Luận án tiến sĩ kỹ thuật nghiên cứu thu nhận và đánh giá khả năng kháng khuẩn erwinia sp gây bệnh thối nhũn trên cà chua sau thu hoạch của chitosan từ mai mực ống

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG HOÀNG NGỌC CƯƠNG Lu NGHIÊN CỨU THU NHẬN VÀ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG ận KHÁNG KHUẨN ERWINIA SP GÂY BỆNH THỐI NHŨN án TRÊN CÀ CHUA SAU THU HOẠCH CỦA CHITOSAN TỪ tiế MAI MỰC ỐNG n sĩ Kĩ t uậ th LUẬN ÁN TIẾN SĨ KỸ THUẬT KHÁNH HÒA - 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG HOÀNG NGỌC CƯƠNG Lu NGHIÊN CỨU THU NHẬN VÀ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG ận KHÁNG KHUẨN ERWINIA SP GÂY BỆNH THỐI NHŨN án TRÊN CÀ CHUA SAU THU HOẠCH CỦA CHITOSAN TỪ n tiế MAI MỰC ỐNG sĩ Kĩ t uậ th NGÀNH ĐÀO TẠO : CÔNG NGHỆ CHẾ BIẾN THỦY SẢN MÃ SỐ : 62540105 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS TRANG SĨ TRUNG PGS.TS NGUYỄN ANH TUẤN KHÁNH HÒA - 2017 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình thực Các số liệu, kết luận án trung thực chưa công bố cơng trình khác Tơi xin chịu hoàn toàn trách nhiệm lời cam đoan Nha Trang, ngày tháng Tác giả luận án Hồng Ngọc Cương ận Lu án n tiế sĩ Kĩ t uậ th i năm 2017 LỜI CẢM ƠN Luận án hồn thành nhờ có nhà trường, tổ chức có liên quan tạo điều kiện; thầy cơ, bạn bè, gia đình giúp đỡ hỗ trợ Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: PGS TS Trang Sĩ Trung PGS TS Nguyễn Anh Tuấn định hướng, dẫn động viên suốt trình học tập nghiên cứu luận án Ban giám hiệu Trường Đại học Nha Trang, Phòng, Ban, Khoa, Viện liên quan cho phép tạo điều kiện thuận lợi trình thực luận án Ban giám hiệu Trường Đại học Bình Dương, Lãnh đạo Khoa Cơng nghệ Sinh học tạo điều kiện thuận lợi q trình thực luận án TS Nguyễn Văn Hịa, Ths Nguyễn Cơng Minh tận tình hướng dẫn, động ận Lu viên khích lệ, dành nhiều thời gian trao đổi trình thực luận án TS Huỳnh Thanh Tùng, PGS.TS Ngô Đăng Nghĩa, TS Khổng Trung Thắng án giúp đỡ, chia sẻ nhiều kinh nghiệm quí báu tiế Các cán kỹ thuật Viện Công nghệ Sinh học Môi trường, Trung tâm sĩ trình tiến hành nghiên cứu n Thí nghiệm Thực hành – Trường Đại học Nha Trang giúp đỡ tạo điều kiện trọng Kĩ Cuối cùng, xin gửi lịng ân tình tới gia đình, người thân u t uậ th nguồn động viên chia sẻ khó khăn để luận án hồn thành Nha Trang, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận án Hoàng Ngọc Cương ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC HÌNH viii ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN xii PHẦN MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN Lu 1.1 TIỀM NĂNG SỬ DỤNG PHẾ LIỆU MAI MỰC ỐNG LOLIGO SP ĐỂ THU ận NHẬN -CHITIN 1.1.1 Giới thiệu nguyên liệu mực ống Loligo sp phế liệu từ mực sau chế biến án 1.1.2 Cấu trúc thành phần hóa học nguyên liệu mai mực ống Loligo sp tiế 1.2 TỔNG QUAN VỀ β-CHITIN VÀ CHITOSAN 16 n 1.2.1 Cấu trúc hóa học, nguồn