(Luận văn) kiểm nghiệm và thử nghiệm vắc xin avac nd clone entero phòng bệnh newcastle cho gà con

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN HỒNG THU lu an KIỂM NGHIỆM VÀ THỬ NGHIỆM VẮC XIN AVAC va n ND-CLONE ENTERO PHÒNG BỆNH NEWCASTLE to p ie gh tn CHO GÀ CON Thú y Mã số: 60 64 01 01 d oa nl w Chuyên ngành: an lu PGS.TS Chu Đức Thắng ll u nf va Người hướng dẫn khoa học: oi m z at nh z m co l gm @ an Lu NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2016 n va ac th si LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cám ơn, thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày… tháng… năm… Tác giả luận văn lu an n va p ie gh tn to Nguyễn Hồng Thu d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th i si LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn tốt nghiệp này, bên cạnh cố gắng nỗ lực thân, nhận động viên giúp đỡ lớn nhiều cá nhân tập thể Trước hết xin gửi cảm ơn chân thành tất thầy giáo tồn trường đặc biệt thầy cô giáo khoa Thú y giảng dạy giúp đỡ suốt năm học tập mái trường Học viện Nơng nghiệp Việt Nam Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo, giảng viên PGS.TS Chu Đức Thắng, người trực tiếp hướng dẫn thực đề tài Qua đây, xin phép gửi lời cảm ơn chân thành tới tất Cán công tác Công ty TNHH MTV Avac Việt Nam, đặc biệt Ban lãnh đạo công ty anh lu an chị làm việc Nhà máy sản xuất vắc xin GMP tận tình bảo giúp đỡ va suốt thời gian thực tập n Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, người thân bạn bè động viên, tn to giúp đỡ tơi vượt qua khó khăn suốt trình thực đề tài ie gh Một lần xin chân thành cảm ơn! p Hà Nôi, ngày tháng năm 2016 d oa nl w Tác giả luận văn nf va an lu Nguyễn Hồng Thu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th ii si MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình, sơ đồ, biểu đồ viii Trích yếu luận văn ix Thesis abstract x lu an Phần Mở đầu n va Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài tn to 1.1 1.3 gh Lịch sử bệnh nl w 2.2 Khái quát bệnh Newcastle 2.1 p ie Phần Tổng quan tài liệu Lịch sử bệnh Newcastle giới 2.2.2 Tình hình bệnh vấn đề nghiên cứu bệnh Newcastle Việt Nam 2.2 Căn bệnh Newcastle 2.2.1 Cấu trúc hình thái virus 2.2.2 Độc lực virus 2.2.3 Sức đề kháng virus 2.3 Dịch tễ học bệnh Newcastle 2.3.1 Phân bố diễn biến bệnh 2.3.2 Vật chủ 2.3.3 Sự truyền lây 2.4 Triệu chứng bệnh tích 2.5 Phương pháp chẩn đoán bệnh 11 2.5.1 Chẩn đoán dựa vào đặc điểm dịch tễ, triệu chứng bệnh tích 11 2.5.2 Chẩn đốn phịng thí nghiệm 11 d oa 2.2.1 nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th iii si 2.6 Đáp ứng miễn dịch chống virus newcastle 12 2.6.1 Đáp ứng miễn dịch không đặc hiệu 12 2.6.2 Đáp ứng miễn dịch đặc hiệu 13 2.6.3 Miễn dịch chống bệnh Newcastle 14 2.7 Sử dụng vacxin phòng chống bệnh 15 2.7.1 Các loại vacxin dùng 15 2.7.2 Tình hình sử dụng vacxin Newcastle giới 24 2.7.3 Tình hình sử dụng vacxin Newcastle Việt Nam 25 2.7.4 Những điểm ý sử dụng vacxin 26 Phần Vật liệu phƣơng pháp nghiên cứu 27 lu an n va Nội dung nghiên cứu 27 3.1.1 Kiểm tra tiêu kỹ thuật vacxin 27 3.1.2 Đánh giá độ dài miễn dịch gà sau tiêm vacxin 27 tn to 3.1 Kiểm tra độ dài bảo quản vacxin sau thời gian lưu kho nhiệt độ 2o-8oC 27 3.1.3 gh Ứng dụng vacxin phòng bệnh can thiệp dịch 27 Địa điểm nghiên cứu 27 nl w 3.3 Đối tượng nghiên cứu 27 3.2 p ie 3.1.4 Nguyên liệu 27 3.5 Phương pháp nghiên cứu 28 3.5.1 Phương pháp lấy mẫu theo TCVN 8684:2011 Vacxin thú y - Quy trình d oa 3.4 nf va an lu lấy mẫu sử dụng mẫu kiểm nghiệm 28 lm ul 3.5.2 Phương pháp xác định hiệu giá virus (liều gây nhiễm 50% phôi - EID50) z at nh oi lô vacxin 28 Phương pháp kiểm tra tiêu vô trùng 29 3.5.4 Phương pháp kiểm tra tiêu an toàn 30 3.5.5 Phương pháp kiểm tra tiêu hiệu lực 30 3.5.6 Phương pháp