Thông tin tài liệu
HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM HỒNG ĐÌNH HUẤN XÁC ĐỊNH ĐỘC LỰC CỦA CHỦNG VIRUS DỊCH TẢ LỢN CHÂU PHI PHÂN LẬP ĐƯỢC TẠI TỈNH HƯNG YÊN TRÊN LỢN THÍ NGHIỆM Ngành: Mã số: Người hướng dẫn khoa học: Thú y 8.64.01.01 GS.TS Nguyễn Thị Lan TS Trương Quang Lâm NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2020 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tôi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cám ơn, thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày… tháng… năm 2020 Tác giả luận văn Hồng Đình Huấn i LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn, tơi nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận văn, cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc GS TS Nguyễn Thị Lan TS Trương Quang Lâm tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập thực đề tài Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới Bộ môn Bệnh lý thú y, Khoa Thú y - Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, thực đề tài hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán viên chức Phịng thí nghiệm trọng điểm cơng nghệ sinh học thú y môn Bệnh lý thú y giúp đỡ tạo điều kiện cho suốt trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận văn Hà Nội, ngày… tháng… năm 2020 Tác giả luận văn Hồng Đình Huấn ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Trích yếu luận văn ix Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.2.1 Mục tiêu chung 1.2.2 Mục tiêu cụ thể 1.3 Phạm vi nghiên cứu 1.4 Những đóng góp đề tài 1.5 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.5.1 Ý nghĩa khoa học 1.5.2 Ý nghĩa thực tiễn Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Tình hình nghiên cứu bệnh Dịch tả lợn Châu Phi ngồi nước 2.1.1 Tình hình nghiên cứu bệnh Dịch tả lợn Châu Phi Việt Nam 2.1.2 Tình hình nghiên cứu bệnh Dịch tả lợn Châu Phi nước 2.2 Virus gây bệnh Dịch tả lợn Châu Phi 2.2.1 Căn bệnh 2.2.2 Dịch tễ học 11 2.2.3 Triệu chứng 15 2.2.4 Bệnh tích 16 2.2.5 Phương pháp chẩn đoán 17 2.2.6 Phòng bệnh 18 2.2.7 Điều trị 20 Phần Vật liệu phương pháp nghiên cứu 21 iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.1 Địa điểm nghiên cứu 21 3.2 Thời gian nghiên cứu 21 3.3 Đối tượng nghiên cứu 21 3.4 Nội dung nghiên cứu 21 3.5 Nguyên liệu 21 3.5.1 Máy móc 21 3.5.2 Dụng cụ 22 3.5.3 Hóa chất 22 3.5.4 Động vật thí nghiệm 22 3.6 Phương pháp nghiên cứu 22 3.6.1 Phương pháp gây bệnh cho lợn thí nghiệm 22 3.6.2 Phương pháp lấy máu 23 3.6.3 Phương pháp mổ khám kiểm tra bệnh tích đại thể 23 3.6.4 Phương pháp làm tiêu bệnh lý kiểm tra bệnh tích vi thể 24 3.6.5 Phương pháp ELISA 26 3.6.6 Phương pháp RT-PCR 27 3.6.7 Phương pháp PCR 30 3.6.8 Phương pháp Realtime PCR 31 3.6.9 Phương pháp thống kê, xử lý số liệu 32 Phần Kết thảo luận 33 4.1 Gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY cho lợn thí nghiệm 33 4.1.1 Kết kháng thể kháng virus DTLCP lợn thí nghiệm trước gây nhiễm 33 4.1.2 Kết kiểm tra số virus gây bệnh lợn thí nghiệm trước gây nhiễm 33 4.1.3 Kết đánh giá thân nhiệt thể trạng lợn thí nghiệm trước gây nhiễm 34 4.1.4 Kết gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY cho lợn thí nghiệm 36 4.2 Triệu chứng lâm sàng chủ yếu lợn thí nghiệm sau gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY 36 4.2.1 Thân nhiệt 36 iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 4.2.2 Triệu chứng lâm sàng chủ yếu lợn gây nhiễm 37 