gốc tự nhiên tính chất dạng chitin 16 sĩ 1.2.2 Cấu trúc hóa học tính chất chitosan 20 Kĩ 1.2.3 Phương pháp thu nhận chitin chitosan 23 t uậ th 1.2.4 Đặc tính sinh học kháng nấm, kháng khuẩn chitosan 36 1.3 GIỚI THIỆU VỀ BỆNH THỐI NHŨN TRÊN CÀ CHUA SAU THU HOẠCH 39 1.3.1 Giới thiệu chung nguồn nguyên liệu cà chua sau thu hoạch 39 1.3.2 Tổng quan bệnh thối nhũn (soft rot) gây hại cà chua sau thu hoạch 41 1.3.3 Giới thiệu chủng vi khuẩn Erwinia spp gây bệnh thối nhũn 42 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 45 2.1 VẬT LIỆU 45 2.1.1 Mai mực ống Loligo sp 45 2.1.2 Trái cà chua Lycopersicon esculetum 45 2.1.3 Hóa chất dùng nghiên cứu 46 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 46 2.2.1 Sơ đồ nghiên cứu tổng quát 46 2.2.2 Bố trí thí nghiệm xác định điều kiện thu nhận β-chitin 49 iii 2.2.3 Bố trí thí nghiệm xác định điều kiện deacetyl β-chitin thu nhận chitosan 55 2.2.4 Bố trí thí nghiệm phân lập vi khuẩn Erwinia sp gây bệnh thối nhũn 62 2.2.5 Bố trí thí nghiệm tổng quát đánh giá khả kháng khuẩn Erwinia sp gây bệnh thối nhũn trái cà chua sau thu hoạch β-chitosan điều kiện in vitro in vivo 64 2.3 PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH, XÁC ĐỊNH CÁC CHỈ TIÊU 71 2.3.1 Phương pháp xác định thành phần hóa học 71 2.3.2 Phương pháp xác định thành phần acid amin thành phần khoáng 71 2.3.3 Phương pháp xác định tính chất -chitin chitosan 71 2.3.4 Phương pháp cắt mạch chitosan 72 2.3.5 Phương pháp phân lập chủng vi khuẩn Erwinia sp gây bệnh thối nhũn 73 Lu 2.3.6 Phương pháp chuẩn bị mẫu dịch vi khuẩn Erwinia carotovora 74 ận 2.3.7 Phương pháp gây bệnh nhân tạo 75 2.3.8 Phương pháp đánh giá hiệu kháng khuẩn β-chitosan điều kiện in vitro75 án 2.3.9 Phương pháp đánh giá hiệu kháng khuẩn β-chitosan điều kiện in vivo 75 tiế 2.3.10 Phương pháp xác định tổng hàm lượng phenol tổng số trái cà chua 76 n 2.3.11 Phương pháp xử lý số liệu 76 sĩ Kĩ CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 77 3.1 THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA MAI MỰC LOLIGO SP 77 th t uậ 3.1.1 Thành phần hóa học 77 3.1.2 Thành phần khoáng 79 3.1.3 Thành phần acid amin 80 3.2 XÁC ĐỊNH ĐIỀU KIỆN THU NHẬN VÀ ĐÁNH GIÁ TÍNH CHẤT -CHITIN TỪ MAI MỰC LOLIGO SP 82 3.2.1 Đánh giá sơ ảnh hưởng nhiệt độ, nồng độ NaOH thời gian đến trình khử protein mai mực Loligo sp 82 3.2.2 Đánh giá ảnh hưởng chi tiết yếu tố nhiệt độ, thời gian nồng độ NaOH đến hiệu khử protein cắt mạch sản phẩm β-chitin 84 3.2.2.1 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hiệu khử protein khối lượng phân tử sản phẩm β-chitin 85 3.2.2.2 Ảnh hưởng thời gian đến hiệu khử protein khối lượng phân tử sản phẩm β-chitin 88 iv 3.2.2.3 Ảnh hưởng nồng độ NaOH đến hiệu khử protein khối lượng phân tử sản phẩm β-chitin 90 3.2.3 Tính chất sản phẩm β-chitin từ mai mực ống 92 3.3 ĐIỀU KIỆN DEACETYL -CHITIN VÀ TÍNH