đánh giá độ dài miễn dịch gà sau tiêm vacxin 31 3.5.7 Phương pháp kiểm tra độ dài bảo quản vacxin nhược độc ND-Clone z 3.5.3 co l gm @ m Entero sau thời gian lưu kho 31 an Lu 3.5.8 Phương pháp xử lý số liệu 32 n va ac th iv si Phần Kết nghiên cứu thảo luận 33 4.1 Kiểm tra tiêu kỹ thuật vacxin 33 4.1.1 Kết kiểm tra hiệu giá virus (liều gây nhiễm 50% phôi- EID50) lô vacxin nhược độc ND-Clone Entero đông khô 35 4.1.2 Kết kiểm tra tiêu vô trùng vacxin 36 4.1.3 Kết kiểm tra tiêu an toàn vacxin 38 4.1.4 Kết kiểm tra tiêu hiệu lực vacxin 39 4.2 Kết đánh giá độ dài miễn dịch gà sau chủng vacxin phương pháp công cường độc thời điểm định 41 Kết định kỳ kiểm tra độ dài bảo quản vacxin nhược độc 4.3 lu Nd-Clone entero sau thời gian bảo quản tháng, 12 tháng 18 tháng 46 an Kết kiểm tra hiệu lực vacxin nhược độc ND-Clone Entero sau va 4.3.1 n thời gian bảo quản tháng, 12 tháng 18 tháng 46 tn to Kết kiểm tra hiệu lực vacxin nhược độc ND-Clone Entero sau 4.3.2 ie gh thời gian bảo quản 24 tháng 25 tháng 48 p Phần Kết luận đề nghị 51 Kết luận 51 w Đề nghị 51 oa nl 5.2 5.1 d Tài liệu tham khảo 52 nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th v si DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Nghĩa tiếng việt Cs : Cộng EID50 : Embryo Infective Dosage, 50 % (Liều gây nhiễm 50 % phôi trứng) FAO : Food and Agriculture Organization HA : Heamagglutination test (Phản ứng ngưng kết hồng cầu) HI : Heamagglutination Inhibition test lu an (Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu) va ICPI : Intracerebral pathogenicity Index n tn to (Chỉ số gây bệnh tiêm não gà ngày tuổi) : Intravenous pathogenicity Index ie gh IVPI p (Chỉ số gây bệnh tiêm tĩnh mạch) : 50 percent Lethal Dose-Liều gây chết tối thiểu 50% động vật thí nl w LD50 : Mean Death Time (Thời gian trung bình phơi chết) an lu MDT d oa nghiệm : Newcastle deases (Bệnh Newcastle) SPF eggs : Specific Pathogen Free Eggs (Trứng gà sạch) nf va ND z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th vi si DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Phân loại độc lực virus Newcastle Bảng 2.2 Dòng virus sử dụng để chế vacxin Newcastle 16 Bảng 4.1 Kết xác định hiệu giá virus vacxin nhược độc Newscatle chủng Clone Entero (3 mẫu vacxin lô 1) 35 Bảng 4.2 Kết xác định hiệu giá virus vacxin nhược độc ND-Clone Entero lô vacxin 1,2,3 36 lu Kết kiểm tra tiêu vô trùng vacxin nhược độc ND-Clone Entero 37 Bảng 4.4 Kết kiểm tra tiêu an toàn vacxin nhược độc ND-Clone Entero 38 Bảng 4.5 Kết kiểm tra tiêu hiệu lực vacxin nhược độc ND- Clone Entero 40 an Bảng 4.3 n va tn to p ie gh Bảng 4.6 Kết đánh giá độ dài miễn dịch gà sau chủng vacxin ngày, 14 ngày, tháng, tháng tháng phương pháp công cường độc 42 oa nl w Bảng 4.7 Kết đánh giá độ dài miễn dịch gà sau chủng vacxin 12 13 tháng phương pháp công cường độc 43 d Bảng 4.8 Kết kiểm tra hiệu lực vacxin nhược độc ND-Clone Entero sau thời gian bảo quản tháng, 12 tháng 18 tháng phương pháp công cường độc 47 nf va an lu z at nh oi lm ul Bảng 4.9 Kết kiểm tra hiệu lực vacxin nhược độc ND-Clone Entero sau thời gian bảo quản 24 tháng 25 tháng phương pháp công cường độc 50 z m co l gm @ an Lu n va ac th vii si DANH MỤC HÌNH, SƠ ĐỒ, BIỂU ĐỒ Hình 2.1 Triệu chứng gà bệnh Newcastle Hình 2.2 Ruột non dày tuyết xuất huyết 10 Sơ đồ 4.1 Tóm tắt quy trình sản xuất vacxin nhược độc Newcastle chủng Clone Entero 34 Hình 4.1 Chủng vắc xin cho gà 1-7 ngày tuổi 39 Hình 4.2 Gà vacxin sống sót cơng cường độc 41 Hình 4.3 Gà đối chứng chết công cường độc 41 Đồ thị 4.1 Biểu diễn độ dài miễn dịch gà sau chủng vacxin ND-Clone lu Entero nhược độc 46 an n va Đồ thị 4.2 Biểu diễn độ dài bảo quản vacxin sau thời gian lưu kho 49 p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th viii si TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Nguyễn Hồng Thu Tên luận văn: “Kiểm nghiệm thử nghiệm vacxin Avac ND-Clone Entero phòng bệnh Newcastle cho gà con” Mã học viên: 23151010 Chuyên nghành: Thú y Cơ sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích Để xây dựng quy trình sử dụng bảo quản hợp lý, kiểm tra số tiêu vacxin nhược độc ND-Clone Entero, đánh giá tiêu vơ trùng, an lu tồn, hiệu lực đánh giá độ dài miễn dịch độ dài bảo quản vacxin an va Các phƣơng pháp nghiên cứu sử dụng n Phương pháp lấy mẫu theo TCVN 8684:2011 Vacxin thú y - Quy trình lấy mẫu tn to sử dụng mẫu kiểm nghiệm ie gh Phương pháp xác định hiệu giá virus (liều gây nhiễm 50% phôi - EID50) lô p vacxin Phương pháp kiểm tra tiêu vô trùng, an toàn, hiệu lực w oa nl Phương pháp đánh giá độ dài miễn dịch gà sau tiêm vacxin d Các kết kết luận an lu Kết nghiên cứu cho thấy tất lô vacxin kiểm tra đạt tiêu nf va bắt buộc kiểm tra theo tiêu chuẩn ngành Vacxin đạt vơ trùng khơng có phát triển vi khuẩn hay nấm môi trường nuôi cấy với thời gian theo dõi ngày Vacxin lm ul an toàn gà gà đẻ chủng gấp 10 lần liều ghi nhãn Hiệu lực cho z at nh oi tỷ lệ bảo hộ 100% gà Đã xác định độ dài bảo quản vacxin nhược độc ND-Clone Entero điều kiện nhiệt độ từ - 8oC 18 tháng đảm bảo chất lượng tốt z @ Tiến hành đánh giá hiệu lực vacxin thực địa vùng ngoại thành Hà Nội (Văn gm Giang-Hưng Yên) Hiệu lực vacxin nhược độc ND-Clone Entero đánh giá sau co l nhỏ thời điểm ngày, 14 ngày, tháng, tháng, tháng 12 tháng phương pháp công cường độc cho tỷ lệ bảo hộ 100% với gà Điều chứng tỏ m virus cường độc, vacxin cho độ dài miễn dịch 12 tháng an Lu lượng kháng thể xuất ngày sau tiêm đủ để bảo hộ gà khỏi công n va ac th ix si nghiệm 10 gà đối chứng với liều 106LD50/con Hiệu lực vacxin đánh giá thông qua số gà thí nghiệm bảo hộ Kết tổng hợp bảng 4.5 Bảng 4.5 Kết kiểm tra tiêu hiệu lực vacxin nhƣợc độc ND-Clone Entero Đối tƣợng Lô TN Gà TN Số mẫu kiểm tra/l ô I Gà ĐC lu an Gà TN va II n Gà ĐC III Gà ĐC p ie gh tn to Gà TN w I Gà TN 1-7 ngày 1-7 ngày - 1-7 ngày 1-7 ngày - 1-7 ngày - - 1-7 ngày 106LD50 15 150 106LD50 106LD50 30 150 10 LD50 1-7 ngày 1-7 ngày 106LD50 30 1-7 ngày 106LD50 15 10 LD50 30 150 ll oi 30 106LD50 106LD50 m Gà ĐC - 106LD50 30 u nf III 1-7 ngày va Gà TN 106LD50 15 an Gà ĐC 106LD50 lu II 30 1-7 ngày d Gà TN 1-7 ngày - oa nl Gà ĐC Tuổi gà Số gà (con) Liều virus cƣờng độc Đƣờng đƣa vacxin Nhỏ mũi Nhỏ mũi Nhỏ mũi Nhỏ mũi Nhỏ mũi Nhỏ mũi Nhỏ mũi Nhỏ mũi Nhỏ mũi Nhỏ mũi Nhỏ mũi Nhỏ mũi Tỷ lệ bảo hộ (%) Số gà sống Số gà chết 30/30 100 15/15 30/30 100 15/15 30/30 100 15/15 147/15 3/150 98 30/30 144/15 6/150 96 30/30 145/15 5/150 96,7 30/30 ĐC: Đối chứng z at nh Ghi chú: TN: Thí nghiệm TĐ: Thực địa Kết z Ở mẫu lô vacxin I, II III, với gà ni thí nghiệm gây miễn dịch, sau 14 ngày cơng cường độc, tồn gà sống sót, tỷ lệ bảo hộ @ gm đạt 100% m co l Ở mẫu lô vacxin I, II III với gà ni ngồi thực địa chủng vacxin, sau 14 ngày công cường độc, số gà sống 147 (lô vacxin I), 144 (lô vacxin II) 145 (lô vacxin I) Tỷ lệ bảo hộ dao động từ 96%-98% Trong lơ đối chứng gà khơng nhỏ vacxin, theo dõi - ngày sau công cường độc, an Lu n va ac th 40 si toàn gà chết với triệu chứng, bệnh tích đặc trưng bệnh Newcastle (hình 4.1,4.2) Điều chứng tỏ vacxin nhược độc ND-Clone Entero chế phôi gà SPF cho hiệu lực cao sử dụng Theo 10 TCN 183-93, vacxin nhược độc Newcatle sử dụng phòng bệnh cho đàn gà phải đạt tiêu vô trùng, an toàn hiệu lực Vacxin coi an toàn sau dùng cho gà mẫn cảm liều vacxin gấp 10 lần liều sử dụng, theo dõi 14 ngày, gà ăn uống, hoạt động bình thường Vacxin đạt tiêu hiệu lực gà mẫn cảm nhỏ 01 liều vacxin, 14 ngày sau công cường độc gà bảo hộ, gà đối chứng chết với triệu chứng, bệnh tích đặc trưng bệnh Newcastle Như vậy, qua kết nghiên cứu