4.3 Kết kiểm tra virus huyết thải virus chủng VNUA - ASFV – 02HY 39 4.4 Một số đặc điểm bệnh lý chủ yếu lợn gây nhiễm virus VNUA – ASFV – 02HY 44 4.4.1 Kết bệnh tích đại thể lợn thí nghiệm 44 4.4.2 Bệnh tích vi thể chủ yếu lợn thí nghiệm gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY 48 Phần Kết luận kiến nghị 53 5.1 Kết luận 54 5.2 Kiến nghị 54 Tài liệu tham khảo 54 v LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa đầy đủ ASF African swine fever Cs Cộng CSF Classical Swine Fever DNA DeoxyriboNucleic Acid DTLCP Dịch tả lợn Châu Phi ELISA Enzym Linked Immunorobent Assay PBS Phosphat Buffer Saline PCR Polymerase Chain Reaction PRRSV Porcine Reproductive & Respiratory Syndrome Virus RT-PCR Reverse Transcriptase – Polymerase Chain Reaction vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Khả tồn virus DTLCP nhiều điều kiện môi trường 10 Bảng 3.1 Thông tin chủng virus VNUA - ASFV – 02HY 21 Bảng 3.2 Thành phần phản ứng RT-PCR 28 Bảng 3.3 Thành phần phản ứng PCR 31 Bảng 4.1 Kết hàm lượng kháng thể kháng virus DTLCP lợn thí nghiệm phương pháp ELISA 33 Bảng 4.2 Kết xét nghiệm có mặt số virus phương pháp Realtime PCR/RT-PCR/PCR 34 Bảng 4.3 Kết giá trị Ct phương pháp Realtime PCR mẫu máu lợn thí nghiệm sau gây nhiễm chủng virus VNUA - ASFV – 02HY 36 Bảng 4.4 Kết đo thân nhiệt trước gây nhiễm (0C) 35 Bảng 4.5 Thân nhiệt lợn thí nghiệm sau gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY 37 Bảng 4.6 Triệu chứng lâm sàng lợn thí nghiệm gây nhiễm chủng virus VNUA - ASFV – 02HY 37 Bảng 4.7 Kết giá trị Ct mẫu máu lợn thí nghiệm theo thời gian sau gây nhiễm chủng virus VNUA - ASFV – 02HY 39 Bảng 4.8 Kết phương pháp Realtime PCR phát virus VNUA - ASFV L01 với mẫu swab phân dịch nước bọt lợn thí nghiệm theo thời gian sau gây nhiễm 42 Bảng 4.9 Kết kiểm tra đồng nhiễm virus khác lợn thí nghiệm chết 43 Bảng 4.10 Bệnh tích đại thể lợn thí nghiệm gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY 44 Bảng 4.11 Bệnh tích vi thể lợn thí nghiệm 50 vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Tình hình DTLCP Châu Á (từ tháng năm 2018 đến nay) Hình 2.2 Ảnh hình thái cấu trúc virus Dịch tả lợn Châu Phi Hình 2.3 Tóm tắt sơ đồ lây lan bệnh DTLCP 13 Hình 2.4 Mối nguy gây lây nhiễm bệnh DTLCP với lợn nuôi 14 Hình 2.5 Các đường lây nhiễm bệnh DTLCP cách phịng ngừa hiệu 19 Hình 4.2 Bệnh tích đại thể lợn thí nghiệm gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY 46 Hình 4.3 Bệnh tích đại thể lợn thí nghiệm gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY (tiếp) 47 Hình 4.4 Một số quan nội tạng lợn đối chứng 47 Hình 4.5 Bệnh tích vi thể lợn gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY 51 Hình 4.6 Bệnh tích vi thể lợn gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY (tiếp) 52 Hình 4.7 Bệnh tích vi thể lợn gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY (tiếp) 53 viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Hồng Đình Huấn Tên luận văn: Xác định độc lực chủng virus dịch tả lợn Châu Phi phân lập tỉnh Hưng Yên lợn thí nghiệm Ngành: Thú y Mã số: 8.64.01.01 Tên sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu Xác định khả gây bệnh chủng virus VNUA – ASFV – 02HY phân lập tỉnh Hưng Yên lợn thí nghiệm Phương pháp nghiên cứu Nội dung nghiên cứu: Gây bệnh thực nghiệm cho lợn thí nghiệm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY Xác định triệu chứng lâm sàng lợn thí nghiệm