CHẤT CHITOSAN TỪ MAI MỰC LOLIGO SP 101 3.3.1 Đánh giá sơ ảnh hưởng yếu tố nhiệt độ, nồng độ NaOH thời gian đến hiệu deacetyl -chitin .101 3.3.2 Ảnh hưởng chi tiết yếu tố nhiệt độ, nồng độ NaOH thời gian đến hiệu deacetyl chitin cắt mạch chitosan 104 3.3.2.1 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hiệu deacetyl chitin cắt mạch chitosan .104 Lu 3.3.2.2 Ảnh hưởng nồng độ NaOH đến hiệu deacetyl β-chitin cắt ận mạch chitosan 107 3.3.2.3 Ảnh hưởng thời gian đến hiệu deacetyl chitin cắt mạch chitosan 108 án 3.3.3 Điều kiện deacetyl lần .110 tiế 3.3.4 Hiệu suất thu nhận tính chất sản phẩm chitosan 111 n 3.3.5 Đề xuất quy trình thu nhận chitin, chitosan từ mai mực ống Loligo sp 119 sĩ 3.4 KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN CỦA CHITOSAN 120 Kĩ 3.4.1 Nghiên cứu phân lập, khẳng định chủng Erwinia sp gây bệnh thối nhũn th trái cà chua sau thu hoạch 120 t uậ 3.4.2 Khả kháng khuẩn β-chitosan điều kiện in vitro 127 3.4.3 Khả kháng khuẩn β-chitosan điều kiện in vivo 131 3.4.4 Đề xuất quy trình bảo quản cà chua sau thu hoạch dung dịch chitosan từ mai mực Loligo sp 139 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 141 DANH MỤC CÔNG TRÌNH CƠNG BỐ CỦA TÁC GIẢ .143 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO 144 PHỤ LỤC 158 v DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt AAS Atomic absorption spectrophotometric Phương pháp phổ hấp thu nguyên tử AOAC Association of Official Analytical Chemists Hiệp hội nhà hoá phân tích thống ANOVA Analysis of Variance Phân tích phương sai -chitosan Chitosan from β-chitin Chitosan từ β-chitin χcr Degree of crystallinity Độ kết tinh C95 Tomato C95 Giống cà chua C95 CrI Crystalline Index Chỉ số kết tinh DA Lu Độ acetyl DNA Deoxyribonucleic acid Axit deoxyribonucleic DD Degree of deacetyl Độ deacetyl DP Deproteinization Quá trình khử protein DM Demineralization Q trình khử khống DC Decolorization Ecc Erwinia carotovora subsp carotovora Eca Erwinia carotovora subsp atroseptica Echr Erwinia chrysanthemi Erwinia chrysanthemi EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid Ethylenediaminetetraacetic axit FTIR Fourier Transform Infrared Quang phổ hấp thụ hồng ngoại GlcN D-glucosamine D-glucosamine GlcNAc N-acetyl glucosamine N-acetyl glucosamine MIC Minimum Inhibitory Concentration Nồng độ ức chế tối thiểu MHS Mark-Houwink-Sakurada equation Phương trình Mark-HouwinkSakurada Mw The average molecular weight Khối lượng phân tử trung bình NL/DM Material / solvent Nguyên liệu / dung môi Degree of acetyl ận án n tiế sĩ Kĩ Erwinia carotovora subsp carotovora th Erwinia carotovora subsp atroseptica t uậ vi Quá trình khử màu Not detected Không phát NMR Nuclear Magnetic Resonance Phổ cộng hưởng từ hạt nhân OD Optical density Độ hấp phụ quang học Pl Pectate lyases Enzyme phân giải pectin Pnl Pectin lyases Enzyme phân giải pectin