng cụ Đĩa petri Micropipet Pipette 1ml Đầu tip Pipette 10ml Erlen 250 ml Ống nghiệm vơ trùng 50 ống Hình Dụng cụ thí nghiệm 1.2 Mơi trường Mơi trường Lauryl Sulphate Broth (LSB) LSB 3,56 g Nước cất 100 ml Môi trường Brilliant Green Lactose Bile Salt (BGBL) BGBL 4,01 g Nước cất 100 ml Môi trường Canh EC EC 3,7 g Nước cất 100 ml Các môi trường môi trường lỏng chứa ống Durham úp ngược Môi trường Canh Trypton Trypton 0,6 g Nước cất 40 ml Môi trường Simmon Citrate Agar (SCA) SCA 0,97 g Nước cất 40 ml Môi trường MR – VP MR – VP 0,68 g Nước cất 40 ml Môi trường EMB EMB 4,87 g Nước cất 130 ml Nước muối sinh lý 1.3 NaCl 0,51 g Nước cất 60 ml Thuốc thử Ether xylen Thuốc thử Kovac’s Thuốc thử Methyl Red Thuốc thử alpha – napthol 3 CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Xử lí mẫu 2.1 Mẫu thịt: 3g Đất 3g Nước cất ml Pha loãng mẫu 2.2 Pha loãng mẫu nước muối sinh lý Mẫu pha loãng thành dãy nồng độ thập phân 10-1, 10-2, 10-3 Mỗi bậc pha loãng thực cách hút 1ml mẫu cho vào ống nghiệm chứa 9ml nước muối sinh lý vô trùng, lắc đều, độ pha loãng 10-1 so với ban đầu Hút 1ml mẫu ống có độ pha loãng 10-1 cho vào ống nghiệm chứa 9ml nước muối sinh lý vơ trùng ta có độ pha lỗng 10-2 so với ban đầu Tiếp tục ta có độ pha lỗng 10-4 Phương pháp phân tích Coliforms 2.3 Cấy ml dịch mẫu pha loãng (10-2, 10-3, 10-4) vào ống nghiệm chứa 10 ml dịch môi trường LSB (mỗi độ pha loãng cấy ống) Ủ 37oC 24-48 Ghi nhận số ống sinh Dùng que cấy vòng cấy chuyển dịch mẫu từ LSB (+) sang ống chứa 10 ml môi trường BGBL Ủ 37oC 24-48 Ghi nhận số ống dương tính độ pha lỗng Tra bảng MPN để biết kết Phương pháp phân tích Coliforms phân 2.3 Dùng que cấy vòng cấy từ ống LSB (+) sang ống nghiệm chứa canh EC Ủ 44.5 C 24 giờ, ghi nhận ống cho kết dương tính (sinh hơi) o Cấy ria dịch mẫu từ ống EC (+) sang môi trường thạch đĩa EMB, ủ 37oC 24 Các khuẩn lạc tròn, dẹt, hình đĩa, có ánh kim tím khuẩn lạc Coliforms phân 4 Chọn khuẩn lạc điển hình, cấy vào canh Trypton, MR-MV, S.Citrate, ủ 44.5oC 24h để thực thử nghiệm Indol Thực tương tự cho tất ống EC (+) Ghi nhận ống cho kết dương tính canh EC cho kết Indol (+) ứng với độ pha loãng Tra bảng MPN để biết kết Phương pháp phân tích Ecoli 2.3 Dùng que cấy vòng cấy từ ống LSB (+) sang ống nghiệm chứa canh EC Ủ 44.5 C 24 giờ, ghi nhận ống cho kết dương tính (sinh hơi) o Cấy ria dịch mẫu từ ống EC (+) sang môi trường thạch đĩa EMB, ủ 37oC 24 Các khuẩn lạc trịn, dẹt, hình đĩa, có ánh kim tím khuẩn lạc E coli giả định Chọn khuẩn lạc điển hình, cấy vào canh Trypton, ủ 44.5oC 24h để thực thử nghiệm IMViC 2.4 Thử nghiệm thuốc thử Thử nghiệm Indol: Chọn khuẩn lạc có đường kính lớn 1mm cấy chuyền vào canh Trypton, ủ 44.5oC 24 Nhỏ giọt thuốc thử Kovac’s vào để yên vài phút Thử nghiệm MR (Methyl Red): Cấy khuẩn lạc E coli giả định vào ống nghiệm chứa môi trường MRVP, ủ 37oC / – ngày Thêm thuốc thử Methyl Red vào đọc kết Nếu có