Nghiên cứu biến đổi bệnh tích đại thể vi thể lợn thí nghiệm Xác định thải chủng virus VNUA – ASFV – 02HY dịch tiết (swab phân, dịch nước bọt) phương pháp Realtime - PCR Đối tượng nghiên cứu chủng virus VNUA – ASFV – 02HY Trang thiết bị phục vụ nghiên cứu: Máy đúc tự động, máy cắt Microton, máy li tâm, máy votex, máy PCR, máy chạy điện di, máy chụp ảnh gel, tủ lạnh, máy đo thân nhiệt điện tử, kính hiển vi, tủ -800C, máy votex, tủ ấm 370C, máy ủ, máy đọc ELISA Hóa chất dùng nghiên cứu: Formol 10%, cồn, xylen, parafin, thuốc nhuộm haematoxylin, thuốc nhuộm eosin, dung dịch PBS, Red Gel, thạch Agarose, kít ELISA hãng Ingenasa, kít tách chiết hãng Promega, kit QIAGEN OneStep RT-PCR Kit Nghiên cứu sử dụng phương pháp như: Phương pháp gây bệnh cho lợn thí nghiệm; Phương pháp mổ khám kiểm tra bệnh tích đại thể; Phương pháp làm tiêu vi thể; Phương pháp ELISA; Phương pháp Realtime - PCR, RT - PCR; Phương pháp PCR Kết kết luận Chủng virus VNUA – ASFV – 02HY có khả gây bệnh cho 4/4 lợn thí nghiệm Triệu chứng lâm sàng chủ yếu sốt cao (41,0 đến 42,50C), ủ rũ, mệt mỏi, suy hơ hấp xuất huyết ngồi da, triệu chứng điển hình bệnh dịch tả lợn Châu Phi Sau ngày thứ gây nhiễm bắt đầu có xuất virus máu lợn thí nghiệm virus nhân lên mạnh máu từ ngày 3-6 sau gây nhiễm Có mối tương quan triệu chứng sốt cao khả nhân lên chủng virus VNUA – ASFV – 02HY lợn gây nhiễm Xác định thải chủng virus VNUA – ASFV – 02HY qua dịch tiết (swab phân dịch nước bọt) lợn gây nhiễm, kết cho thấy sau ngày gây nhiễm ix LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Theo chế sinh bệnh, virus DTLCP xâm nhập thể lợn, nhân lên thải virus ngồi mơi trường, nguồn virus lây lan trực tiếp gián tiếp tiếp xúc với dịch tiết chất tiết từ lợn bệnh Truyền lây qua đường khí dung không quan trọng truyền lây bệnh DTLCP (Costard S., 2013) Phân lợn nguồn lây nhiễm virus DTLCP thứ hai sau máu Virus tồn có khả lây nhiễm phân lợn bệnh Các vật dụng, trang thiết bị dính phân lợn bệnh mang virus lây truyền nhân viên chăm sóc lợn từ chuồng qua chuồng khác, nhân viên công ty, phương tiện vận chuyển tải virus từ trại qua trại khác; nơi qua nơi khác, Từ kết nghiên cứu này, để giảm thiểu nguy lây nhiễm virus qua phân, dịch tiết lợn bệnh, trại phải yêu cầu nhân viên trại thực tốt biện pháp an toàn sinh học tối thiểu vệ sinh chuồng, chăm sóc lợn trại Nếu có thể, trại nên tăng cường chậu thuốc sát trùng ô chuồng, thực sát trùng ủng ô chuồng, trang bị ủng cho ô chuồng, nhân viên phải sát trùng ủng thay ủng vào ô chuồng mới; đeo găng tay y tế chăm sóc lợn thay găng tay vào chuồng Kết lơ thí nghiệm, sau ngày gây nhiễm thứ có 01/04 lợn chết; ngày thứ ngày thứ sau gây nhiễm 3/3 lợn gây nhiễm chủng chết Lợn chết tiến hành mổ khám bệnh phẩm để chẩn đoán cho kết dương tính với virus DTLCP âm tính với virus Tai xanh (PRRSV), virus Dịch tả lợn cổ điển (CSFV), virus Circo (PCV2) Điều cho thấy lợn thí nghiệm chết virus DTLCP (Bảng 4.9) Trong đó, lơ đối chứng lợn khỏe mạnh đến hết thời gian theo dõi 21 ngày đợt thí nghiệm Bảng 4.9 Kết kiểm tra đồng nhiễm virus khác lợn thí nghiệm chết Bệnh TN1 TN2 TN3 Dịch tả lợn Châu Phi + + + TN4 + Lợn CSFV PRRSV PCV2 - - - - - - Ghi chú: (+) Dương tính, (-) Âm tính 43 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 4.4 MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM BỆNH LÝ CHỦ YẾU CỦA LỢN ĐƯỢC GÂY NHIỄM CHỦNG VIRUS VNUA – ASFV – 02HY 4.4.1 Kết bệnh tích đại thể lợn