Pme Pectin methylesterases Enzyme phân giải pectin PA Polyamide Bao nylon PG Potato glucose Môi trường potato glucose PCR Polymerase chain reaction Phương pháp khuếch đại gen PDA Potato dextrose agar Môi trường thạch khoai tây rARN Ribosomal ribonucleic ARN riboxom Scanning Electron Microscope Kính hiển vi điện tử quét ận SEM Lu Nd Phương pháp sắc ký loại trừ kết hợp với phân tán ánh sáng tĩnh đa góc án Size-exclusion chromatographySEC-MALLS Multi-angle static light scattering tiế Loài Species spp Species pluriel subsp Subspecies SPSS Statistical Package for the Social Sciences SS Sum of Squares Tổng bình phương độ lệch TEM Transmission Electron Microscope Kính hiển vi điện tử truyền qua TpHCM Ho Chi Minh City Thành phố Hồ Chí Minh TLTK References Tài liệu tham khảo VASEP Vietnam Association of Seafood Exporters and Producers Hiệp hội chế biến xuất Thuỷ sản Việt Nam VNF Viet Nam Food Công ty Cp Việt Nam Food XRD X-ray powder diffraction Phổ nhiễu xạ tia X wt.% Weight percent Phần trăm theo khối lượng n sp Nhiều loài sĩ Kĩ Phân loài t uậ th Phần mềm thống kê vii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần hóa học nguyên liệu số loại phế liệu thủy sản thông dụng để sản xuất chitin Bảng 1.2 Thành phần hóa học số mai mực Bảng 1.3 Thành phần khoáng nguyên liệu mai mực Bảng 1.4 Các dung mơi thường sử dụng để hịa tan chitosan 21 Bảng 1.5 Tính chất chitosan ảnh hưởng độ deacetyl 22 Bảng 1.6 Thành phần tính chất số loại chitosan thương mại 22 Bảng 1.7 Điều kiện khử protein trình sản xuất chitin từ nguyên liệu khác 30 Bảng 1.8 Nguồn nguyên liệu thủy sản, điều kiện xử lý loại chitin 32 Lu Bảng 1.9 Điều kiện deacetyl thu nhận chitosan từ nguồn chitin khác 34 ận Bảng 1.10 Khối lượng phân tử trung bình (Mw) chitosan điều kiện deacetyl khác 36 án Bảng 1.11 Bảng tổng hợp chủng vi khuẩn gây bệnh thối nhũn (soft rot) 43 tiế Bảng 3.1 Thành phần hóa học mai mực ống Loligo sp 77 n Bảng 3.2 Thành phần khoáng mai mực Loligo sp., loại mực khác vỏ tôm 79 sĩ Bảng 3.3 So sánh thành phần acid amin mai mực ống Loligo sp kết tham Kĩ khảo 80 th Bảng 3.4 Tính chất mai mực ống sản phẩm β-chitin 94 t uậ Bảng 3.5 Thành phần khoáng mai mực sản phẩm β-chitin 95 Bảng 3.6 Hàm lượng acid amin mai mực sản phẩm β-chitin 95 Bảng 3.7 Độ dịch chuyển hóa học proton DCl/D2O 25oC β-chitin 100 Bảng 3.8 Hiệu suất thu hồi chitin chitosan 112 Bảng 3.9 So sánh chất lượng thương mại chitosan β-chitosan 113 Bảng 3.10 Hàm lượng acid amin lại β-chitin β-chitosan 114 Bảng 3.11 Thành phần khoáng kim loại mai mực, β-chitin β-chitosan 115 Bảng 3.12 Độ dịch chuyển hóa học proton DCl/D2O 70oC β-chitosan 118 Bảng 3.13 Mẫu cà chua thu nhận từ chợ nông sản 121 Bảng 3.14 Kết đánh giá đặc tính sinh hóa sinh lý dịng vi khuẩn 123 Bảng 3.15 Khả kháng khuẩn Erwinia carotovora chitosan với khối lượng phân tử khác chitosan thương mại (C-120) 128 