(Luận văn thạc sĩ) kiểm nghiệm và thử nghiệm vắc xin avac nd clone entero phòng bệnh newcastle cho gà con

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMN NÔNG NGHIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMP VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMT NAM NGUYỄN HỒNG THU KIỂM NGHIỆM VÀ THỬ NGHIỆM VẮC XIN M NGHIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMM VÀ THỬ NGHIỆM VẮC XIN NGHIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMM VẮC XIN C XIN AVAC ND-CLONE ENTERO PHỊNG BỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAMNH NEWCASTLE CHO GÀ CON Chuyên ngành: Thú y Mã số:: 60 64 01 01 Người hướng dẫn khoa học:i hướng dẫn khoa học:ng dẫn khoa học:n khoa học:c: PGS.TS Chu Đức Thắngc Thắngng NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NƠNG NGHIỆP - 2016 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cám ơn, thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày… tháng… năm… Tác giả luận văn Nguyễn Hồng Thu i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn tốt nghiệp này, bên cạnh cố gắng nỗ lực thân, nhận động viên giúp đỡ lớn nhiều cá nhân tập thể Trước hết xin gửi cảm ơn chân thành tất thầy cô giáo toàn trường đặc biệt thầy cô giáo khoa Thú y giảng dạy giúp đỡ suốt năm học tập mái trường Học viện Nông nghiệp Việt Nam Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo, giảng viên PGS.TS Chu Đức Thắng, người trực tiếp hướng dẫn thực đề tài Qua đây, xin phép gửi lời cảm ơn chân thành tới tất Cán công tác Công ty TNHH MTV Avac Việt Nam, đặc biệt Ban lãnh đạo công ty anh chị làm việc Nhà máy sản xuất vắc xin GMP tận tình bảo giúp đỡ tơi suốt thời gian thực tập Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, người thân bạn bè động viên, giúp đỡ tơi vượt qua khó khăn suốt trình thực đề tài Một lần xin chân thành cảm ơn! Hà Nôi, ngày tháng năm 2016 Tác giả luận văn Nguyễn Hồng Thu ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng .vii Danh mục hình, sơ đồ, biểu đồ viii Trích yếu luận văn ix Thesis abstract x Phần Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Khái quát bệnh Newcastle 2.2 Lịch sử bệnh 2.2.1 Lịch sử bệnh Newcastle giới 2.2.2 Tình hình bệnh vấn đề nghiên cứu bệnh Newcastle Việt Nam 2.2 Căn bệnh Newcastle 2.2.1 Cấu trúc hình thái virus 2.2.2 Độc lực virus .6 2.2.3 Sức đề kháng virus 2.3 Dịch tễ học bệnh Newcastle 2.3.1 Phân bố diễn biến bệnh 2.3.2 Vật chủ 2.3.3 Sự truyền lây 2.4 Triệu chứng bệnh tích 2.5 Phương pháp chẩn đoán bệnh 11 2.5.1 Chẩn đoán dựa vào đặc điểm dịch tễ, triệu chứng bệnh tích 11 2.5.2 Chẩn đốn phịng thí nghiệm 11 iii 2.6 Đáp ứng miễn dịch chống virus newcastle 12 2.6.1 Đáp ứng miễn dịch không đặc hiệu 12 2.6.2 Đáp ứng miễn dịch đặc hiệu 13 2.6.3 Miễn dịch chống bệnh Newcastle 14 2.7 Sử dụng vacxin phòng chống bệnh 15 2.7.1 Các loại vacxin dùng 15 2.7.2 Tình hình sử dụng vacxin Newcastle giới 