khẳng định vacxin nhược độc ND- Clone Entero chế phôi gà SPF hồn tồn vơ trùng, có độ an tồn hiệu lực cao lu an n va p ie gh tn to d oa nl w an lu Hình 4.3 Gà đối chứng chết cơng cƣờng độc ll u nf va Hình 4.2 Gà vacxin sống sót công cƣờng độc oi m 4.2 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ ĐỘ DÀI MIỄN DỊCH CỦA GÀ SAU KHI THỜI ĐIỂM NHẤT ĐỊNH z at nh CHỦNG VACXIN BẰNG PHƢƠNG PHÁP CÔNG CƢỜNG ĐỘC Ở CÁC z Độ dài miễn dịch gà khả trì tồn trạng thái miễn @ gm dịch thể gà thí nghiệm gây chủng vacxi ND-Clone Entero l nhược độc Khả miễn dịch gà dùng vacxin dài m co chứng tỏ bảo hộ vacxin gà nhiêu Độ dài miễn dịch gà sau dùng vacxin nhược độc ND-Clone Entero an Lu thể qua tỷ lệ bảo hộ gà vacxin sau thời gian dùng vacxin n va ac th 41 si lu an n va p ie gh tn to Bảng 4.6 Kết đánh giá độ dài miễn dịch gà sau chủng vacxin ngày, 14 ngày, tháng, tháng tháng phƣơng pháp công cƣờng độc oa nl w Số mẫu KT/lô Đối tƣợng Tuổi gà d 10 106LD50 15 10 30 10 LD50 106LD50 15 10 30 106LD50 15 106LD50 gm @ mũi Nhỏ mũi Nhỏ mũi Nhỏ mũi Nhỏ Kết ngày 14 ngày tháng tháng tháng Tỷ Tỷ Tỷ Tỷ Tỷ Gà lệ Gà lệ Gà lệ Gà lệ Gà lệ sống/ bảo sống/ bảo sống/ bảo sống/ bảo sống/ bảo công hộ công hộ công hộ công hộ công hộ (%) (%) (%) (%) (%) 30/30 100 30/30 100 30/30 100 30/30 100 30/30 100 0/15 0/15 0/15 30/30 100 30/30 100 30/30 0/15 0/15 0/15 30/30 100 30/30 100 30/30 0/15 0/15 o l.c z mũi 0/15 m ngày Nhỏ mũi Nhỏ z at nh ĐC Đƣờng chủng 106LD50 oi Lô (3) Liều VR cƣờng độc m Lô (3) ll fu ĐC ngày 1-7 Gà TN ngày Gà 1-7 ĐC ngày 1-7 Gà TN ngày Gà 1-7 30 an Gà 1-7 ngày 1-7 nv a lu Lô (3) Gà TN Số gà ∑gà công/ công/lô lần vx cơng/ mẫu Lu Ghi chú: TN: Thí nghiệm; ĐC: Đối chứng an n va ac th 42 0/15 100 30/30 0/15 100 30/30 0/15 100 100 0/15 30/30 100 0/15 30/30 100 0/15 si lu an n va ∑gà công/lô vx 1-7 ngày 10 30 106LD50 15 10 p ie Đối tƣợng Tuổi gà Gà TN Lô (3) d oa nl w Số mẫu KT/lô Kết Số gà công/ lần công/ mẫu a lu gh tn to Bảng 4.7 Kết đánh giá độ dài miễn dịch gà sau chủng vacxin 12 13 tháng phƣơng pháp công cƣờng độc 1-7 ngày Gà TN 1-7 ngày Gà ĐC 1-7 ngày Gà TN 1-7 ngày 10 Gà ĐC 1-7 ngày Đƣờng chủng 12 tháng 13 tháng Gà sống/ công Tỷ lệ bảo hộ (%) Gà sống/ công Tỷ lệ bảo hộ (%) Nhỏ mũi 26/30 86,7 20/30 66,7 106LD50 Nhỏ mũi 0/15 0/15 30 106LD50 Nhỏ mũi 25/30 83,3 16/30 53,3 15 106LD50 Nhỏ mũi 0/15 0/15 30 106LD50 Nhỏ mũi 24/30 80 14/30 46,7 15 106LD50 Nhỏ mũi 0/15 0/15 ll Lô (3) fu an nv Gà ĐC Liều VR cƣờng độc oi m z at nh Lô (3) z @ ĐC: Đối chứng m o l.c gm Ghi chú: TN: Thí nghiệm; an Lu n va ac th 43 si Dùng gà từ 1-7 ngày tuổi, dùng vacxin phương pháp nhỏ mũi cho gà với liều sử dụng 106EID50/con, dùng nhắc lại lần vacxin cho gà sau 14 kể từ nhỏ mũi 1, thời điểm cơng cường độc chúng tơi dùng 30 con/lần thí nghiệm cho mẫu vacxin lô, 15 gà khơng chủng vacxin làm đối chứng Sau ngày tính từ gà gây miễn dịch vacxin Newcastle nhược độc, mẫu vacxin lấy 10 gà gây miễn dịch với gà đối chứng không nhỏ vacxin đem thử thách chủng virus cường độc Newcastle Velogenic Mỗi gà nhỏ mũi với liều 106LD50/con Theo dõi sau công cường độc 14 ngày Các gà cịn lại mẫu lơ vacxin tiếp tục ni dưỡng điều kiện phịng thí nghiệm lu Sau 14 ngày, tháng, tháng tháng, phương pháp tiến hành lúc an ngày sau gà chủng vacxin Kết tổng hợp chúng tơi trình bày n va bảng 4.7 tn to Lần thử thách vào lúc 12 tháng cuối 13 tháng từ gh gà gây miễn dịch lần Ở lần thí nghiệm này, chúng tơi dùng 10 gà p ie miễn dịch gà đối chứng không nhỏ vacxin, đem thử thách chủng virus cường độc Newcastle Velogenic Mỗi gà nhỏ với liều 106LD50/con nhỏ mũi Kết nl w theo dõi sau 14 ngày thể bảng 4.8 d oa Từ kết kiểm tra độ dài miễn dịch gà sau nhỏ vacxin, chúng tơi an lu có nhận xét sau: va Theo tiêu chuẩn ngành 10 TCN 183 – 93, tiêu kiểm tra hiệu lực vacxin u