viii PHỤ LỤC 2.2 SỐ LIỆU ĐÁNH GIÁ ẢNH HƯỞNG CỦA YẾU TỐ NHIỆT ĐỘ ĐẾN QUÁ TRÌNH KHỬ PROTEIN Nhiet Protein lại Mw 70 1.55 1.8 1.65 8360 8550 8725 75 1.65 1.55 1.4 8675 8465 8240 80 0.5 0.8 0.7 8170 8328 8462 85 0.35 0.25 0.5 6730 6630 6830 90 0.4 0.2 0.3 5155 5040 5255 ận Lu Pro Độ lệch án Mw Độ lệch 70 1.67 0.13 8545 183 75 1.53 0.13 8460 218 80 0.67 0.15 8320 146 85 0.37 0.13 6730 100 90 0.30 0.10 n tiế Nhietdo sĩ Kĩ t uậ th Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Protein Source Type III Sum df Mean Square of Squares Corrected Model 5.063a 1.266 Intercept 12.331 12.331 Nhietdo 5.063 1.266 Error 162 10 016 Total 17.555 15 Corrected Total 5.224 14 a R Squared = 969 (Adjusted R Squared = 957) 5150 108 F Sig 78.289 762.722 78.289 000 000 000 Protein Duncan Nhietdo N Subset 90.00 3000 85.00 3667 80.00 75.00 70.00 Sig .535 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 016 a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 b Alpha = 0.05 6667 1.000 1.5333 1.6667 228 Lu ận Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Mw Source Type III Sum df Mean Square F Sig of Squares Corrected 26352060.000a 6588015.000 266.529 000 Model Intercept 830527215.000 830527215.000 33600.370 000 Nhietdo 26352060.000 6588015.000 266.529 000 Error 247178.000 10 24717.800 Total 857126453.000 15 Corrected Total 26599238.000 14 a R Squared = 991 (Adjusted R Squared = 987) Mw Duncan Nhietdo N Subset 90.00 5150.0000 85.00 6730.0000 80.00 8320.0000 75.00 8460.0000 70.00 8545.0000 Sig 1.000 1.000 125 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 24717.800 a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 b Alpha = 0.05 án n tiế sĩ Kĩ t uậ th PHỤ LỤC 2.3 SỐ LIỆU ĐÁNH GIÁ ẢNH HƯỞNG CỦA YẾU TỐ THỜI GIAN ĐẾN Q TRÌNH KHỬ PROTEIN Protein cịn lại Thoigian Mw 4.74 3.9 4.35 8530 8650 8763 1.85 1.75 8350 8180 8520 1.35 1.3 1.35 8454 8240 8020 10 1.15 0.65 0.9 7150 7010 6870 12 0.55 0.65 0.7 6060 6140 5980 14 0.65 0.45 0.5 5220 5020 5120 Mw Độ lệch 0.42 8648 117 tiế ận Lu Độ lệch 0.13 8350 170 0.15 8238 217 7010 140 6060 80 5120 100 F Sig Protein 4.33 1.87 1.33 10 0.90 0.1 12 0.63 0.08 14 0.53 0.10 án Thoigian n sĩ Kĩ t uậ th Thời gian: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Protein Source Type III Sum df Mean Square of Squares Corrected Model 30.472a 6.094 Intercept 46.048 46.048 Thoigian 30.472 6.094 Error 545 12 045 Total 77.065 18 Corrected Total 31.017 17 a R Squared = 982 (Adjusted R Squared = 975) 134.172 1013.777 134.172 000 000 000 Protein Duncan Thoigian N Subset 14.00 5333 12.00 6333 10.00 9000 8.00 1.3333 6.00 1.8667 4.00 Sig .067 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 045 Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 4.3300 1.000 ận Lu Khối lượng phân tử trung bình: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Mw Source Type III Sum df Mean