Góp phần nghiên cứu phương pháp chiết xuất berberin từ cây vàng đắng coscinium usitatum pierre

PHầN I Đặt vấn đề Vàng đắng thc q hiÕm, mäc hoang chđ u ë c¸c níc vùng nhiệt đới,ở nớc ta mọc phổ biến miền Đông nam bộ, Nam trung bộ, Tây nguyên Ngoài thấy mọc nhiều Trung Hạ Lào, Campuchia Vàng đắng thu hái hầu nh quanh năm, thu hoạch thái mỏng, phơi hay sấy khô không chế biến khác Ngời ta đà tìm thấy rễ thân vàng đắng giàu Berberin Berberin hoạt chất nhiều nh : Hoàng liên gai (Berberis sp.), Hoàng liên ô-rô (Mahonia sp.), nhiều thuộc chi Coptis, Hoàng bá (Phellodendron amurense) Trong thân rễ vàng đắng hàm lợng Berberin cao, nớc ta nguồn nguyên liệu quý để chiết xuất Berberin Trong nhân dân, ngời ta dùng vàng đắng chữa lị, đau mắt,viêm ruột Trong y học dùng Berberin làm thuốc chữa lị, đau mắt, viêm ruột, dùng làm thuốc chữa ung th [7] Ngoài ra, ngời ta dùng làm thuốc cầm máu phụ khoa sau sinh nở, chữa viêm túi mật, đặc biệt tác dụng tốt với bệnh sỏi mËt [20] Trong kü nghƯ ngêi ta cßn dïng Berberin để tạo chất màu làm thuốc nhuộm, làm chất tạo màu gia vị đồ uống có cồn [18] lĩnh vực khác Đà có nhiều tài liệu nghiên cứu phơng pháp chiết xuất Berberin từ vàng đắng nh phơng pháp chiết Phạm Viết Trang [11], phơng pháp chiết Berberin áp lực nóng Nguyễn Liêm [8] có nhiều quy trình khác Nhng quy trình chiết số nhợc điểm nh : kéo dài thời gian, tốn nhiều dung môi, hoá chất Với mong muốn đóng góp phần nhỏ việc cung cấp thông số phơng pháp chiết xuất Berberin nói chung chiết từ vàng đắng nói riêng Do đà thực đề tài : Góp phần nghiên cứu phơng pháp chiết xuất Berberin từ vàng đắng Coscinium usitatum Pierre Với nội dung đề tài nhằm giải vấn đề sau : -Khảo sát số điều kiện chiết xuất Berberin đạt suất, chất lợng cao -Dự kiến quy trình chiết xuất Berberin điều kiện Việt Nam.Trên sở kết hoàn thiện quy trình chiết xuất Berberin để đa vào sản xuất PHầN II Tổng quan tài liệu nguồn nguyên liệu chiết xuất berberin Berberin alcaloid đợc phát khoảng 150 loài thuộc nhiều họ thực vật khác nhau: Họ Mao lơng (Ranunculaceae), họ Hoàng liên (Berberidaceae), họ Tiết dª (Menispermaceae), hä Cam (Rutaceae) Theo Muraviova, Berberin thêng có thuộc chi Berberis : - Berberis aristata DC - B buxifolia Lam - B canadonsis Mill - B glauca H.B.K - B licium Roile - B noranensis Schult - B sinosis Desf - B amurensis Rupr Có hàm lợng Berberin 0.15% - 3% , vỏ rễ đến 1% [21] Karbovic Bespalova cho berberin cã Berberis vulgaris L vµ B.amurensis Rupr víi hàm lợng alcaloid không dới 0.6% [20] Còn theo Orekhop Berberis heteropoda có chứa alcaloid ®ã cã berberin [23] Trong Tõ ®iĨn c©y thc cđa Võ Văn Chi đà cho biết thân rễ Hoàng liên gai (Berberis wallichiana D C ) có chứa berberin [2] Bên cạnh thuộc chi Berberis cho berberin có khác cho berberin nh thuộc chi Coptis: - Coptis teeta Wall - C chinensis Franch - C teetoides C.Y Cheng - C deltoidea C.Y Cheng et Hsiao [1] víi hµm lợng không 4% [3] Ngoài berberin có thuộc chi Mahonia với hàm lỵng cao : - M annamica Gagnep [19] - M nepalensis D.C.