Nghiên cứu phương pháp chiết xuất và định lượng đồng thời đồng phân đối quang evodiamin và rutaecarpin trong quả ngô thù du (evodiae fructus) bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao

Mục tiêu nghiên cứu: 1) Xây dựng quy trình chiết xuất ĐPĐQ của evodiamin và rutaecarpin trong quả Ngô thù du (NTD); 2) Thầm định quy trình định lượng đồng thời ĐPĐQ của evodiami[r]

AB5D:2-2'-hydroxybenzoyì-5,7-dicỉorobenzofuran Cl _

3’

CTPT: C15H803CI2, p t ỉ: 307,13; Hiệu suất: 85 % Bộỉ kết tinh màu vàng SKLM Rf: 0,57 (A), 0,76 (B), 0,91 (C); t°Cno_= 117-118 °C; LC-MS (m/z): [M-H]+ (tính íốn: 304,9772; tìm thấy: 304,9807); H-NMR (500 MHz, CDCI3) õ (ppm): 12,02 (s, 1H, OH), 7H nhan ỉhơm: 8,45 (dd, 1H, J = 1,5; 8 Hz), 7^66 (s, 1H), 7,65 (đ, 1H, J = Hz), 7,60-7,56 (m, 1H), 7,53 (d,1H, J - Hz), 7,09 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,06-7,02 (m, 1H).

4 Thử hoạt tính kháng khuẩn

Kểl định tính kháng khuẩn cho thấy chất AB1, AB2, AB3, AB1D, AB3D có tác dụng kháng khuẩn lên chủng vi khuẩn: Escherichia colt ATCC 25922, MSSA ATCC 29213, MRSA ATCC 43300-

Streptococcus faecalis ATCC 29212; với kết

trình bày bảng 1

Bảng Đường kính vịng kháng khuẩn dẫn chất 2-benzoylbenzofuran

Kí hiệu Đườnq kính vịnq khánq khuấn fmmi* £ coli S faecalis MSSA MRSA AB1 10 13 9,5

-AB2 9,5 9,5 -

-AB3 9,5 9,5 - ~

AB1D -

-AB3D 13 10

* Kích ỉhước lỗ 8 mn> BÀN LUẬN

Thực đề tài, nhận thấy, phản ứng quy trình tỗng hợp xảy tương đối dễ hiệu suất cao (>70%) Các chất thu có độ tinh khiết kết phổ khối, phổ cộng hường từ hạỉ nhân rõ ràng Kết auả thử tác dụng khang khuẩn cho thấy số dẫn Chat thề hoạt tính kháng khuẩn - định hướng cho nghiên cứu

KẾT LUẬN

Chủng tổng hợp 10 dẫn chất 2- benzoylbenzofuran íừ dẫn chất salicyialdehyd ơ-bromoceton Các sản phẩm sau tổng hợp xác định cấu trúc tính chấi bằng: SKLM, nhiệt độ nóng chảy, u v , IR, NMR, MS

Qua kết thử hoạt tính Kháng khuẩn cho íhấy, một số có tác dụng E Coli, S.areus MSSA vắ MRSA, S faecalis góp phần xây dựng khung cấu trúc có tác dụng kháng khuẩn, tạo tiền đề cho nghiên cứu phát triển kháng sinh

TÀI L lệ ủ THAM KHẢO

1 Jiang, X.; Liu, w ; Zhang, w ; Jiang, F.; Gao, z.; Zhuang, H.; Fu, L (2011), Synthesis and antimicrobial evaluation of new benzofuran derivatives European

Journal of Medicinal Chemistry, 46, pp 3526-3530.

2 Shang, Y.; Wang, c.; He, X.; Ju, K.; Zhang, M.; Yu, S.; Wu, J (2010), DMAP-catalyzed cascade reaction: one-pot synthesis of benzofurans in water Tetrahedron ,

ỔỔ, pp 9 -9 3

3 Rao, M L N.; Awasthi, D K.; Banerjee, D (2007), Microwave-mediated solvent free Rap-Stoermer reaction for efficient synthesis of benzofurans Tetrahedron Letters,

48, pp 431-434.