nf Newcastle nhược độc tiến hành sau nhỏ vacxin 14 ngày Ở thời điểm ll này, vật có lượng kháng thể chắn để bảo hộ m oi Theo Nguyễn Bá Hiên (2009) kháng thể không xuất sau thể tăng dần đến mức bảo hộ z at nh tiêm mũi tiêm đầu trước 24 mà xuất sau 24 trở đi, lượng kháng z Theo Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hương (2009) đưa vacxin vào @ gm thể, kháng thể chưa sinh mà phải sau thời gian tiềm tàng, dài l hay ngắn phụ thuộc vào kháng nguyên chứa vacxin xâm nhập m co kháng nguyên lần đầu hay lần thứ hai, thứ ba sau kháng thể sinh ra, lượng kháng thể tăng dần, đạt mức cao sau 2-3 tuần giảm dần an Lu sau vài tháng vài năm n va ac th 44 si Trong thí nghiệm này, tiến hành thử thách virus cường độc Newcastle Velogenic (VN91) cho gà vào lúc ngày sau đưa vacxin vào thể Ở mẫu lô vacxin, 30/30 gà gây miễn dịch sau công cường độc bảo hộ, đạt tỷ lệ 100%, gà đối chứng chết hồn tồn Điều chứng tỏ rằng, lượng kháng thể mà gà sản sinh vào thời điểm đủ để bảo vệ vật khỏi công virus cường độc Ở lần thử thách vào lúc 14 ngày, tháng, tháng tháng tính từ sau nhỏ vacxin, gà lơ thí nghiệm I, II III theo dõi 14 ngày sau cơng cường độc, 30/30 gà thí nghiệm lô sau thử thách với liều 106LD50 /con sống sót, giữ nguyên tỷ lệ bảo hộ 100% Trong lu lơ đối chứng gà không nhỏ vacxin, theo dõi - ngày sau an công cường độc, 100% số gà chết với triệu chứng, bệnh tích đặc trưng n va bệnh Newcastle tn to Thời điểm thử thách 12 tháng sau gà chủng vacxin, thời điểm tỷ lệ bảo hộ gà bắt đầu giảm, cụ thể: p ie gh + Lô vacxin thứ nhất: tổng số 30 gà mẫu vacxin có 26/30 gà thí nghiệm bảo hộ, đạt tỷ lệ 86,7% nl w + Lô vacxin thứ hai: 30 gà thử thách mẫu vacxin có 25/30 gà d oa sống, đạt tỷ lệ bảo hộ 83,3% an lu + Lô vacxin thứ ba: mẫu vacxin tổng số 30 gà thử thách va với liều 106LD50 /con, có 24/30 gà sống, đạt tỷ lệ bảo hộ 80% u nf Thời điểm 13 tháng mốc thời gian kiểm tra độ dài miễn dịch cuối ll gà phạm vi nghiên cứu đề tài Bảng 4.8 cho thấy khả m oi bảo hộ gà giảm đáng kể Ở thời điểm 13 tháng, số vịt lô tỷ lệ bảo hộ z at nh giảm rõ rệt Tổng số gà lô mẫu kiểm tra thời điểm 12 tháng, tỷ lệ bảo hộ 86,7% giảm xuống 66,7% Gà lô mẫu kiểm tra 16/30 gà sau z thử thách sống, tỷ lệ bảo hộ 83,3% 12 tháng giảm xuống 53,3% @ gm thời điểm Đặc biệt gà mẫu kiểm tra lơ vacxin thứ 3, có 14/30 gà l cứu sống, tỷ lệ bảo hộ 46,7% Theo tiêu chuẩn ngành 10 TCN 183 m co – 93 tỷ lệ bảo hộ nằm mức cho phép nhiều Kết kiểm tra độ dài miễn dịch lô vacxin nhược độc ND- Clone an Lu Entero minh họa đồ thị 4.1: n va ac th 45 si 120 100 Tỷ lệ bảo hộ (%) 100 100 100 100 100 86.7 83.3 80 80 66.7 53.3 46.7 60 40 lô1 lô2 lô3 20 14 90 180 270 360 390 Thời điểm kiểm tra (ngày) lu an n va tn to Đồ thị 4.1 Biểu diễn độ dài miễn dịch gà sau chủng vacxin NDClone Entero nhƣợc độc Như vậy, nhìn vào biểu đồ 4.1 quan sát rõ ổn định hay giảm xuống tỷ lệ bảo hộ gà lô vacxin qua thời điểm kiểm tra độ dài ie gh miễn dịch p Từ kết nghiên cứu khẳng định: gà sau nhỏ vacxin từ ngày đến 12 tháng bảo hộ công virus cường độc w oa nl Điều chứng tỏ gà nhỏ vacxin nhược độc Newcastle ND-Clone Entero d chế phơi gà SPF có độ dài miễn dịch 12 tháng lu ll u nf va an 4.3 KẾT QUẢ ĐỊNH KỲ KIỂM TRA ĐỘ DÀI BẢO QUẢN CỦA VACXIN NHƢỢC ĐỘC ND-CLONE ENTERO SAU THỜI GIAN BẢO QUẢN THÁNG, 12 THÁNG VÀ 18 THÁNG oi m 4.3.1 Kết kiểm tra hiệu lực vacxin nhƣợc độc ND-Clone Entero sau z at nh thời gian bảo quản tháng, 12 tháng 18 tháng z Bệnh Newcastle bệnh thường tiến triển thể cấp tính, tỷ lệ tử vong cao, bệnh xảy quanh năm Vì thế, việc sản xuất dự trữ đủ lượng m co l gm @ vacxin nhằm đáp ứng nhu cầu thực tiễn chăn nuôi cần thiết Trong trình lưu kho dự trữ, điều kiện bảo quản tốt để không làm giảm chất lượng vacxin thiếu Vấn đề đặt vacxin sau sản xuất, bảo quản 2o8oC thời