[2] - M bealei Carr [2] Ngoài Berberin đợc tìm thấy vỏ nh: Hoàng bá (Phellondendron amurense Rupr P chinense Schneider.), với tỷ lệ 1,6% [2], Thổ hoàng liên ( Thalictrum foliosolum D.C.) có chừng 0,35% [1], Vàng đắng (Coscinium fenestratum Colebr.) với hàm lợng không 1,5% [3] Tuy nhiên ngời ta thờng dùng vàng đắng để đa vào sản xuất Berberin, hàm lợng Berberin thân rễ cao, nguồn nguyên liệu nhiỊu, dƠ thu h¸i, cã ë nhiỊu vïng ë ViƯt Nam, biên giới Việt Lào, Campuchia Do ngời ta coi vàng đắng nguồn nguyên liệu số để chiÕt xuÊt Berberin Chi Coscinium: Chi Coscinium lµ mét chi nhỏ họ Tiết dê ( Menispermaceae) phân bố chủ yếu vùng núi miền Đông Nam Bộ, Nam Trung Bộ, Tây Nguyên, thấy mọc hoang nhiều trung hạ Lào, Campuchia Theo Phạm Hoàng Hộ Cây cỏ Việt Nam đà mô tả loµi Coscinium lµ:[4] - C fenestratum Colebr - C.blumeanum Miers - - C colaniae Gagn ph©n bè ë vùng Tây nguyên, Lục tỉnh Theo Bài Giảng Dợc liệu tập II đà mô tả loài: C fenestratum Colebr C usitatum Pierre phân bố vùng núi miền Đông Nam Bộ, Tây Nguyên Cây Vàng Đắng: 3.1 Những nghiên cứu thực vật: Theo Trần Công Khánh đà mô tả: vàng đắng hay gọi vang đằng, vàng giang, tơ-rơn.[6] Cây vàng đắng loại dây leo, thân gỗ to, sống lâu năm dài tới 10 m nữa, đờng kính thân từ 5-10cm Thân cành hình trụ, mặt màu vàng xám, có nếp nhăn mờ hay nhẵn Cành nhỏ đầu có lông màu nâu, sau lông, đổi thành trắng, mang vết sẹo cuống hình đĩa Mặt cắt thân cành có màu vàng tơi; mặt cắt rễ có màu vàng sẫm, nhìn rõ dÃy mạch gỗ toả tròn nh hình nan hoa bánh xe, chất nớc chảy từ mặt cắt có màu vàng Lá đơn nguyên , mọc so le, phiến mỏng dài, thờng hình trứng rộng hình trứng dài11-33cm, rộng 8-23cm, gốc phiến tròn, thẳng hay hình tim nông, thuôn nhọn, mặt lông, khô thờng nhẵn, gân gân lõm xuống; mặt dới có lông trắng, nhìn rõ 57 gân xoè nh hình chân vịt 1-2 đôi gân mép cùng, nh hệ gân hình mạng lới nhỏ Cuống mảnh, dài 3-16 cm, đầu có lông nâu, thờng phồng đầu, đầu đính cách mép phiến từ 0,2-0,8 cm, đầu dới cong gập lại nh đầu gối Cụm hoa: hoa đính đầu hình cầu; đờng kính 6-7mm có cuống nhỏ dài 10-30mm, đợc xếp chùm dài 5-11cm nách hay đoạn thân già không mang lá; cụm hoa đứng đơn độc hay tụ họp vài một, trục nhánh cụm hoa mảnh, có lông tơ màu nâu, bắc dạng dùi, dài 4-5mm Hoa đực gần nh không cuống, bao hoa có 6-9 phận hình bầu dục gần nhau, mặt có lông, mặt nhẵn; 3-6 phận phía dài 1,5-2mm, phận nhỏ dài1-1,5mm, đính thấp Bộ nhị có nhị xếp thành vòng; vòng gồm nhị rời, dài 1mm, nhị vòng dính liền ë phÝa díi Hoa