3 Pham, T.-A N (2013), Design, synthesis, and SAR studies of novei scaffolds for drug discovery Dissertation for the degree of doctor Kangwon National University

4 Pham T.-A N.; Che, H.; Phan, P.-T T.; Lee, J.-W.; Kim, S.-S.; Park, Hi (2012), Oroxyiin A analogs exhibited strong inhibitory activities against iNOS-mediaied nitric oxide (NO) production Bioorganic & Medicinal Chemistry

Letters, 22, pp 2534-2535.

5 Igor Pravst; Marko Zupan; stojan stavber (2006), Directed regioselectiviiy of bromination of ketones with NBS: solvent - free conditions versus water Tetrahedron Letters, 47, pp 4707 -4710

6 Wen-Zhang Chen; Ling-Ling Fan; Hai-Tao Xiao; Ying Shou; Wan Xiao; Jian-Ta Wang; Lei Tang (2014), First total synthesis of natural products cajanolactone A and cajanonic acid A Chinese Chemical Letters, 25, pp 749-751

NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP CHIÉT XUÁT

VÀ ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI ĐỊNG PHÂN ĐĨI QUANG EVODIAMIN VÀ RUTAECARPIN TRONG QUẢ NGÔ THÙ DU (EVODIAE FRUCTUS)

BẰNG SÁC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO

Nghiên cứu Nguyên T hị T húy Ngọc (Sinh viên Dược 5, K hoa Dược, T rường Đ i học Y D ợ c c ầ n Thơ)

Giáo viên h n g dẫn:

TS.DS Nguyễn Thị Ngọc Vân (Liên m ơn Hóa phân tích - Kiềm nghiệm - Độc chắt, Khoa Dược,

T rương Đ ại học Y D ợ c c ầ n They)

TÓM TẮT

Đặt vấn đề: Chiết xuất định lượng thành phần cố tác dụng điều trị dược liệu rật cần thiết, đặc biệt hoạt chất dạng đồng phân đối quang (ĐPĐQ).

Mục tiêu nghiên cứu: 1) Xây dựng quy trình chiết xuất ĐPĐQ evodiamin rutaecarpin Ngô thù du (NTD); 2) Thầm định quy trình định lượng đồng thời ĐPĐQ evodiamin rutaecarpin sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC).

-Đối tuựng phương phấp nghiên cứu: Quà khô NTD cung cấp từ nhà thuốc đơng dược cầ n Thơ, loại bị tạp, xay, rây qua cỡ rây 0,3 /77/77 Tiến hành khảo sảt cốc yếu tố ảnh hường quy trình chiết: dung mơi, thời gian

chiết, thể tích dung môi số lần chiết lặp lại; thẩm định quy trình định lượng.

Két quả: Đẫ chọn quy trình chiết thích hợp phương pháp chiết có hỗ trợ siêu âm; tìm đuợc điểu kiện sắc ký thích họp cột Chiralpak AD-H, pha động: n-hexan-2-propanol-ethanol (70:20:10, tưtưtt), tốc độ dịng: 0,7 ml/phút, thể tích tiêm mẫu: 20ịji, bước sóng: 225nm.

Kết luận: Quy trình định lượng đồng thời ĐPĐQ evodiamin rutaecarpin từ NTD HPLC ứnq dụng định lượng 13 mẫu dược liệu, cho thắy thành phần hoạt chất quà ĐPĐQ S-(+)-evodiamin.

T khóa: đồng phần đối quang SUMMARY

OPTIMIZATION OF EXTRACTION CONDITIONS AND SIMULTANEOUS QUANTIFICATION BY CHIRAL HPLG OF EVODlAMiNE ENANTIOMER AND RUTAECARPINE IN EVODIAE FRUCTUS

Nguyen Thi Thuy Ngoc, Nguyen Thi Ngoc Van Can Tho University o f Medicine and Pharmacy

Background: Determination o f bio-compound in herbal plant is very important, especially chiral compounds. Objectives: 1) Optimization o f extraction condition; 2) Validation o f chiral HPLC method fo r quantification of evodiamine enantiomers and rutaecarpine in evodiae fructus.