Square F Sig of Squares Corrected 30447885.611a 6089577.122 290.977 000 Model Intercept 942894262.722 942894262.722 45054.079 000 Thoigian 30447885.611 6089577.122 290.977 000 Error 251136.667 12 20928.056 Total 973593285.000 18 Corrected Total 30699022.278 17 a R Squared = 992 (Adjusted R Squared = 988) Mw Duncan Thoigian N Subset 14.00 5120.0000 12.00 6060.0000 10.00 7010.0000 8.00 8238.0000 6.00 8350.0000 4.00 8647.6667 Sig 1.000 1.000 1.000 362 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 20928.056 án n tiế sĩ Kĩ t uậ th PHỤ LỤC 2.4 SỐ LIỆU ĐÁNH GIÁ ẢNH HƯỞNG CỦA YẾU TỐ NỒNG ĐỘ NAOH ĐẾN Q TRÌNH KHỬ PROTEIN Protein cịn lại NaOH Mw 3.0 2.1 2.2 2.4 9130 9305 9465 3.5 1 0.8 9110 9220 8994 4.0 0.65 0.5 0.75 8685 8405 8545 4.5 0.35 0.35 0.3 7860 8025 7935 5.0 0.2 0.25 0.25 6440 6320 6200 Lu Độ lệch Mw Độ lệch 2.23 0.15 9300 168 0.12 9108 113 0.13 8545 140 7940 83 6320 120 Protein 3.0 3.5 0.93 4.0 0.63 4.5 0.33 0.03 5.0 0.23 0.03 ận NaOH án n tiế sĩ Kĩ t uậ th Nồng độ NaOH: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Protein Source Type III Sum df Mean Square of Squares Corrected Model 7.836a 1.959 Intercept 11.441 11.441 NaOH 7.836 1.959 Error 108 10 011 Total 19.385 15 Corrected Total 7.944 14 a R Squared = 986 (Adjusted R Squared = 981) F 180.831 1056.062 180.831 Sig .000 000 000 Protein Duncan NaOH N Subset 5.00 2333 4.50 3333 4.00 6333 3.50 3.00 Sig .267 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 011 9333 2.2333 1.000 1.000 ận Lu Khối lượng phân tử trung bình: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Mw Source Type III Sum of df Mean Square F Squares Corrected 17239245.600a 4309811.400 263.849 Model Intercept 1019106821.400 1019106821.400 62390.221 NaOH 17239245.600 4309811.400 263.849 Error 163344.000 10 16334.400 Total 1036509411.000 15 Corrected Total 17402589.600 14 a R Squared = 991 (Adjusted R Squared = 987) Sig án 000 tiế n 000 000 sĩ Kĩ t uậ th Mw Duncan NaOH N Subset 6320.0000 5.00 4.50 7940.0000 4.00 8545.0000 3.50 3.00 Sig 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 16334.400 9108.0000 9300.0000 096 PHỤ LỤC 3.1 SỐ LIỆU ĐÁNH GIÁ SƠ BỘ ẢNH HƯỞNG CỦA YẾU TỐ (NHIỆT ĐỘ, NỒNG ĐỘ NAOH VÀ THỜI GIAN) ĐẾN QUÁ TRÌNH DEACETYL ận Lu Thời gian 12 18 24 30 36 42 48 54 60 66 72 Nhiệt độ 30C NaOH NaOH NaOH 40% 50% 60% 33 35 40 35 40 50 38 45 55 40 50 60 42 53 65 44 55 69 45 61 72 48 65 76 54 72 78 57 75 83 58 77 85 58 80 86 60 81 - Nhiệt độ 60C NaOH NaOH NaOH 40% 50% 60% 41 50 55 50 60 70 60 67 80 66 72 87 68 75 88.6 74 80 79 86 83 86.6 83 - Nhiệt độ 90C NaOH NaOH NaOH 40% 50% 60% 52 60 68 65 80 95 70 90 95.5 80 91.3 88 88.2 - án Giá trị trung bình 60.2 7784 60 65.7 6976 70 75.6 6824 80 90 87.9 90.1 6254 5604 DD Mw 2.6 192 1.3 182 t uậ 50 th Mw Kĩ DD Độ lệch chuẩn sĩ Nhietdo n tiế PHỤ LỤC 3.2 SỐ LIỆU ĐÁNH GIÁ ẢNH HƯỞNG CỦA YẾU TỐ NHIỆT ĐỘ ĐẾN