c¸i cã bao hoa gièng nh hoa đực, nhị lép hình chuỳ dài 1mm, nhụy gồm noÃn dài 2mm, có lông dày, vòi hình sợi, uốn cong Chùm dài 10-15cm, mang 20-30 hạch hình cầu, đờng kính 2,53cm, mặt có lông màu nâu đến vàng cam, thịt màu vàng, vị đắng; vỏ tạo thành hạch cứng, dày tới 3mm Năm 1999, Đỗ Tất Lợi [10] đà mô tả vàng đắng khác với Trần Công Khánh: Là leo to, có phân nhánh, mọc bò mặt đất leo lên gỗ cao Thân non màu trắng bạc, thân già màu ngà, xù xì, có vết tích rụng Cắt ngang thân có hình bánh xe, có vòng lõi tuỷ xốp Lá mặt xanh, mặt dới màu trắng nhạt, có gân ( gân rõ) Hoa màu trắng phớt tím, mọc thành xim kẽ Rễ hình trụ, đầu thuôn hình nón, mặt màu trắng nhạt, mặt màu vàng Theo Võ Văn Chi mô tả [2]: Vàng đắng loại dây leo to, thân rộng 5-7cm tới 15-20cm gốc già; gỗ màu vàng, vỏ thân nứt nẻ màu xám trắng; nhánh, mặt dới lá, cụm hoa có lông màu trắng bạc Lá mọc so le, phiến to đến 25cm, gân gốc 5; màu trắng mốc mặt dới; cuống phình cong góc, dính vào phiến Hoa nhỏ mọc thành chụm tán thân già, hoa đực có nhị, hoa có nhị lép, noÃn có lông Quả hạch tròn, đờng kính cỡ 2,5cm Riêng Phạm Hoàng Hộ [4] lại mô tả vàng đắng với loài khác nhau: - Coscinium fenestratum Colebr ( Dây vàng đắng) Dây leo to, thân rộng 57cm, gỗ vàng; nhánh, mặt dới lá, phát hoa trái có lông the quắn, trắng, phiến to đến 25cm, có gân xuất phát từ đáy, trắng mốc mặt dới, cuống phù cong đáy Chụm mang tán thân già; hoa đực có tiểu nhuỵ, hoa có tiểu nhuỵ lép, tâm bì có lông cho trái tròn, to 2,5cm - C blumeanum Miers ( Vàng đắng Blume) Dây leo, thân to Lá có phiến xoan hay xoan tròn dài, to 12-35cm, rộng 6-20cm, không lông Lúc nhỏ nh mặt bọt, mặt dới mốc trắng, có lông dày, gân đáy 7, gân phụ 2-5 cặp, Cuống dài 6-20cm, gắn cách bìa 1,5-2cm Hoa đầu to 10-13cm; hoa đực có 3-6 đài, tiểu nhuỵ Hoa có dài, tâm bì Quả nhẵn cứng xoan, có lông, to 2,5cm - C colaniae Gagn 3.2 Những nghiên cứu thành phần hoá học: *.Theo nghiên cứu nớc ngoài: Trong rễ vàng đắng C.fenestratum Colebr cã mét sè alcaloid thø yÕu nh Berlambine, noroxyhydrastinine dihydroberlambine [14] Ngoài rễ C fenestratum Colebr có alcaloid mới, là: 12, 13-dihydro-8-oxo-berberin (I), cịng cã t¸c dơng tèt nh berberin O O N H O OMe OMe (I) Bên cạnh có oxyberberin, tetrahydroberberin ( canadin), sitosterol, stigmasterol [15] Các tác giả khác cho rằng: Berberin đợc tổng hợp thân rễ vàng đắng C.fenestratum Colebr [16] * Theo nghiên cứu nớc: Trong thân rễ vàng đắng có chứa Berberin với tỉ lệ từ 1,5-3% Ngoài có palmatin, jatrorrhizin [1] Theo Đỗ Tất Lợi[10]: Trong vàng đắng có nhiều alcaloid dÉn xt cđa isoquinolein, chđ u lµ Berberin, tû lƯ Berberin chiÕm tõ 1,5-2%, cã ®Õn 3% Vâ Văn Chi[2] lại cho rằng: thành phần hoá học chủ yếu vàng đắng Berberin, saponin; thân chứa Berberin