gian bảo quản kéo dài mà hiệu lực khơng bị ảnh hưởng Do đó, việc đưa thông tin thời hạn bảo quản vacxin nhà an Lu sản xuất người tiêu dùng cần thiết n va ac th 46 si lu an n va tn to Bảng 4.8 Kết kiểm tra hiệu lực vacxin nhƣợc độc ND-Clone Entero sau thời gian bảo quản p ie gh tháng, 12 tháng 18 tháng phƣơng pháp công cƣờng độc oa nl w Đối tƣợng Tuổi gà d Số mẫu KT/lô Kết ∑gà công/lô vx 10 30 106LD50 30/30 100 15 106LD50 0/15 10 30 106LD50 15 tháng Liều VR cƣờng độc 1-7 ngày Gà ĐC 1-7 ngày Gà TN 1-7 ngày Gà ĐC 1-7 ngày Gà TN 1-7 ngày 10 Gà ĐC 1-7 ngày 15 Lô (3) ll fu Gà TN z an nv a lu Số gà công/ lần công/ mẫu oi m 30 Gà sống/ công Tỷ lệ bảo hộ (%) 30/30 100 30/30 100 0/15 0/15 30/30 100 30/30 100 30/30 100 106LD50 0/15 0/15 0/15 106LD50 30/30 100 30/30 100 30/30 100 0/15 0/15 0/15 106LD50 o l.c m Ghi chú: TN: Thí nghiệm; Tỷ lệ Gà sống/ bảo hộ công (%) 18 tháng Tỷ lệ bảo hộ (%) Gà sống/ công gm @ Lô (3) z at nh Lô (3) 12 tháng ĐC: Đối chứng an Lu n va ac th 47 si Trong trình nghiên cứu đê tài này, lô vacxin sau sản xuất kiểm tra chất lượng đủ tiêu chuẩn xuất xưởng, q trình bảo quản chúng tơi định kỳ lấy mẫu thời điểm tháng, 12 tháng, 18 tháng, 24 tháng 25 tháng tính từ thời điểm kết thúc trình sản xuất, để tiến hành kiểm tra hiệu lực Mỗi lô vacxin lấy mẫu thời gian sau bảo quản hoàn nguyên trở lại nước muối sinh lý vô trùng 0,85% cho ml chứa liều vacxin sử dụng (106EID50) Nhỏ cho 10 gà thí nghiệm gà khơng chủng vacxin làm đối chứng, sau 14 ngày số gà miễn dịch gà đối chứng thử thách với virus cường độc Newcastle Velogenic (VN91) Tiếp tục theo dõi 14 ngày, ghi lại số gà sống, chết lô miễn dịch đối chứng Kết thể bảng 4.9 lu an n va lô đem thử thách liều 106LD50/con Sau thời gian theo dõi 14 ngày, gà tn to Qua bảng 4.9 cho thấy: sau thời gian bảo quản tháng, 12 tháng 18 tháng nhiệt độ 2o-8oC, thời gian mẫu lô vacxin đem kiểm tra hiệu lực đảm bảo tiêu chất lượng, 30/30 gà thí nghiệm cho ie gh khoẻ mạnh phát triển bình thường, tỷ lệ bảo hộ đạt 100% p 4.3.2 Kết kiểm tra hiệu lực vacxin nhƣợc độc ND-Clone Entero sau w thời gian bảo quản 24 tháng 25 tháng d oa nl Thời điểm kiểm tra sau bảo quản 24 tháng 25 tháng thời điểm cuối kiểm tra đề tài nghiên cứu Kết bảng 4.10 an lu cho thấy: ll u nf va + Lô vacxin 1: thời điểm 24 tháng sau bảo quản, tổng số gà kiểm tra cho mẫu vacxin 30, sau công cường độc có 28 sống, tỷ lệ bảo hộ bắt đầu giảm 93,3% Sau 25 tháng tỷ lệ bảo hộ giảm xuống đáng kể từ 93,3% oi m cịn 70% z at nh + Lơ vacxin 2: 30/30 gà dùng để kiểm tra hiệu lực mẫu vacxin, có 25/30 bảo hộ, tỷ lệ đạt 83,3% thời điểm 24 tháng, đến 25 tháng tỷ lệ z gm @ bảo hộ giảm 56,7% m co l + Lô vacxin 3: với mẫu kiểm tra 24 tháng 25 tháng sau bảo quản, 26/30 19/30 gà thí nghiệm sau thử thách cịn sống sót; tỷ lệ bảo hộ từ 86,7% giảm xuống 63,3% an Lu Theo quy định tiêu chuẩn ngành 10 TCN 183 – 93, sau thử thách cường độc tồn gà miễn dịch phải cứu sống nghĩa tỷ lệ bảo hộ phải n va ac th 48 si đạt 100% lô vacxin đạt tiêu hiệu lực Kết kiểm tra hiệu lực vacxin sau thời gian bảo quản minh hoạ đồ thị 4.2 lu Tỷ lệ bảo hộ (%) 120 100 an n va 80 lô1 60 lô2 lô3 40 gh tn to 20 p ie 12 nl w 18 24 25 d oa Thời điểm kiểm tra (tháng) an lu ll u nf va Đồ thị 4.2 Biểu diễn độ dài bảo quản vacxin sau thời gian lƣu kho Qua hình đồ thị 4.2 cho thấy vacxin từ sản xuất đến sau bảo quản 18 tháng cho hiệu lực với tỷ lệ bảo hộ 100%, đến 24 tháng sau sản xuất tỷ lệ bảo hộ giảm xuống lô: lô giảm xuống cịn 93,3%, lơ tỷ lệ bảo hộ cịn 83,3% lô tỷ lệ bảo hộ giảm xuống 86,7% Đến 25 tháng sau bảo quản, tỷ lệ bảo hộ lại tiếp tục giảm: lơ cịn 70%, lơ cịn 56,7 lơ oi m z at nh z @ 63,3% m co l gm Qua nghiên cứu đề tài cho thấy, vacxin nhược độc ND-Clone Entero sau sản xuất có độ dài bảo quản 18 tháng điều kiện nhiệt độ 2o-8oC Từ đưa lịch bảo quản cho nhà sản xuất người tiêu dùng, giúp cho họ có kế hoạch hoạch định xác công tác sản xuất kinh doanh an Lu đem lại nguồn lợi kinh tế cao cho doanh nghiệp n va ac th 49 si lu an n va gh tn to Bảng 4.9 Kết kiểm tra hiệu lực vacxin nhƣợc độc ND-Clone Entero sau thời gian bảo quản 24 tháng 25 p ie tháng phƣơng pháp công cƣờng độc oa nl w Đối tƣợng Tuổi gà d ∑gà công/lô vx Liều VR cƣờng độc 10 30 106LD50 15 ll Lô (3) 1-7 ngày 1-7 ngày 1-7 ngày 1-7 ngày 1-7 ngày 1-7 ngày fu Gà TN an nv a lu Số mẫu KT/lô Kết Số gà công/ lần công/ mẫu 15 10 30 15 Nhỏ mũi 106LD50 Nhỏ mũi 106LD50 Nhỏ mũi 106LD50 Nhỏ mũi 106LD50 Nhỏ mũi o l.c Gà ĐC gm Lô (3) 30 @ Gà TN 10 z Gà ĐC z at nh Lô (3) oi Gà TN m Gà ĐC Đƣờng chủng 106LD50 Nhỏ mũi 24 tháng Tỷ lệ Gà bảo sống/ hộ công (%) 25 tháng Tỷ lệ Gà bảo sống/ hộ công (%) 28/30 93,3 21/30 70 0/15 0/15 25/30 83,3 17/30 56,7 0/15 0/15 26/30 86,7 19/30 63,3 0/15 0/15 m ĐC: Đối chứng an Lu Ghi chú: TN: Thí nghiệm; n va ac th 50 si PHẦN KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Vacxin nhược độc ND-Clone Entero Công ty TNHH MTV AVAC Việt Nam sản xuất hàng năm theo quy trình sản xuất vacxin trứng gà SPF 9-11 ngày tuổi, để cung cấp cho cơng tác phịng, chống bệnh Newcastle quốc gia Căn vào kết thu trình nghiên cứu luận văn, chúng tơi đưa số kết luận sau đây: lu Kết kiểm nghiệm vacxin an Các lô vacxin đạt tiêu bắt buộc kiểm tra theo tiêu chuẩn ngành va n 10 TCN 183 - 93: to tn - Vô trùng - Hiệu lực: tỷ lệ bảo hộ 100% gà p ie gh - An toàn gà nl w Hiệu lực vacxin nhược độc ND-Clone Entero đánh giá sau oa chủng thời điểm ngày, 14 ngày, tháng, tháng, tháng 12 tháng cho d tỷ lệ bảo hộ 100% Điều chứng tỏ lượng kháng thể xuất ngày sau lu an chủng đủ để bảo hộ gà khỏi công virus cường độc, vacxin cho nf va độ dài miễn dịch 12 tháng lm ul Độ dài bảo quản vacxin nhược độc ND-Clone Entero điều kiện nhiệt độ từ - 8oC, vacxin bảo quản 18 tháng đảm bảo chất lượng tốt z at nh oi 5.2 ĐỀ NGHỊ - Xác định hàm lượng kháng thể bị động gà sinh từ gà mẹ z phòng vacxin nhược độc ND-Clone Entero để định thời điểm chủng gm @ mũi thích hợp gà giai đoạn nở m co để góp phần phịng chống dịch Newcastle gia cầm l - Cần thực cách nghiên ngặt việc chủng ngừa cho đàn gia cầm an Lu n va ac th 51 si TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt: Nguyễn Bá Hiên Trần Thị Lan Hương (2010) Miễn dịch học thú y NXB Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Bá Hiên Huỳnh Thị Mỹ Lệ (2012) Giáo trình Bệnh truyền nhiễm thú y Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Bá Huệ, Nguyễn Thu Hồng Trần Thị Hường (1980) Các chủng virus cường độc Newcastle gây vụ dịch lớn xí nghiệp nước ta lu hường phân biệt Kết nghiên cứu Khoa học kỹ thuật Thú y 1968-1978, Nhà an xuất Nông nghiệp, Hà Nội n va Nguyễn Thu Hồng (1993) Khảo sát virus Newcastle gây ổ dịch lớn năm 70 nghiên cứu số vacxin phòng bệnh cho gà nước ta Luận gh tn to án phó tiến sỹ KHNN Đại học Nơng nghiệp, Hà Nội Nguyễn Tiến Dũng, Bunpon Sirivong Nguyễn Văn Quang (1991) Cấu trúc p ie nl w kháng nguyên HN virus Newcastle ảnh hưởng lên phản ứng HA, oa HI Tuyển tập cơng trình nghiên cứu KHKT Nông nghiệp Nhà xuất Nông d nghiệp, Hà Nội an lu Phạm Hồng Sơn (2005) Giáo trình Bệnh truyền nhiễm thú y Nhà xuất nf va Nơng nghiệp, Hà Nội lm ul Trần Đình Từ (1985) Nghiên cứu xác định độc lực chủng virus vacxin z at nh oi Newcastle sử dụng Việt Nam Kêt nghiên cứu KHKT Thú y 1979-1984 Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Trần Đình Từ (1985) Nghiên cứu xác định độc lực chủng virus vacxin z gm @ Newcastle sử dụng Việt Nam Kêt nghiên cứu KHKT Thú y 1979-1984 Tr 119-146 Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội l Vũ Đạt (1989) Nghiên cứu tác nhân gây ảnh hưởng đến đáp ứng miễn