Materials and Methods: Evodiae fructus pulverized into powder, passed through a 0.3 mm sieve Optimization o f extraction procedure: the parameters included the type o f solvent, extraction time, temperature, times of sonicatorwere surveyed; Method validation under the ICH guideline.

Result: Chromatographic separations were performed on a Chiralpak A D -hf’ column (250mm X 4.6mm i.d.,

5ụm) with elution o f n-hexane-2-propanol-ethanol (70:20:10, vA/A/) in a flow rate o f 0.7ml/min and detection at 225nm The samples were prepared by solid phase extraction method The validated method was successfully applied to the quantitative analysis o f three constituents in 13 batches o f samples.

Conclusion: The development, validation and application o f a chiral LC method fo r the quantitative analysis of evodiamine enantiomers and rutaecarpine in evodiae fructus were described It has been successfully applied to analyze 13 batches o f samples The results showed that S-(+)-evodiamine was the main component.

Keyw ords: Evodiamine, Rutaecarpine, Evodiae fructus, Enantiomer separation.

ĐẶT VÁN ĐÈ

Ngơ thù du có tên khoa học Evodia rutaecarpa họ Cam (Ruỉaceae) sử dụng từ lâu dân gian đề trị bệnh viêm nhiễm, sốt nóng, ổau bụng [2] Hoạt chất írong NTD hai aĩcaioid evodiamin vằ ruìaecarpỉn với nhiều tác dụng: kháng viêm, chống huyết khối, hạ huyết áp, kháng ung thư nghiến cứu chứng minh, nhiên nghiên cứu thực dạng racemic evodiamin [7],[8],[9],[11] Bên cạnh đó, evodĩamin NTD tồn chủ yếu dạng S-(+)-evodiamin [5] chưa có nghiên cứu sử dụng phương pháp HPLC để định lượng ĐPĐQ cua evodiamin rutaecarpin Vì vậy, nghiên cứu thực với mục tiêu:

1) Xây dựng quy trình chiết xuất ĐPĐQ evodiamin rutaecarpin Ngô Thù Du (NTD)

2) Xây dựng thẩm định quy trình định lượng đồng thời ĐPĐQ- evodiamin rutaecarpin sắc ký iỏng hiệu cao

Đốỉ TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN u

1 Đổi tứợng nghiên cứu

Quả Ngô ỉhù du ổược mua nhà thuốc đông dược Cần Thơ, kiểm tra đạt u cầu íheo chun luận "Ngơ thù du” cùa DĐVN IV [1] Dược liệu loại bỏ tạp, xay, rây qua cỡ rây 0,3 mm

2 Phương pháp nghiến cứu

2.1 Hóa chắt - d u n g m ô i - th iế t b ị

Chất đối chiếu: Chuẩn R-^-evodiamin, S-(+)- evodỉamin điều chế sắc ký lỏng bán điều chế, đánh giá độ ỉinh khiết xác định cấu trúc

phương pháp phồ nghiệm [3], hàm lượng 99,5%; chuẩn rutaecarpin chuấn nồi diphenhydramine, hàm lượng 99,0% Sigma-AIdrich (Mỹ)

Dung môi: Hexan, iso-propanol, ethanol (EtOH), acetonitrii (MeCN), methanol (MeOH) ioại HPLC Dicloromethan (DCM), MeOH, aceton, cloroform, ethyi acetat, EtOH loại phân tích

Thiết bị: Máy HPLC phân tích Thermo Scientific Spectra, đầu dị UV-vis (Mỹ) Cột ĐPQH Chirpak AD-H, Chiralcel OĐ-AD-H, Chiraicel OJ-H (250 mm X 4,6 mm i.d., (im) Bộ chiết pha rắn manifold (Water, Mỹ)

