TỔNG QUAN
Lịch sử phát hiện
Trong thời kỳ kháng chiến chống Mỹ, Sâm Việt Nam, được biết đến với tên gọi “Củ ngãi rợm con” của người Xê Đăng, chỉ được các già làng sử dụng để chữa trị bệnh nặng và tăng cường sức lực khi vào rừng Năm 1973, đoàn điều tra Dược liệu Ban Dân y Khu 5 do DS Đào Kim Long dẫn đầu đã phát hiện ra loài Panax và một vùng sâm rộng lớn tại núi Ngọc Linh, huyện Đắc Tô, tỉnh Kon Tum Sau đó, Ban Dân y đã được giao nhiệm vụ bảo vệ và khai thác bí mật, phối hợp với xưởng Dược Trung Trung Bộ để chế biến thành thuốc, đồng thời gửi mẫu cho Bộ Y tế và Viện Dược liệu Hà Nội nghiên cứu Sau khi thống nhất đất nước, Sâm Việt Nam đã được Trung tâm Sâm Việt Nam (nay là Trung tâm Sâm và Dược liệu Tp HCM - Viện Dược liệu) nghiên cứu hệ thống trong đề tài cấp Bộ và nằm trong chương trình nghiên cứu trọng điểm “Tạo nguồn nguyên liệu làm thuốc” 64C của Nhà nước.
Sâm Việt Nam đã được nghiên cứu sâu rộng trong các lĩnh vực thực vật học, hóa học, dược lý, trồng trọt, nuôi cấy mô và chế phẩm, nhờ vào sự hợp tác với các viện, trường trong và ngoài nước Những công trình nghiên cứu này đã làm rõ hơn về thành phần hoạt chất và tác dụng của chúng.
Hình 1.1 Cây Sâm Việt Nam ngoài tự nhiên [39]
Phân loại
Họ: Ngũ gia bì (Araliaceae)
Loài: Panax vietnamensis Ha et Grushv
Hình 1.2 Hình thái cây Sâm Việt Nam [39]
Sâm Việt Nam, còn được biết đến với các tên gọi như sâm Ngọc Linh, sâm Khu Năm (sâm K5), và sâm trúc, là một loại thảo dược quý hiếm Ngoài ra, nó còn được gọi là củ rọm con, rơm con (theo ngôn ngữ của người Xê Đăng) và thuốc giấu trong văn hóa dân tộc Tây Nguyên Tên quốc tế của loại sâm này là Vietnamese ginseng.
Danh pháp khoa học
Năm 1973, Dược sĩ Đào Kim Long đã nghiên cứu cây Sâm Việt Nam, nêu rõ các đặc điểm hình thái, sinh thái học, quần thể, thảm thực vật, khả năng thích nghi, cách phát tán và khả năng tái sinh của cây Ông đã cung cấp các mẫu cây ép khô, ảnh chụp và 3 kg sâm đã phơi khô Tên khoa học của cây Sâm Việt Nam được Dược sĩ Đào Kim Long đặt là Panax articulatus KL Dao hay Panax articulatus Kim.
Long Đào theo tên người phát hiện
Năm 1985, Hà Thị Dung và I V Grushvisky đã phát hiện và đặt tên cho loài cây Nhân sâm Việt Nam với tên khoa học là Panax vietnamensis Ha et Grushv., thuộc họ Ngũ gia bì - Araliaceae Sự công bố này được thực hiện tại Viện Thực vật Kamarov, thuộc Liên Xô cũ.
Vào năm 1994, bộ Quy tắc quốc tế về danh pháp thực vật (ICBN - Tokyo code) được ban hành, quy định rằng tên khoa học hợp pháp của cây Sâm Việt Nam hiện nay là Panax articulatus KL Dao (1973) ex Ha et Grushv (1985) theo điều 1, mục 3 phần C của bộ quy tắc.
Đặc điểm hình thái
Sâm Việt Nam là một loài cây thân thảo, sống lâu năm, cao 40 – 100 cm
Thân rễ của cây có đường kính từ 1 đến 3,5 cm, mọc bò ngang giống như củ gừng, dài từ 30 đến 100 cm và có nhiều đốt không phân nhánh Bề mặt thân rễ có màu nâu nhạt, ruột trắng ngà, với phần cuối đôi khi có củ gần hình cầu có đường kính lên đến 5 cm Dựa vào các vết sẹo do thân khí sinh lụi hàng năm, người ta có thể xác định tuổi của cây Thân khí sinh mảnh, cao từ 40 đến 80 cm, mọc thẳng đứng, nhẵn và rỗng, có 3 mặt hơi tròn với các rãnh nhỏ dọc theo chiều dài.
Hình 1.3 Thân rễ của cây Sâm Việt Nam [40]
Trên đỉnh thân khí sinh, lá kép hình chân vịt thường có từ 2 đến 4 lá kép mọc vòng, hiếm khi có 3, 5 hoặc 6 lá Mỗi lá kép ở ngọn gồm 5 lá chét, đôi khi có 6 hoặc 7, với chiều dài từ 7 đến 14 cm Lá chét trên cùng có hình trứng ngược hoặc hình mũi mác, dài từ 8 đến 14 cm và rộng từ 3 đến 5 cm Đầu lá thường nhọn đột ngột, với mũi nhọn dài từ 1,5 đến 2 cm, góc lá hình nêm và mép lá có răng cưa nhỏ đều Lá chét có 19 cặp gân bên (thỉnh thoảng là 8 đến 11), và mặt trên của lá chét có nhiều lông cứng dạng gai dài đến 3 mm, trong khi mặt dưới ít hơn.
Hình 1.4 Lá của cây Sâm Việt Nam [40]
Cụm hoa có chiều dài 25 cm, gấp 1,5 - 2 lần chiều dài cuống lá, thường xuất hiện với tán đơn độc ở đầu cuống, đôi khi kèm theo 1 - 4 tán phụ hoặc hoa đơn lẻ Cuống hoa dài từ 1,5 cm trở lên.
Cây có chiều cao khoảng 2 cm và nhiều lông, với tán hoa chính có đường kính từ 2,5 đến 4 cm, chứa từ 50 đến 120 hoa Hoa có màu vàng lục nhạt, đường kính khi nở từ 3 đến 4 mm; đài hoa có 5 răng hình tam giác, dài từ 1 đến 1,5 cm.
5 cánh hoa hình trứng dài 2 mm; bao phấn hình trái xoan dài 1mm và có 5 nhị Bầu chủ yếu 1 ô, 1 vòi, đôi khi có 2 ô, 2 vòi [6]
Hình 1.5 Hoa của cây Sâm Việt Nam [40]
Quả mọng có hình dạng trứng và khi chín sẽ có màu đỏ, thường xuất hiện một chấm đen ở đỉnh Quả có thể có hình thận với một hạt hoặc hình cầu dẹt với hai hạt Vỏ hạt được cấu tạo bởi nhiều vết xốp lồi lõm.
