Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài Sâm Vũ Diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) và Sâm Việt Nam (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) ở Việt Nam. Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài Sâm Vũ Diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) và Sâm Việt Nam (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) ở Việt Nam. Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài Sâm Vũ Diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) và Sâm Việt Nam (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) ở Việt Nam. Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài Sâm Vũ Diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) và Sâm Việt Nam (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) ở Việt Nam. Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài Sâm Vũ Diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) và Sâm Việt Nam (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) ở Việt Nam. Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài Sâm Vũ Diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) và Sâm Việt Nam (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) ở Việt Nam. Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài Sâm Vũ Diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) và Sâm Việt Nam (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) ở Việt Nam. Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài Sâm Vũ Diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) và Sâm Việt Nam (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) ở Việt Nam. Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài Sâm Vũ Diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) và Sâm Việt Nam (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) ở Việt Nam.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HOÀNG ANH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA HAI LOÀI SÂM VŨ DIỆP (PANAX BIPINNATIFIDUS SEEM.) VÀ SÂM VIỆT NAM (PANAX VIETNAMENSIS HA ET GRUSHV.) Ở VIỆT NAM Ngành: Hóa học Mã số: 9440112 TĨM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HĨA HỌC Hà Nội - 2023 Cơng trình hoàn thành tại: Trường Đại học Bách khoa Hà Nội Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Vũ Đình Hồng PGS TS Nguyễn Hữu Tùng Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá luận án tiến sĩ cấp Trường họp Trường Đại học Bách khoa Hà Nội Vào hồi ……giờ ….phút, ngày ….tháng …năm … Có thể tìm hiểu luận án thư viện: Thư viện Tạ Quang Bửu - Trường ĐHBK Hà Nội Thư viện Quốc gia Việt Nam DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CỦA LUẬN ÁN Nguyen Thi Hoang Anh, Nguyen Huu Tung, Pham Trung Hieu, Pham Quang Dương, Le Dang Quang, Vu Dinh Hoang (2020) Bioactive saponins from Panax bipinnatifidus Seem growing in Viet Nam Vietnam Journal of Science and Technology, 58 (6A), 228-235 Phan Van Kiem, Vu Dinh Hoang, Nguyen Thi Hoang Anh, Dinh Thi Phuong Anh, Dinh Thi Phuong Anh, Do Thi Trang, Bui Huu Tai (2021) Panabipinoside A and Panabipinoside B, two new oleananeane triterpenoid saponins from the roots of Panax bipinnatifidus with nitric oxide inhibitory