2.2 N ộ i dung nghiên c ứ u

2.2.1 khảo sảt lựa chọn điều kiện sắc ký

Để tách ĐPĐQ cùa evodiamin, kỹ thuật HPLC với cột pha tĩnh bất đối áp dụng Hệ pha động thường sử dụng để tách đồng phân lầ n-hexarì- alcohoi Do đỗ tỷ lệ dung môi pha động khác khảo sát để chọn điều kiện sắc ký thích hợp thỏa

các pỉc nằm khoảng 0,8 - 1,5 thời gian phân tích ngắn < 20 phút

2.2.2 Xây dựng quy trình chiết làm dịch chiết

tố lại cố định Mỗi yếu tố tiến hành chiết lần, tính trung binh nhấm loại trừ* sai số ngẫu nhiên thí nghiệm Lượng dưực liệu sử dụng íà 0,1 gam Hiệu chiết đánh giá thông qua tồng diện tích pic (Sp) ĐPĐQ evodiamin rutaecarpin phương phap HPLC

Làm dịch chiết: Sử dụng cột SPE pha đảo (C-I8, 400 mg, 6 ml) Hoạt hóa cột SPE cách cho ml MeÓH va mi nước Các yếu tố cần khảo sát: dung môi loại tạp, dung môi rửa giải, thể tích dung mơi sử dụng tốc độ dịng qua SPE

2.2.3 Thẩm định quy trình định lượng

Tiến hành khảo sát tính phù hợp hệ thống thẩm định quy trinh định lượng theo tiêu chuẩn ÍCH AOAC (4], [6] Đánh giá 6 tiêu quy trình định lượng bao gồm: tính đặc hiệu, tính tuyển tính miền giá trị, độ xác, độ đúng, giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ)

2.3.4 ứng dụng quy trình định lượng số mẫu dược liệu mua thành phố c ầ n Thơ: Các mẫu

được định iượng lần tính giá trị trung binh KẾT QUẢ NGHIÊN cứ u

1 Khảo sá t lựa chọn điều kiện sắc kỷ Kết cho thấy cột Chirpak ẢD-H có khả íách đồng thời pic thời gian phân tích ngắn (< 20 phút) (Bảng 1, hlnh 2)

Như điều kiện sắc ký thích hợp để định lượng đồng thời ĐPĐQ evódiamin va rutaecarpin ià cột Chiraípak AD-H (250 mm X 4,6 mm i.d., fim), pha động hỗn hợp n-hexan- 2-propanol-ethanol (70:20:10, tt/tt/tt), tốc độ dịng: 0,7 mi/phút, thể tích tiêm mâu 20 Ị i l , bước-sóng phát hiện: 225 nm Thời

gian lưu (tR) cùa R-(-)-evodiamin, S-(+)-evodỉamin rutaecarpin la 8,2; 9,4 17,5 phút

Bảng Kết điều kiện sắc ký khảo sát cột pha tĩnh bất đối Chiralcel OJ-H, Chiraiceỉ OD-H, Cột Pha động Đống phân đ ố i Quanq cùa evodiamine enantiomer Rutaecarpin

ÍR1 ki a Rs Picđơnq phân 1 ÍR k a Rs

OJ-H A 10,21 1,92 1,51 2,9 (S) 44,0 11,57 3,99 >15

B 12,39 2,54 1,53 2,2 (S) 70,0 19,00 6,55 >15 c 13,28 2,8 1,28 1,1 (S) >70 >15 D 15,90 3,54 1,31 1,3 (S) >70 >15 OD-H A 7,60 0,81 1,14 0,8 (R) 8,1 0,93 1,00 n.r B 8,98 1,14 1,13 0,8 (R) 9,5 1,26 0,98 n.r c 12,35 1,94 1,23 1,6 (R) 14,2 2,38 1,00 n.r D 13,29 2,16 1,24 1,7 (R) 14,3 2,40 0,90 n.r AD-H A 8,41 1,27 1,57 6,8 (R) 42,0 10,35 5,15 >15 B 7.05 1,35 1,67 4,4 (R) 46,0 11,43 5,09 >15 c 5,81 0,57 1,235 1,1 (R) 12,2 2,31 3,26 10,1