Hình 1.6 Quả của cây Sâm Việt Nam [40]
Sinh thái và phân bố
Sâm Việt Nam, thuộc chi Nhân sâm (Panax L), được phát hiện vào năm 1973 trong số hơn 10 loài và dưới loài đã biết Đến năm 1985, loài này mới chính thức được công nhận là một loài mới.
Sâm mọc tự nhiên tập trung dưới chân núi Ngọc Linh, nơi có lớp đất đá granit vàng đỏ với độ mùn cao và tơi xốp Các khu vực này thường nằm ở độ cao từ 1500 đến 2200 m, chủ yếu ở khoảng 1800 đến 2000 m, thuộc hai huyện Đắk Tô (tỉnh Kon Tum) và Trà My (tỉnh Quảng Nam).
Sâm Việt Nam hiện nay có sự phân bố đa dạng, được ghi nhận tại nhiều địa điểm mới như núi Ngọc Lum Heo và đỉnh núi Ngọc Am ở Quảng Nam, Đắc Glei ở Kon Tum, cùng với núi Langbian ở Lâm Đồng.
Sâm Việt Nam phát triển ở độ cao từ 1200 đến 2200 m so với mực nước biển, ưa ẩm và bóng râm, thường mọc rải rác hoặc thành từng cụm nhỏ dưới tán cây lớn, đặc biệt dọc theo ven suối ở độ cao từ 1900 m Với khí hậu ẩm ướt, đất mùn tơi xốp và nhiệt độ trung bình từ 15⁰C đến 18⁰C, Sâm Việt Nam sinh trưởng mạnh mẽ từ mùa xuân đến hè nhờ vào điều kiện tự nhiên lý tưởng của vùng núi Ngọc Linh với lượng mưa khoảng 3000 mm/năm.
Tháng 4 – 5 cây ra hoa, tháng 6 - 9 ra quả tương đối đều [3] Quả chín rụng xuống đất, tồn tại qua mùa đông và nảy mầm vào mùa xuân năm sau Gieo giống tự nhiên bằng hạt Phần thân rễ bị gãy còn lại vẫn có thể tái sinh Cây thường lụi hàng năm vào mùa đông, đến đầu mùa xuân năm sau từ thân rễ sẽ mọc lên chồi thân mới [5].
Thành phần hóa học
1.6.1 Từ phần dưới mặt đất của cây Sâm Việt Nam
Cây Sâm Việt Nam, giống như các loài sâm khác trên thế giới, chủ yếu chứa các hợp chất saponin, được chiết xuất từ rễ và thân rễ Đến nay, các nhà khoa học đã phân lập và xác định cấu trúc protopanaxadiol oxid II cùng với 52 hợp chất saponin, trong đó có 26 saponin đã biết và 26 saponin mới được đặt tên là vina-ginsenoside-R1-R25 và 20-O-Me-G.Rh1.
Saponin dammaran là hoạt chất chủ yếu mang lại nhiều tác dụng sinh học quý giá, với hàm lượng chiếm từ 12 đến 15% và có tới 49 loại khác nhau trong thành phần saponin của Sâm Việt Nam.
Trong đó các saponin dẫn chất của 20(S)-protopanaxadiol gồm 22 hợp chất với các đại diện chính là: ginsenoside-Rb1, -Rb3, -Rd chiếm hàm lượng lần lượt là 2%, 0,11% và 0,87% [5]
Bảng 1.1 Các saponin dẫn chất của 20(S)-protopanaxadiol ở phần dưới mặt đất [5]
STT Tên Kiểu R1 R2 Hàm lượng (%)
1 G-Rb1* (A) -Glc 2 -Glc -Glc 6 -Glc 2,0
2 G-Rb2 (A) -Glc 2 -Glc -Glc 6 -Ara(p) 0,012
3 G-Rb3* (A) -Glc 2 -Glc -Glc 6 -Xyl 0,11
4 G-Rc (A) -Glc 2 -Glc -Glc 6 -Ara(f) 0,013
6 PG-RC1 (A) -Glc 2 -Glc 6 -Ac -Glc 0,001
7 GY-IX (A) -Glc -Glc 6 -Xyl 0,002
8 GY-XVII (A) -Glc -Glc 6 -Glc 0,036
9 Q-R1 (A) -Glc 2 -Glc 6 -Ac -Glc 6 -Glc 0,012
10 Q-R1 (A) -Glc 2 -Glc 2 -Xyl -Glc 6 -Glc 0,072
13 VG-R7 (A) -Glc 2 -Glc 2 -Xyl -Glc 0,01
Ghi chú: *: các saponin chính trong thành phần saponin dẫn chất protopanaxadiol G ginsenoside; PG = pseudo-ginsenoside; GY = gypenoside; Q = quinquenoside; N notoginsenoside; M = majonoside; VG = vina-ginsenoside
Hình 1.7 Cấ u trú c hóa ho ̣c chung của các saponin dẫn chất của 20(S)-protopanaxadiol
Các saponin dẫn chất của 20(S)-protopanaxatriol gồm 17 hợp chất với các đại diện chính là: ginsenoside-Re, -Rg1, notoginsenoside –R1 chiếm hàm lượng lần lượt là 0,17%; 1,37% và 0,36% [5]
Bảng 1.2 Các saponin dẫn chất của 20(S)-protopanaxatriol ở phần dưới mặt đất [5]
STT Tên Kiểu R1 R2 R3 Hàm lượng
Ghi chú: *: các saponin chính trong thành phần saponin dẫn chất protopanaxatriol Glc: β-D-glucopyranosyl; α-Glc: α-glucopyranosyl; GlcA: β-D-glucoronopyranosyl; Rha: α-
L-rhamnopyranosyl; Xyl: β-D-xylopyranosyl; Ara: α-arabinopyranosyl; Ara(f): α-L- arabinofuranosyl; Ara(p): α-L-arabinopyranosyl; Ac: acetyl
Hình 1.8 Cấ u trú c hóa ho ̣c chung của các saponin dẫn chất của 20(S)-protopanaxatriol
Saponin có cấu trúc ocotillol bao gồm 11 hợp chất, trong đó majonoside –R1 và –R2 là hai đại diện chính với hàm lượng lần lượt là 0,14% và 5,29% Đặc biệt, M-R2 chiếm gần 50% tổng hàm lượng saponin từ phần dưới mặt đất của Sâm Việt Nam, trở thành hợp chất chủ yếu so với các loại saponin trong các loài sâm khác trên thế giới, và có hiệu suất chiết xuất gấp 48 lần so với Đại diệp tam thất.