có tỷ lệ tới 3,5% Ngoài có Ceryl alcohol, hentriacontane, sitosterol, acid palmitic vµ acid oleic, glycosid sitosterol, saponin vài chất nhựa nớc ta thân rễ vàng đắng có alcaloid berberin với tỉ lệ 1,5-3% Nguyễn liêm [9] đà xác định thành phần hoá học vàng đắng Berberin chiếm 82% so với alcaloid toàn phần, phần lại palmatin, jatrorrhizin Ngoài ra, luận án tiến sĩ [9], Nguyễn Liêm đà khảo sát kỹ vàng đắng hàm lợng alcaloid protoberberin phận khác Kết thân già có 2-3%, cành nhỏ 1-1,5%, 0,10,7%, vỏ thân 5%, phần thân gỗ 0,85% Điều kiện bảo quản có ảnh hởng lớn đến chất lợng nguyên liệu Độ ẩm cao làm giảm nhanh hàm lợng alcaloid hết giảm từ 3% xuống 0,13% 3.3 Những nghiên cứu ứng dụng vàng đắng y học: * Theo Đỗ Tất Lợi (1999) [10]: -Nhân dân thờng dùng thân rễ làm thuốc hạ nhiệt, chữa sốt rét, chữa lỵ, ỉa chảy, đau mắt Dùng dạng thuốc bột hay thuốc viên, ngày uống 4-6(g) -Dùng làm nguyên liệu để chiết xuất Berberin Berberin hydroclorid dùng để chữa lỵ, ỉa chảy, đau mắt Ngày uống 0,02-0,20 g dới dạng thuốc viên Ngời ta dùng để chữa bệnh gan, mật, vàng da, ăn uống khó tiêu; pha dung dịch 0,5-1% dùng để nhỏ mắt, chữa mắt đau, hay để rửa mắt * Theo Võ Văn Chi [2]: Vàng đắng nguồn nguyên liệu chiết xuất Berberin Thờng dùng chữa ỉa chảy, lỵ trực khuẩn, viêm ruột, vàng da, sốt, sốt rét, tiêu hoá Ngày dùng 6-10g dạng thuốc sắc, thuốc bột hay viên Hoặc dùng Berberin chlorid dạng viên nén 0,05 g, ngày 6-10 viên chia làm lần Dùng dung dịch 0,5-1% Berberin chlorid để chữa đau mắt ấn độ ngời ta dùng rễ trị lỵ dùng rửa mụn nhọt, vết thơng Nớc sắc vỏ dùng chữa sốt gián cách, nớc sắc thân dùng để trị rắn cắn Ngoài Berberin đắng nên có tác dụng kháng virus đà ®ỵc dïng mét sè trêng hỵp nhiƠm trïng nh: Bệnh kiết lỵ amip, bệnh Leishmania da bệnh dịch tả Dùng dới dạng Berberin sulfat, hydrochlorid dạng chlorid [18] Các tác giả Nhật đà chứng minh: Berberin có nhiều họ thực vật cã t¸c dơng øc chÕ mét sè ung th Theo Phan Quốc Kinh: Berberin alcaloid có tác dụng thông mật, co bóp tử cung, có tác dụng điều trị bệnh Leishmania, Trichomonas, bệnh lỵ, tả, sốt rét đau mắt Gần đà phát đơc tính chÊt chèng ung th cđa Berberin [7]  Karbovic vµ Bespalova đà cho biết[20]: Vàng đắng dùng làm thuốc cầm máu phụ khoa sau đẻ, viêm túi mật Berberin sulfat làm giảm huyết áp, dùng trị viêm túi mật đặc biệt bệnh sỏi mật Dùng dạng viên nén 0,005g Còn Maskovski lại cho rằng: Berberin sulfat dùng chữa viêm gan, viêm túi mật, sỏi mật, ngày 5-10mg, đợt điều trị từ 2-4 tuần Ngoài dùng dới dạng cồn[22] Berberin đợc chiết từ C.fenestratum có hiệu ức chế vi khuẩn gây bệnh đờng ruột gia súc nh gà, lợn, chó trộn vào thức ăn nớc uống [17] Ngoài ứng dụng trên, Berberin dùng để làm chất tạo màu thực phẩm loại đồ uống có cồn [18] Vì công dụng quan