Nghiên cứu phát hiện đột biến gen idh1 trên bệnh nhân u nuyên bào thần kinh đệm

Bộ GIÁO DỰC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TÉ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BÙI THANH Tủ NGHIÊN củtl PHÁT HIỆN ĐỘT BI ÉN GEN mill TRÊN BỆNH NHÂN u NGUYÊN BÀO THẢN KINH ĐỆM Ngành đạo tạo : Cư nhản Kỳ thuật xét nghiệm y học Mã ngành : 7720601 KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP củ NHẢN Y KHOA KHÓA 2019 2023 Người hướng đần: BSNT PHẠM THỊ HƯƠNG TRANG H Ni - 2023 -ãc ô4 ugc V Hl LỜI CẤM ơx Trước tiên, với lất cá lòng kinh trọng bict cm sâu sấc, cho phép em xin gửi lòi cám ơn tới BSNT Phạm Thị Hương Trang - Trang tàm Kiêm chuẩn chất lượng xét nghiệm y học - Trường Dại học Y Hà Nội tận tình hưởng dần, chi báo cho em nhùng kiến thức, kinh nghiệm quỷ báu đồng hãnh vả tạo điều kiện lốt dê cm có thè hồn thành khóa luận tổt nghiệp Em xin gưi lời cám ơn tới Ban Giám hiệu, Phòng Quan lỷ dão tạo Đại học - Trường Đại học Y Hà Nội Ban giám đốc khoa Giãi phầu bệnh - Bệnh viện Hừu Nghị Việt Dức dà giúp đờ tạo điều kiện cằn thiết đẽ cm hồn thành khóa luận Em xin gưi lời cam ơn đến thầy cô Bộ mơn Hóa sinh Lãm sàng- Khoa Kỳ Thuật Y Học - Trưởng Đại học Y Hà Nội anh chị Trung tâm Kiêm chuẩn chắt lượng xét nghiệm y học dã giúp dỡ cm tận tinh dạy dỏ truyền dạt nhùng kiến thức quý báu tạo điều kiện thuận lợi cho cm quã trinh hục tập nghiên cửu Cuối cùng, em xin gưi biết ơn tới gia dinh, bạn bè dã dộng viên, chia se cỗ vù em suốt thời gian qua Hà Nội tháng nâm 2023 Sinh viên Bùi Thanh Tủ «4 ugc V Hl LỊÌ CAM DOAN Kính gũi: - Phỏng Quân lý Đảo lạo ’ Trường Đại học Y Hả Nội - Hội đồng chấm thi khóa luận lốt nghiệp Em Bùi Thanh Tú - Sinh viên tố 29 lớp Y4XN - Khoa Kỳ Thuật Y Hục - Trường Đại hục Y Hà Nội xin cam đoan: I Dây lã khóa luận ban thân em thực hướng dẫn cua BSNT Phạm Thị Hương Trang Các số liệu thông lin nghiên cứu hoàn loàn trung thực, chinh xác khách quan Em xin chịu hỗn tồn trách nhiệm nhùng cam đoan Hà Nội tháng nãm 2023 Sinh viên Bùi Thanh Tú -c ^H «4 ugc V Hl MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ MÉT TẢT DANH MỤC HÌNH DANH MỤC BÁNG TĨM TAT ĐẬT VÁN DÈ CHƯƠNG 1: TÔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Dịch tề học cua u nguyên bão thần kinh đệm 1.2 Nguyên nhân vả đường hình thành cua ƯNBTKĐ -1 1.2.1 Các yếu tổ nguy 1.2.2 Con dường hình thành ƯNBTKĐ 1.3 Phản loại u nguyên bào thần kinh đệm 1.4 Chân đoán u nguyên bào than kinh đệm 1.4.1 Triệu chứng lâm sàng 1.4.2 Chấn đoán cận lâm sàng 1.5 Điều trị u nguyên bào thần kinh đệm 1.5.1 Điều trị triệu chúng 1.5.2 Phẫu thuật 1.5.3 Điều trị dự phòng tãi phát 1.6 Cơ chế phân tư cua gen IDHỈ ƯNBTKĐ 1.6.1 Đục diêm cấu trúc 1.6.2 Vai trò sinh học 1.6.3 Đột biển gen IDH1 10 1.7 Vai trỏ cùa dột biến gen IDHi thực hành làm sàng 12 1.7.1 Vai trị chấn đốn phân loại khối u 12 1.7.2 Vai trò liên lượng sống cỏn đáp ứng với diều trị 13 1.8 Kỳ thuật PCR kỹ thuật giai trinh tự Sangcr phân tích gen