Bảng 1.3 Các saponin có cấu trúc ocotillol ở phần dưới mặt đất [5]
STT Tên Kiểu R1 R2 Hàm lượng (%)
44 VG-R1 (M) -Glc 2 -Rha-6Ac -CH3 0,033
45 VG-R2 (M) -Glc 2 -Xyl-6Ac -CH3 0,014
46 VG-R5 (M) -Glc 2 -Xyl4-αGlc -CH3 0,008
47 VG-R6 (M) -Glc 2 -Xyl-6Ac -CH3 0,006
48 VG-R14 (M) -Glc 2 -Xyl -CH2OH 0,02
Ghi chú: *: Các saponin chính trong thành phần saponin có cấu trúc ocotillol
Hình 1.9 Cấ u trú c hóa ho ̣c chung của các saponin cấu trúc ocotillol
Saponin dẫn chất của acid oleanolic chỉ chiếm tỷ lệ rất thấp với hemsloside – Ma3, được phát hiện đầu tiên trong một loài Panax thuộc họ Nhân sâm Hợp chất này đã được phân lập trước đó từ Hemsleya macrosperma C.Y.Wu thuộc họ Bầu bí.
Bảng 1.4 Hai saponin dẫn chất của acid oleanolic ở phần dưới mặt đất [5]
STT Tên Kiểu R1 R2 Hàm lượng (%)
52 H-Ma3 (P) -Glc 2 -Glc-3Ara(p) -Glc 0,05
Hình 1.10 Cấ u trú c hóa ho ̣c chung của các saponin dẫn chất của acid oleanolic
Sự khác biệt về thành phần và hàm lượng hợp chất saponin trong Sâm Việt Nam đã xác định giá trị và công dụng của loại sâm này trong trị liệu so với các loại sâm khác trên thế giới Đặc biệt, sự hiện diện của lượng lớn saponin dammaran dạng ocotillol là yếu tố quyết định sự khác biệt này.
Bảng 1.5: Hàm lượng saponin ở phần dưới mặt đất của Sâm Viê ̣t Nam và các loại Panax spp khác [6,20,21]
Loại aglycon Panax ginseng Panax notoginseng
Ghi chú: 20(S)-ppd: 20(S)-protopanaxadiol; 20(S)-ppt: 20(S)-protopanaxatriol
Hợp chất polyacetylen đã được nghiên cứu, trong đó có 7 hợp chất được phân lập và 5 hợp chất đã xác định cấu trúc Hai polyacetylen chính là panaxynol và heptadeca-1,8(E)-dien-4,6-diyn-3,10-diol Ngoài ra, hai hợp chất mới được phát hiện là 10-acetoxy-heptadeca-8(E)-en-4,6-diyn-3-ol và heptadeca-1,8(E),10(E)-trien-4,6-diyn-3,10-diol.
Acid béo: 17 acid béo chứa từ 8 – 20 cacbon, acid linoleic chiếm tỷ lệ lớn nhất là 40,04%, tiếp theo là acid palmitic (29,62%), acid oleic (13,26%),… [6]
Có tổng cộng 18 loại acid amin đã được xác định, trong đó bao gồm các acid amin thiết yếu cho cơ thể Một số acid amin có tỷ lệ cao đáng chú ý như arginin (46,66%), lysin (17,90%) và tryptophan (10,20%).
Nguyên tố vi lượng, đa lượng: tổng cộng 20 nguyên tố vi lượng và đa lượng đã được tìm thấy như K, Na, Mg, Mn, Cu, Fe, Co, Zn, Se… [22]
Hợp chất sterol: β–sitosterol và daucosterin (β–sitosteryl–3–O-β–D- glucopyranosid) [5]
Hợp chất gluxit: đường tự do (6,19%) và đường toàn phần (26,77%) [5]
1.6.2 Từ phần trên mặt đất của cây Sâm Việt Nam
Đến nay, nghiên cứu về thành phần hóa học từ phần trên mặt đất, đặc biệt là lá của Sâm Việt Nam, vẫn còn hạn chế và thiếu tính hệ thống Các kết quả nghiên cứu hiện có chưa thống nhất và có sự khác biệt đáng kể.
19 saponin damaran đã được phân lập từ phần trên mặt đất của cây, gồm 11 saponin đã biết và 8 saponin cấu trúc mới được đặt tên là vinaginsenosid-L1-L8 [5,10]
The article discusses the saponin derivatives of 20(S)-protopanaxadiol, which include 13 compounds The main representatives are notoginsenoside-Fe, notoginsenoside-Fc, and ginsenoside-Rb3, with respective contents of 0.134%, 0.314%, and 0.168%.
Bảng 1.6 Các saponin dẫn chất của 20(S)-protopanaxadiol ở phần trên mặt đất [5,10]
STT Tên Kiểu R1 R2 Hàm lượng (%)
4 GY-IX (A) -Glc -Glc 6 -Xyl 0,088
5 G-Rb3* (A) -Glc 2 -Glc -Glc 6 -Xyl 0,168
7 VG-L2 (A) -Glc 2 -Glc 2 -Xyl -Glc 6 -Ara(f) 0,110
8 N-Fc* (A) -Glc 2 -Glc 2 -Xyl -Glc 6 -Xyl 0,314
9 VG-L3 (B) -Glc 2 -Glc -Glc 6 -Xyl 0,002
10 VG-L4 (B) -Glc 2 -Glc 2 -Xyl -Glc 6 -Xyl 0,001
13 VG-L7 (C)24(R) -Glc 2 -Glc -Glc 6 -Xyl 0,001
Ghi chú: *: các saponin chính trong thành phần saponin dẫn chất của protopanaxadiol
Có 3 saponin là dẫn chất của protopanaxatriol đã được phân lập bao gồm: pseudo- ginsenoside-RS1, ginsenoside-Re và ginsenoside-Rg1 [5,10]
Bảng 1.7 Các saponin dẫn chất của 20(S)-protopanaxatriol ở phần trên mặt đất [5,10]
STT Tên Kiểu R1 R2 R3 Hàm lượng (%)
14 PG-RS1 (D) -H -Glc 2 -Rha-6Ac -Glc 0,013
Các saponin có cấu trúc ocotillol gồm có 3 hợp chất với đại diện chính là vina- ginsenoside-R1 chiếm hàm lượng 0,155% [5,10]
Bảng 1.8 Các saponin có cấu trúc ocotillol ở phần trên mặt đất [5,10]
STT Tên Kiểu R Hàm lượng (%)
Ghi chú: *: saponin chính trong thành phần saponin có cấu trúc ocotillol
Từ phần trên mặt đất của cây Sâm Việt Nam đã phân lập được thêm 4 nguyên tố vi lượng bao gồm Pb, Cu, Zn, Sn [5,10]
Bảng 1.9 Các nguyên tố vi lượng ở phần trên mặt đất [5,10]
STT Nguyên tố vi lượng Hàm lượng (ppm)
Bằng việc áp dụng kỹ thuật sắc ký cột kết hợp với sắc ký lớp mỏng điều chế, nghiên cứu đã phân lập thành công 6 hợp chất từ cao n-hexane và cao methanol của lá Sâm Việt Nam Các hợp chất được xác định bao gồm squalene và α-tocopherolquinone.
