(Luận văn thạc sĩ) xác định độc lực của chủng virus dịch tả lợn châu phi phân lập được tại tỉnh hưng yên trên lợn thí nghiệm

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMN NÔNG NGHIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMP VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMT NAM HỒNG ĐÌNH HUẤN XÁC ĐỊNH ĐỘC LỰC CỦA CHỦNGNH ĐỘC LỰC CỦA CHỦNGC LỰC CỦA CHỦNGC CỦA CHỦNGA CHỦA CHỦNGNG VIRUS DỊNH ĐỘC LỰC CỦA CHỦNGCH TẢ LỢN CHÂU PHI PHÂN LẬP LỢN CHÂU PHI PHÂN LẬPN CHÂU PHI PHÂN LẬPP ĐƯỢN CHÂU PHI PHÂN LẬPC TẠI TỈNH HƯNG YÊN TRÊN LỢN THÍI TỈNH HƯNG YÊN TRÊN LỢN THÍNH HƯNG YÊN TRÊN LỢN CHÂU PHI PHÂN LẬPN THÍ NGHIỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAMM Ngành: Thú y Mã số:: 8.64.01.01 Người hướng dẫn khoa học:i hướng dẫn khoa học:ng dẫn khoa học:n khoa học:c: GS.TS Nguyễn Thị Lann Thị Lan Lan TS Trương Quang Lâm NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP - 2020 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cám ơn, thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày… tháng… năm 2020 Tác giả luận văn Hồng Đình Huấn i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn, tơi nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận văn, cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc GS TS Nguyễn Thị Lan TS Trương Quang Lâm tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập thực đề tài Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới Bộ môn Bệnh lý thú y, Khoa Thú y Học viện Nơng nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, thực đề tài hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán viên chức Phịng thí nghiệm trọng điểm cơng nghệ sinh học thú y môn Bệnh lý thú y giúp đỡ tạo điều kiện cho suốt trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận văn Hà Nội, ngày… tháng… năm 2020 Tác giả luận văn Hồng Đình Huấn ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn .ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Trích yếu luận văn .ix Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài .1 1.2 Mục tiêu nghiên cứu .2 1.2.1 Mục tiêu chung .2 1.2.2 Mục tiêu cụ thể .2 1.3 Phạm vi nghiên cứu .3 1.4 Những đóng góp đề tài 1.5 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.5.1 Ý nghĩa khoa học 1.5.2 Ý nghĩa thực tiễn Phần Tổng quan tài liệu .4 2.1 Tình hình nghiên cứu bệnh Dịch tả lợn Châu Phi nước 2.1.1 Tình hình nghiên cứu bệnh Dịch tả lợn Châu Phi Việt Nam 2.1.2 Tình hình nghiên cứu bệnh Dịch tả lợn Châu Phi nước .5 2.2 Virus gây bệnh Dịch tả lợn Châu Phi 2.2.1 Căn bệnh 2.2.2 Dịch tễ học .11 2.2.3 Triệu chứng 15 2.2.4 Bệnh tích 16 2.2.5 Phương pháp chẩn đoán 17 2.2.6 Phòng bệnh 18 2.2.7 Điều trị 20 Phần Vật liệu phương pháp nghiên cứu .21 iii 3.1 Địa điểm nghiên cứu 21 3.2 Thời gian nghiên cứu 21 3.3 Đối tượng nghiên cứu 21 3.4 Nội dung nghiên cứu 21 3.5 Nguyên liệu 21 3.5.1 Máy móc 21 3.5.2 Dụng cụ 22 3.5.3 Hóa chất 22 3.5.4 Động vật thí nghiệm 22 3.6 Phương pháp nghiên cứu 22 3.6.1 Phương pháp gây bệnh cho lợn thí nghiệm 22 3.6.2 Phương pháp lấy máu 23 3.6.3 Phương pháp mổ khám kiểm tra bệnh tích đại thể 23 3.6.4 Phương pháp làm tiêu bệnh lý kiểm tra bệnh tích vi thể 24 3.6.5 Phương pháp ELISA 26 3.6.6 Phương pháp RT-PCR .27 3.6.7 Phương pháp PCR .30 3.6.8 Phương pháp Realtime PCR 31 3.6.9 Phương pháp thống kê, xử lý số liệu .32 Phần Kết thảo luận .33 4.1 Gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY cho lợn thí nghiệm 33 4.1.1 Kết kháng thể kháng virus DTLCP lợn thí nghiệm trước gây nhiễm 33 4.1.2 Kết kiểm tra số virus gây bệnh lợn thí nghiệm trước gây nhiễm 33 4.1.3 Kết đánh giá thân nhiệt thể trạng lợn thí nghiệm trước gây nhiễm 34 4.1.4 Kết gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY cho lợn thí nghiệm 36 4.2 Triệu chứng lâm sàng chủ yếu lợn thí nghiệm sau gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY 36 4.2.1 Thân nhiệt 36 iv 4.2.2 Triệu chứng lâm sàng chủ yếu lợn gây nhiễm 37 4.3 Kết kiểm tra virus huyết thải virus chủng VNUA - ASFV – 02HY 39 4.4 Một số đặc điểm bệnh lý chủ yếu lợn gây nhiễm virus VNUA – ASFV – 02HY 44 4.4.1 Kết bệnh tích đại thể lợn thí nghiệm .44 4.4.2 Bệnh tích vi thể chủ yếu lợn thí nghiệm gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY 48 Phần Kết luận kiến nghị 53 5.1 Kết luận 54 5.2 Kiến nghị 54 Tài liệu tham khảo 54 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa đầy đủ ASF African swine fever Cs Cộng CSF Classical Swine Fever DNA DeoxyriboNucleic Acid DTLCP Dịch tả lợn Châu Phi ELISA Enzym Linked Immunorobent Assay PBS Phosphat Buffer Saline PCR Polymerase Chain Reaction PRRSV Porcine Reproductive & Respiratory Syndrome Virus RT-PCR Reverse Transcriptase – Polymerase Chain Reaction vi DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Khả tồn virus DTLCP nhiều điều kiện môi trường .10 Bảng 3.1 Thông tin chủng virus VNUA - ASFV – 02HY 21 Bảng 3.2 Thành phần phản ứng RT-PCR .28 Bảng 3.3 Thành phần phản ứng PCR .31 Bảng 4.1 Kết hàm lượng kháng thể kháng virus DTLCP lợn thí nghiệm phương pháp ELISA Bảng 4.2 33 Kết xét nghiệm có mặt số virus phương pháp Realtime PCR/RT-PCR/PCR 34 Bảng 4.3 Kết giá trị Ct phương pháp Realtime PCR mẫu máu lợn thí nghiệm sau gây nhiễm chủng virus VNUA - ASFV – 02HY36 Bảng 4.4 Bảng 4.5 Kết đo thân nhiệt trước gây nhiễm ( C) 35 Thân nhiệt lợn thí nghiệm sau gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY Bảng 4.6 Triệu chứng lâm sàng lợn thí nghiệm gây nhiễm chủng virus VNUA - ASFV – 02HY Bảng 4.7 37 37 Kết giá trị Ct mẫu máu lợn thí nghiệm theo thời gian sau gây nhiễm chủng virus VNUA - ASFV – 02HY 39 Bảng 4.8 Kết phương pháp Realtime PCR phát virus VNUA - ASFV L01 với mẫu swab phân dịch nước bọt lợn thí nghiệm theo thời gian sau gây nhiễm Bảng 4.9 42 Kết kiểm tra đồng nhiễm virus khác lợn thí nghiệm chết 43 Bảng 4.10 Bệnh tích đại thể lợn thí nghiệm gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY 44 Bảng 4.11 Bệnh tích vi thể lợn thí nghiệm 50 vii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Tình hình DTLCP Châu Á (từ tháng năm 2018 đến nay) .7 Hình 2.2 Ảnh hình thái cấu trúc virus Dịch tả lợn Châu Phi Hình 2.3 Tóm tắt sơ đồ lây lan bệnh DTLCP 13 Hình 2.4 Mối nguy gây lây nhiễm bệnh DTLCP với lợn ni 14 Hình 2.5 Các đường lây nhiễm bệnh DTLCP cách phòng ngừa hiệu 19 Hình 4.2 Bệnh tích đại thể lợn thí nghiệm gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY 46 Hình 4.3 Bệnh tích đại thể lợn thí nghiệm gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY (tiếp) 47 Hình 4.4 Một số quan nội tạng lợn đối chứng .47 Hình 4.5 Bệnh tích vi thể lợn gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY 51 Hình 4.6 Bệnh tích vi thể lợn gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY (tiếp) 52 Hình 4.7 Bệnh tích vi thể lợn gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY (tiếp) 53 viii