những câu hỏi tự luận có đáp án được đặt ra để giúp bạn ôn tập kiến thức môn giải phẫu bệnh. nội dung file xoay quanh những biểu hiện của tế bào, bệnh lí, các tiểu chuẩn và phương pháp chuẩn đoán. file được tổng hợp dựa trên giáo trình của bộ môn giải phẫu bệnh của Trường đại học y khoa Phạm Ngọc Thạch. file này là do mình tự tổng hợp trong suốt quá trình ôn thi. Hy vọng nó sẽ giúp ích được ccho các cậu trong kỳ thi tới
một số phương pháp lấy mẫu loại mẫu nghiên cứu gồm loại - tử thiết: vật liệu lấy từ thể người chết - có chức giải thích ngun nhân gây chết kiểm nghiệm xác chuẩn đốn lâm sàng từ rút kinh nghiệm nâng cao chất lượng y học - sinh thiết: mẫu mô lấy từ thể người sống o cách lấy phẫu thiết sinh thiết nội soi sinh thiết kim o mục đích phục vụ cho chuẩn đoán điều trị - vật liệu thực nghiệm: nghiên cứu động vật o mục đích xác nhận nguyên nhân chế gây bệnh nghiên cứu tìm phương pháp điều trị cho bệnh phương pháp nghiên cứu giải phẫu bệnh - nghiên cứu đại thể : vỏ bao, mật độ, kích thước - nghiên cứu vi thể: o sử dụng phương pháp nhuộm: phương pháp nhuộm hay dùng Hematoxylin-eosin nhuộm fonata để tìm hăc tố bào nhuộm trichomat để quan sát kĩ sợi collagen nhuộm PÁS để quan sát kĩ glycogen chất nhày ngày thay phương pháp nhuộm hố mơ miễn dịch dựa phản ứng kháng nguyên khàng thể o phương pháp cố định o sinh học phân tử áp dụng nêu kỹ thuật mô bệnh học - cố định, cắt lọc - xử lí mơ - đúc khối - cắt mỏng : thường sử dụng ethanol - nhuộm - dán lamen CỐ ĐỊNH Lý có bước cố định - hình thái đặc điểm sinh học quan hay thể protein đảm nhiệm - lấy phận khỏi thể phân thiếu máu ni dẫn đến q trình tự tiêu tự huỷ protein => quan phân huỷ , hình thái tế bào trở nên méo mó, dị dạng khơng thể quan sát Một phương pháp cố định lý tưởng phải đạt yêu cầu - ngăn cản tự tiêu tự huỷ protein enzyme - giữ đặc điểm hình thái mẫu vật - không làm mẫu mô căng cứng mức - không làm ảnh hưởng đến khả bắt màu thuốc nhuộm - tác dụng nhanh, rẻ, không độc Các phương pháp cố định - có hai phương pháp vật lí hố học( hố học sư dụng nhiều phịng thí nghiệm) * phương pháp vật lí - Cố định nhiệt o Dùng nhiệt làm biến tính protein o Ít dùng làm biến đổi tổ chức mô o Hay sử dụng để gia tốc số phương pháp cố định khác - Cố định lị vi sống o Ít sử dụng o Nếu sử dụng phải dùng hợp chất có khả bây có hệ thống máy hút hệ thống xử lí chất bay o Hay sử dụng mục đích gia tốc số phương pháp cố định khác - cố định đông khô: o ngâm nitơ lỏng => cho vào buồng chân không => cố định fomanandehyt o - sử dụng chủ yếu hố mơ miễn dịch Nêu số tác dụng chất cố định hố học - hố chất đơng kết ethanol: + dùng nồng độ 80 độ + chế: kéo nước từ tế bào mơ ngồi làm đứt gãy liên kết chéo phân tử protein =>làm protein bị biến tính kết tụ lại với + dùng cố định làm co cứng mẫu mô + dùng tế bào học để cố định phết mỏng tế bào ACETON:+ gây co rút mạnh ethanol + ứng dụng nghiên cứu enzyme hố mơ miễn dịch methanol: chế ethanol đảy nước nên dùng nhiệt độ cao clorur thuỷ ngân: + không rút nước mà tạo cầu nối khiến protein kết tụ lại + co rút mạnh ethanol nên… acidpyric : chế y chang clorur thuỷ ngân - Hố chất khơng đơng kết: formadehyde: + sử dụng nhiều phòng lab + khơng làm biến tính protein ethanol mà tạo liên kết methylen protein làm chúng kết tụ lại với bicromat kali : + thường sử dụng nghiên cứu thành phần tế bào mô cố định tốt myelin photpholipid nên sử dụng để nghiên cứu thành phần acid acetide: + thường dùng nghiên cứu thành phần tế bào gây kết tủa AND ( khơng gây kết tủa pro, lipid, glu) glutaraldehyde: chế giống formon dùng nghiên cứu enzyme siêu vi thể - tetroxyd osmium: bảo quản tốt hình thái tế bào Dựa vào đâu để phân loại hoá chất cố định hoá học * phương pháp hoá học - dựa vào phản ứng kết tủa với lịng trắng trứng mà chia hố chất thành loại: hố chất cố định đơng kết hố chất cố định khơng kết - hố chất cố định khơng đơng kết gồm có: +, acis acetic, glutaraldehyde, bichromat kali, tetraoxyd osium Nêu tên số dung dịch dùng phịng thí nghiệm - Formalin đệm trung tính 10% ( nước máy, formandehyde, monodihydrophotpho natri, dihydrophotpho natri) o Thực tế có 3-4 fformandehyt - Dung dịch formalin carson mioling : bảo tồn cấu trúc siêu vi thể tốt - Dung dịch formalin 10% canxi: bảo tồn tốt cấu trúc lipid - Dung dịch formalin 10% kẽm không đệm: hay sử dụng hố mơ miễn dịch Các kỹ thuật cố định - Nhúng chìm: kỹ thuật dùng nhiều nhất, thể tích gấp 15-20 lần - - tiêm truyền: sử dụng động vật thí nghiệm Các yếu tố ảnh hưởng đến chất lượng cố định bệnh phẩm - tốc độ xuyên thấu: acetide nhanh nhất, formandehyde - thể tích dung dịch cố định: thể tích phải nhiều mẫu, 15-20 lần - nồng độ hoá chát cô định:+ nồng độ thấp làm giảm tốc độ cố định + nồng độ cao làm co cứng teo nhỏ, biến dạng tế bào - áp lực thẩm thấu dung dịch cố định : để dung dịch có áp lực thẩm thấu tối ưu nên thêm vào đường sucrose muối natri clorur - độ ph:6-8 - độ dày mẫu mô - mật độ mẫu mô : mo lổng thẩm thấu nhanh mô rắn - nhiệt độ - thời gian cố định - khuấy trộn: khuấy tăng tốc độ xuyên thấu dung dịch Lựa chọn phương pháp cố định cho số mơ đặc biệt - Mắt o Fornmalin đệm trung tính 10% o Tiêm truyền vào mạch máu mắt - Não o Truyền dung dịch cố định vào động mạch não - Vú: rút ngắn thời gian lấy mẫu vật ngâm vào dung dịch cố định - Phổi o Fornmalin đệm trung tính 10% o Bơm phồng dung dịch vào mơ phổi thơng quan đường khí quản - - - phế quảng Mô lymphoo o Nên cẩn thận chứa nhiều vi khuẩn vi rút hệ liên võng mô Các mẫu sinh thiết o Được cố định NBF vùi nến cho bảo quản cấu trúc bó sợi collagen Các mẫu sinh thiết thận o Ban đầu cố định formanlin trung tính sau cố định glutaral Dung dịch sử dụng rộng rãi thị trường - Formalin đệm trung tính 10% chứa 4% formandehyde - Ngâm từ 6-72 giờ, tối ưu 24 CẮT LỌC Quy trình cắt lọc gồm - Tiếp nhận bệnh phẩm - Mã hoá bệnh phẩm - quan sát đại thể : o định hướng bệnh phẩm o đánh dấu mực: giúp xác định diện cắt bề mặt vi thể đại thể, có ý nghĩa quan trọng, khảo sát khối u ác tinh, tô bệnh phẩm trước cắt lọc thấm khăn để cố định vết mực o xẻ cắt lát bệnh phẩm - mô tả đại thể - lấy mẫu chọn lọc nêu lưu ý bước xẻ cắt lát bệnh phẩm - cắt lát dày 3-5mm để khảo stas tình trạng bệnh - trước cắt lọc phải xắt định vị trí tổn thương cách sờ nắn - chọn nơi cách lọc cho bộc lộ vùng tổn thương mối liên