16 tetradecanol (26), docosanol (27), daucosterol (28), kaempferol (29) Cả 6 hợp chất lần đầu tiên được biết đến với sự hiện diện trong lá Sâm Viê ̣t Nam [11]
Hình 1.11 Cấu trúc hóa học 6 hợp chất được phân lập từ lá Sâm Việt Nam [11]
Nghiên cứu của Lê Hoàng Khang và cộng sự đã phân lập 5 hợp chất từ dịch chiết metanol của lá Sâm Việt Nam, trong đó có một sesquiterpene lacton mới mang tên panaxolide và bốn hợp chất đã được biết đến trước đó, bao gồm junipediol A, daucosterol, và kaempferol 3-.
O-β-D-Glycosyl(12)-β-D-galactoside, ginsenoside R10 Các hợp chất này dã được đánh giá hoạt tính sinh học
Hình 1.12 Cấu trúc hóa học của panaxolide được phân lập từ lá Sâm Việt Nam [19]
Công dụng
Sâm Việt Nam là một loại thảo dược quý, có tác dụng bổ sung cho 5 tạng (tâm, can, tỳ, phế, thận), giúp tăng cường tinh thần, định hồn phách, giảm lo âu, trừ tà khí, cải thiện thị lực và tăng cường sức khỏe tổng thể Sâm thường được kết hợp với các loại thuốc bổ khí hoặc bổ huyết khác để phát huy hiệu quả tối ưu Thân rễ và rễ củ của Sâm Việt Nam được sử dụng như một loại thuốc bổ toàn thân, giúp tăng cường sức lực, chữa suy nhược, mệt mỏi, chống xơ vữa động mạch, giải độc và bảo vệ gan.
18 nó còn được dùng làm thuốc trị viêm họng và hen phế quản mãn tính, điều hòa thần kinh trung ương, điều hòa tim mạch, giảm đường huyết [4,5]
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Đối tượng nghiên cúu
Mẫu nghiên cứu sử dụng lá Sâm Việt Nam (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) được thu hái từ núi Ngọc Linh, tỉnh Kon Tum vào tháng 5 năm 2021 Mẫu này đã được giám định bởi TS Phạm Hà Thanh Tùng, chuyên gia thực vật học thuộc Bộ môn Dược liệu - Dược học cổ truyền, Khoa Dược, Trường Đại học Phenikaa Hiện tại, mẫu tiêu bản của nghiên cứu được lưu giữ tại Khoa Dược của trường.
Hóa chất và trang thiết bị
Mẫu chấ t chuẩn được sử du ̣ng trong nghiên cứu là ginsenoside Rd 1,5mg/ml có độ tinh khiết không thấp hơn 95% theo HPLC
Các dung môi được sử dụng để chiết xuất cao và phân lập các hợp chất bao gồm ethanol (EtOH), ethyl acetat (EtOAc), chloroform (CHCl3), methanol (MeOH), acid acetic (CH3COOH), n-butanol (n-BuOH) và nước cất, tất cả đều đạt tiêu chuẩn tinh khiết (PA).
Sắc ký lớp mỏng được thực hiện trên bản mỏng tráng sẵn bằng đế nhôm loại Kieselgel 60 F254 (Merck, Damstadt, Đức) Phương pháp phát hiện chất sử dụng đèn tử ngoại với bước sóng thích hợp.
254 nm và 365 nm hoặc dùng thuốc thử là dung dịch H2SO4 10% hơ nóng
- Dụng cụ: bình nón, cốc có mỏ, phễu lọc, ống đong, ống nghiệm, pipet chính xác, bình định mức
- Tủ sấy Memmert (Memmert – Đức), tủ hút
- Máy siêu âm Elmasonic S (Đức)
- Máy cất quay Rotavapor R-100 (BUCHI, Thụy Sĩ)
- Cân phân tích Precisa 262SMA-FR (sai số 0,0001g, Precisa-Thụy Sĩ)
- Màng lọc Cellulose Acetate 0,45 àm
Hình 2.2 Hệ thống máy cất quay Rotavapor R-100 (BUCHI, Thụy Sĩ)
Phương pháp nghiên cứu
2.3.1 Phương pháp xử lý và chiết mẫu
Sâm Việt Nam chứa saponin là thành phần chính, và việc tham khảo tài liệu về chiết xuất saponin trong dược liệu là cần thiết để xác định phương pháp chiết xuất tối ưu cho mẫu nghiên cứu.
- Mẫu dược liê ̣u lá Sâm Viê ̣t Nam được rửa sa ̣ch, sấy khô và xay nhỏ thành bô ̣t dược liê ̣u chuẩn bi ̣ cho nghiên cứu
- Chiết hoạt chất từ dược liệu bằng ethanol theo phương pháp chiết siêu âm ở
45 o C Cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm Phân đoạn dịch chiết bằng các dung môi
Trong nghiên cứu công nghiệp, CH2Cl2 và BuOH được sử dụng để phân lập các chất thông qua sắc ký cột với chất hấp phụ silica gel pha thường và pha đảo Để theo dõi các vết chất từ các phân đoạn, sắc ký lớp mỏng là phương pháp hữu ích.
2.3.2 Phương pháp phân lập, tinh chế
2.3.2.1 Phương pháp phân tích bằng kỹ thuật sắc ký cột (CC)
Mỗi chất riêng biệt có ái lực khác nhau trong hệ thống hai pha (pha động và pha tĩnh), dẫn đến tương tác mạnh hoặc yếu với pha tĩnh, từ đó ảnh hưởng đến vận tốc di chuyển của chúng qua pha tĩnh Nếu pha tĩnh có tính phân cực cao, các hợp chất phân cực mạnh sẽ bị giữ lại lâu hơn so với các hợp chất kém phân cực, khiến cho các hợp chất kém phân cực di chuyển nhanh hơn và thoát khỏi cột sớm hơn Ngược lại, trong trường hợp pha tĩnh kém phân cực, các chất phân cực sẽ ra khỏi cột trước các chất kém phân cực Do đó, có thể tách một hỗn hợp gồm nhiều loại hợp chất thành những đơn chất riêng lẻ.
Bả ng 2.1 So sánh sắ c ký cô ̣t pha thường và pha đảo
Sắc ky ́ cột pha thường Sắc ky ́ cột pha đảo
Pha ti ̃nh Chủ yếu là silica tinh khiết (phân cực)
Silica biến tính với chuỗi dài ky ̣ nước (kém phân cực)
Pha động Dung môi ít phân cực hơn pha tĩnh: hexan, isopropyl ether,…
Dung môi phân cực hơn pha tĩnh: nước, acetonitril,…
Các thông số quan tro ̣ng trong sắ c ký cô ̣t bao gồm:
- Tỷ lê ̣ đường kính cô ̣t (D) so với chiều cao cô ̣t (L) thể hiê ̣n khả năng tách của cột
Tỷ lệ giữa quãng đường đi của chất cần tách so với quãng đường đi của dung môi, được gọi là Rf, là một chỉ số quan trọng trong sắc ký Mỗi chất sẽ có một giá trị Rf khác nhau, giúp phân biệt các hợp chất trong quá trình phân tích Việc xác định Rf cho phép các nhà nghiên cứu đánh giá hiệu quả của phương pháp tách chiết và nhận diện chất một cách chính xác.
Trong quá trình thực hiện sắc ký cột, việc đưa chất hấp phụ lên cột sắc ký là rất quan trọng Có hai dạng nạp chất lên cột sắc ký: nạp dạng khô và nạp dạng ướt Quá trình nạp chất có thể được mô tả ngắn gọn như sau:
Để nạp chất hấp phụ dạng khô vào cột sắc ký, trước tiên, bạn cần đưa chất hấp phụ vào cột khi còn khô Sau đó, sử dụng que mềm gõ nhẹ lên thành cột để chất hấp phụ được xếp chặt thành cột Cuối cùng, sử dụng dung môi chạy cột để tiến hành chạy cho đến khi chất hấp phụ có dạng đồng nhất.
Để nạp chất hấp phụ dạng sệt vào cột sắc ký, chất hấp phụ cần được xử lý trong một lượng dung môi chạy cột tối thiểu trước khi nạp vào cột Sau đó, chất hấp phụ đã xử lý được nạp vào cột thông qua một phễu lọc có đuôi dài, mở nhẹ khóa dưới cột để dung môi chảy ra Phần dung môi chảy ra sẽ được rót ngược trở lại cột một vài lần để chất hấp phụ sắp xếp chặt chẽ trong cột.
Hình 2.3 Minh họa cô ̣t sắ c ký
Nghiên cứu này tiến hành sắc ký cột với pha tĩnh là silica gel pha thường (cỡ hạt 63-200 μm) và silica gel pha đảo (cỡ hạt 40-63 μm), trong khi pha động sử dụng chất lỏng.
2.3.2.2 Phương pháp phân tích bằng kỹ thuật sắc ký lớp mỏng (TLC)
Sắc ký lớp mỏng là một phương pháp quan trọng để tách các hợp chất trong một hỗn hợp thành từng loại đơn chất riêng lẻ Phương pháp này dựa vào tính ái lực khác nhau của các hợp chất đối với hệ thống pha động và pha tĩnh.
Để nhận biết chất cần phân tích, có thể sử dụng ánh sáng thường nếu các chất này có màu Tuy nhiên, hầu hết các hợp chất hữu cơ yêu cầu áp dụng phương pháp vật lý hoặc hóa học để quan sát Phương pháp vật lý sử dụng soi huỳnh quang ở bước sóng 254 nm và 365 nm, trong khi phương pháp hóa học áp dụng thuốc thử để hiện màu hoặc quét lên bề mặt bản mỏng của thiết bị densitometer, thiết bị này đo cường độ phản xạ ánh sáng tử ngoại hoặc khả kiến của chất Việc lựa chọn phương pháp phụ thuộc vào bản chất của chất phân tích.
Sắ c ký lớp mỏng được đă ̣c trưng bởi mô ̣t số đa ̣i lượng, bao gồm:
Hệ số lưu giữ Rf là một đại lượng quan trọng thể hiện mức độ dịch chuyển của các chất phân tích trong quá trình sắc ký Giá trị của Rf được xác định bằng tỷ lệ giữa khoảng cách dịch chuyển của chất phân tích và khoảng cách dịch chuyển của pha động.
Khoảng cách từ điểm xuất phát đến tâm vết phân tích được ký hiệu là d R (cm), trong khi khoảng cách từ điểm xuất phát đến mức dung môi pha động được ký hiệu là d M (cm) Cả hai khoảng cách này đều được đo trên cùng một đường đi của vết.
R f có giá trị dao động giữa 0 và 1
+ Hệ số lưu giữ tương đối R r :
Trong đó: d R,x là đường đi của chất phân tích (cm) d R,C là đường đi của chất chuẩn (cm)
(giá trị R r càng gần 1 thì chất phân tích và chất chuẩn càng đồng nhất)
Trong nghiên cứ u này, sắ c ký lớp mỏng được tiến hành trên bản mỏng Silicagel
Để khảo sát điều kiện phòng thí nghiệm cho hệ dung môi F254 (Merk), dung môi được chọn là CHCl3-MeOH-H2O với tỉ lệ 65:35:10 Phát hiện chất có thể thực hiện bằng đèn tử ngoại ở bước sóng 254 nm và 365 nm, hoặc sử dụng dung dịch H2SO4 10% phun đều lên bản mỏng, sau đó sấy khô và hơ nóng trên bếp điện từ cho đến khi xuất hiện màu Cuối cùng, quan sát vết xuất hiện dưới ánh sáng thường.
2.3.3 Phương pháp xác định cấu trúc bằng phân tích khối phổ (MS)
Khối phổ là phương pháp xác định khối lượng (m/z) và số lượng tương đối của các ion được tạo ra từ phân tử ion hóa và phân rã thành các mảnh.
Sử dụng chùm điện tử có năng lượng trung bình từ 50-100 eV để bắn phá phân tử hữu cơ trong môi trường chân không cao (10 -6 mmHg) dẫn đến ion hóa và phá vỡ các chất hữu cơ thành mảnh Tín hiệu ion tương ứng được thể hiện qua các vạch có cường độ khác nhau, tạo thành phổ đồ hoặc phổ khối Để xác định công thức cấu tạo của chất nghiên cứu, cần áp dụng kỹ thuật ion hóa phù hợp nhằm phân tách chất thành nhiều mảnh ion, từ đó làm rõ cấu trúc ghép nối của chúng Việc phân tích phổ nên được kết hợp với phổ NMR và phổ IR để đạt được kết quả chính xác hơn.
2.3.4 Phương pháp xác định cấu trúc bằng phân tích phổ cô ̣ng hưởng từ ha ̣t nhân (NMR)
Địa điểm nghiên cứu
- Khoa Dược, trường Đại học Phenikaa
- Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam
KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM
Chiết xuấ t ca ́c hợp chất từ lá Sâm Viê ̣t Nam
Mẫu lá Sâm Việt Nam (680 g) được rửa sạch và phơi khô, thu được 118 g, sau đó xay nhỏ và ngâm chiết bằng dung môi ethanol 80% trong 3 lần (mỗi lần 1 L) với thiết bị chiết siêu âm ở 45 °C trong 4 giờ Dịch chiết ethanol được lọc qua giấy lọc, gom lại và cất dưới áp suất giảm, thu được 13,2 g cao chiết (11,19% khối lượng khô) 12,0 g cao chiết được hòa tan trong 200 mL nước cất và chiết phân bố bằng CH2Cl2 và BuOH (mỗi dung môi 3 lần, mỗi lần 200 mL) Các phân đoạn CH2Cl2 (3,2 g) và BuOH (6,1 g) được cất dưới áp suất giảm để thu được phân đoạn tương ứng Quy trình chiết xuất và phân đoạn từ lá Sâm Việt Nam được mô tả tóm tắt trong hình 3.1.
Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất và phân đoa ̣n các chất từ lá Sâm Viê ̣t Nam
Cao chiết tổng EtOH
Rư ̉ a sa ̣ch, phơi khô, xay nhỏ
1 Lo ̣c, gom di ̣ch lo ̣c
1 Ho ̀a tan 12g/200ml nước cất
2 Chiết = CH 2 Cl 2 , 3 lần, 200ml/lần
3 Chiết = BuOH, 3 lần, 200ml/lầ n
Phân lâ ̣p các hợp chất từ lá Sâm Viê ̣t Nam
Tiến hành sắc ký cột phân đoạn dịch chiết saponin toàn phần (BuOH) 6,0 g trên cột silica gel (Φ40 mm × 300 mm) với hệ dung môi có độ phân cực tăng dần gồm CH2Cl2-MeOH (10:1→1:1, v/v, mỗi phân đoạn 200 mL) đã thu được 6 phân đoạn, được ký hiệu từ F1 đến F6.
Từ phân đoạn F2 (1,2 g), chạy sắc ký cột silica gel (Φ25 mm × 300 mm) với hệ pha động CHCl3-MeOH-H2O (5:1:0,1, v/v/v, 2,0 L) thu được 4 phân đoạn nhỏ hơn là
Dựa trên kiểm tra TLC, phân đoạn F2.4 (250 mg) được tinh chế thêm bằng cách sử dụng cột sắc ký pha đảo YMC C-18 với dung môi rửa giải MeOH-H2O (2:1, v/v, 1000 mL), thu được hợp chất A (23 mg) Hình 3.2 minh họa quy trình phân lập các chất từ phân đoạn BuOH của lá Sâm Việt Nam.
Hình 3.2 Quy trình phân lâ ̣p các chất từ phân đoa ̣n BuOH lá Sâm Viê ̣t Nam
Sắ c ky ́ cô ̣t silicagel CHCl 3 /MeOH/H 2 O (5/1/0,1)
Sắ c ky ́ pha đảo YMC C-18 MeOH/H 2 O (2/1)
Tiến hành định tính ginsenoside Rd trong lá Sâm Việt Nam bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng (TLC) là một kỹ thuật hiệu quả Quan sát vết chất được thực hiện bằng cách phun đều thuốc thử là dung dịch, giúp xác định sự hiện diện của ginsenoside Rd trong mẫu lá.
H2SO4 10% lên bản mỏng, sấy khô rồi hơ nóng trên bếp điện từ đến khi xuất hiện màu Kết quả thu được thể hiê ̣n trong hình 3.3
Hình 3.3 Sắ c ký đồ sắ c ký lớp mỏng của hợp chất ginsenoside Rd trong lá Sâm Viê ̣t Nam
C: Cao ethanol lá Sâm Viê ̣t Nam
Rd: Hợp chất ginsenoside Rd
Bả n mỏng: Silicagel pha thường 60 F 254
Hệ dung môi khai triển: CHCl3-MeOH-H2O (65:35:10)
Thuốc thử phát hiê ̣n: H2SO4 10%/ethanol, sấ y khô
Quan sá t: Ánh sáng thường
Kết quả : Hình 3.3 cho thấy, trong cao ethanol lá Sâm Viê ̣t Nam có vết trùng với R f và màu sắ c của vết Rd (R f = 0,61)
Xa ́c đi ̣nh cấu trúc các hợp chất từ lá Sâm Viê ̣t Nam
Hợp chất A được xác định cấu trúc hóa học thông qua các đặc điểm vật lý và các phương pháp hóa lý như phương pháp cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) và phổ khối (MS).
Hợp chất A thu được ở da ̣ng bột vô định hình màu trắng ngà
Phổ 1 H-NMR củ a hợp chất A được đo trong dung môi pyridine-D 5 ở 600 MHz, thu được số liê ̣u như sau: 1 H-NMR (600 MHz): δ H 0,73, 0,89, 0,90, 1,05, 1,22, 1,56, 1,58
(8 tín hiệu CH3, s, CH3-19, 30, 18, 29, 28, 26, 21, 27), 3,23 (1H, dd, J = 10,2, 4,2 Hz, H-
Hz, H-1′′) Hình 3.4 là hình ảnh phổ 1 H-NMR củ a hợp chất A
Hình 3.4 Phổ 1 H-NMR (600 MHz) củ a hợp chất A
Phổ 1 H-NMR của hợp chất A xuất hiện 08 tín hiệu singlet của các nhóm methyl bậc ba tại δ H 0,73, 0,89, 0,90, 1,05, 1,22, 1,56, 1,58 (8 tín hiệu CH3-19, 30, 18, 29, 28,
26, 21, 27) Ngoài ra, trên phổ 1 H-NMR còn xuất hiện các tín hiệu cộng hưởng trong vùng δ H 3,8-4,5 ppm đặc trưng cho sự có mặt của các nhóm oxymethin và oxymethylen
Sự có mặt của 03 gốc đường cấu hình β trong cấu trúc của hợp chất A được nhận biết bởi 3 tín hiệu doublet ở δ H 4,85 (1H, d, J = 7,8 Hz, H-1′), 5,13 (1H, d, J = 7,2 Hz, H-1′′′), 5,33 (1H, d, J = 7,8 Hz, H-1′′) [25-27]
Tiến hành đo phổ 13 C-NMR củ a hợp chất A trong dung môi pyridine-D 5 ở 150 MHz Kết quả đo phổ 13 C-NMR củ a hợp chất A được thể hiê ̣n trong hình 3.5
Hình 3.5 Phổ 13 C-NMR (150 MHz) củ a hợp chất A
Bảng 3.1 Số liệu phổ 13 C-NMR của hợp chất A
Vi ̣ trí Hợp chất A * Ginsenoside
Rd * [26] Vi ̣ trí Hợp chất A * Ginsenoside
Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H và 13C-NMR của hợp chất A cho thấy đặc điểm đặc trưng của saponin, với phần aglycon là triterpen khung dammaran 30 nguyên tử C Đây là nhóm hợp chất chính có trong sâm Việt Nam và các loài thuộc chi Panax.