activity Journal of Chemical Research (ISI: Q4), 45, 850855 GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Từ xa xưa, ông cha ta sử dụng loại thảo mộc để làm thuốc chữa bệnh cứu người Công dụng lồi thảo dược lưu truyền qua nhiều hệ đến tận ngày nay, người dân có thói quen sử dụng cỏ phổ biến để điều trị số bệnh thơng thường Do có nguồn gốc từ thực vật tự nhiên, nên sản phẩm dược liệu có độc tính thấp, phù hợp với quy luật sinh lý thể Ở giới Việt Nam, loài thuộc chi Panax sử dụng phổ biến làm thuốc bổ thành phần số thuốc truyền thống dân tộc Sâm vũ diệp có tác dụng giảm stress, tăng cường tính đề kháng, chống ung thư, chống thổ huyết [5,6,7] Sâm Việt Nam dùng làm thuốc để tăng cường sức khỏe, chống ung thư, bảo vệ gan [3,8,9] Tuy nhiên, đề tài nghiên cứu với đối tượng Việt Nam hạn chế Do đó, chúng tơi lựa chọn đề tài: “Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học hai loài Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) Sâm việt nam (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) Việt Nam” Mục tiêu luận án: Nghiên cứu thành phần hóa học củ Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) Sâm việt nam (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) thu hái Việt Nam Đánh giá số hoạt tính sinh học hợp chất phân lập để tìm kiếm hợp chất có hoạt tính sinh học, làm sở khoa học cho nghiên cứu để tạo sản phẩm chăm sóc sức khỏe cho cộng đồng góp phần giải thích tác dụng chữa bệnh từ lồi Nội dung luận án bao gồm: Nghiên cứu phân lập hợp chất từ củ Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) Sâm việt nam (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) Việt Nam phương pháp sắc ký kết hợp Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập Đánh giá hoạt tính sinh học số hợp chất phân lập Những đóng góp luận án: Đây nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học hai lồi thực vật Panax bipinnatifidus Seem Panax vietnamensis Ha et Grushv Việt Nam Nghiên cứu thu kết sau: Từ Sâm vũ diệp (P bipinnatifidus): phân lập xác định cấu trúc 10 hợp chất saponin (SVD-1 đến SVD-10) bao gồm 08 saponin thuộc khung oleanane (SVD-1 đến SVD-8) 02 saponin thuộc khung dammarane (SVD-9 SVD-10) Trong đó: 02 hợp chất mới: đặt tên panabipinoside A (SVD-1) panabipinoside B (SVD-2) 04 hợp chất lần đầu phân lập từ Sâm Vũ Diệp (P bipinnatifidus): kalopanax-saponins E (SVD-4), spinasaponin A 28-Oglucoside (SVD-5), 20(S)-ginsenoside Rg3 (SVD-9), chikusetsusaponin VI (SVD-10) 04 hợp chất biết: ginsenoside Ro (SVD-3), stipuleanoside R1 (SVD-6), stipuleanoside R2 (SVD-7), araloside A (SVD-8) Từ Sâm việt nam (P vietnamensis): phân lập xác định cấu trúc 05 hợp chất saponin (SVN-1 đến SVN-5), 05 hợp chất saponin thuộc khung dammarane 01 hợp chất lần đầu phân lập từ Sâm Việt Nam (P vietnamensis) : notoginsenoside E (SVN-1) 04 hợp chất biết: ginsenoside Rd (SVN-2), pseudoginsenosideRS1 (SVN-3), ginsenoside Rg1 (SVN-4) ginsenoside Rb1 (SVN-5) Về hoạt tính sinh học: Trong số hợp chất phân lập được, có số hợp chất thể hoạt tính gây độc tế bào, ức chế sản sinh NO ức chế enzym αglucosidase Bố cục luận án: Luận án gồm 147 trang với 43 bảng biểu, 35 hình vẽ, 160 tài liệu tham khảo cập