D 7,05 0,91 1,19 1,5 (R) 14,0 2,78 2,94 14,0 E 16,18 3,37 1,19 4,8 (Rì 25,3 5,84 1,46 11,3 F 7,265 0,96 1,23 1,8 (R) 15,8 3,27 2,77 12,9 G 7,503 1,03 1,24 1,8 (Rì 15,9 3,30 2,59 12,5 H 8,24 1,23 1,24 2,9 (R) 17,5 3,73 2,46 15,0

IM Miuuy WUI uu-ựu, r u a uụny n nexan/cinanoi; OU/4U ; a : n e x a n /tin a n o i: /u /áu; u: fiexan/2-hTopanoi:

60/40; D: Hexan/2-Propanoi: 70/30; E: Hexan/2-Propanoi: 85/15; F: Hexan/2-Propanol/Ethanol: 65/30/5; G: Hexan/2-Propanol/Ethanol: 70/25/5; H: Hexan/2-Propano!/Ethanol: 70/20/10 ’

2 Xây dựng quy ỉrìn h ch iế t làm dịch chiết

Hinh Đồ thị biểu diễn kết khảo sát điều kiện chiết xuất tối ưu

Nhận xét: dựa đồ thị thấy, điều kiện chiết tối ưu cho phương pháp chiết có hỗ trợ siêu âm lá: dung môi chiết acetonitril, thời gian chiết 30 phút, thể tích dung mơi 50 mí, số lần chiết iặp lại

Khảo sàt quy trình làm dịch chiết kỹ thuật chiết pha rắn

Dịch chiết ioại tạp ml hỗn hợp 30% isopropanol-nước, rửa giồỉ ml acetonitril Dịch chiết sau loại íạp kỹ thuật chiết pha rắn cho kết sắc ký đồ sạch, pịc tạp đường không bị nhiễu Hiệu suất thu hồi quy trình đánh giá việc thêm chuẩn ĐPQH evodiamin rutaecarpin vảo cột SPE trước tiến hành loại tạp-rừa giải Két hiệu suầt chiét chất > 95%

w Ị

j

V " A

\

Ắ

" '

j

í V í

i ị

í Ẳ

■ - ■ ■ , , - ■ • •• ‘ • i-r.

Hình Sắc ký đồ (a) hỗn hợp chuẩn (b) dịch chiết Ngô thù du sau loại tạp SPE, (1) diphenhydramin (IS), (2) R-(-)-evodiamin, (3) S-(+)'evodiamin, (3) rutaecarpin

3 Thẩm định quy trình đ ịnh lượng

Khảo sàt tỉnh phu hợp hệ thống

Tiến hành tiêm lặp lại 6 lần liên tiếp dung dịch chuẩn, kết cho thay RSD tR Sp ĐPQH evodiamin rutaecarpin nhò 2% hệ íhống sắc ký có tính tương thích phù hợp

Tính chọn lọc

Mẫu trắng (MeOH) mẫu pha động khơng xuất pic có tR tương đương với tR pỉc mằu chuẩn Mầu thử co pic có tR tương đương với ỈR chuẩn nội, hai pic ĐPQH evodiamin pic rutaecarpin mẫu chuẩn, s ắ c ký đồ mẫu thử ihêm chuần có tăng lên chiều cao, diện tích ba pic có ÍR tương đương với tR ba pic mẫu chuẩn Như phương pháp có tính chọn lọc cao

Tính tuyến tính, miền giá trị, LOD, LOQ; độ xác độ đúng

Đường tuyen tính xây dựng 8 điểm, ứng với điềm nồng độ chuẩn ỔỮỢC định lượng, LOD LOQ xác định nồng độ mà tỉ lệ chiều cao pic hoạt chất so với độ nhiễu đường (tỉ !ệ S/N) đến lần LOD

10 iần đốỉ với LOQ Độ xác cùa phương pháp ổánh giá dựa vào khảo sát độ lặp lại ngày) độ xác trung gian liên ngày Độ xác định phương pháp thêm chuẩn, xác định tỷ lệ phục hồi Kết trình bày írong bảng

Bằng Kết thấm định quy trinh phân ỉích Các thơng số

R-(-)-evodiamin evodiamins -í+ x

Rutaecarpin

Phương trình quy

y = 0,064x +0,009

y = 0,064x+

0,008

y = 0.034X + 0,004

Hê số tương quan (R 2f

0,999 0,999 0,999

Khoảng tuyến tính (Mg/m!)