QUÁ TRÌNH DEACETYL 1.6 288 0.4 0.6 182 328 Độ deacetyl (DD): Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: DD Source Type III Sum df Mean Square of Squares Corrected Model 2080.710a 520.177 Intercept 86518.446 86518.446 Nhietdo 2080.710 520.177 Error 24.727 10 2.473 Total 88623.882 15 Corrected Total 2105.437 14 a R Squared = 988 (Adjusted R Squared = 984) F 210.371 34989.888 210.371 Sig .000 000 000 DD Duncan Nhietdo N Subset 60.2667 50.00 60.00 65.7667 70.00 80.00 90.00 Sig 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 2.473 a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 b Alpha = 0.05 75.6667 1.000 ận Lu Khối lượng phân tử trung bình (Mw): Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: DD Source Type III Sum df Mean Square F of Squares Corrected 8002667.600a 2000666.900 33.952 Model Intercept 671123958.826 671123958.826 11389.216 Nhietdo 8002667.600 2000666.900 33.952 Error 589262.672 10 58926.267 Total 679715889.098 15 Corrected Total 8591930.272 14 a R Squared = 931 (Adjusted R Squared = 904) 87.9333 90.1000 122 Sig án tiế 000 n 000 000 sĩ Kĩ t uậ th DD Duncan Nhietdo N Subset 5604.3300 90.00 80.00 6254.3300 70.00 60.00 50.00 Sig 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 58926.267 a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 b Alpha = 0.05 6824.3300 6976.6700 460 7784.9200 1.000 PHỤ LỤC 3.3 SỐ LIỆU ĐÁNH GIÁ ẢNH HƯỞNG CỦA YẾU TỐ NỒNG ĐỘ NAOH ĐẾN QUÁ TRÌNH DEACETYL NaOH Giá trị trung bình Độ lệch chuẩn DD Mw DD Mw 30 43.3 8100 2.7 35 45.27 8100 2.1 40 59.73 7423 1.9 246 45 75.83 7211 3.6 238 50 83.57 6702 1.7 213 55 85.67 4916 1.5 294 Lu Độ deacetyl (DD): ận Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: DD án Source Type III Sum of Squares df 5 12 18 17 n tiế sĩ 1065.255 77369.978 1065.255 5.655 F Sig 188.382 13682.258 188.382 000 000 000 Kĩ a R Squared = 987 (Adjusted R Squared = 982) t uậ th 5326.277a 77369.978 5326.277 67.857 82764.113 5394.134 Corrected Model Intercept NaOH Error Total Corrected Total Mean Square DD Duncan NaOH N Subset 43.3000 45.2700 30.00 35.00 40.00 59.7300 45.00 50.00 55.00 Sig .330 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 5.655 75.8300 1.000 83.5700 85.6700 301 Khối lượng phân tử trung bình (Mw): Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Mw Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig Corrected Model 21123039.072a 101.304 000 Intercept 901100161.214 901100161.214 21607.913 000 21123039.072 4224607.814 000 Error 500427.877 12 41702.323 Total 922723628.164 18 21623466.949 17 NaOH Corrected Total 4224607.814 101.304 ận Lu a R Squared = 977 (Adjusted R Squared = 967) án NaOH tiế Duncan Mw N 45.00 40.00 30.00 35.00 Sig 6702.3300 7211.0000 7423.0000 8100.0000 8100.0000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 41702.323 a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 