thí nghiệm Sau gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY, lợn chết tiến hành mổ khám để quan sát bệnh tích số lợn cịn lại mổ khám ngày 21 (sau kết thúc thí nghiệm) để quan sát, ghi chép lại bệnh tích đại thể Bệnh tích đại thể quan lợn thí nghiệm trình bày bảng 4.10 Bảng 4.10 Bệnh tích đại thể lợn thí nghiệm gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY Lợn Cơ quan Hạch lympho Phổi Tim Dạ dày Lách Ruột Thận Não Gan Xoang bao tim, Xoang ngực, Xoang bụng Lơ đối chứng (n=2) Lơ thí nghiệm (n=4) Bệnh tích quan Sưng to, xuất huyết Xuất huyết Xuất huyết Xuất huyết Sưng to, nhồi huyết Xuất huyết điểm bề mặt Thận sưng, xuất huyết điểm vùng vỏ thận Xuất huyết Sưng, tụ máu Viêm tích dịch TN TN TN TN ĐC1 ĐC2 ++ +++ ++ +++ + ++ + - - + + - - + +++ ++ ++ +++ + ++ ++ - - + ++ + +++ - - + +++ ++ + - - ++ + - + - + + - - - + + + + - - Ghi chú: +++ :Tổn thương nặng, ++ : Tổn thương mức trung bình, + : Tổn thương nhẹ, - : không tôn thương Kết bảng 4.10 cho thấy lợn lơ thí nghiệm bệnh tích đại thể chủ yếu tượng xuất huyết quan nội tạng tích dịch xoang thể Cụ thể sau: Bệnh tích hạch lympho: Lợn gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY hạch lympho sưng to, thâm đen xuất huyết (hình 4.2.a) Hạch coi cửa ngõ để chống lại trình xâm nhập tác nhân gây bệnh, mổ 44 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com khám quan sát thấy hầu hết hạch: hạch hàm, hạch bẹn, hạch dày, hạch phổi, hạch màng treo ruột, sưng, xuất huyết nặng Bệnh tích thận: Có tượng xuất huyết điểm vùng vỏ thận lợn gây nhiễm, mức độ từ nhẹ (lợn TN số lợn TN số 4) đến nặng (lợn TN số lợn TN số 3) (hình 4.2.e) Bệnh tích lách: Sưng to, nhồi huyết màu đen, lách lợn thí nghiệm gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY, mức độ tổn thương nặng (hình 4.2.d) Ngồi ra, tượng xuất huyết tràn lan quan nội tạng não, phổi, tim, dày, ruột (hình 4.2 hình 4.3) gan sưng tụ máu, tích dịch xoang xoang bao tim, xoang ngực, xoang bụng Những nghiên cứu tổn thương bệnh lý chủ yếu lợn mắc bệnh DTLCP cho biết tổn thương bệnh lý xuất huyết toàn thân, lách sưng to xuất huyết, hạch sưng to gặp thể cấp tính (Sánchez-Vizcaíno & cs., 2015, Francisco J Salguero, 2020) Những thay đổi khác mức độ nghiêm trọng tùy thuộc vào dạng bệnh Bệnh tích lách xuất huyết dễ vỡ thể bệnh cấp tính, nhồi huyết lách phổ biến thể bán cấp tính (Sánchez -Vizcaino & cs., 2015) Hạch ruột, hạch thận, hạch hàm hạch bẹn xuất huyết, có màu đỏ sẫm giống cục máu đông thể cấp tính bán cấp tính (Sanchez -Vizcaino, 2015; Gomez-Villamandos & cs., 2013) Thận xuất huyết tràn lan phần vỏ, tủy bể thận thể cấp tính, nhiều so với thể cấp tính Xuất huyết vỏ thận tổn thương phổ biến bệnh DTLCP (GómezVillamandos & cs., 2013) Xuất huyết bàng quang quan sát dọc theo bề mặt niêm mạc Trong tim, tụ máu bề mặt ngoại tâm mạc nội tâm mạc, mạch vành (Wilkinson & cs., 1989) Tràn dịch màng bao tim tìm thấy thể bệnh bán cấp tính, thể bệnh mạn tính dẫn đến viêm màng ngồi tim Rối loạn chức túi mật túi mật sưng to phổ biến (Sánchez-Vizcaíno & cs., 2015) Sự biến đổi bệnh tích đại thể quan tăng sinh cạn kiệt tế bào thực bào nhiều quan, chẳng hạn tế bào Kupffer gan thực bào phế nang đại thực bào kẽ phổi Điều kèm với mạch máu thay đổi sung huyết, xuất huyết huyết khối 45 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hình 4.2 Bệnh tích đại thể lợn thí nghiệm gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY a Hạch