0,05 -50,0 0,05 -50,0 0,1 -50 LOD (uq/m!) 0,01 0,01 0,05

L O Q (MQ/ml) 0,05 0,05 0,10

Độ xác nqàv (n=6)a

1,6 0,7 2,6

Độ xác liên ngày (n=3)a

2,1 ,2 2,5

Độ (thêm chuẩn 80%)b

Độ (thêm chuẩn 100%)b

102,9 99,8 98,0

Đô (thêm

chuẩn 120%)b 100,6 103,7 100,9

a Đánh giá qua giá trì RSD % ket quả

b Đánh giá qua tỷ lệ phục hồi (%) chuẩn thêm vào thừ

Kết bảng cho thấy, khoảng nồng độ khảo sái có từớng quan tuyến tĩnh chặt chẽ nồng độ với dỉệrt tích pic đáp ứng với hẹ số tương quan xấp xỉ 1, đồng ỉhời có giá trị LOD LOQ thấp chứng tỏ phương pháp có độ nhạy cao Phương pháp có độ lặp lại đọ cao với RSD evòdiamin rutaecarpin nhỏ 3% (trong ngày khác ngày) [4], tỷ lệ phục hồi 98- 103,7%, đáp ứng yêu cầu ve thẩm định phương pháp phân tích dược liệu Như vậy, quy trình đạt u cầu độ đúng, độ xác theo tiêu chuẩn AOAC [4]

4 ứ n g dụng đ ịnh lượng dư ợ c Siêu

Kết định lữợng 13 mẫu dược liệu Ngô thù du cho thấy, hàm iượng evodiamin rutaecarpin mẫu có khác dao động khoảng từ 0,0005-0,0372% R-(-)-evodiamin, từ 0,0033-0,6265% 5-(-i-)-evodỉamin từ 0,0290-0,3192% rutaecarpin tính theo dược liệu khơ Kếỉ cho thấy S-(+)-evodiamin rutaecarpin hoạt chất dịch chiết Ngô thù du

BÀN LUẬN

1 Khảo sát lựa chọn điều kiện sắc kỷ

Đây công bố đầu tiến tách đồng thơi ĐPQH evodiamln rutaecarpin phựơng pháp sắc ký lịng sử dụng cột ĐPQH Quy trình sắc ký khảo sát loại cột pha tĩnh bất đối, kết bảng cho thấy cột Chiralcel OJ-H tách pic ĐPĐQ evodiamin nhiên tR pic rutaercarpin dài (44 phút), cột Chiraicel OD-H tách pic ĐPĐQ evodiamin không tách pic S-(+)- evodiamỉn rutaecarpin thay đổi tỷ lệ pha động Như cột Chiraipak AĐ-H chọn cỏ kha tách đồng thời pic thời ặian phân tích ngắn (< 20 phút) Thứ tự pic ỉrên sắc ký đồ xac định tiêm chuẩn đơn R-(-)-evodiamin, S- (+)-evodiamin rutaecarpin

2 Xây dựng quy trình c h iế ỉ làm dịch chỉết

Quy trinh chiết phương pháp có hỗ trợ siêu âm đơn giản, dễ thực nhanh phát triển thành quy trỉnh chiết thường quy ứng dụng kiểm tra chất lứợng dược liệu thị trường

Để đảm bảo quy trinh chiết ổn định, lặp lại tốt kiểm sốt hoạt chất khơng bị q trình chiết định lượng, chuần nội diphenhydramine cho vào dược liệu trước chiết Quy trình chiết đánh giá hiệu suất chiết phương pháp thêm chuẩn vào dược liệu đánh giá thông qua ty lệ thu hồi chuẩn thêm vào Kết hiệu suất chiếi cùa chất > 95% chứng tỏ quy trỉnh đàm bảo tính nguyên vẹn suốt trình xử lý mẫu

