(Luận văn thạc sĩ) đánh giá hiệu lực của vắc xin avimex knew h5 sử dụng ở gà để chống lại vi rút cúm gia cầm h5n1 clade 2 3 2 1 và h5n6 clade 2 3 4 4 phân lập tại việt nam năm 2017

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMN NÔNG NGHIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMP VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMT NAM NGÔ THỊ HƢƠNG ĐÁNH GIÁ HIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMU LỰC CỦA VẮC XIN AVIMEX KNEW-C CỦA VẮC XIN AVIMEX KNEW-A VẮC XIN AVIMEX KNEW-C XIN AVIMEX KNEWH5 SỬ DỤNG Ở GÀ ĐỂ CHỐNG LẠI VI RÚT CÚM GIA DỤNG Ở GÀ ĐỂ CHỐNG LẠI VI RÚT CÚM GIANG Ở GÀ ĐỂ CHỐNG LẠI VI RÚT CÚM GIA GÀ ĐỂ CHỐNG LẠI VI RÚT CÚM GIA CHỐNG LẠI VI RÚT CÚM GIANG LẠI VI RÚT CÚM GIAI VI RÚT CÚM GIA CẦM H5N1 CLADE 2.3.2.1 VÀ H5N6 CLADE 2.3.4.4M H5N1 CLADE 2.3.2.1 VÀ H5N6 CLADE 2.3.4.4 PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM NĂM 2017P TẠI VI RÚT CÚM GIAI VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMT NAM NĂM 2017 Chuyên ngành: Thú y Mã số:: 8640101 Người hướng dẫn khoa học:i hướng dẫn khoa học:ng dẫn khoa học:n khoa học:c: PGS.TS Chu Đức Thắngc Thắngng NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP - 2019 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu đƣợc trình bày luận văn trung thực, khách quan chƣa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn đƣợc cám ơn, thông tin trích dẫn luận văn đƣợc rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận văn Ngô Thị Hƣơng i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn, nhận đƣợc hƣớng dẫn, bảo tận tình thầy giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận văn, cho phép tơi đƣợc bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Chu Đức Thắng tận tình hƣớng dẫn, dành nhiều cơng sức, thời gian tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập thực đề tài Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Nội – Chẩn – Dƣợc – Độc chất, Khoa Thú y – Học viện Nơng nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ tơi trình học tập, thực đề tài hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán viên chức Trung tâm Chẩn đoán Thú y Trung ƣơng giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi suốt q trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn gia đình, ngƣời thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận văn./ Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận văn Ngô Thị Hƣơng ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng .vii Trích yếu luận văn x Thesis abstract .xii Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài .1 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Phạm vi nghiên cứu 1.4 Những đóng góp mới, ý nghĩa khoa học thực tiễn Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Sơ lƣợc bệnh cúm gia cầm 2.1.1 Khái niệm bệnh cúm gia cầm 2.1.2 Lịch sử bệnh giới 2.1.3 Tình hình dịch cúm gia cầm Việt Nam 2.1.4 Dịch tễ học bệnh cúm gia cầm 2.1.5 Triệu chứng, bệnh tích bệnh cúm gia cầm .11 2.1.6 Phƣơng pháp chẩn đoán cúm gia cầm .13 2.2 Vi rút cúm gia cầm 13 2.2.1 Đặc điểm hình thái, cấu trúc vi rút cúm