trọng nh công trình nghiên cứu cần phải bổ sung tiến hành đề tài Phần III Thực nghiệm kết Nguyên liệu phơng pháp nghiên cứu 1.1 Nguyên liệu: - Thân vàng đắng (Coscinium usitatum) đợc thu hoạch trung hạ Lào (do anh Chu Văn thu hoạch) Đem thái mỏng, sấy khô 600C, sau tán thành bột thô 1mm - Thêi gian lÊy mÉu: th¸ng 4/2000 (tríc mïa ma) 1.2 Phơng pháp nghiên cứu 1.2.1 Định lợng Berberin vàng đắng (theo DĐVNII- tập 3) 1.2.2 Khảo sát độ tan muối Berberin: - Dùng dung dịch acid: acid sulfuric 2%, 4%, acid hydrochlorid 1% vµ acid acetic 1% - Chiết phơng pháp chiết nguội 1.2.3 Phơng pháp chiết xuất Berberin vàng đắng: - Khảo sát nồng độ muối NaCl: tìm nồng độ NaCl suất chiết xuất tối u - Tìm nồng ®é H2SO4 cho hiƯu st chiÕt xt cao - T×m số lần chiết để đạt hiệu cao - Tìm tỷ lệ dung môi/ nguyên liệu để chiết đạt hiệu cao - Các hoá chất, nguyên liệu đạt tiêu chuẩn DĐVN II, tập 1.2.4 Xác định hàm lợng Berberin sản phẩm chiết đợc từ vàng đắng (bằng phơng pháp HPLC): Tiến hành trung tâm giáo dục phát triển sắc ký Việt Nam (EDC) trờng Đại học Bách khoa Hà Nội - Máy sắc ký HPLC: m¸y Hewlet Packard 1100 kÌm m¸y vi tÝnh CR-4AX - Cét zorbax RX-SIL - Pha ®éng: Ethyl acetat: acid formic: methanol (15: 3: 2) - Bíc sãng ph¸t hiƯn: 280 nm - Lợng mẫu bơm: 20l, bơm tay - Tốc độ dòng: 1ml/ 1phút - áp suất: 66 bar (kg/cm3) 1.2.5 Phơng pháp tinh chế Berberin: - Theo phơng pháp tinh chế Berberin chiết từ vỏ Hoàng bá môn Công nghiệp dợc - Trờng Đại học Dợc Hà Nội 1.2.6 Dự kiến xây dựng mô tả quy trình chiết 1.2.7 Khảo sát quy trình chiết xuất Berberin cũ So sánh với quy trình dự kiến 1.2.8 Phơng pháp xử lý số liệu [5]: Số liệu thực nghiệm đợc xử lý theo phơng pháp thống kê ứng dụng y dợc Xác định giá trị trung bình, độ lệch chuẩn (S) khoảng tin cậy () n - Giá trị trung bình: x = ∑ xi n i=1 - §é lƯch chn: S2 = ∑ ( xi− x¯ )2 n−1 S - Khoảng tin cậy trung bình: = x t( f ) √n Trong ®ã : S: ®é lƯch chn n: sè lÇn thÝ nghiƯm f = n-1: sè bËc tù t : H»ng sè student víi  = 0,05 So sánh giá trị trung bình theo giả thiết trung bình cộng (test T) chấp nhận mức ý nghĩa (đợc quy ớc p) 0,05 Theo thống kê dợc học: - Nếu > 0.05: hai giá trị khác ý nghÜa thèng kª - - NÕu  < 0,05: hai giá trị khác có ý nghĩa thống kê 2- Kết thực nghiệm: 2.1 Định lợng Berberin vàng đắng: Theo dợc điển Việt Nam II - tập - trang 303 Nguyên tắc định lợng: theo phơng pháp cân Tiến hành: Cân xác khoảng 10g bột dợc liƯu cho vµo dơng chiÕt soxhlet, chiÕt b»ng methanol (TT) tới dịch chiết không màu vàng nhạt Cất thu hồi methanol cách thuỷ lại khoảng 1/10 thể tích ban đầu Thêm 30ml níc cÊt vµ gam Magnesi oxyd (TT) TiÕp tơc đun cách thuỷ nhiệt độ 60-700C khoảng 15 phút, lắc bình Lọc hút chân DO THI m tua (g) 0.8 0.6 0.4 0.2 C C C C C C C C C C10 Nong H2SO4 (%) Đồ thị II: Mối liên quan khối lợng Berberin nồng độ H2SO4 Nhìn vào đồ thị ta thấy nồng độ dung dịch sulfuric 2% nồng độ muối 32,4% thu đợc kết cao nhất, sau nồng độ acid H2SO4 2,1 - 2,2%, nồng độ H2SO4 1,5% thu đợc kết thấp Khảo sát nồng độ NaCl: Để tiện trình làm thực nghiệm, chọn nồng độ dung dịch H2SO4 2% Chúng tiến hành thay đổi hàm lợng NaCl, chiết với 40ml dung dịch H2SO4 2%, chiết lần Kết đợc ghi bảng Bảng 4: Khối lợng Berberin thu đợc thay đổi nồng độ Natri clorua NaCl(g) n  TB 10 15 20 25 26 0,2852 0,2782 0,2612 0,2518 0,2820 1,3584 0,2717  0,0179 0,3596 0,3630 0,3542 0,3841 0,3456 1,0865 0,3613 0,0178 0,4621 0,4632 0,4716 0,4526 0,4710 2,3205 0,4641  0,0096 0,6343 0,6318 0,6081 0,6218 0,6280 3,1240 0,6248  0,0130 0,6439 0,6430 0,6512 0,6632 0,6581 3,2594 0,6519  0,0109 27 28 29 30 31 0,6509 0,6532 0,6548 0,6601 0,6492 3,2682 0,6536  0,0052 0,6723 0,6681 0,6703 0,6678 0,6715 3,3500 0,6700  0,0023 0,7003 0,7089 0,7102 0,7058 0,7041 3,5293 0,7059  0,0048 0,7517 0,7508 0,7489 0,7520 0,7498 3,7532 0,7506  0,0015 0,7652 0,7701 0,7685 0,7718 0,7690 3,8446 0,7689  0,0029 (tiÕp B¶ng 4): NaCl(g) n  TB (TiÕp b¶ng 4): NaCl(g) n  TB 31,5 A1 0,7068 0,7013 0,7102 0,7078 0,7115 3,5376 0,7075  0,0049 31,6 A2 0,6699 0,6632 0,6708 0,6657 0,6715 3,3411 0,6682  0,0044 31,7 A3 0,6803 0,6815 0,6789 0,6776 0,6808 3,3991 0,6798  0,0017 31,8 A4 0,7173 0,7158 0,7192 0,7208 0,7165 3,5896 0,7179  0,0025 31,9 A5 0,7637 0,7648 0,7592 0,7719 0,7586 3,7882 0,7576  0,0107 32,0 A6 0,8815 0,8786 0,8802 0,8820 0,8791 4,4014 0,8803  0,0017 32,1 A7 0,8203 0,8169 0,8210 0,8187 0,8190 4,0959 0,8192  0,0029 32,2 A8 0,8943 0,8903 0,8918 0,8896 0,8908 4,4568 0,8914  0,0022 32,3 A9 0,9312 0,9308 0,9362 0,9296 0,9301 4,6579 0,9316  0,0033 32,4 A10 0,9339 0,9326 0,9348 0,9358 0,9316 4,6687 0,9337  0,0010 (TiÕp b¶ng 4): NaCl n  TB (TiÕp b¶ng 4): NaCl n  TB 32,5 A11 0,7135 0,7102 0,7206 0,7186 0,7218 3,5847 0,7169  0,0061 32,6 A12 0,7073 0,7166 0,7054 0,7091 0,7125 3,5509 0,7102  0,0054 32,7 A13 0,6467 0,6474 0,6508 0,6623 0,6457 3,2529 0,6506  0,0085 32,8 A14 0,6491 0,6472 0,6389 0,6596 0,6460 3,2408 0,6482  0,0092 32,9 A15 0,6393 0,6308 0,6412 0,6381 0,6481 3,1975 0,6395  0,0077 C¸c sè liƯu đợc biểu diễn đồ thị Đồ thị 3: Mối liên quan khối lợng Berberin nồng ®é NaCl DO THI m tua (g) 0.8 0.6 0.4 0.2 A1 A3 A5 A7 A9 A1 A1 Nong NaCl (%) A1 NhËn xét: Qua đồ thị ta thấy Berberin clorid tủa nhiều nồng độ từ 32,2-> 32,4 (%) *Thay đổi số lần chiết: Sau tìm đợc nồng độ H2SO4, NaCl đạt suất chiết tối u tiến hành khảo sát số lần chiết xuất Berberin từ dợc liệu Chiết với dung dịch acid H2SO4 2,0%, V = 40ml, chiết lần, lợng muối 32,4 (g) Tiến hành nh quy trình Kết bảng Bảng Khối lợng Berberin thu đợc thay ®ỉi sè lÇn chiÕt Sè lÇn chiÕt n