co m dịch phòng bệnh Newcastle Báo cáo hội nghị Khoa học Kỹ thuật Bộ Nông an Lu nghiệp Công nghệ thực phẩm, Hà Nội n va ac th 52 si Tiếng Anh: 10 Allan W H and Gough R E (1976) A comparison between the haemagglutination inhibition and complement fixation tests for Newcastle disease Res Vet Sci 20, p.101 - 103 11 Allan W H., Lancaster J E., and Toth B (1978) Newcastle disease vaccines Their production and use FAO Animal Production and Health Series No 10 FAO, Rome, Italy 12 Alexander D.J (1988) ND method of speasd Acadern Pub Boston pp 256-272 13 Alexander D.J (2003) Historical aspects Kluwer academic publ Boston pp 1-10 lu 14 Bankowski R.A (1964) Cytopathogenicity of Newcastle disease virus In Hason an va R.P (ed) Newcastle disease virus: An Evolving pathogen University of Wisconsin n press Madison pp 231 by Newcastle disease immune serum Science pp 361-362 p ie gh tn to 15 Beach R P (1942) Theneutralization in vitro of avian pneumoencephalitis virus 16 Beaudette and F R Bivins J A and Miller B R (1949) Newcastle disease oa nl w immunization with live virus Corell Vet pp 302-334 17 Brandly C A and Hanson R P (1965) Newcastle disease in disease of poultry d an lu Biester and Schwarte fifth edition The IOWA State University press Ames, nf va IOWS, USA (22) pp 81-88 lm ul 18 Chang P W (1981) Newcastle disease In G W Beran (ed.).CRC Handbook series in zoonoses Section B: viral zones Vol II CRC press: Boston Raton pp z at nh oi 261-274 19 Doyle T M (1927) A hitherto unrecorded disease of flowls due to a filter passing z virut, jComp patholther pp 144-169 @ gm 20 Doyle T.M (1962) Newcastle disease of fowls Journal of Comparative Pathology co l and Therapeutics, 48: 1-20 21 Doyle T M (1985) Pathology of Newcastle disease (48) pp 144-169 m an Lu 22 Falcon M.D (2004) Exotic Newcastle Disease.”Seminars in Avian and Exotic Pet Medicine 13(2) pp 79-85 n va ac th 53 si 23 Hanson R.P (1980) Newcastle disease In Hitcher S.B Dommer C H Purchase Insolation and Idenntification of Avian pathogens Am Assoc Avian pathol Kennett Square P A pp 63-66 24 Hitchner S B and Johnson E P (1948) A virus of low virulence for immunizing fowls against Newcastle disease (avian pneumoencephalitis) Vet Med 43 pp 525-530 25 Kolakofsky D.E (1974) Molecular weight determination of sendai and Newcastle disease virus RNA J Virol (13) pp 261-258 26 Kraneveld F.C (1926) A poultry disease in the Dutch East Indies NederlandsIndische Bladen voor Diergeneeskunde 38 pp 448-450 lu an 27 Lancaster J E (1966) Newcastle disease-a review 1926-1964 Monogr No Can va Dep Agric Ottawa n Monogr No11 Can Dep Agric Ottawa ie gh tn to 28 Lancaster J E and Alexander D J (1975) Newcastle disease: virus and spread p 29 Murphy F A, Gibbs E P J, Horzinek M C and Studdert M J (1999) Veterinary w Virology 3nd ed San Diego: Academic Press oa nl 30 Parry S.H., and Aitken I.D (1977) Local immunity in the respiratory tract of the d chicken II The secretory immune response to newcastle disease virus and the role lu an of IgA, Veterinary Microbiology Volume 2, Issue 2, p 143-165 nf va 31 R J Phillips, Samson A C R and Emmerson P T (1998) Nucleotide sequence lm ul of the 5′-terminus of Newcastle disease virus and assembly of the complete genomic sequence: agreement with the “rule of six” Arch Virol 143 (1998) pp z at nh oi 1993–2002 32 Spradbrow P B (2001) Newcastle disease in village chickens Poultry Science z Review pp 57-96 @ gm 33 Timms L and D J Alexander (1977) Cell-mediated immune response of l chickens to Newcastle disease vaccines, Avian Pathol 6, p 51 - 59 m co 34 Reynolds, D L and A D Maraqa (2000) Protective immunity against Newcastle an Lu disease: The role of cell-mediated immunity Avian Dis 44, p.145 - 154 n va ac th 54 si