type A .13 2.2.2 Nguồn gốc, cấu trúc phân bố vi rút cúm A/H5N1 clade 2.3.2.1 .17 2.2.3 Nguồn gốc, cấu trúc phân bố vi rút cúm A/H5N6 clade 2.3.4.4 .18 2.2.4 Đặc tính kháng nguyên vi rút cúm 18 2.2.5 Độc lực vi rút 19 2.2.6 Sức đề kháng vi rút 20 2.2.7 Cơ chế xâm nhiễm gây bệnh vi rút cúm A tế bào vật chủ 20 2.2.8 Nuôi cấy lƣu trữ vi rút 22 2.3 Phòng bệnh cúm gia cầm 22 iii 2.3.1 Các loại vắc xin đƣợc dùng 22 2.3.2 Tình hình sử dụng vắc xin cúm gia cầm giới 23 2.3.3 Tình hình sử dụng vắc xin cúm gia cầm Việt Nam 24 2.3.4 Những điểm ý sử dụng vắc xin cúm gia cầm 26 Phần Vật liệu phƣơng pháp nghiên cứu 27 3.1 Địa điểm nghiên cứu 27 3.2 Thời gian nghiên cứu 27 3.3 Đối tƣợng, vật liệu nghiên cứu 27 3.4 Nội dung nghiên cứu 28 3.5 Phƣơng pháp nghiên cứu 28 3.5.1 Phƣơng pháp điều tra hồi cứu 28 3.5.2 Phƣơng pháp lấy mẫu bảo quản mẫu 28 3.5.3 Phƣơng pháp mổ khám 29 3.5.4 Phƣơng pháp công cƣờng độc đánh giá hiệu lực vắc xin 29 3.5.5 Phƣơng pháp phát kháng nguyên 30 3.5.6 Phƣơng pháp xử lý số liệu 34 Phần Kết thảo luận 35 4.1 Tình hình dịch cúm gia cầm Việt Nam năm gần 35 4.1.1 Tình hình dịch cúm gia cầm Việt Nam năm 2015 35 4.1.2 Tình hình dịch cúm gia cầm Việt Nam năm 2016 35 4.1.3 Tình hình dịch cúm gia cầm Việt Nam năm 2017 36 4.1.4 Tình hình dịch cúm gia cầm Việt Nam năm 2018 37 4.1.5 Sự phân bố lƣu hành chủng cúm gia cầm Việt Nam năm 2018 4.2 Kết kiểm tra hiệu giá kháng thể gà tiêm phòng vắc xin Avimex Knew-H5 mũi mũi 4.3 38 40 Đánh giá hiệu lực bảo hộ vắc xin avimex knew-h5 chống lại vi rút cúm gia cầm H5n1 clade 2.3.2.1c H5n6 2.3.4.4b phân lập năm 2017 42 4.3.1 Kết thí nghiệm công cƣờng độc với vi rút cúm H5N1 Clade 2.3.2.1c 43 4.3.2 Kết thí nghiệm cơng cƣờng độc với vi rút cúm H5N6 Clade 2.3.4.4b 48 4.4 Kết đinh lƣơng vi rút bai thai 54 iv 4.4.1 Mức độ thải vi rút gà sau công cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N1 clade 2.3.2.1c 54 4.4.2 Mức độ thải vi rút gà sau công cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N6 clade 2.3.4.4b 59 4.5 Đánh giá triệu chứng, bệnh tích cơng cƣờng độc 62 4.5.1 Bệnh tích đại thể gà sau công cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N1 clade 2.3.2.1c 63 4.5.2 Bệnh tích đại thể gà sau công cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N6 clade 2.3.4.4b 64 Phần Kết luận kiến nghị 70 5.1 Kết luận 70 5.2 Kiến nghị 70 Tài liệu tham khảo 71 Phụ lục 75 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt ADN DNA Axit deoxyribonucleic (Acid Deoxyribo Nucleic) AI (Avian influenza) Bệnh Cúm gia cầm ARN RNA Axit ribonucleic (Acid Ribonucleic) ELISA Phản ứng miễn dịch gắn men (Enzyme-Linked immunosorbent assay) GMT (Geometic Mean Titer) Hiệu giá kháng thể trung bình HA (Haemagglutination assay) Phản ứng ngƣng kết hồng cầu HI (Haemagglutination inhibition assay) Phản ứng ngăn trở ngƣng kết hồng cầu HPAI Cúm gia cầm thể độc lực cao (Highly pathogenic avian influenza) LPAI Cúm gia cầm thể độc lực thấp (Low pathogenic avian influenza) PBS (Phosphate-Bufferred Saline) Dung dịch đệm phốt phát RDE Enzym phá hủy điểm tiếp nhận (Receptor destroying enzyme) Realtime