nhật đến năm 2021 Bố cục luận án gồm: mở đầu (02 trang), chương - tổng quan (35 trang), chương - đối tượng phương pháp nghiên cứu (09 trang), chương - thực nghiệm (07 trang), chương kết thảo luận (71 trang), kết luận kiến nghị (02 trang), danh mục cơng trình cơng bố luận án (01 trang), tài liệu tham khảo (20 trang) NỘI DUNG CỦA LUẬN ÁN LỜI MỞ ĐẦU Trình bày ý nghĩa thực tiễn, mục tiêu nội dung nghiên cứu luận án CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU Trình bày kết nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học lồi thực vật Panax bipinnatifidus Seem Panax vietnamensis Ha et Grushv CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Củ Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) thu hái Sa Pa, Lào Cai vào tháng 5/2019 giám định tên khoa học nhà khoa học uy tín Lá Sâm việt nam (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) thu hái Kon Tum vào tháng 10/2020 giám định tên khoa học khoa học uy tín 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp phân lập chất Sử dụng phương pháp sắc ký bao gồm: sắc ký cột (CC), sắc ký lớp mỏng (TLC), sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học chất Cấu trúc hợp chất phân lập xác định dựa vào thơng số vật lý đo góc quay cực riêng kết hợp với phương pháp phổ đại phổ khối phân giải cao HR-ESI-MS, phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1D, 2D 2.2.3 Phương pháp nghiên cứu sinh học Hoạt tính gây độc tế bào ung thư thực theo phương pháp MTT, hoạt tính ức chế sản sinh NO hoạt tính ức chế enzyme αglucosidase CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 3.1 Phân lập hợp chất từ Sâm vũ diệp (P bipinnatifidus) 3.1.1 Quy trình phân lập chất Quy trình ngâm chiết phân lập chất từ củ Sâm vũ diệp tiến hành theo hình 3.1.1 Hình 3.1 1: Sơ đồ chiết phân lập hợp chất từ Sâm vũ diệp (P bipinnatifidus) 3.1.2 Thông số vật lý liệu phổ hợp chất phân lập từ lồi Sâm vũ diệp Phần trình bày thông số vật lý liệu phổ 10 hợp chất (SVD-1 đến SVD-10) phân lập được, có hợp chất SVD1 SVD-2 3.2 Phân lập chất từ loài Sâm việt nam 3.2.1 Quy trình phân lập chất Các chất phân lập từ Sâm việt nam theo hình 3.1.2 Hình 3.1.2 Sơ đồ chiết phân lập hợp chất từ Sâm việt nam (P vietnamensis) 3.3.2 Thông số vật lý liệu phổ hợp chất phân lập từ Sâm việt nam Phần trình bày thông số vật lý liệu phổ 05 hợp chất (SVN-1 đến SVN-5) phân lập có hợp chất lần đầu phân lập từ Sâm việt nam CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Các hợp chất phân lập từ Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus) Từ củ Sâm vũ diệp phân lập 10 hợp chất Trong có hợp chất panabipinoside A (SVD-1) panabipinoside B (SVD-2) Các hợp chất có cấu trúc sau: 4.1.1 Hợp chất SVD-1: Panabipinoside A (hợp chất mới) Hình 4.1.1.1 Cấu trúc hợp chất SVD-1 Hợp chất SVD-1 thu dạng bột màu trắng Góc quay cực riêng [α]D25 = +12,2 (c = 0,1; MeOH) Phổ khối lượng HR-ESI-MS xuất pic ion giả phân tử m/z 941,51031 [M – H]–, tính tốn cho cơng thức C48H77O18 941,51099 Như hợp chất SVD-1 có cơng thức phân tử C48H78O18 Phổ IR cho thấy có mặt nhóm hydroxyl (3401 cm− 1), C=O carboxylic (1732 cm− 1) C-O-C (1028 cm− 1) 942 #87 RT: 0.39 AV: NL: 3.92E5 T: FTMS - p ESI