IDH1 13 1.8.1 Kỳ thuật PCR 13 1.8.2 Kỳ thuật giai trinh tự gen Sanger 15 -c ^H «4 ugc V Hl CHƯƠNG 2: ĐÓI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHẤP NGHIÊN củv 17 2.1 Đối tượng nghiên cứu 17 2.2 Tiêu chuẩn lựa chọn loại trừ 17 2.3 Các bước tiến hành nghiên cửu 18 2.4 Thời gian địa điềm nghiên cửu 19 2.5 Phương pháp nghiên cứu 19 2.5.1 Thiết ke nghiên cứu 19 2.5.2 Cờmảu nghiên cứu 19 2.6 Dụng cụ trang thiết bị hóa chất .19 2.6.1 Dụng cụ 19 2.6.2 Thiết bị 19 2.6.3 Hỏa chất 20 2.7 Quy trinh kỳ thuật 21 2.7.1 Quy trinh tách chiết DNA vã kiêm tra chất lượng DNA sau tách 21 2.7.2 Quy trinh PCR vã điện di kiểm tra sản phẩm 23 2.7.3 Xác định kiêu gen cua mầu bảng giai trinh tựgcn 25 2.8 Xử lý số liệu 25 2.9 Dạo dức nghiên cứu 25 CHƯƠNG 3: KÉT QUÁ NGHIÊN cút’ 26 3.1 Kết tách chiết DNA, kiêm tra nồng độ vã tinh DNA 26 3.2 Kẻt tối ưu hóa nhiệt độ gắn mồi 27 3.3 Kết điện di sán phẩm PCR 28 3.4 Ket qua giai trinh tự gen 29 3.5 Kết qua phát dột biến gen IDH1 29 CHƯƠNG 4: BẢN LUẬN 30 4.1 Kết tách chiết DNA 30 4.2 Kết PCR khuếch dại gen 31 4.3 Kct qua giãi trinh tự gen 34 KẾT I.lJẶN 35 TI LIU THAM KHO -ãc ^H ô4 ugc V Hl DANH MỤC CẤC CH VIẾT TÁT Têu viết tắt Tên đầy (lú Y nghía UNBTKĐ u nguyên bão thằn kinh đệm UTBTKĐLT tề bào thần kinh đệm lan toa CBTRƯS EGFR Central Brain Tumor Trung tâm quăn lý u não Hoa Registry of the United state Kỳ Epidermal Growth Factor Thụ the yen tồ tâng trường Receptor biêu bi Enzym Isocitrate IDIỈ1 Isocitrate Dehyrogenase TP5Ỉ Tumor Protein 53 Gen ức die khối u TP53 a-KG a - Cetoglutarate a D-2-HG D-2-hydroxyglutarate D-2-hydroxyglutarate LDIỈA Lactate dehydrogenase A Lactate dehydrogenase A OS overall survival Thời gian sổng tổng the PFS progression - free survival Dehyrogenase Cetoglutarate Thời gian sống không tiền MRI Magnetic Resonance Imaging PCR Polymerase Chain Reaction TMZ Temozolomide DNA Deoxyribonucleic acid dNTP Deoxyi ibonucleotid-5triphosphate triphosphate -•c Chụp cộng hướng từ hạt nhân Phan ứng khuếch đại chuồi polymerase Thuốc Temozolomide DiDeoxyribonucleotid-5- đdNTP triển «4 ugc V Hl H& DANH MỤC HĨNH Hiiứi 1.1 Hai dưỡng hình thành UNBTKĐ Hình 1.2 Vị trí cùa 1DHI NST Hĩnh 1.3 1DH xúc tãc tạo CO2 ÍI-KG từ Isocitrate 10 Hình 1.4 Q trinh chuyền hóa cua IDH binh thưởng vã độtbiến .12 Hĩnh 1.5 Nguyên lý phan úng PCR 14 Hình 1.6 Minh họa giai trinh tự gen máy tự dộng 16 Hĩnh 2.1 Chu triiìỉi nhiệt phán ứng PCR 24 Hình 3.1 Kct quà OI) cùa mẫu DNA tách chiết 27 Hình 3.2 Kết cua chạy diện di sàn phẩm PCR theo gradientnhiệt độ 27 Hình 3.3 Kết qua điện di san phàm PCR đoạn cxon gen IDH1 bệnh nhân ƯNBTKĐ 28 Hình 3.4 Kểt giai trinh tự đoạn exon cua gen IDH1 chứa dột biển điếm C.G395A 29 -ãc ô4 ugc V Hl DANH MỤC BÁNG Bang 2.1 Đặc diem mồi Cua phân ứng PCR 20 Bàng 2.2 Thành phần tham gia phàn ứng PCR 23 Bang 3.1 Báng kết quà đo nồng độ DNA độ tinh với 20 mầu nghiên cúu 26 Bâng 3.2 Kct qua phát dạng dột biển diêm gen IDH1 29 -ãc ô4 ugc V Hl TểM TT Tiờu dề: 'Nghiên cữu phát (tột biền gen IDH1 bệnh nhàn II nguyên bào thân kinh đệm Tóm tắt: nguyên bào thần kinh đệm khối u ác tinh phô biến Dột biến gen IDH1 khăm phá quan trọng mang đến hiểu biết che sinh bệiúi học có vai trơ quan trọng chẩn đốn, phân loại, tiên lượng điều trị bệnh nhân mắc ƯNBTKĐ Mục tiêu cua nghiên cứu xác định đột biền gen IDỈỈỈ bệnh nhân UNBTKĐ Đổi lượng nghiên cứu: 20 mẫu mỏ đúc paraffin cua bệnh nhãn mắc ƯNBTKĐ sau phẫu thuật bệnh viện Hửu Nghị Việt Dức Phương pháp nghiên cửu nghiên củu mò tá cát ngang Tien hãnh thu thập mầu mò paraffin cua bệnh nhân, tách chict DNA từ mẫu mô thực PCR, điện di kiêm tra chất lượng sàn phàm PCR sán phàm PCR dạt tiêu chuân sỏ dược tinh vã giai trinh tự gen máy giái trình gen tự dộng Kết nghiên cứu: phát trường hợp có đột bicn gen IDH1 tống số 20 mầu nghiên cứu đột biến thuộc loại thay the P-R132H (C.G395A) Từ khóa: "U nguyên bão thần kinh đệm” "Glioblastoma, "Dt bin gen IDHI, NBTK "IDH1 -ãc ô4 ugc V Hl DẶT VÁN DÈ nguyên bào thần kinh đệm - Glioblastoma (ƯNBTKD) dược coi lã khói u nghiêm trụng cùa hệ thống thần kinh trung ương, tái phát mang tinh hệ thống tiên lượng xẩu với ty lệ sống sỏt sau nảm lã 7.2% ’ Thời gian sống trung binh cho bệnh nhãn mắc ƯNBTKD chi 15 thăng, ca phẫu thuật cẳt bo khối u an tồn diều trị tích cực hịa trị xạ trị bơ trợ2 Mặc dù dây khối u không phô biến, bệnh lý thẩn kinh nghiêm trọng ban chất không chừa khói cua khối u góp phần gãy gánh nặng xả hội y tề cao Đen nay, UNBTKĐ vần loại ung thư khó diều trị lựa chọn diều trị dã thiện Do việc tìm cản nguyên, chc bệnh sinh vã trinh bệnh học cua ƯNBTKĐ để có thê can thiệp chỉnh xac hiệu qua diều rắt cần thiết Hầu het UNBTKD lã nguyên phát Chi khoang 5% u nguyên báo thần kinh đệm dược chẩn đốn ỡ bệnh nhân có u thần kinh đệm mức độ thấp trước dó dà lien tricn thành u nguyên bão thẩn kinh đệm thử phát khoang thời gian nhiều năm Cà hai loại coi lã không thê phân biệt ve mặt mô bệnh học, có kliac biệt rõ ràng thay dổi phàn tử5 Các nhà khoa học dà tim thấy biền đỗi cua sỗ gen EGFR, TP53 IDỈỈÌ dỏ IDỈỈÍ có vai trị quan trọng tiên lượng bệnh4 Dột biến IDHỈ chu yếu dược xác định UNBTKĐ thử phát, với ti lệ dột biến chiêm hon 70% trường hụp Trong đột biến chi tim thấy lẽ tẽ ƯNBTKD nguyên phát5 Trong vãi nghiên cứu dột biến gen Isocitrat dehydrogenase (IDH1) dà chứng minh cỏ vai trô quan trọng cho bác sĩ lâm sàng chân đốn phân loại khói u dược xem xét yếu tố tiên lượng dáp ứng diều trị vã thin gian sống cua bệnh nhân UNBTKĐ IDHỈ đột biến làm cho hoạt dộng enzyme bị thay dối dần dền tống hợp 2- -•c «4 ugc V Hl 28 So sánh kct qua khao sát mức nhiệt dộ gắn mồi có băng sáng, rõ nét, khơng cị bâng phụ, diều kiện thi nhiệt dộ gắn mồi 54°c có dộ dậm sảng rị nét nhắt Chủng tơi lựa chọn 54°c nhiệt dộ gan moi 3.3 Kết quà diện di sãn phẩm PCR Tien hành thực PCR cho mẫu mô nhiột độ gần mồi 54°c kềt quà diộn di sán phẩm PCR sau: M G.1 G.2 G.3 G-4 G.5 G.6 G.7 G.8 G.9 G.10 G.11 (♦) (-)