RT-PCR (Reverse Trancription – Phản ứng chuỗi Polyme phiên mã Polymerase Chain Reation) CEF ngƣợc theo thời gian thực Tếbao xơ phôi ga ̀‡ ̀‡ vi DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Bố trí thí nghiệm kiểm tra hiệu lực vắc xin 30 Bảng 3.2 Primer probe để phát vi rút cúm gia cầm .32 Bảng 3.3 Thành phần phản ứng realtime PCR 32 Bảng 3.4 Chu trinh‡ nhiệt phản ứng realtime RT-PCR 32 Bảng 4.1 Tình hình dịch bệnh qua giai đoạn 2015-2018 37 Bảng 4.2 Hiệu giá kháng thể gà sau tiêm vắc xin mũi mũi với kháng nguyên đồng chủng vắc xin 41 Bảng 4.3 Kết theo dõi theo dõi lầm sàng q trinh thí nghiệm cơng cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N1 (vắc xin mũi 1) 44 Bảng 4.4 Kết theo dõi theo dõi lầm sàng q trinh thí nghiệm cơng cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N1 (vắc xin mũi 2) 46 Bảng 4.5 Kết theo dõi thu thập đƣợc sau thí nghiệm cơng cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N6 (vắc xin mũi 1) 48 Bảng 4.6 Kết theo dõi thu thập đƣợc sau thí nghiệm công cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N6 (vắc xin mũi 2) 50 Bảng 4.7 Bảng điểm lâm sàng tỷ lệ bảo hộ đàn gà sau công cƣờng độc tỷ lệ bảo hộ đàn gà sau công cƣờng độc 52 Bảng 4.8 Kết thử nghiệm hiệu lực loại vắc xin virus phân lập năm 2017 53 Bảng 4.9 Mức độ thải vi rút nhóm gà sau cơng cƣờng độc vi rút cúm H5N1 clade 2.3.2.1c với liệu trình mũi 55 Bảng 4.10 Mức độ thải vi rút nhóm gà sau cơng cƣờng độc vi rút cúm H5N1 clade 2.3.2.1c với liệu trình mũi 56 Bảng 4.11 Kết phát vi rút cúm A/H5N1 clade 2.3.2.1c 57 Bảng 4.12 Mức độ thải vi rút nhóm gà sau công cƣờng độc vi rút cúm H5N6 clade 2.3.4.4b với liệu trình mũi 59 Bảng 4.13 Mức độ thải vi rút nhóm gà sau công cƣờng độc vi rút cúm H5N6 clade 2.3.4.4b với liệu trình mũi 60 Bảng 4.14 Kết phát vi rút cúm A/H5N6 clade 2.3.4.4b 61 vii Bảng 4.15 Kết mổ khám nhóm gà đƣợc cơng cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N1 clade 2.3.2.1c 63 Bảng 4.16 Kết mổ khám nhóm gà đƣợc cơng cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N6 clade 2.3.4.4b 65 viii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cấu tạo ngồi vi rút cúm gia cầm 14 Hình 4.1 Biểu đồ so sánh dịch cúm gia cầm từ năm 2015 – 2018 .38 Hình 4.2 Cây phả hệ vi rút cúm subtype H5 Việt Nam năm 2018 39 Hình 4.3 Biểu đồ tỷ lệ phân bố mức hiệu giá kháng thể sau tiêm vắc xin mũi mũi 41 Hình 4.4 Biểu đồ khả bảo hộ sau công cƣờng độc vi rút cúm H5N1 clade 2.3.2.1c gà thí nghiệm với liệu trình tiêm 47 Hình 4.5 Biểu đồ khả bảo hộ sau công cƣờng độc vi rút cúm H5N6 clade 2.3.4.4b 52 Hình 4.6 Biểu đồ diễn biến mức độ thải vi rút nhóm gà sau cơng cƣờng độc vi rút cúm H5N1 clade 2.3.2.1c với liệu trình tiêm mũi 57 Hình 4.7 Biểu đồ diễn biến mức độ thải vi rút nhóm gà sau công cƣờng độc vi rút cúm H5N1 clade 2.3.2.1c với liệu trình tiêm mũi 58 Hình 4.8 Biểu đồ diễn biến mức độ thải vi rút nhóm gà sau cơng cƣờng độc vi rút cúm H5N6 clade 2.3.4.4b với liệu trình tiêm mũi 61 Hình 4.9 Biểu đồ diễn biến mức độ thải vi rút nhóm gà sau cơng cƣờng độc vi rút cúm H5N6 clade 2.3.4.4b với liệu trình tiêm mũi ix 62