lympho sưng, xuất huyết; b Phổi xuất huyết; c Não xuất huyết; d Lách sưng, nhồi huyết; e Thận xuất huyết điểm; f Tim xuất huyết; g Bàng quang xuất huyết điểm 46 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hình 4.3 Bệnh tích đại thể lợn thí nghiệm gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY (tiếp) a Dạ dày xuất huyết; b Ruột hạch màng treo ruột xuất huyết; c Gan sưng, tụ máu; d Ruột xuất điểm; Hình 4.4 Một số quan nội tạng lợn đối chứng a Phổi bình thường; b Tim bình thường; c Hạch amidan bình thường; d Gan bình thường; e Thận bình thường; g Bàng quang bình thường Trong q trình thí nghiệm, lợn lơ đối chứng khơng có dấu hiệu bất thường, ăn uống bình thường Sau lợn lơ thí nghiệm chết, tiến hành mổ khám lợn lô đối chứng Qua trình theo dõi mổ khám thấy lợn lơ đối chứng: Cân nặng bình thường, lơng mượt, quan nội tạng bình thường khơng có dấu hiệu tổn thương bệnh (Hình 4.4) 47 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Như vậy, kết nghiên cứu cho thấy chủng virus VNUA - ASFV – 02HY có độc lực cao với lợn, có khả gây bệnh cho lợn tương đương thể cấp tính ngồi tự nhiên 4.4.2 Bệnh tích vi thể chủ yếu lợn thí nghiệm gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY Tiến hành lấy mẫu bệnh phẩm quan: phổi, lách, gan, hạch lympho, ruột lợn thí nghiệm, mẫu ngâm formol làm tiêu vi thể nhằm xác định bệnh tích mức độ tế bào Sau đúc mẫu bệnh phẩm thu block, block cắt tiêu để nhuộm HE, chọn tiêu đẹp tương ứng với block đem soi kính, quan sát bệnh tích vi thể Kết cho thấy bệnh tích chủ yếu lợn thí nghiệm gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY trình bày bảng 4.10 Bảng 4.10 cho thấy, bệnh tích vi thể chủ yếu 04 lợn thí nghiệm gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY xuất huyết tràn lan quan nội tạng, virus tác động chủ yếu vào mô lympho, phổi, thận, gan não Đặc trưng bệnh lý mô lympho tượng teo nang lympho, gặp hạch lympho, hạch amidan lách Cụ thể bệnh tích vi thể tổ chức: Lách: Biến đối bệnh lý lách chủ yếu tượng xuất huyết, hồng cầu lan tràn nhu mô lách, tụ lại thành đám, hồng cầu ứ lại tĩnh mạch tủy trắng; tế bào bị thối hóa xen kẽ tế bào lành Hiện tượng teo nang lympho gặp tiêu vi thể lợn thí nghiệm Đánh giá tổn thương vi thể lách lợn thí nghiệm mức độ tổn thương nặng (hình 4.5 hình 4.7) Hạch lympho: Hạch quan có mức độ tổn thương vi thể nặng, hạch lợn thí nghiệm có biểu nang lympho bị teo nhỏ, xen lẫn xuất nhiều tế bào hồng cầu, đặc biệt hạch phổi hạch màng treo ruột, hạch dày có nhiều nhất, giống biểu bệnh tích đại thể (hình 4.5 hình 4.7) Ruột: Quan sát thấy tế bào hồng cầu tiêu vi thể ruột, mô liên kết hồng cầu xuất tràn lan (hình 4.6) Mức độ tổn thương vi thể ruột lợn thí nghiệm đánh giá từ nhẹ đến trung bình Phổi: Cllác tiêu vi thể lợn gây nhiễm có chứa nhiều hồng cầu lòng phế nang đại thực bào, ngồi có thâm nhiễm tế bào viêm, dịch phù 48 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com tăng sinh tổ chức kẽ phổi Ở phế quản: Biểu mơ bong tróc, tổn thương chứa đầy dịch rỉ viêm (hình 4.7) Thận: Bệnh tích vi thể thận lợn gây nhiễm virus thấy có tượng xuất huyết, chứa nhiều hồng cầu vùng vỏ thận ống thận, cầu thận (hình 4.5) Gan: Có tượng xuất huyết lan tràn, hoại tử nhu mơ (hình 4.6) Não: Có tượng xuất huyết (Hình 4.6) Tim: Ở tim, bệnh tích xuất huyết sung huyết Qua kết biến đổi bệnh tích vi thể lợn gây nhiễm thực nghiệm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY kết hợp với việc so sánh bệnh tích vi thể gây chủng virus cường độc nghiên cứu khác (Zhao D., 2019), thấy chủng virus VNUA – ASFV – 02HY có khả gây bệnh tích vi thể tương tự chủng virus DTLCP có độc lực cao thực địa 49 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bảng 4.10 Bệnh tích vi thể lợn thí nghiệm Cơ quan Bệnh tích quan Hạch Lympho Phổi Ruột Thận Lách Gan Não Tim Xuất huyết; hoại tử; teo nang Lympho Xuất huyết, thâm nhiễm tế bào viêm, chứa dịch phù Xuất huyết, Xuất huyết Xuất huyết, teo nang Lympho Xuất huyết, hoại tử nhu mô Xuất huyết Xuất huyết Lô đối chứng (n=2) Lơ thí nghiệm (n=4) Lợn thí nghiệm Lợn Lợn Lợn Lợn ĐC1 ĐC2 + +++ +++ ++ - - ++ + +++ + + + ++ ++ +++ ++ + + ++ + +++ +++ + ++ + + ++ ++ ++ ++ + - - - Ghi chú: +++ Tổn thương nặng, ++: Tổn thương mức trung bình, +: Tổn thương nhẹ, -: Khơng có tổn thương 50 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hình 4.5 Bệnh tích vi thể lợn gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY a, hình ảnh xuất huyết, teo nang lympho hạch lympho (HE10X); b,c, hình ảnh xuất huyết thận, lách (HE10X); d,e,f hình ảnh xuất huyết hạch lympho, thận, lách (HE40X) 51 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hình 4.6 Bệnh tích vi thể lợn gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY (tiếp) a,b,c hình ảnh xuất huyết não, ruột, gan (HE10X); d,e,f hình ảnh xuất huyết não, ruột, gan (HE40X) 52 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hình 4.7 Bệnh tích vi thể lợn gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY (tiếp) a,b, hình ảnh teo nang lympho hạch amidan lách (HE10X); c, xuất huyết, dịch phù lòng phế nang (HE10X); d, xuất huyết, dịch phù lòng phế nang (HE40X) 53 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Chủng virus VNUA – ASFV – 02HY có khả gây bệnh cho 4/4 lợn thí nghiệm Triệu chứng lâm sàng chủ yếu sốt cao (41,0 đến 42,50C), ủ rũ, mệt mỏi, suy hô hấp xuất huyết da, triệu chứng điển hình bệnh Dịch tả lợn Châu Phi Sau ngày thứ gây nhiễm bắt đầu có xuất virus máu lợn thí nghiệm virus nhân lên mạnh máu từ ngày 3-6 sau gây nhiễm Có mối tương quan triệu chứng sốt cao khả nhân lên chủng virus VNUA – ASFV – 02HY lợn gây nhiễm Sau ngày gây nhiễm phát chủng virus VNUA – ASFV – 02HY dịch tiết lợn thí nghiệm, thải liên tục đến lợn thí nghiệm chết Bệnh tích đại thể chủ yếu lợn thí nghiệm gây nhiễm chủng virus VNUA – ASF – 02HY chủ yếu xuất huyết quan nội tạng gồm hạch lympho, lách, thận, dày, ruột, phổi, não tích dịch xoang thể Bệnh tích vi thể chủ yếu lợn gây nhiễm chủng virus VNUA – ASFV – 02HY: Xuất huyết, hồng cầu tràn lan quan nội tạng, tượng teo nang lympho lách hạch, hoại tử nhu mô gan nang lympho hạch Dựa vào kết triệu chứng lâm sàng, biến đổi đại thể vi thể lợn thí nghiệm cho thấy chủng virus VNUA – ASFV – 02HY có độc lực cao, có khả gây bệnh động vật với biểu triệu chứng lâm sàng, bệnh tích thể cấp tính giống với chủng virus DTLCP gây bệnh thực địa 5.2 KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu đặc tính sinh học, sinh học phân tử tính kháng nguyên chủng virus VNUA – ASFV – 02HY để lựa chọn chủng có khả sản xuất vắc xin phòng bệnh chế phẩm sinh học 54 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TÀI LIỆU THAM KHẢO Costard S., Mur L., Lubroth J., Sanchez-Vizcaino J.M & Pfeiffer D.U (2013) Epidemiology of African swine fever virus Virus Research Vol 173 (1) pp 191–197 Chi Cục Thú Y Vùng VI (2017) Quy trình phát virus Dich tả lợn Châu Phi kỹ thuật realtime PCR ban hành Dixon L.K., Chapman D.A.G., Netherton C.L & Upton C (2013) “African swine fever virus replication and genomics” Virus Research Vol 173 (1): 3–14 Fauquet C., Fauquet M & Mayo M.A (2005) Virus Taxonomy: VIII Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses Academic Press Gallardo C., Soler A., Rodze I., Nieto R., Cano-Gómez C., Fernandez-Pinero J & Arias M (2019) Attenuated and non-haemadsorbing (non-HAD) genotype II African swine fever virus (ASFV) isolated in Europe, Latvia 2017 Transbound Emerg Dis doi: 10.1111/tbed.13132 Gomez-Villamandos J C., Hervas J., Moreno C., Carrasco L., Bautista M J., Caballero J M., Wilkinson P J & M A Sierra (1997) Subcellular changes in the tonsils of pigs infected with acute African swine fever virus Vet Res 28:179–189 Gomez-Villamandos J.C., Bautista M.J., Sanchez-Cordon P.J & Carrasco L (2013) Pathology of African swine fever: the role of monocyte–macrophage Virus Research 17:140-149 Greig A & Plowright W (1970) The excretion of two virulent strains of African swine fever virus by domestic pigs J Hyg 68 673–682 Hoàng Tồn Thắng (2006), Giáo trình sinh lý học vật ni, Đại học Thái Nguyên, NXB Nông Nghiệp, Hà Nội Huyền Trang (2019) Các đường lây nhiễm bệnh DTLCP cách phịng ngừa hiệu quả.Tạp chí chăn ni (5) tr 31-32 Le VP, Jeong DG, Yoon SW, Kwon HM, Trinh TBN & Nguyen TL (2019) Outbreak of African swine fever, Vietnam, 2019 Emerging infectious disease Lê Văn Năm (2018) Bệnh lợn Việt Nam biện pháp phòng trị hiệu NXB Nông nghiệp, Hà Nội: 18-26 Lê Văn Năm (2018) Chẩn đoán phân biệt Dịch tả lợn cổ điển (CSF) Dịch tả lợn châu Phi (CSF) Tạp chí Nông nghiệp phát triển nông thôn, (23): 42-49 Mebus, C.A., Dardiri, A.H., (1979) Additional characteristics of disease caused by the African swine fever viruses isolated from Brazil and the Dominican Republic U Anim Health Assoc 83: 227–239 Montgomery R E (1921) On a form of swine fever occurring in British East Africa J Comp Pathol 34: 59–191 Nguyễn Bá Hiên & Huỳnh Thị Mỹ Lệ (2011) Giáo trình Bệnh truyền nhiễm thú y NXB Nông Nghiệp, Hà Nội 55 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Nguyễn Đăng Thọ (2019) Các phương pháp chẩn đoán Dịch tả lợn Châu Phi Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y (3): 71 – 83 O’Donnell V., Risatti G.R., Holinka L.G., Krug P.W., Carlson J., Velazquez-Salinas L., Azzinaro P.A., Gladue D.P & Borca M.V (2017) Simultaneous deletion of the 9GL and UK Genes from the African swine fever virus Georgia 2007 isolate offers increased safety and protection against homologous challenge J Virology 91: 1760–1816 Penrith M L., Thomson G R., Bastos A D S., (2004) African swine fever In Infectious diseases of livestock : 1088–1119 Plowright W., Thomson G R., Neser J A.,(1994) African swine fever In Infectious diseases of livestock, with special reference to southern Africa 1: 567–599 Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia bệnh động vật – yêu cầu chung lấy mẫu bệnh phẩm, bảo quản vận chuyển QCVN 01 - 83: 2011/BNNPTNT Reis A.L., Abrams C.C., Goatley L.C., Netherton C., Chapman D.G., Sanchez-Cordon P & Dixon L.K (2016) Deletion of African swine fever virus interferon inhibitors from the genome of a virulent isolate reduces virulence in domestic pigs and induces a protective response Vaccine 34: 4698-4705 Rowlands R J., Michaud V., Hutchings