Full ms [400.0000-1500.0000] 759.52338 100 95 90 85 80 75 70 Relative Abundance 65 60 55 708.52606 50 45 941.51031 40 35 30 712.50507 729.17609 25 803.19604 20 951.23267 877.21497 15 739.46204 10 827.26526 840.90094 818.92035 745.13428 700 773.44421 720 740 760 780 793.16797 800 902.13434 868.18390 820 840 987.78992 997.70642 968.22235 894.20361 860 880 900 920 940 960 980 1000 m/z Hình 4.1.1.1: Phổ HR-ESI-MS hợp chất SVD-1 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H 13C-NMR SVD-1 mang đặc điểm saponin có phần aglycone triterpene khung oleanane đặc trưng saponin cơng bố từ Sâm vũ diệp (P bipinnatifidus) Phổ 1H-NMR cho thấy tín hiệu nhóm methyl singlet bậc 3, cộng hưởng vùng trường mạnh δH 0,88; 0,91; 0,92; 1,00; 1,03; 1,09 1,21 ppm, nhóm oxymethylene 3,50 (2H , s, H-28) Proton olefin δ 5,21 (1H, br s, H-12) gợi ý có mặt liên kết đơi khung oleanane Tín hiệu proton anomeric δ 4,17 (1H, d, J = 8,0 Hz); 4,42 (1H, d, J = 7,5 Hz) 4,64 (1H, d, J = 8,0 Hz) khẳng định có mặt ba đơn vị đường Các tín hiệu cịn lại ba đơn vị đường xuất khoảng δH 3,23–3,71 điều xác nhận lần liệu phổ HR-ESI-MS cách so sánh NMR C-1″, C-2″, C-3″, C-4″, C-5″ hợp chất SVD-1 hợp chất SVD-4 SVD-5 Đường glucuronopyranosyl đường phổ biến xác định saponin triterpene từ thực vật thuộc họ Araliaceae [17,70,71,72] Căn vào số tương tác proton anomeric δH 4,17; 4,42 4,64 (J = 7,5–8,0 Hz) ta khẳng định tất đơn vị đường hợp chất SVD-1 dạng β Carbon anomeric (105,0 – 106,3) C13(145,8) C12(123,6) C28(77,8) C3(91,1) Hình 4.1.1.4: Phổ 13C-NMR giãn rộng hợp chất SVD-1 Cấu hình đơn vị đường hợp chất SVD-1 tương tự với cấu hình đơn vị đường saponin phân lập từ chi Panax [17,70,71,72,73,74] Và điều khẳng định thêm trình thủy phân acid hợp chất SVD-1 Sự có mặt D-glucose Dglucuronic acid sản phẩm thủy phân acid hợp chất SVD-1 xác nhận phân tích sắc ký lớp mỏng (TLC) cách so sánh góc quay cực riêng chúng với góc quay cực riêng Dglucose D-glucuronic acid [66] 10 So sánh với hợp chất erythrodiol [75] phân lập từ lồi Cylicodiscus gabunensis cho thấy SVD-1 có phần aglycone giống erythrodiol Do vậy, với tất dự liệu trên, cấu trúc hóa học SVD-1 xác định 3β, 28-dihydroxyoleanan-12-ene 3-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→3)β-D-glucuronopyranoside]-28-O-β-D-glucopyranoside, hợp chất đặt tên panabipinoside A (Hình 4.1.1.1) Hình 4.1.1.5: Phổ HMBC hợp chất SVD-1 Bảng 4.1.1: Dữ liệu phổ NMR hợp chất SVD-1 hợp chất tham khảo SVD-1 (CD3OD) C Erythrodiol [73] (DMSO- d6) δc 125 MHz, ppm δH 500 MHz, ppm δc 75 MHz 40,0 0,99 (m)/1,62 (m) 38,2 11 SVD-1 (CD3OD) C 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 Erythrodiol [73] (DMSO- d6) δc 125 MHz, ppm δH 500 MHz, ppm δc 75 MHz 26,9 91,1 40,2 57,0 19,3 33,8 41,2 49,0 37,8 24,7 123,6 145,8 42,9 26,9 22,7 37,8 44,2 47,7 31,8 35,3 33,0 28,5 16,7 16,2 17,6 26,6 77,8 1,72 (m)/1,91 (m) 3,21 (dd, 12,0, 4,5) 0,80 (d, 12,5) 1,47 (m)/1,59 (m) 1,40 (m)/1,57 (m) 1,60 (m) 1,90 (m)/1,92 (m) 5,21 (br s) 1,00 (m)/1,70 (m) 1,41 (m)/1,89 (m) 2,03 (dd, 13,0, 3,5) 1,07 (m)/1,81 (m) 1,16 (m)/1,33 (m) 1,52 (m)/1,60 (m) 1,09 (s) 0,88 (s) 1,00 (s) 1,03 (s) 1,21 (s) 3,50 (s) 23,5 82,9 38,4 55,7 18,5 32,7 39,8 47,7 