24 2.7.3 Tình hình sử dụng vacxin Newcastle Việt Nam 25 2.7.4 Những điểm ý sử dụng vacxin 26 Phần Vật liệu phƣơng pháp nghiên cứu 27 3.1 Nội dung nghiên cứu .27 3.1.1 Kiểm tra tiêu kỹ thuật vacxin 27 3.1.2 Đánh giá độ dài miễn dịch gà sau tiêm vacxin 27 3.1.3 Kiểm tra độ dài bảo quản vacxin sau thời gian lưu kho nhiệt độ -8 C 27 3.1.4 Ứng dụng vacxin phòng bệnh can thiệp dịch 27 3.2 Đối tượng nghiên cứu 27 3.3 Địa điểm nghiên cứu 27 3.4 Nguyên liệu 27 3.5 Phương pháp nghiên cứu 28 3.5.1 Phương pháp lấy mẫu theo TCVN 8684:2011 Vacxin thú y - Quy trình o o lấy mẫu sử dụng mẫu kiểm nghiệm 28 3.5.2 Phương pháp xác định hiệu giá virus (liều gây nhiễm 50% phôi - EID50) lô vacxin 28 3.5.3 Phương pháp kiểm tra tiêu vô trùng 29 3.5.4 Phương pháp kiểm tra tiêu an toàn 30 3.5.5 Phương pháp kiểm tra tiêu hiệu lực 30 3.5.6 Phương pháp đánh giá độ dài miễn dịch gà sau tiêm vacxin 31 3.5.7 Phương pháp kiểm tra độ dài bảo quản vacxin nhược độc ND-Clone Entero sau thời gian lưu kho 31 3.5.8 Phương pháp xử lý số liệu .32 iv Phần Kết nghiên cứu thảo luận 33 4.1 Kiểm tra tiêu kỹ thuật vacxin 33 4.1.1 Kết kiểm tra hiệu giá virus (liều gây nhiễm 50% phôi- EID 50) lô vacxin nhược độc ND-Clone Entero đông khô 35 4.1.2 Kết kiểm tra tiêu vô trùng vacxin 36 4.1.3 Kết kiểm tra tiêu an toàn vacxin 38 4.1.4 Kết kiểm tra tiêu hiệu lực vacxin 39 4.2 Kết đánh giá độ dài miễn dịch gà sau chủng vacxin phương pháp công cường độc thời điểm định 4.3 Kết định kỳ kiểm tra độ dài bảo quản vacxin nhược độc Nd-Clone entero sau thời gian bảo quản tháng, 12 tháng 18 tháng 4.3.1 46 Kết kiểm tra hiệu lực vacxin nhược độc ND-Clone Entero sau thời gian bảo quản tháng, 12 tháng 18 tháng 4.3.2 41 46 Kết kiểm tra hiệu lực vacxin nhược độc ND-Clone Entero sau thời gian bảo quản 24 tháng 25 tháng 48 Phần Kết luận đề nghị 51 5.1 Kết luận 51 5.2 Đề nghị 51 Tài liệu tham khảo 52 v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Nghĩa tiếng việt Cs : Cộng EID50 : Embryo Infective Dosage, 50 % (Liều gây nhiễm 50 % phôi trứng) FAO : Food and Agriculture Organization HA : Heamagglutination test (Phản ứng ngưng kết hồng cầu) HI : Heamagglutination Inhibition test (Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu) ICPI : Intracerebral pathogenicity Index (Chỉ số gây bệnh tiêm não gà ngày tuổi) IVPI : Intravenous pathogenicity Index (Chỉ số gây bệnh tiêm tĩnh mạch) LD50 : 50 percent Lethal Dose-Liều gây chết tối thiểu 50% động vật thí nghiệm MDT : Mean Death Time (Thời gian trung bình phôi chết) ND : Newcastle deases (Bệnh Newcastle) SPF eggs : Specific Pathogen Free Eggs (Trứng gà sạch) vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Phân loại độc lực virus Newcastle Bảng 2.2 Dòng virus sử dụng để chế vacxin Newcastle 16 Bảng 4.1 Kết xác định hiệu giá virus vacxin nhược độc Newscatle chủng Clone Entero (3 mẫu vacxin lô 1) 35 Bảng 4.2 Kết xác định hiệu giá