L G., Oura C., Vosloo W., Dwarka R., Onashvili T., Albina E & Dixon L K (2008) African Swine Fever Virus Isolate, Georgia, 2007 Emerg Infect Dis 14(12): 1870–1874 Salas M.L & Andrés G (2013) African swine fever virus morphogenesis Virus Res 173(1): 29-41 Sánchez-Cordón P.J., Jabbar T., Berrezaie M., Chapman D., Reis A., Sastre P., Rueda P., Goatley L & Dixon L.K (2017) Evaluation of protection induced by immunisation of domestic pigs with deletion mutant African swine fever virus BeninDMGF by different doses and routes Vaccine 36(5): 707-715 Sánchez-Vizcaíno J.M., Mur L., Gomez - Villamandos J.C & Carrasco L (2015) An update on the epidemiology and pathology of African swine fever J Comp Pathol 152(1): 9-21 Schloer G.M (1985) Polypeptides and structure of African swine fever virus.Virus Res 3(4): 295-310 Solenne C., Barbara W., de Glanville W., Ferran J., Rebecca R., Wilna V., Frabcois R., Drik U P & Linda K D (2009) Review African swine fever: how can global spread be prevent?, Phil Trans R Soc 364: 2683 – 2699 Stone S.S and Hess (1973) Effects of Some Disinfectants on African Swine Fever Virus, Appl Microbiol 1973 Jan 25(1): 115–122 Tignon M., Gallardo C., Iscari C., Hutet E., Van der Y., Kolvasov D., De mia G.M., Le Potier M.F., Bishop R.P., Arias M & Koenen F (2011) Development and interlaboratory validation study of an improved new real-time PCR assay with internal control for detection and laboratory diagnosis of African swine fever virus J Virol Methods 178: 161–167 56 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Vallée I., Stephen W G Tait & Penelope P Powell (2001) African Swine Fever Virus Infection of Porcine Aortic Endothelial Cells Leads to Inhibition of Inflammatory Responses, Activation of the Thrombotic State, and Apoptosis J Virol 75(21): 10372–10382 Wilkinson P.J., Wardley R.C & Williams S.M (1981) African swine fever virus (Malta/78) in pigs J Comp Pathol 91 (2): 277–284 World Organisation for Animal Health (2008) Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals OIE, Paris World Organisation for Animal Health (2019) Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals OIE, Paris Ze C., Xiaofeng X., Xiaojun Y., Weihao D., Xiufeng J., Haishuo J., Guangyuan L., Jianxun L., Hong Y & Gao S (2019) DNA segment of African Swine Fever Virus first detected in hard ticks from sheep and bovine Systematic & Applied Acarology 24(1): 180–184 Zhao D., Liu R., Zhang X., Li F., Wang J., Zhang J., Liu X., Wang L., Zhang J., Wu X., Guan Y., Chen W., Wang X., He X & Bu Z (2019) Replication and virulence in pigs of the first African swine fever virus isolated in China Emerging Microbes & Infections 8: 438-477 57 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... luanvanchat@agmail.com TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Hồng Đình Huấn Tên luận văn: Xác định độc lực chủng virus dịch tả lợn Châu Phi phân lập tỉnh Hưng Yên lợn thí nghiệm Ngành: Thú y Mã số: 8.64.01.01... bệnh Dịch tả lợn Châu Phi nước 2.1.1 Tình hình nghiên cứu bệnh Dịch tả lợn Châu Phi Việt Nam 2.1.2 Tình hình nghiên cứu bệnh Dịch tả lợn Châu Phi nước 2.2 Virus gây bệnh Dịch tả lợn Châu. .. cứu Xác định khả gây bệnh chủng virus VNUA – ASFV – 02HY phân lập tỉnh Hưng Yên lợn thí nghiệm Phương pháp nghiên cứu Nội dung nghiên cứu: Gây bệnh thực nghiệm cho lợn thí nghiệm chủng virus VNUA
Ngày đăng: 16/12/2022, 10:52
Xem thêm:
