PhÇn I 1 MỞ ĐẦU 1 Lý do chọn đề tài Theo tổ chức y tế thế giới (WHO), ở các nước OECD hiện nay, cứ năm người trưởng thành thì có một người và trong sáu trẻ em thì có một trẻ em thừa cân hoặc béo phì Í[.]
1 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Theo tổ chức y tế giới (WHO), nước OECD nay, năm người trưởng thành có người sáu trẻ em có trẻ em thừa cân béo phì Ít 2.8 triệu người chết hàng năm liên quan đến béo phì, ước tính khoảng gần 1.8 tỉ người trưởng thành giới thừa cân, số có 650 triệu người béo phì Thừa cân béo phì dẫn đến bệnh liên quan bệnh tim mạch, hệ hô hấp, ung thư, đặc biệt bệnh tiểu đường Tiểu đường (TĐ) ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe cộng đồng toàn giới, ước tính có khoảng 425 triệu người mắc bệnh tiểu đường, phân bố chủ yếu nước phát triển, nước phát triển trung bình nước phát triển Trong tổng số có 90% người bệnh mắc tiểu đường loại Theo thông kê hiệp hội tiểu đường giới, tỉ lệ tử vong liên quan đến tiểu đường hàng năm đạt mức lớn từ trước tới với số triệu ca so với HIV/AIDS (1,5 triệu), bệnh lao phổi (1,5 triệu) bệnh sốt rét (0,6 triệu người) Số người mắc TĐ ước tính vượt 625 triệu người toàn giới vào năm 2040 Trên giới, nhiều loài thuộc chi Costus L sử dụng hiệu việc hạ lượng đường glucose máu Tại Ấn Độ, số loài Costus igneus, Costus pictus Costus speciosus nghiên cứu có hiệu tốt hỗ trợ điều trị bệnh tiểu đường Các nghiên cứu thành phần hóa học số loài thuộc chi Costus L cho thấy chúng chứa nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học cao, chủ yếu thuộc nhóm flavonoids, saponins (chủ yếu diosgenin), alkaloids, terpenoids …, ngồi cịn số hợp chất khác tồn dạng vi lượng Trong đó, số hợp chất Eremanthin diosgenin thử nghiệm riêng biệt cho thấy hiệu hỗ trợ điều trị tiểu đường rõ rệt Vì v y chúng tơi chọn đề tài: M (Costus L.) uyện n ut n p n n , tỉn n Đối tƣợng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu lu n văn lồi mía dị (Costus L.) Thanh hóa Việt Nam, có triển vọng cung cấp chất có hoạt tính sinh học phong phú hấp dẫn có tác dụng điều hịa đường huyết Nhiệm vụ nghiên cứu Nhiệm vụ nghiên cứu lu n văn bao gồm: - Từ lồi mía dị (Costus L.) Thạch thành Thanh hóa chiết chọn lọc với dung mơi thích hợp để thu hỗn hợp cao chất từ mía dị (Costus L.) - Phân l p xác định cấu trúc số hợp chất từ mía dị (Costus L.) 3 Chƣơng I TỔNG QUAN 1.1 Các nghiên cứu chi Costus L C speciosus loài thực v t lưu niên thân thảo có củ với thân thẳng đứng mọc hướng [7] Lá mọc xoắc ốc xung quanh thân Về mặt hình thái, đơn giản dạng trứng elip, nhẵn, có màu xanh thẫm , gần khơng có cuống Các cụm hoa có dạng nón dài khoảng 10 cm, với bắc phân bố gần chót Lá bắc có dạng ovan có đầu nhọn, màu đỏ tươi Hoa có màu trắng, dài từ 5- cm, với phần cuối môi hoa dạng cốc nhị hoa vàng Quả có dạng nang màu đỏ, chứa hạt màu đen với áo hạt trắng Cánh hoa nhìn giống tờ giấy nhăn (giấy crepe) Sau cánh hoa héo rụng đi, cịn lại phần nón với bắc đỏ Thông thường , thân nảy chồi vào tháng Tư Qúa trình hình thài hoa bắt đầu vào thánh 11, sau rụng thân khô dần Từ tháng 12 đến tháng 4, củ nằm đất tạm thời ngừng sinh trưởng, phát triển 1.2 Thành phần hóa học: Các nghiên cứu nhà khoa học thành phần hóa học vơ phong phú có hoạt tính sinh học đa dạng từ lồi mía dị Phần thân rễ Costus speciosus nguồn giàu saponin diosgenin, sapogenin, tigogenin, steroids alkaloids [28], [29] Nó có chứa diosgenin, 5α-stigmast-9(11)- en-3β-ol, sitosterol-β-D-glucoside, dioscin, prosapogenins A B dioscin , gracillin , quinones , α- tocopherol , tricontanoic acids , curcumin tricontanol [30], [31] Eremanthin Diosgenin costunolide Prosapogenin A gracillin 1.3 Các nghiên cứu hoạt tính sinh học 1.3.1 o ttn ốn ox : Các chất chống oxi hóa nhóm hợp chất có khả dừng q trình oxi hóa nhờ khả gom bắt gốc tự kích hoạt enzyme chống oxi hóa tế bào Trong tế bào, nguyên tử Oxy thường nh n electron một, dẫn đến hình thành loại oxy phản ứng (Reactive Oxygen Species – ROS) [36] 1.3.2 o ttn ốn un t Nghiên cứu cung cấp chứng để xác định mối quan hệ thành phần chống oxy hóa C speciosus hoạt tính chống ung thư Một thành phần có hoạt tính sinh học khác Diosgenin phân l p từ C speciosus có hoạt tính kích hoạt chết theo l p trình tế bào ung thư Các tế bào HepG2 xử lý Diosgenin cho thấy hoạt tính gây độc tế bào với giá trị IC50 32,62 μg/ml, so với tế bào HepG2 xử lý Paclitaxel với giá trị IC50 0,48 μg/ml Nghiên cứu kéo dài để xác định giá trị IC50 Diosgenin dòng tế bào ung thư MCF-7 Kết cho thấy giá trị IC50 11,03 μg/ml 1.3.3 o t t n k án v m Một nghiên cứu in vitro t p trung vào hoạt tính costunolide tổng hợp tác nhân gây viêm chế gây viêm kích thích bới Lipopolysaccharides (LPS) tế bào chuột BV – 5 Costunolide làm yếu biểu yếu tố hoạt tử khối u alpha (TNF-α), interleukin (IL), IL-6, NO synthase (NOS) cyclooxygenase (COX -2) tiểu thần kinh đệm kích hốt thơng qua ức chế NF-κB đường protein kinase kích hoạt chất gây giãn phân [27 o t t n bảo vệ 1.3.4 n Các enzyme huyết thanh, bao gồm aspartate aminotransferase (AST, EC 2.6.1.1), alanine aminotransferase (ALT, EC 2.6.1.2), lactate dehydrogenase (LDH, EC 1.1.1.27), alkaline phosphatase (ALP, EC 3.1.3.1), acid phosphatase (ACP, EC 3.1.3.2), sử dụng chất đánh dấu sinh học gan Sự tăng hoạt động AST, ALT, LDH, ALP, ACP huyết thanh/huyết tương chúng bị rị rỉ từ tế bào gan vào mạch máu o ttn 1.3.5 ốn stress Chức MAO cho ngăn cản sử giải phóng 5-hydroxytryptamine (5-HT) [45] Dịch chiết C speciosus giảm đáng kể tăng hàm lượng 5-HT 5-HIAA mô não cách ngăn chặn phản ứng cảnh báo, dẫn tới tăng đáng kể hàm lượng 5-HT 5-HIAA [66] Các tác giả nghiên cứu hoạt tính C speciosus MAO Tuy nhiên cần cân nhắc tới enzyme catechol-Omethyltransferase (EC 2.1.1.6) hoạt động với MAO trình dị hóa catecholamine Nghiên cứu cho hoạt tính chống trầm cảm C speciosus phát triển thành loại thuốc điều trị chứng rối loạn hệ thần kinh trung ương Chúng đề xuất nghiên cứu tương lai trọng tới hiệu ứng C speciosus bệnh đau đầu để nghiên cứu công dụng chữa đau đầu y học cổ truyền C speciosus 1.3.6 o t t n k án k uẩn Các phản ứng phụ không mong muốn xay uống qua miệng hợp chất chống vi khuẩn, ví dụ uống penicillin dẫn tới chứng ợ nóng, buồn nơn, nơn mửa tiêu chảy Do đó, nhiều thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn tiến hành loại thảo dược gia vị để tìm biện pháp thay [47] Dịch chiết hexane methanol từ thân rễ C speciosus biểu hoạt tính kháng khuẩn dạng vùng phân giải vi khuẩn Shigella spp., Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas spp., Bacillus subtilis, Salmonella spp so với kem bạc sulfadiazine [48] 1.3.7 o ttn ốn t ểu đườn v lp máu Mosihuzzaman & cs [49] nghiên cứu hoạt tính nước ép từ thân rễ C speciosus chuột bị gây tiểu đường không phụ thuộc vào insulin Các kết cho thấy, chuột không bị tiểu đường, 1.3.8 n u độ t n C.speciosus với liều lượng 275–1100 mg/kg/ngày vịng 90 ngày khơng dẫn tới thay đổi đáng kể nào, ngoại trừ giảm hàm lượng cholesterol glucose máu động v t thí nghiệm [57] Cuối cùng, để xác định độ an toàn C speciosus, dịch chiết khác từ tất ph n xem xét tách biệt với để xác định giá trị LD50 loại dịch chiết giới hạn an toàn chúng 1.4 Cây mía d 1.4 đ ểm t v t Hình 1.2 Hoa mía dị 1.4 n p n Costunolide 1.4.3 n Eremanthin diogesnin n Cây mía giị có vị chua cay, đắng, tính mát, có độc nhẹ, vào kinh can th n.Theo kinh nghiệm dân gian mía giị (Củ cát lồi) có số cơng dụng sau: Lợi tiểu, giúp điều trị bệnh phù thũng,điều trị bệnh xơ gan cổ chướng,điều trị viêm th n cấp (phù th n),điều trị chứng mẩn ngứa mề đay, eczema (bệnh da),điều trị viêm đường tiết niệu (biểu hiện: tiểu buốt tiểu rắt),điều trị viêm tai (đau nhức bên tai) Chƣơng PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM 2.1 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.1.1 P ươn p áp lấy mẫu 2.1.2 Phươn p áp p ân t ợp , p ân tá ỗn ợp v p ân l p ất 2.1.3 P ươn p áp t u un m - Áp suất thường - Áp suất giảm - Cất quay chân không 2.1.4 á ất từ o t u đượ Để phân tích phân tách phân l p hợp chất, sử dụng phương pháp sắc ký như: - Sắc ký cột (CC) - Sắc ký lớp mỏng (TLC) phân tích - Các phương pháp kết tinh phân đoạn s lý t uyết p ươn p áp sắ ký Hình 2.3 Sắc ký SKLM mẫu cao 2.1.5 P ươn p áp k ảo sát ấu trú ợp ất Cấu trúc hợp chất khảo sát nhờ kết hợp phương pháp phổ: Muốn xác định cấu trúc chất phân l p cần dựa vào liệu v t lý cung cấp từ phương pháp phổ đại, phải biết kết hợp phân tích liệu cho ta kết xác Các phương pháp v t lý đại thường dùng để xác định cấu trúc hợp chất gồm: phổ tử ngoại (UV), phổ hồng ngoại (IR), phổ khối lượng (EI-MS, ESI-MS, HR-ESI-MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều (1H-NMR, 13C-NMR, DEPT) hai chiều (HSQC, HMBC, HMQC, COSY, NOESY) 10 2.2 Hóa chất thiết bị ố ất ết bị 2.3 Nghiên cứu hợp chất từ mía d 23 P ân l p ợp ất Phần Costus speciosus Smith (8,7 kg) Cất thu hồi dung môi Cao metanol (767g) - Phân bố nước - Chiết với hexan, etylaxetat, butanol Cao hexan (31g) Cao etyl axetat (239g) Cao butanol (188g) Sơ đồ 2.1: Chiết hợp chất phần mặt đất mía dị 11 Cao etylaxetat (239g) Sắc kí cột: clorofom : etylaxetat Lần lượt % metanol: %, %, 10 %, 20 %, 30 %, 50 %, 70 %, 90 %, 100 %) Pđ Pđ Chất LV-C1 (135 mg) Pđ Pđ SKC hexan:axeton (10:1; 7:1; 5:1) Chất LV-C2 (75 mg) Pđ Pđ Pđ Pđ Pđ SKC cloroform:Etyl axetat 40:1 Chất LV-C4 (232 mg) Chất LV-C3 (245 mg) Sơ đồ 2.2: Tách hợp chất từ cao etylaxetat Costus speciosus Hình 2.4 Mẫu chất thu đƣợc từ cao etyl axetat Cao etyl axetat phân tách cột silicagel, với hệ dung môi rửa giải Clorofom/etylaxtat tăng dần nồng độ % etylaxetat: %, %, 10 %, 20 %, 30 %, 50 %, 70 %, 90 %, 100 %, thu phân đoạn Phân đoạn thu chất (135mg) (LV-C1), phân đoạn sau tiếp tục rửa 12 giải cột nhỏ với hệ dung môi n hexan/aceton với tỷ lệ 10:1; 7:1; 5:1 thu chất (75mg) (LV-C2) Phân đoạn phân tách lại sắc ký cột với hệ dung môi cloroform:etylaxetat 40:1 thu chất (LV-C3) (245 mg) Phân đoạn tinh chế lại sắc ký cột với hệ dung môi cloroform:Etylaxetat 20:1 thu chất 4.(LV-C4) (232 mg) 23 Một số ữ k ện p ổ ồn n o , p ổ k ố lượn v p ổ ộn n từ t n ân ất p ân l p Hợp chất LV-C1: Tinh thể hình kim, đ.n.c.: 135-136oC IR (KBr) max (cm-1): 3400, 3025, 1410, 1250, 820, 690 EI-MS m/z: 414 [M]+ (20), 413 (41), 398 (28), 397(100), 395 (32), 383 (11), 361 (11), 257 (3), 255 (6,3), 151 (5,6), 139 (11) Phổ 1H-NMR (500MHz, CDCl3) ( ppm): 5,31(1H, m, H-6); 3,51 (1H, m, H-3); 1,01 (3H, s, 19-CH3); 0,92 (3H, d, J = 6,2 Hz, 21CH3); 0,84 (3H, d, J = 7,0 Hz, 29-CH3); 0,83 (3H, d, J = 6,5 Hz, H-26); 0,81 (3H, d, J =6,5 Hz, 27-CH3); 0,68 (3H, s, 18-CH3) Phổ 13 C-NMR (125MHz, CDCl3) ( ppm): 140,8 (C-5); 121,7 (C-6); 71,8 (C-3); 56,8 (C14); 56,1 (C-17); 50,2 (C-9); 45,9 (C-24); 42,3 (C-4, C-13); 39,8 (C-12); 37,3 (C-1); 36,5 (C-10); 36,2 (C-20); 33,9 (C-22); 31,9 (C-7); 31,7 (C-8); 29,7 (C-2); 29,2 (C-25); 28,3 (C-16); 26,1 (C-23); 24,3 (C-15); 23,1 (C28); 21,1 (C-11); 19,8 (C-19); 19,4 (C-27); 19,1 (C-26); 18,8 (C-21); 11,9 (C-18, C-29) Hợp chất LV-C2 : Tinh thể hình kim, đ.n.c: 155o-157oC IR (KBr) max (cm-1): 3400, 3025, 1410, 1250, 820, 690 Phổ EI-MS m/z: 412 [M+] (7), 300 (7), 255 (11), 231 (4), 213 (8), 173 (7), 145 (20), 133 (20), 83 (49,3), 55 (100), 43 (90) 1H-NMR (500MHz, CDCl3) ( ppm) ; 13C-NMR (125MHz, CDCl3) ( ppm)(bảng 3.2) Hợp chất LV-C3: Chất rắn vơ định hình, đ.n.c: 283-285°C IR (KBr) max (cm-1): 3400, 3050, 1650 815 EI-MS m/z 396 [M-glc]+ 1H-NMR 13 (500Hz DMSO-d6) ( ppm): 5,32 (1H, d, J=3,0, H-6); 2,40 (1H, s, H-4b); 2,20 (1H, q, J= 2,5, 13,5Hz, H-4a); 0,98 (3H, s, 21-CH3); 0,91 (3H, d, J=6,5Hz, 27-CH3); 0,67 (3H, s, 18-CH3) 13C-NMR (125MHz, DMSO-d6) (ppm): 140,4 (C-5), 121,1 (C-6); 100,8 (C-1’); 77,0 (C-3); 76,7 (C-5’); 76,6 (C-3’); 73,4 (C-2’); 70,1 (C-4’); 61,1 (C-6’); 56,2 (C-14); 55,4 (C17); 49,6 (C-9); 45,1 (C-24); 41,8 (C-13); 40,1 (C-4); 40,0 (C-12); 38,2 (C-1); 36,8 (C-20); 36,2 (C-10); 35,4 (C-22); 33,3 (C-7); 31,4 (C-8); 31,3 (C-2); 29,2 (C-23); 28,7 (C-16); 27,7 (C-25); 25,5 (C-15); 23,8 (C-28); 22,6 (C-11); 20,6 (C-27); 19,7 (C-19); 19,0 (C-21); 18,9 (C-26); 11,7 (C18, C-29) Hợp chất (LV-C4): chất bột màu trắng, đ.n.c 230-2330C; EI-MS: m/z 725 442 (M+.10); 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) (ppm): 5,12 (1H, t, J = 3,0 Hz, H - 12), 3,52 (1H, d, J = 11,0 Hz, H-28a), 3,21 (1H, dd, J = 11,0, 5,0 Hz, H-3), 3,13 (1H, d, J = 11,0 Hz, H-28b), 1,08 (3H, s, H-27), 0,97 (3H, s, H-24), 0,96 (3H, s, H-26), 0,92 (3H, s, H-25), 0,91 (3H, d, J = 5,2 Hz, H-30), 0,78 (3H, d, J = 5,5 Hz, H-29), 0,77 (3H, s, H-23) C-NMR (125 MHz, CDCl3) (ppm): xem bảng 3.1 13 14 Chƣơng KẾT QỦA VÀ THẢO LUẬN 3.1 Phân lập 3.2 Xác định cấu trúc hợp chất Phân lập xác định cấu trúc hợp chất LV-C1 Phổ IR hợp chất LV-C1 cho vân hấp thụ cực đại 3400 cm1 đặc trưng cho nhóm hydroxyl 3025cm-1 dao động kéo căng C-H anken Phổ EI-MS cho mảnh ion phân tử m/z [M]+ 414 ứng với công thức phân tử hợp chất C29H50O Từ phổ 1H-NMR 13C-NMR với kĩ thu t DEPT hợp chất LV-C1 cho thấy tín hiệu nguyên tử H sau: Ha-3 3,51ppm tín hiệu proton gắn C-3 có C 71,4 ppm; tín hiệu H 5,31 ppm nguyên tử hiđro gắn nguyên tử C-6 (C 120,3) nối đơi C=C Ngồi cịn xuất tín hiệu nhóm metyl vị trí tương ứng H 0,68; 0,87; 0,91; 1,01; 1,1; 1,17 Các số liệu phổ thu so với [46] hoàn toàn phù hợp với -sitosterol Hợp chất tồn phổ biến thực v t [59] 29 28 21 18 22 23 12 11 13 HO 25 26 16 14 10 24 17 19 27 20 15 (LV-C1) -sitosterol Hợp chất LV-C2 tinh thể hình kim khơng màu, đ.n.c 155-157oC Phổ IR, 1H-NMR C-NMR hợp chất khẳng định có mặt nhóm 13 hydroxyl gắn với C-3 tương ứng với tín hiệu Ha-3 3,28 ppm, C-3 71,2 ppm max=3400 cm-1, ngồi cịn có tín hiệu proton thuộc nhóm metin nối đơi khơng liên hợp với tín hiệu đặc trưng H-6 5,35 ppm; 15 H-22 5,14 ppm H-23 5,03 ppm Phổ EI-MS hợp chất LV-C2 thấy pic ion phân tử m/z 412 [M]+ tương ứng với công thức phân tử C29H48O So sánh số liệu phổ hợp chất LV-C2 hoàn toàn phù hợp với hợp chất stigmasterol [58] 29 28 21 18 20 22 23 12 11 17 13 19 HO 14 10 24 25 27 26 16 15 (LV-C2) Stigmasterol Phân lập xác định cấu trúc hợp chất LV-C3 Hợp chất LV-C3 chất vơ định hình, đ.n.c 283-285oC Phổ IR hợp chất LV-C3 có bước sóng cực đại 3460 cm-1 đặc trưng cho nhóm hydroxyl 1650cm-1 đặc trưng cho nối đôi C=C Phổ khối lượng EI-MS cho cho pic ion m/z 396 [M-glc]+, công thức phân tử tương ứng C35H60O6 Phổ 1H-NMR xác nh n có mặt proton C=C 5,34 ppm; nhóm hydroxy vùng 3,26 ppm đến 4,08 ppm; nhóm CH2 tương đương C6, gốc đường có tín hiệu 3,62 ppm đến 4,20 ppm Tín hiệu cộng hưởng từ 2,21 đến 2,43 ppm đặc trưng cho proton C-4, vùng từ đến ppm vùng xen phủ dày đặc tín hiệu nhóm -CH- CH2- vịng no Các nhóm metyl nhánh vịng có tín hiệu vùng 0,63-1,03 ppm Phổ 13C-NMR DEPT quan sát thấy 35 tín hiệu ngun tử C, ngun tử cacbon gắn với oxy từ C1’ -C6’ độ dịch chuyển tương ứng C 61,3 (C6’); C 76,5 (C5’); C 69,1 (C4’); C 76,2 (C3’); C 73,2 (C2’) C 100,4 (C1’) tương ứng với gốc đường Có hai tín hiệu 140,7 121,4 ppm thuộc liên kết olefin Các số liệu phổ thu so với số liệu phổ tài liệu [30] khẳng định hợp chất LV- 16 C3 -sitosterol-3-O--D-glucopyranosit Hợp chất tồn phổ biến thực v t [58] HO H H HO O OH HO H O H H (LV-C3) -sitosterol 3-O--D-glucopyranosit Hợp chất LV-C4 chất bột màu vàng, đ.n.c 214-2150C Phổ khối lượng EI-MS hợp chất LV-C4 cho pic ion m/z 432 [M]+ tương ứng với công thức phân tử C21H20O10 Phổ IR cho tín hiệu nhóm OH CO phân tử Phổ 13C-NMR DEPT hợp chất LV-C4 xuất tín hiệu tương ứng 21 cacbon, có 15 cacbon thuộc khung flavon (6 nhóm CH, 8C b c bốn, nhóm C=O) cacbon thuộc vào gốc đường Từ số liệu phổ 1H-NMR cho thấy có hai tín hiệu δH 6.78 (1H), qua tín hiệu phổ HSQC cho thấy nguyên tử H tương tác với C có tín hiệu δC 98, H-6 vịng A Bên cạnh tín hiệu δH 6,90 (2H) 8,0 (2H) thể tương tác xa với tín hiệu 13 C- NMR δC 161,9 (C-4’) thể chúng H-1’/6’ H-3’/5’ vòng B Thêm vào đó, tín hiệu δH 6,25 H-3 Theo phổ HMBC H-3 có tín hiệu tương tác xa với C-2 (δC 162,8) C-1’ (δC 120,12) Tín hiệu 13 C-NMR δC 161,3 có tương tác với H-6 C-7 Dựa vào số liệu phổ 1H, 13C-NMR với tài liệu khác, hợp chất A có phần cấu trúc apigenin Ngồi hợp chất LV-C4 cịn có tín hiệu gốc đường galactose thể phổ 1H-NMR với δH 3,20-3,83 (5H), tương ứng với tín hiệu phổ 13C-NMR δC 72,9; 68,3; 75,2; 69,0; 80,3; 61,1 Mặt khác, qua phổ 17 HMBC có tương xa H-1’’ C-8 chứng tỏ gốc đường gắn apigenin vị trí C-8 V y qua số liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT,UV, IR, ESI-MS, HSQC, HMBC tài liệu, xác định cấu trúc chất LV-C4 có tên apigenin-8-C-β-D-galactopyranoside OH OH '' 2'' HO '' '' O '' 3' OH O HO OH ' O 6' ' OH O Hình 3.19: Cơng thức apigenin-8-C-β-D-galactopyranoside 18 KẾT LUẬN Lu n văn tốt nghiệp Nghiên cứu thành phần hóa học Mía dị (Costus speciosus Smith) Thạch Thành Thanh Hóa thực nhiệm vụ nghiên cứu phân l p xác định cấu trúc hợp chất từ Mía dị, đạt kết nghiên cứu sau : +Đã xây dựng qui trình chiết phân tách để điều chế cao chiết n-hexan, etyl axetat, butanol phần chiết nước chứa hợp chất từ phần mặt đất +Đã phân tích sắc ký lớp mỏng (TLC) dịch chiết etyl axetat để xác định điều kiện sắc ký định tính xác định hệ dung mơi thích hợp cho phân tách sắc ký phần cao +Bằng phương pháp sắc ký cột với dung môi giải hấp khác nhau, nồng độ khác phân l p phân đoạn cao etylaxetat hợp chất LV-C1; LV-C2; LV-C3; LV-C4 +Cấu trúc hợp chất phân l p xác định cách kết hợp phương pháp phổ đại: ESI-MS, 1H-NMR, 13 C-NMR DEPT HMBC, HSQC xác định cấu trúc 04 hợp chất : sitosterol: apigenin-8-C-β-D-galactopyranoside; -sitosterol 3-O--Dglucopyranosit; Stigmasterol có cấu trúc phân tử sau : OH OH '' 2'' HO '' '' O '' 3' OH O HO OH ' O HO H ' 6' HO H OH HO OH O O H O H H 29 28 29 21 18 20 22 23 12 11 17 13 19 HO 14 10 24 25 28 27 21 18 26 22 11 16 23 13 17 19 15 HO 14 10 15 24 25 26 16 27 20 12