36,9 23,8 122,1 144,0 41,8 25,7 22,4 35,6 42,1 46,4 31,3 35,7 31,5 28,7 15,5 16,1 16,8 26,0 73,6 12 SVD-1 (CD3OD) C 6’ δH 500 MHz, ppm δc 75 MHz 33,8 24,2 0,91 (s) 0,92 (s) 33,1 22,5 105,3 75,1 77,8 71,5 78,2 4,17 (d, 8,0) 3,20 (dd, 9,0, 8,0) 3,35 (m)* 3,32 (m)* 3,32 (m)* 3,68 (m)* 3,87 (m)* δc 125 MHz, ppm 29 30 28-O-Glc 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ Erythrodiol [73] (DMSO- d6) 62,8 3-O-GluA 1′′ 106,3 4,42 (d, 7,5) 2′′ 74,8 3,47 (dd, 9,0, 7,5) 3′′ 87,0 3,62 (m)* 4′′ 71,9 3,63 (m)* 5′′ 76,7 3,71 (d, 9,0) 6′′ nd 3′′-O-Glc 1′′′ 105,0 4,64 (d, 8,0) 2′′′ 75,1 3,32 (dd, 9,0, 7,5) 3′′′ 77,8 3,43 (m)* 4′′′ 71,7 3,31 (m)* 5′′′ 78,3 3,23 (m)* 6′′′ 62,8 3,68 (m)*/3,87 (m)* *tín hiệu chồng chập 13 4.1.2 Hợp chất SVD-2: Panabipinoside B (hợp chất mới) Hình 4.1.2.1: Cấu trúc hóa học tương tác HMBC, COSY hợp chất SVD-2 Hợp chất SVD-2 thu dạng bột màu trắng Phổ khối lượng HR-ESI-MS xuất pic ion giả phân tử m/z 1073,54980 [M – H]–, tính tốn cho cơng thức C53H85O22 1073,55325 Như hợp chất SVD2 có cơng thức phân tử C53H86O22 Phổ IR cho thấy có mặt nhóm hydroxyl (3406 cm− 1), carboxylic (1732 cm− 1) C-O-C (1029 cm− 1) Hình 4.1.2.2: Phổ HR-ESI-MS hợp chất SVD-2 Phổ NMR hợp chất SVD-2 (đo CD3OD) tương tự phổ 14 hợp chất SVD-1, gợi ý hợp chất SVD-2 dẫn xuất hợp chất SVD1 Phổ 1H-NMR cho thấy tín hiệu nhóm methyl singlet bậc cộng hưởng vùng trường mạnh giá trị δH 0,87; 0,91; 0,92; 0,99; 1,02; 1,08 1,20 (3H, s) Proton olefin δ 5,20 (1H, br s, H-12) gợi ý có mặt liên kết đơi khung oleanane Nhóm 28-CH2-O- oxymethylene liên kết đơi C-12/C-13 xác định δH 3,50 (2H, s)/ δC 77,9; δH 5,20 (br s)/δC 123,6 δC 145,8 tương ứng Bốn đơn vị đường xác định thông qua bốn tín hiệu anomeric δH 4,16 (d, J = 8,0 Hz)/δC 105,3; δH 4,39 (d, J = 8,0 Hz)/δC 106,4; δH 4,88 (d, J = 8,0 Hz)/δC 104,5 δH 5,24 (br s)/δC 107,9 Phổ NMR chất SVD-2 so với chất SVD-1 có thêm tín hiệu δH 5,24 (br s)/ δC 107,9; δH 4,03 (br s)/δC 82,0: δH 3,82/δC 79,5; δH 4,40/δC 87,3; δH 3,66 3,71/δC 63,3, điều khẳng định SVD-2 có thêm đơn vị α-arabinofuranosyl so với SVD-1, SVD-2 dẫn xuất SVD-1 [29] Việc gán tín hiệu 1H 13C-NMR cho tất bốn đơn vị đường xác định cách phân tích chi tiết phổ HSQC, HMBC COSY Tương tác HMBC từ H-1′ (δH 4,16) đến C-28 (δC 77,9), từ H-1′′ (δH 4,39) đến C-3 (δC 91,0), từ H-1′′′ (δH 4,88) đến C-3′′ (δC 82,2) từ H-1′′′′ (δH 5,24) đến C-4′′ (δC 77,8) khẳng định có đơn vị glucose liên kết C-28, đơn vị đường glucuronopyranosyl liên kết C-3, đơn vị glucose khác gắn C-3′′ đường glucuronopyranosyl đường arabinofuranosyl gắn vị trí C-4′′ đường glucuronopyranosyl Độ dịch chuyển hóa học C-4′′ (δC 77,8) SVD-2 chuyển dịch sang vùng trường yếu so với trường hợp gốc đường arabinofuranosyl không gắn vào vị trí C-4′′ đường glucuronopyranosyl, điều khẳng định thêm đường arabinofuranosyl SVD-2 gắn vị trí C-4′′ đường glucuronopyranosyl [69] Hằng số tương tác lớn (J = 8,0 Hz) proton anomeric H-1′ (δH 4,16), H-1′′ (δH 4,39) H-1′′′(4,88), chứng tỏ số tương tác diaxial 15 cho phép xác định đơn vị đường có liên kết β-glucoside Nhóm methyl bậc (0,88 – 1,21) Hình 4.1.2.3: Phổ 1H-NMR hợp chất SVD-2 Hình 4.1.2.3: Phổ 13H-NMR hợp chất SVD-2 Hình 4.1.2.4: Phổ 