b Alpha = 0.05 t uậ th 50.00 4916.0000 Kĩ sĩ 55.00 n Subset 228 1.000 PHỤ LỤC 3.4 SỐ LIỆU ĐÁNH GIÁ ẢNH HƯỞNG CỦA YẾU TỐ THỜI GIAN ĐẾN QUÁ TRÌNH DEACETYL Thời gian 12 16 20 24 Giá trị trung bình DD 62.9 84.0 87.1 88.1 89.1 89.5 Độ lệch chuẩn Mw 7753 7567 7081 6512 5669 4963 DD 2.37 0.79 1.15 1.39 1.46 1.92 Mw 184 187 136 167 56 101 Độ deacetyl (DD): Tests of Between-Subjects Effects 1574.528a 125365.266 1574.528 30.627 126970.422 1605.155 df án Mean Square 5 12 18 17 n tiế F 314.906 125365.266 314.906 2.552 Sig 123.383 49119.188 123.383 000 000 000 sĩ Kĩ Corrected Model Intercept Thoigian Error Total Corrected Total Type III Sum of Squares ận Source Lu Dependent Variable: DD DD Duncan Thoigian t uậ th a R Squared = 981 (Adjusted R Squared = 973) N 62.9300 4.00 8.00 12.00 16.00 20.00 24.00 Sig 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 2.552 a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 b Alpha = 0.05 Subset 84.0000 1.000 87.1000 88.1000 89.1000 89.5000 113 Khối lượng phân tử trung bình (Mw): Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Mw Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig Corrected Model 18151139.516a 168.102 000 Intercept 781955712.771 781955712.771 36209.328 000 Thoigian 18151139.516 3630227.903 000 Error 259145.062 12 21595.422 Total 800365997.349 18 18410284.577 17 ận Lu Corrected Total 3630227.903 168.102 a R Squared = 986 (Adjusted R Squared = 980) án Duncan tiế Thoigian Mw N sĩ 24.00 20.00 16.00 12.00 8.00 7567.3300 4.00 7753.3300 5669.3300 th 6512.3300 t uậ Sig Kĩ 4963.0000 n Subset 7081.0000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 21595.422 a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 b Alpha = 0.05 1.000 147 PHỤ LỤC 3.5 SỐ LIỆU DEACETYL LẦN Thời gian Giá trị trung bình Độ lệch chuẩn Mw DD Mw 72.9 7753 1.3 184 84.0 7567 0.3 187 12 87.1 7081 0.9 36 16 88.1 6512 1.3 167 20 89.0 5669 0.5 56 89.5 4963 0.9 101 ận 24 Lu DD án SỐ LIỆU DEACETYL LẦN Giá trị trung bình DD Mw 91.3 6831 1.0 36 92.7 5589 1.1 167 12 94 4745 1.3 56 16 94.2 3521 1.4 187 t uậ th Mw Kĩ DD Độ lệch chuẩn sĩ gian n tiế Thời PHỤ LỤC 3.6 KẾT QUẢ KHÁNG KHUẨN TRONG ĐIỀU KIỆN IN VIVO b a Vết bệnh bên bên trái cà chua thời điểm 36 xử lý với dung dịch chitosan S-138 có trọng lượng phân tử 138 kDa nồng độ 0,6% ận Lu 0% 0% NC NC án 1.5% 0.6% 1% sĩ 1% n tiế 0.6% 1.5% Kĩ t uậ th Kích thước vết bệnh bên kích thước vết bệnh bên ngồi thời điểm 72 sau chủng bệnh xử lý với dung dịch chitosan S-138 nồng độ (0; 0,6; 1; 1,5%) ĐC N M ĐC N M Kích thước vết bệnh bên ngồi kích thước vết bên trái cà chua thời điểm 36 sau chủng bệnh xử lý với chitosan 1,5%, chitosan thương mại (M), chitosan S-138 (N), trái không xử lý dung dịch chitosan (ĐC) PHỤ LỤC 3.7 ĐẶC TÍNH SINH HÓA, SINH LÝ CỦA ERWINIA SPP ận Lu án n tiế sĩ Kĩ t uậ th Theo Janse 2005, chương 2, trang 48