3 Thầm định qu y trình đ ịnh lượng

Kếỉ xay dựng phương pháp' cho thấy,

tiêu thẩm định đáp ứng quy định thẩm định theo tiêu chuẩn ICH với thời gian phân ỉích ngắn (20 phút), độ nhạy cao (LOQ = 0,05 ụg/m! evodiamin 0,1 Ịjg/mí rutaecarpin), sử dụng để định lượng hoạt chất nồng độ thấp dược liệu

KẾT LUẬN

Quy trinh chiết làm dịch chiết Ngô ỉhù du kỹ thuật chiết pha rắn đữợc khảo sat, công bố ve xây dựng quy trình chiết ĐPQH Quy trinh định lượng đồng thời ĐPĐQ evodiamin rụtaecarpin dịch chiết phương pháp sắc ký lỏng sư dụng cột ĐPĐQ Chiralpak AD-H (250 mm X 4,6 mm i.d., (im) xây dựng thẩm định theo hướng dẫn ICH với thời gian phân tích ngắn (20 phút), độ nhạy cao Quy trinh ứng dụng định lượng 13 mẫu dược liệu, kết cho thấy thành phẩn hoạt chất ngơ thù du dạng đồng phân đối quang S-(+)- évodiamin

TÀỈ LIỆU THAM KHẢO

1 Hội đồng Dược điển, 2009 Dược điển Việt Nam

IV Nhà xuắt Y học, ír 841-842

2 Đỗ Tất Lợi, 2004 Những thuốc vị thuốc

Việt Nam Nhà xuất Y học, ỉr 378-379 >

3 Nguyễn Thị Ngọc Vân, Nguyễn Thị Tường Vi, Kyeong Ho'Kim, 2015 ừng dụng sắc ký lỏng hiệu cáo chế chất chuần đồng phân quàng học evodiamin Tạp chí Y Dược học cần Thơ, số 1, tr 138- 143

4 AOAC, 2012 Guidelines for Standard Method

Períormance Requirements.

J Buckingham, K, H Baggaiey, A D Roberts, L F Szabo, 2010 Dictionary o f alkaloids, pp 758, E310.

6 ICH, 2005 Validation of analytical procedures:

Text and Methodology Q2(R1).

7 Y Hu, H Fahmy, J.K Zjawiony, G.E Davies, 2010 Inhibitory effect and transcriptional impact of berberine and evodiamine on human white preadipocyte differentiation Fitoterapia, 81, pp 259-268.

8 S Jia, c Hu, 2010 Pharmacological Effects of Ruỉaecarpine as a Cardiovascular Protective Agent

Molecules, 15, pp 1873-1881.

9 Y Kobayashi, Y Nakano, M Kizaki, K Hoshikuma, Y Yokoo, T Kamiya, 2001, Capsaicin-iike Anti-Obese Activities of Evodiamin from Fruits of Evodia rutaecarpa, a Vanilioid Receptor Agonist Plartta Med 67, pp 628-633

10 X Luo, B Chen, s Yao, 2004, Simultaneous analysis of protoberberine, indoiequinoline and quinolone alkaloids in coptis-evodia herb couple and the Chinese herbal preparations by high-performance liquid chromatography-electrospray mass spectrometry

Talanta, 66, pp 103-110

11 J.R Sheu, W.C Hung, C.H Wu, Y.M Lee, M.H Yen, 2000 Antithrombotic effect of ruỉaecarpine, an alkaloid isolated from Evodia rutaecarpa, on platelet plug formation in in vivo experiments Brit J Haematol, 110, pp 110-115

12 X Tang X, z Huang, Y Chen, Y Liu, J Zhao, J Yi, 2014 Simuitaneous determination of six bioactive compounds in Evodiae Fructus by high-performance liquid chromatography with diode array detection Journal of