13C-NMR hợp chất SVD-2 Các đơn vị đường chất SVD-2 cho giống với loại 16 đường điển hình hay xuất saponin từ rễ chi Panax khẳng định lần cách thủy phân SVD-2 mơi trường acid [17,29,42,70,71,72,73,74] Sự có mặt D-glucose, D-glucuronic acid L-arabinose sản phẩm thủy phân acid hợp chất SVD-2 xác nhận phân tích sắc ký lớp mỏng (TLC) cách so sánh góc quay cực riêng chúng với góc quay cực riêng D-glucose, D-glucuronic acid Larabinose [66] Do đó, cấu trúc hóa học hợp chất SVD-2 xác định 3β, 28-dihydroxyoleanan-12-ene 3-O-{β-D-glucopyranosyl-(1→ 3)-[α-Larabinofuranosyl-(1→ 4)]β-D-glucuronopyranoside}-28-O-β-Dglucopyranoside Đây hợp chất đặt tên panabipinoside B Bảng 4.1.2: Dữ liệu phổ NMR hợp chất SVD-1, SVD-2 C δc SVD-1 SVD-2 CD3OD CD3OD δH 125 MHz, ppm 500 MHz, ppm 0,99 (m) δc δH 125 MHz, ppm 500 MHz, ppm 40,0 26,9 91,1 3,21 (dd, 12,0, 4,5) 91,0 3,21 (dd, 12,0, 4,5) 40,2 - 40,2 - 57,0 0,80 (d, 12,5) 57,0 0,81 (d, 12,5) 19,3 33,8 1,62 (m) 1,72 (m) 1,91 (m) 1,47 (m) 1,59 (m) 1,40 (m) 40,0 0,96 (m) 26,9 19,2 33,8 1,61 (m) 1,70 (m) 1,87 (m) 1,45 (m) 1,58 (m) 1,40 (m) 17 C δc SVD-1 SVD-2 CD3OD CD3OD δH 125 MHz, ppm 500 MHz, ppm δc δH 125 MHz, ppm 500 MHz, ppm 1,57 (m) 1,59 (m) 41,2 - 41,2 - 49,0 1,60 (m) 49,0 1,60 (m) 10 37,8 - 37,8 - 11 24,7 12 123,6 5,21 (br s) 123,6 5,20 (br s) 13 145,8 - 145,8 - 14 42,9 - 42,9 - 15 26,9 16 22,7 17 37,8 - 37,8 - 18 44,2 2,03 (dd, 13,0, 3,5) 44,2 2,01 (dd, 13,0; 3,5) 19 47,7 20 31,8 21 35,3 22 33,0 1,90 (m) 1,92 (m) 1,00 (m) 1,70 (m) 1,41 (m) 1,89 (m) 1,07 (m) 1,81 (m) 1,16 (m) 1,33 (m) 1,52 (m) 1,60 (m) 24,7 27,0 22,7 47,7 31,8 35,3 33,0 1,90 (m) 1,92 (m) 1,03 (m) 1,70 (m) 1,42 (m) 1,90 (m) 1,07 (m) 1,83 (m) 1,16 (m) 1,33 (m) 1,51 (m) 1,60 (m) 18 C δc SVD-1 SVD-2 CD3OD CD3OD δH 125 MHz, ppm 500 MHz, ppm δc δH 125 MHz, ppm 500 MHz, ppm 23 28,5 1,09 (s) 28,5 1,08 (s) 24 16,7 0,88 (s) 17,1 0,87 (s) 25 16,2 1,00 (s) 16,2 0,99 (s) 26 17,6 1,03 (s) 17,6 1,02 (s) 27 26,6 1,21 (s) 26,6 1,20 (s) 28 77,8 3,50 (s) 77,9 3,50 (s) 29 33,8 0,91 (s) 33,8 0,90 (s) 30 24,2 0,92 (s) 24,2 0,91 (s) 1’ 105,3 4,17 (d, 8,0) 105,3 4,16 (d, 8,0) 2’ 75,1 3,20 (dd, 9,0, 8,0) 75,1 3,20 (dd, 9,0, 7,5) 3’ 77,8 3,35 (m)* 78,2 3,35 (m)* 4’ 71,5 3,32 (m)* 71,7 3,31 (m)* 5’ 78,2 3,32 (m)* 78,0 3,23 (m)* 28-O-Glc 6’ 62,8 3,68 (m)* 3,87 (m)* 62,8 3,69 (m)* 3,87 (m)* 3-O-GluA 1′′ 106,3 4,42 (d, 7,5) 106,4 4,39 (d, 8,0) 2′′ 74,8 3,47 (dd, 9,0, 7,5) 76,5 3,56 (dd, 9,0, 8,0) 3′′ 87,0 3,62 (m)* 82,2 3,78 (m)* 4′′ 71,9 3,63 (m)* 77,8 3,88 (m)* 5′′ 76,7 3,71 (d, 9,0) 77,9 3,25* 19 C SVD-1 SVD-2 CD3OD CD3OD δc δH δc δH 125 MHz, ppm 500 MHz, ppm - nd - 125 MHz, ppm 500 MHz, ppm 6′′ nd 3′′-O-Glc/2′′-O-Glc 1′′′ 105,0 4,64 (d, 8,0) 104,5 4,88 (d, 8,0) 2′′′ 75,1 3,32 (dd, 9,0, 7,5) 75,1 3,27 (dd, 9,0, 8,0) 3′′′ 77,8 3,43 (m)* 78,2 3,36 (m)* 4′′′ 71,7 3,31 (m)* 71,0 3,37 (m)* 5′′′ 78,3 3,23 (m)* 78,3 3,26 (m)* 6′′′ 62,8 3,68 (m)* 62,3 3,70 (m)* 3,87 (m)* 3,83 (m)* 4′′-O-Ara(f) 1′′′′ 107,9 5,24 (br s) 2′′′′ 82,0 4,03 (br s) 3′′′′ 79,5 3,82 (m)* 4′′′′ 87,3 4,40 (m) 63,6 3,66 (m) 5′′′′ 3,71 (m) *tín hiệu chồng chập 4.2 Các hợp chất phân lập từ loài Sâm việt nam (P vietnamensis) Từ Sâm việt nam phân lập 05 hợp chất : notoginsenoside