hệ với cấu trúc xung quanh nêu lưu ý bước lấy mẫu chọn lọc - lấy mẫu khối u: phải đủ để chuẩn đoán loại mô học, độ mô học mứ độ xâm lấn tới quan xung quanh - lấy mẫu diện cắt giúp xác định bờ phẫu thuật an tồn hay chưa, dự đốn khả tái phát lựa chọn thuốc điều trị hỗ trợ hay dùng phường pháp lấy mẫu vng góc Cho thấy khoảng cách tổn thương với diện cắt Lấy mẫu song song Khảo sát cấu trúc hình trụ lịng ống Khơng đánh giá liên quan tổn thương diện cắt - Chỉ sử dụng trường hợp mà không thấy tổn thương lan tới diện cắt lấy mẫu hạch lympho: đánh giá giai đoạn bệnh đặc biệt bệnh lý ác tính, lát mỏng 2-3mm lấy mẫu mơ bình thường sai sót lỗi kỹ thuật trọng khâu cắt lọc + nhằm lẫn bệnh phẩm : lỗi nghiêm trọng + tạp nhiễm bệnh phẩm + giả tượng đè ép hay xảy bệnh phẩm mô, mô hạch, carcinom tế bào nhỏ nêu dùng que gỗ thay cho dao hay kẹp xử lí mơ đúc khối mơ sau đúc khối cần cắt mỏng đơn vị - 5mcm Mục đích xử lí mơ đúc khối - Loại bỏ mỡ, muối, nước tế bào thay mơi trường có đủ độ cứng để cắt mẫu mo không bị lún xuống Mơi trường hay sử dụng phịng lab - Parafin Các bước q trình xử lí mơ - Cố định bổ sung xử lí mơ: o mẫu vật cố định đủ bỏ qua bước o thường dùng đến trạm dung dịch formalin để cố định bổ sung - khử nước o loại bỏ nước dung dịch cô định cách cách sử dụng dung dịch có tính ưa nước, tạo liên kết hydro với phân tử nước kéo nước ngồi cách pha lỗng nước dung môi khử nước o khử nước với dung dịch tăng dần 70% -95% - 100% nồng độ tăng đột ngột làm co rút biên dạng mẫu mô o khử lâu làm mẫu mô căng cứng giịn o khử q nhanh làm mẫu mơ bị mềm khó thắm parafin - làm o giai đoạn hoà tan dung dịch khử nước parafin o độ quang dung dịch làm gần protein để mẫu mô trở nên suốt o làm q lâu làm mẫu mơ bị giịn, dễ vỡ - thấm parafin o để mẫu mô trở nên cứng, dễ cắt mỏng bắt màu thuốc nhuộm tên số chất khử nước - ethanol - methanol - cồn biến tính - aceton - isopropanol sử lí mẫu cứng mơ liên kết đặc,móng, sừng nên thêm vào dung dịch - phenol 4% ethanol 95% để làm mềm mẫu mô tên số chất sử dụng để làm - xylen hay dùng (CH3)2C6H4 - toluen CH3C6H5 - limonene - chloroform CHCl3 tiêu chuẩn để trở thành chất làm - chất làm thường hydrocacbon - làm nhanh, độc, gây cháy hay phá huỷ mẫu mô - dể dàng bị thay parafin nóng chảy - nhiệt độ sôi chất làm thấp càn dễ dàng thấm parafin số ý bước thấm parafin - parafin hợp chất hydrocacbon xuất từ dầu mỏ, tồn nhiều nhiệt độ khác - phịng lab dùng nhiều parafin nhiệt độ 55-58 độ - parafin nhiệt độ 60 độ cần ngâm 1đến 2h mẫu mô đủ cứng - sáp parafin nóng chảy nhiệt độ cao phù hợp với loại mô cứng mô xương,… - sử dụng parafin với nhiệt độ cao gây biến dạng mẫu mô 10 số dung dịch thay sáp parafin - phức hợp nitrocellulose celloidin : hay sử dụng môi trường nghiên cứu - resin hay sử dụng vùi mẫu mô trường hợp xem kính hiển vi - điện tử, mơ xương không khử canxi thạch genlatin: dùng để gắn kết nhiều mẫu mô nhỏ thành khổi quy trình cắt lạnh sucrose 3% dùng trường hợp mẫu mô cắt lạnh cố định formalin 11 để phục hồi mẫu mô bị lỗi đố khơ cứng giịn - Ngâm mẫu hỗn hợp dung dịch gồm o 70ml ethanol 70% + o 30ml glyxerol o 1g diothine - Ngâm qua đêm nhiều sau làm