virus vacxin nhược độc ND-Clone Entero lô vacxin 1,2,3 36 Bảng 4.3 Kết kiểm tra tiêu vô trùng vacxin nhược độc ND-Clone Entero 37 Bảng 4.4 Kết kiểm tra tiêu an toàn vacxin nhược độc ND-Clone Entero 38 Bảng 4.5 Kết kiểm tra tiêu hiệu lực vacxin nhược độc ND- Clone Entero 40 Bảng 4.6 Kết đánh giá độ dài miễn dịch gà sau chủng vacxin ngày, 14 ngày, tháng, tháng tháng phương pháp công cường độc 42 Bảng 4.7 Kết đánh giá độ dài miễn dịch gà sau chủng vacxin 12 13 tháng phương pháp công cường độc 43 Bảng 4.8 Kết kiểm tra hiệu lực vacxin nhược độc ND-Clone Entero sau thời gian bảo quản tháng, 12 tháng 18 tháng phương pháp công cường độc 47 Bảng 4.9 Kết kiểm tra hiệu lực vacxin nhược độc ND-Clone Entero sau thời gian bảo quản 24 tháng 25 tháng phương pháp cơng cường độc 50 vii DANH MỤC HÌNH, SƠ ĐỒ, BIỂU ĐỒ Hình 2.1 Triệu chứng gà bệnh Newcastle Hình 2.2 Ruột non dày tuyết xuất huyết 10 Sơ đồ 4.1 Tóm tắt quy trình sản xuất vacxin nhược độc Newcastle chủng Clone Entero 34 Hình 4.1 Chủng vắc xin cho gà 1-7 ngày tuổi 39 Hình 4.2 Gà vacxin sống sót công cường độc .41 Hình 4.3 Gà đối chứng chết cơng cường độc 41 Đồ thị 4.1 Biểu diễn độ dài miễn dịch gà sau chủng vacxin ND-Clone Entero nhược độc 46 Đồ thị 4.2 Biểu diễn độ dài bảo quản vacxin sau thời gian lưu kho 49 viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Nguyễn Hồng Thu Tên luận văn: “Kiểm nghiệm thử nghiệm vacxin Avac ND-Clone Entero phòng bệnh Newcastle cho gà con” Chuyên nghành: Thú y Mã học viên: 23151010 Cơ sở đào tạo: Học viện Nơng nghiệp Việt Nam Mục đích Để xây dựng quy trình sử dụng bảo quản hợp lý, kiểm tra số tiêu vacxin nhược độc ND-Clone Entero, ngồi đánh giá tiêu vơ trùng, an tồn, hiệu lực cịn đánh giá độ dài miễn dịch độ dài bảo quản vacxin Các phƣơng pháp nghiên cứu sử dụng Phương pháp lấy mẫu theo TCVN 8684:2011 Vacxin thú y - Quy trình lấy mẫu sử dụng mẫu kiểm nghiệm Phương pháp xác định hiệu giá virus (liều gây nhiễm 50% phôi - EID50) lô vacxin Phương pháp kiểm tra tiêu vơ trùng, an tồn, hiệu lực Phương pháp đánh giá độ dài miễn dịch gà sau tiêm vacxin Các kết kết luận Kết nghiên cứu cho thấy tất lô vacxin kiểm tra đạt tiêu bắt buộc kiểm tra theo tiêu chuẩn ngành Vacxin đạt vô trùng phát triển vi khuẩn hay nấm môi trường nuôi cấy với thời gian theo dõi ngày Vacxin an toàn gà gà đẻ chủng gấp 10 lần liều ghi nhãn Hiệu lực cho tỷ lệ bảo hộ 100% gà Đã xác định độ dài bảo quản vacxin nhược độc ND-Clone Entero o điều kiện nhiệt độ từ - C 18 tháng đảm bảo chất lượng tốt Tiến hành đánh giá hiệu lực vacxin thực địa vùng ngoại thành Hà Nội (Văn Giang-Hưng Yên) Hiệu lực vacxin nhược độc ND-Clone Entero đánh giá sau nhỏ thời điểm ngày, 14 ngày, tháng, tháng, tháng 12 tháng phương pháp công cường độc cho tỷ lệ bảo hộ 100% với gà Điều chứng tỏ lượng kháng thể xuất ngày sau tiêm đủ để bảo hộ gà khỏi công virus cường độc, vacxin cho độ dài miễn dịch 12 tháng ix