E (SVN-1), ginsenoside Rd (SVN-2), pseudoginsenoside-RS1 (SVN-3), ginsenoside Rg1 (SVN-4) ginsenoside Rb1 (SVN-5) Các hợp chất có cấu trúc sau: 20 4.3 Đánh giá hoạt tính sinh học hợp chất phân lập 4.3.1 Kết thử hoạt tính sinh học hợp chất phân lập từ Sâm vũ diệp 4.3.1.1 Kết đánh giá tác dụng gây độc tế bào Cao chiết tổng EtOH cao phân đoạn saponin tổng nồng độ độ 25, 50, 100 200 µg/mL thể tác dụng ức chế yếu, không đáng kể với phát triển tế bào ung thư HL-60 Có thể kết luận sơ cao chiết tổng cao phân đoạn saponin Sâm vũ diệp tác dụng ức chế tế bào ung thư máu HL-60 Stipuleanoside R2 (SVD-7) araloside A (SVD-8) hai saponin Sâm vũ diệp, cho khơng có hoạt tính (âm tính) với tỷ lệ ức chế tế bào ung thư HL-60 nhỏ, nhỏ 50% thử đến nồng độ 50 µM (IC50 > 50 µM) 21 4.3.1.2 Kết đánh giá hoạt tính ức chế sản sinh NO Cao chiết EtOH Sâm vũ diệp hợp chất đánh giá hoạt tính ức chế sản sinh NO RAW264.7 kích thích LPS Các hợp chất SVD-2, SVD-3, SVD-4, SVD-5 SVD-10 có khả ức chế sản sinh NO với giá trị IC50 từ 0,21±0,04 đến 0,62±0,09 µg/mL 4.3.1.3 Kết đánh giá hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase Hợp chất kalopanax-saponins E (SVD-4) stipuleanoside R1 (SVD6) có hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase Đặc biệt hợp chất kalopanaxsaponins E (SVD-4) hợp chất cho hoạt tính ức chế enzyme αglucosidase mạnh với giá trị IC50 0,56 µg/ml 4.3.2 Kết thử hoạt tính sinh học hợp chất phân lập từ Sâm việt nam Notoginsenoside E (SVN-1), ginsenoside Rd (SVN-2), pseudoginsenoside-RS1 (SVN-3), ginsenoside Rg1 (SVN-4) ginsenoside Rb1 (SVN-5) phân lập từ Sâm việt nam thể hoạt tính ức chế sản sinh NO yếu *Nhận xét: Cao chiết tổng EtOH cao phân đoạn saponin tổng Sâm vũ diệp stipuleanoside R2 (SVD-7) araloside A (SVD-8) thể tác dụng ức chế yếu, không đáng kể với phát triển tế bào ung thư HL-60 Các hợp chất SVD-2, SVD-3, SVD-4, SVD-5 SVD-10 có hoạt tính ức chế sản sinh NO Về mặt cấu trúc, hợp chất saponin khung oleanane – nhóm hợp chất ghi nhận có hoạt tính ức chế sản sinh NO mạnh nhóm chất hữu Trong chất SVN-1, SVN-2, SVN-3, SVN-4 SVN-5 thể hoạt tính ức chế sản sinh NO yếu Điều cho phép gợi ý saponin thuộc khung oleanane có hoạt tính ức chế sản sinh NO tốt hợp chất saponin thuộc khung dammarane hợp chất SVN-1, SVN-2, SVN-3, SVN-4 SVN-5 Về hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase, kalopanax-saponins E (SVD-4) stipuleanoside R1 (SVD-6) có hoạt tính ức chế enzyme αglucosidase 22 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Trong trình thực luận án này, thu kết nghiên cứu Sâm vũ diệp (P bipinnatifidus) Sâm việt nam (P vietnamensis) cụ thể sau: Về thành phần hóa học: Đã phân lập xác định 15 hợp chất từ loài thực vật này, đó: Từ củ Sâm vũ diệp: phân lập xác định cấu trúc 10 hợp chất saponin (SVD-1 đến SVD-10) Trong có 02 hợp chất panabipinoside A (SVD-1) panabipinoside B (SVD-2), 04 hợp chất lần đầu phân lập từ Sâm Vũ Diệp kalopanax-saponins E (SVD-4), spinasaponin A 28-O-glucoside (SVD-5), 20(S)-ginsenoside Rg3 (SVD-9), chikusetsusaponin VI (SVD-10) 04 hợp chất biết ginsenoside Ro (SVD-3), stipuleanoside R1 (SVD-6), stipuleanoside R2 (SVD-7), araloside A (SVD-8) Từ Sâm việt nam: phân lập xác định cấu trúc 05 hợp chất saponin (SVN-1 đến SVN-5) Trong có 01 hợp chất lần đầu phân lập từ Sâm Việt Nam notoginsenoside E (SVN-1) 04 chất biết ginsenoside Rd (SVN-2), pseudoginsenoside-RS1 (SVN-3), ginsenoside Rg1 (SVN-4) ginsenoside Rb1 (SVN-5) Về hoạt tính sinh học 2.1 Thử nghiệm hoạt tính sinh học Sâm vũ diệp Các saponin phân lập cao chiết từ Sâm vũ diệp (P bipinnatifidus) tiến hành thử nghiệm hoạt tính sinh học: tác dụng gây độc tế bào ung thư, ức chế sản sinh NO, ức chế enzyme αglucosidase Hoạt tính gây độc tế bào ung thư Cao chiết tổng EtOH, cao chiết phân đoạn saponin thành phần saponin đặc trưng Sâm vũ diệp stipuleanoside R2 (SVD-7) araloside A (SVD-8) hoặc thể hoạt tính gây độc tế bào yếu với dịng tế bào ung thư máu HL-60 23 Hoạt tính ức chế sản sinh NO Cao chiết EtOH Sâm vũ diệp hợp chất SVD-1, SVD-2, SVD-3, SVD-4, SVD-5, SVD-7, SVD-9 SVD-10 phân lập từ Sâm vũ diệp thử hoạt tính ức chế sản sinh NO tế bào RAW kích thích LPS Kết thu hợp chất SVD-2, SVD-3, SVD-4, SVD-5 SVD-10 thể hoạt tính ức chế sản sinh NO tốt với giá trị IC50 chất nằm khoảng từ 0,21±0,04 đến 0,62±0,09 µg/mL, thấp chứng dương L-NMMA (8,08±0,90 µg/mL) Hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase Cao chiết EtOH Sâm vũ diệp chất SVD-4, SVD-6, SVD7, SVD-8 phân lập từ Sâm vũ diệp đánh giá tác dụng ức chế enzyme α-glucosidase Kết cho thấy hợp chất SVD-4 SVD-6 có hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase Đặc biệt hợp chất SVD-4 hợp chất cho hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase mạnh với giá trị IC50 0,56 µg/ml 2.1 Thử nghiệm hoạt tính sinh học Sâm việt nam Hoạt tính kháng viêm thông qua ức chế sản sinh NO Cao chiết EtOH Sâm việt nam hợp chất SVN-1, SVN-2, SVN-3, SVN-4 SVN-5 phân lập từ Sâm việt nam thử hoạt tính ức chế sản sinh NO tế bào RAW kích thích LPS Kết cho thấy cao chiết EtOH hợp chất SVN-1, SVN-2, SVN-3, SVN-4 SVN-5 hoạt tính ức chế sản sinh NO KIẾN NGHỊ Trên sở kết thu được, kiến nghị: Các hợp chất panabipinoside B (SVD-2), ginsenoside Ro (SVD-3), kalopanax-saponins E (SVD-4), spinasaponin A 28-O-glucoside (SVD-5) chikusetsusaponin VI (SVD-10) phân lập từ Sâm vũ diệp thể hoạt tính ức chế sản sinh NO tốt, hợp chất kalopanax-saponins E (SVD-4) đồng thời thể hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase mạnh Vì vậy, cần có nghiên cứu sâu để định hướng cho thực nghiệm in vivo Khảo sát thêm hoạt tính sinh học khác với chất phân lập nhằm tìm kiếm thêm khả ứng dụng hợp chất 24 ... tài: ? ?Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học hai loài Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) Sâm việt nam (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) Việt Nam? ?? Mục tiêu luận án: Nghiên cứu thành. .. án: Nghiên cứu thành phần hóa học củ Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) Sâm việt nam (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) thu hái Việt Nam Đánh giá số hoạt tính sinh học hợp chất phân lập... sinh học số hợp chất phân lập Những đóng góp luận án: Đây nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học hai lồi thực vật Panax bipinnatifidus Seem Panax vietnamensis Ha et Grushv Việt Nam Nghiên