Trong phân tích 13C-NMR của hợp chất A, có 48 tín hiệu từ nguyên tử cacbon được ghi nhận Trong số đó, 18 tín hiệu được xác định là thuộc về 03 phân tử đường, trong khi 30 tín hiệu còn lại thuộc về phần aglycon dammaran Đặc biệt, có một nối đôi tại vị trí C-24/C-25 với các giá trị δ C lần lượt là 125,8 và 130,9 ppm.
Tiến hành đo phổ khối positive [M+Na] + củ a hợp chất A thu được kết quả phổ như hình dưới đây:
Hình 3.6 Phổ ESI-MS (positive [M+Na] + ) củ a hợp chất A
Ion [M+Na]+ có giá trị m/z lớn hơn giá trị m/z của ion phân tử hợp chất A là 23 đơn vị khối lượng nguyên tử Hình 3.6 cho thấy đỉnh ion [M+Na]+ tại m/z.
969, do đó khối lượng phân tử của hợp chất A là M A = 969 – 23 = 946 Kết hợp với phổ
13C-NMR cho biết công thức phân tử của hợp chất A là C48H82O18 (M6)
Như vâ ̣y, những dấu hiê ̣u thu thâ ̣p được từ phổ MS, 1 H-NMR và 13 C-NMR củ a hợp chất A bao gồm:
+ 8 tín hiê ̣u đơn của các nhóm methyl bâ ̣c 3
+ Các tín hiê ̣u đă ̣c trưng của các nhóm oxymethin và oxymethylen
+ 3 tín hiê ̣u đôi của 3 gốc đường cấu hình β
+ 48 tín hiê ̣u nguyên tử cacbon: 18 tín hiê ̣u thuô ̣c 3 phân tử đường, 30 tín hiê ̣u thuộc phần aglycon dammaran với mô ̣t nối đôi đă ̣c trưng
+ Công thứ c phân tử là C 48 H82O18 (M6)
Dựa trên phân tích so sánh dữ liệu phổ của hợp chất A với phổ của ginsenoside Rd (3-O-[β-D-glucopyranosyl(1→2)-β-D-glucopyranosyl]-20-O-(β-D-glucopyranosyl)-3β, 12β, 20(S)-trihydroxydammar-24-en), chúng ta nhận thấy hai phổ hoàn toàn trùng khớp, điều này cho phép xác định hợp chất A chính là ginsenoside Rd.
Hình 3.7 Công thứ c cấu ta ̣o của hợp chất A
BÀN LUẬN
Về phương pha ́p chiết xuất các hợp chất từ lá Sâm Viê ̣t Nam
Trong nghiên cứu này, chúng tôi áp dụng phương pháp chiết siêu âm, nhưng gặp phải nhiều sai sót do nhóm nghiên cứu thực hiện lần đầu Điều này cho thấy cần khắc phục những vấn đề và tiến hành nghiên cứu sâu hơn Một số phương pháp khác có thể được áp dụng trong phòng thí nghiệm để đạt hiệu suất cao hơn.
- Phương pháp chiết bằng soxhlet 40
- Phương pháp chiết hồi lưu
- Phương pháp chiết ngấm kiệt
Quá trình cất lọc dung môi dưới áp suất giảm yêu cầu cài đặt thông số máy cất quay một cách chính xác, với áp suất giảm dần phù hợp, nhằm đạt hiệu quả tối ưu Cần tránh hiện tượng dịch cất sủi bọt và tràn vào hệ thống máy cất quay, vì điều này có thể dẫn đến lãng phí thời gian và ảnh hưởng đến kết quả cuối cùng.
Về phương pha ́p phân lâ ̣p các hợp chất từ lá Sâm Viê ̣t Nam
Các phương pháp sắc ký phổ biến bao gồm sắc ký cột và sắc ký lớp mỏng, là những kỹ thuật cổ điển được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu phân lập các hợp chất thiên nhiên Sắc ký lớp mỏng nổi bật với tính dễ thực hiện, cho kết quả nhanh chóng và độ nhạy cao, thường được áp dụng để định tính và theo dõi quá trình sắc ký cột, sắc ký điều chế và chiết phân đoạn Trong khi đó, sắc ký cột mang lại hiệu quả tách cao, đơn giản và chi phí thấp, giúp phân đoạn dễ dàng tinh sạch mà không hoặc ít gây biến tính, bảo toàn chất lượng của chất phân lập.
Việc nạp chất hấp phụ lên cột sắc ký là rất quan trọng, ảnh hưởng trực tiếp đến hiệu quả phân lập các hợp chất Cần lưu ý khi đưa mẫu phân tích và dung môi vào cột sắc ký, đặc biệt là cột sắc ký pha đảo Dung môi nên được đưa vào từ từ để tránh làm xáo trộn lớp mẫu và lớp chất hấp phụ Trong quá trình chạy sắc ký, cần quan sát thời điểm thích hợp để bổ sung dung môi, tránh để cạn dung môi có thể làm khô lớp chất hấp phụ, dẫn đến hư hỏng và giảm khả năng phân tách Cuối cùng, quá trình chuẩn bị cột sắc ký cần đảm bảo không có bọt khí; nếu phát hiện bất thường, cần xả hết cột và nạp lại từ đầu.
Về phương pha ́p xác đi ̣nh cấu trúc hợp chất phân lâ ̣p được từ lá Sâm Viê ̣t Nam
Phương pháp phổ khối (MS) và phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) là hai phương pháp hóa lý hiện đại, hiệu quả cao trong việc xác định cấu trúc của các hợp chất, đặc biệt là các hợp chất hữu cơ thiên nhiên Phổ MS còn được ứng dụng để xác định đồng vị, định tính và định lượng.