màu cam cần tiếp tục ủ ống mơi trường có giống thêm ngày thực lại thử nghiệm Thử nghiệm VP (Voger – Proskauer): Cấy E coli giả định vào mơi trường MRVP có pH 6.9 Ủ 37oC/24 – 48 Nhỏ thuốc thử: giọt α-naphtol, sau nhỏ giọt dung dịch KOH 40% Lắc nhẹ ống phút để oxi hoá Acetoin Đọc kết sau 20 phút Document continues below Discover more from: nghệ sinh Công học CNSH01 Đại học Tôn Đức… 249 documents Go to course Atsh - Đề cương 19 31 Công nghệ sinh học 100% (5) THÍ NGHIỆM SINH HỌC TẾ BÀO Công nghệ sinh học 100% (5) Dược động - dược 25 động học Công nghệ sinh học 100% (4) Seminar-SHTB26 27 Nhóm5 đại học tơn… Cơng nghệ sinh học 100% (4) Sinh đai cương tới C13 Công nghệ sinh học 100% (3) Hoa - thực vật dược Công nghệ 39 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN sinh học 3.1 100% (3) Kết 3.1.1 Coliforms Sau cấy ml dịch mẫu pha loãng nồng độ (10-1, 10-2, 10-3) vào ống nghiệm chứa 10 ml dịch môi trường LSB ủ 37oC 48h ghi nhận ống sinh Sau cấy từ LSB (+) sang ống chứa mơi trường BGBL ủ 37°C 48h ta ghi nhận ống dương 6 Sau tra bảng kết MPN ta thu tổng số Coliforms >1100 vi khuẩn ml mẫu 3.1.2 Coliforms phân Sau cấy ống LSB dương sang ống nghiệm chứa canh EC ta thu ống sinh Cấy ống mẫu từ ống EC dương sang môi trường thạch đĩa EMB ta thu khuẩn lạc trịn dẹp, có ánh tím - Thử nghiệm Indo Sau cấy khuẩn lạc môi trường thạch đĩa EMB vào canh Trypton nhỏ giọt thuốc thử Kovac’s vào để yên vài phút ta ghi nhận có ống có xuất vịng đỏ bề mặt môi trường => ống dương ống có lớp màu vàng bề mặt mơi trường => ống âm 7 Kết quả: có tất ống EC dương ( 3 nồng độ 0.1; 0.01; 0.001) ống Indol dương (3 nồng độ 0.1; 0.01; 0.001) Sau tra bảng MPN ta thu tổng số Coliforms phân >1260 vi khuẩn ml mẫu 3.1.3 E.Coli - Thử nghiệm Indol Cấy khuẩn lạc E.Coli giả định vào Trypton thêm thuốc thu thử Kovac’s ta thu ống có vịng màu đỏ bề mặt môi trường => ống dương (3 nồng độ 0.1; 0.01; 0.001) - Thử nghiệm MR (Methyl Red) Cấy khuẩn lạc E.Coli giả định vào mơi trường MR-VP thêm thuốc thử MR ta ghi nhận kết ống dương xuất màu đỏ sau bỏ thuốc thử vào 8 - Thử nghiệm VP Sau cấy E coli giả định vào môi trường MRVP Ủ 37°C 48 nhỏ giọt α-naphtol, sau nhỏ giọt dung dịch KOH 40%, lắc nhẹ ta ghi nhận kết khơng có thay đổi bề mặt môi trường nên ống âm Sau thử nghiệm ta ghi nhận tra bảng MPN ta tổng số E.Coli >1111 vi khuẩn ml dung dịch mẫu 3.2 Kết luận Dựa theo TCVN mẫu thịt tươi lượng Coliforms, E.Coli khơng đạt tiêu chuẩn khơng sản xuất, xuất bán cho người tiêu dùng 9 Kết thực nghiệm khơng hồn tồn xác kĩ thuật thao tác cịn nhiều thiếu sót: + Mẫu kiểm nghiệm bị nhiễm khuẩn q trình bảo quản lúc làm thí nghiệm + Trong pha mơi trường cấy bị nhiễm làm ảnh hưởng đến kết kiểm nghiệm 10 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Bùi Anh Võ (2019), Thí nghiệm kiểm nghiệm vi sinh thực phẩm, Giáo trình Khoa Khoa học Ứng dụng, Trường Đại học Tôn Đức Thắng, Việt Nam