lại bước xử lí mơ - Mẫu mơ qua phục hồi khó để cắt mỏng 12 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình xử lí mơ - Rung lắc: giảm 30% thời gian xử lí mơ - Nhiệt độ: tgxlm trở nên nhanh nêú nhiệt độ cao o Nhiệt độ cao mức làm biến dạng mẫu mô - Độ nhớt: dung dịch có độ nhớt thấp có khả thấm vào mô nhanh hơn, parafin dung dịch có độ nhớt thấp - Áp lực 13 Hố chất sử dụng khơng sử dụng kỹ thuật xử lí mơ tự động lị vi sống - Được sử dụng o Ethanol o Isopropanol o Parafin - Khơng sử dụng nguy gây cháy nổ cao o Formalin o Xylen 14 Nêu ưu nhược điểm q trình xử lí mơ lị vi sóng - Ưu điểm o Nhanh, hố chất, khơng độc khơng gây hại cho mơi trường o Không làm biến đổi tế bào kháng nguyên tế bào - Nhược điểm o Mắc tiền o Phải ln hiệu chuẩn kiểm sốt tay o Di chuyền tay 15 Các bước khâu đúc lốc parafin bước quan trọng - Các bước gồm o Bước 1: mở nắp hộp cát xét ( hạn chế mở lần) o Bước 2: gắp bệnh phẩm bỏ vào khuôn inox hứng sẵn parafin lỏng o Bước 3: định hướng mẫu mô cố định vào đáy khuôn nhờ điểm lạnh o Bước 4: đặt cát xét lên khuôn hứng cho đầy parafin sau để sang bàn làm lạnh để đông đặc parafin tách khỏi lốc - Bước quan trọng o Bước định hướng mẫu mô o Vì Định hướng thể đầy đủ tổn thương khơng bỏ sót bệnh Định hướng dễ dàng cho việc cắt mỏng lưỡi dao không làm hư mẫu mô 16 Mục đích việc làm lạnh nhanh - Chỉ tạo tinh thể parafin nhỏ 17 Nêu biểu việc khử nước mức - Viền mẫu mô bị rách, nghiền - Tế bào bị co rút nhăn nheo - Trong mẫu mô bị đứt mảnh sợi tóc 18 Nêu biểu việc xử lí mơ - Mờ, nhân nhuộm màu nhiễm sắc chất khác ,không thấy rõ chất nhiễm sắc nhân tan 19 Nêu biểu việc mẫu mô bị sống - Bị cứng xung quanhh bị mềm Cắt mỏng cắt lạnh Mỗi lát cắt mỏng u cầu có kích thước - 5mcm hay 5um Có loại máy cắt mỏng nêu số đặc điểm loại cắt mỏng - Có hai loại máy cắt mỏng o Đặc điểm chung có thân máy, đế giữ dao lưỡi dao, đầu lốc - Máy cắt mỏng dạng quay o Có tay quay o Lưỡi dao cố định đầu b lốc di chuyển lên xuống theo chiều dọc o Là loại máy sử dụng nhiều o Gồm có máy tự động thủ công - Máy cắt mỏng dạng trượt o Đầu lốc cố định o Đế giữ Lưỡi dao di chuyển cắt theo chiều ngang o Việc cắt hoàn thành đầu lưỡi dao trở vị trí ban đầu o Được dùng để cắt lốc celloidin parafin có kích thước lớn Yếu tố định chất lượng lát cắt - Góc cắt - Góc tối ưu 5-10 độ - Tuỳ loại máy sễ có góc cắt tối ưu khác - Để biết góc cắt tối ưu cần phải o Cắt thử, phát sai sót cân chỉnh cán dao Nêu số đặc điểm lưỡi dao sử dụng - Lúc trước sử dụng loại dao sử dụng mòn mài lại - Nay sài loại dao dùng mịn bỏ - Gồm có hai loại lưỡi dao thấp cao - Cạnh sắc lưỡi dao phủ lớp làm giảm ma sát giúp cạnh sắc trơn lưỡi dao bền Các thông số lưỡi dao thấp lưỡi dao cao - Thấp : 76-8-0.25 - Cao: 76-14-0.3 Các bước trình cắt mỏng - Cắt thơ trước để bọc lộ mặt cắt Độ dày lát cắt 15-30um - B2: ngâm ướt lốc vào thau nước đá vụn - B3: gắn lốc vào máy, khéo léo để gọt thêm mặt lôc - B4: cắt mỏng nhẹ nhàng tạo dải ruy băng - B5: quan sát loại bỏ lát cắt bị lỗi, chọn lát cắt đẹp - B6: chuyển lát cắt qua bể nước Dùng kẹp đầu ruy băng que gỗ đầu cuối ruy băng Bể nước có nhiệt độ nhỏ nhiệt độ nóng chảy parafin 5-10 độ