Saponin ginsenoside Rd đã được xác định cấu trúc trong nhiều tài liệu Nghiên cứu này sử dụng dữ liệu phổ để đối chiếu với dữ liệu phổ của hợp chất phân lập, từ đó đánh dấu và ghi lại các cặp tín hiệu tương đồng Khi lựa chọn tài liệu tham khảo, cần lưu ý rằng sự dịch chuyển hóa học ở mỗi dung môi là khác nhau, do đó nên đo trong dung môi giống với dung môi trong tài liệu tham khảo Dữ liệu phổ trong tài liệu và dữ liệu phổ thực nghiệm có thể có sự chênh lệch nhỏ do không sử dụng cùng một máy móc và thiết bị, tuy nhiên sự chênh lệch này là chấp nhận được.
Về saponin ginsenoside Rd
Sâm Việt Nam đã được nghiên cứu từ lâu, nhưng hầu hết các nghiên cứu trước đây chỉ tập trung vào rễ và thân rễ Mặc dù có một số nghiên cứu về phần khí sinh, nhưng dữ liệu còn rời rạc và thiếu hệ thống Đặc biệt, nghiên cứu riêng biệt về lá Sâm Việt Nam vẫn rất hạn chế.
Nhóm nghiên cứu đã phân lập thành công một hợp chất từ phân đoạn BuOH của cao tổng hợp EtOH từ lá Sâm Việt Nam (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) thu hái tại núi Ngọc Linh, Kon Tum Qua các kết quả phổ thực nghiệm và so sánh với tài liệu tham khảo, hợp chất này được xác định là saponin ginsenoside.
Hợp chất này đã được ghi nhận nhiều lần trong các nghiên cứu về rễ và thân rễ, tuy nhiên, các báo cáo liên quan đến lá lại rất hiếm.
Kết quả các nghiên cứu trước đây đã công bố cho thấy, saponin ginsenoside Rd có rất nhiều tác du ̣ng dược lý như:
Ginsenoside Rd có tác dụng bảo vệ thần kinh bằng cách đối kháng độc tính kích thích, tăng cường các chất trung gian tái tạo thần kinh và cải thiện chức năng thần kinh Nó đạt được điều này thông qua việc giảm viêm, stress oxy hóa, quá trình chết theo chương trình, quá tải Ca2+ và rối loạn.
Ty thể đóng vai trò quan trọng trong việc phòng chống các bệnh lý thần kinh như Alzheimer, Parkinson, Huntington, trầm cảm, suy giảm nhận thức và thiếu máu não.
Ginsenoside Rd có tác dụng chống viêm mạnh mẽ, giúp điều trị nhiều bệnh viêm nhiễm, bao gồm viêm khớp sụn, viêm đại tràng và viêm ruột.
Tác dụng của Rd trong việc cải thiện tổn thương nội mô võng mạc được thể hiện qua việc tăng cường tương tác AMPK/SIRT1, từ đó điều chỉnh có lợi stress oxy hóa và quá trình chết theo chương trình, đồng thời cải thiện tổn thương mạch máu do bệnh tiểu đường.
Rd có khả năng cải thiện tình trạng teo cơ bằng cách chống lại sự hao mòn cơ xương do lão hóa và ung thư Nó tăng cường chức năng cơ, ngăn chặn sự biểu hiện của các yếu tố thoái hóa protein và bảo vệ tính toàn vẹn của ty thể Do đó, Rd có thể trở thành một tác nhân trị liệu hiệu quả để ngăn chặn chứng teo cơ.
Ginsenoside Rd có tác dụng bảo vệ tim mạch và chống đột quỵ do thiếu máu cục bộ bằng cách giảm tổn thương do thiếu máu não và tái tưới máu Nó tạo ra hiệu ứng chống hạ sốt và cải thiện các tổn thương do đột quỵ bằng cách ức chế stress oxy hóa và viêm.
Ginsenoside Rd có khả năng ức chế sự di căn của ung thư đại trực tràng bằng cách liên kết chặt chẽ với thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu mô (EGFR), từ đó điều hòa và giảm hoạt động của các gen liên quan đến quá trình chuyển đổi giữa mô biểu mô và mô trung mô Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng ginsenoside Rd làm giảm đáng kể số lượng và kích thước của các nốt di căn khối u ở gan, phổi và thận trong mô hình chuột di căn.
Ginsenoside Rd có tác dụng chống khối u, đặc biệt trong ung thư dạ dày, thông qua việc tăng cường hoạt động của Caspase-3 và Caspase-9 Ngoài ra, nó còn ngăn chặn sự hình thành mạch và sự phát triển của khối u vú.
Sâm Việt Nam được sử dụng để điều trị suy nhược, mệt mỏi, chống xơ vữa động mạch, giải độc, bảo vệ gan, điều hòa hệ thần kinh trung ương, điều chỉnh nhịp tim và giảm đường huyết Nghiên cứu về tác dụng dược lý của ginsenoside Rd đã giúp giải thích vai trò của Sâm Việt Nam trong y học dân gian.
Kết quả của đề tài nghiên cứu đóng vai trò quan trọng trong lĩnh vực khoa học, mang lại giá trị thực tiễn và khẳng định cơ sở dữ liệu về thành phần hóa học.
Nghiên cứu về 40 lá Sâm Việt Nam đã cung cấp cơ sở khoa học cho việc ứng dụng Sâm Việt Nam trong chăm sóc sức khỏe Hướng tới tương lai, việc sử dụng lá Sâm Việt Nam được xác định là nguồn cung cấp tiềm năng về saponin và các thành phần hóa học khác, nhằm tối ưu hóa nguồn dược liệu từ Sâm Việt Nam Điều này mở ra cơ hội phát triển các sản phẩm có giá trị kinh tế cao.
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHI ̣ Kết luận:
Qua thờ i gian nghiên cứu, đã hoàn thành được các mu ̣c tiêu khóa luâ ̣n đề ra, kết quả thu được như sau:
- Chiết xuấ t, phân lập được thành phần saponin ginsenoside Rd trong mẫu lá Sâm
Cấu trúc hóa học của saponin ginsenoside Rd đã được xác định dựa trên các đặc điểm vật lý và các phương pháp hóa lý hiện đại Các kỹ thuật chính bao gồm phổ khối (MS) và phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR), giúp cung cấp thông tin chi tiết về cấu trúc phân tử của ginsenoside Rd Việc áp dụng những phương pháp này không chỉ làm rõ cấu trúc hóa học mà còn hỗ trợ trong việc nghiên cứu các đặc tính sinh học của hợp chất này.