NHỮNG THỦ THUẬT CẦN BIẾT KHI THỰC TẬP DƯỢC LÝ ❖ MỤC TIÊU Sau khi kết thúc bài thực tập, sinh viên có thể Thực hiện đúng các thao tác trên thú và thực hành các đường cho thuốc vào cơ thể thú vật Biết c[.]
NHỮNG THỦ THUẬT CẦN BIẾT KHI THỰC TẬP DƯỢC LÝ ❖ MỤC TIÊU Sau kết thúc thực tập, sinh viên có thể: - Thực thao tác thú thực hành đường cho thuốc vào thể thú vật - Biết cách tính tốn pha chế dung dịch thuốc với yêu cầu cụ thể BẮT THÚ VẬT RA KHỎI CHUỒNG - Chuột nhắt: nắm đuôi chuột, nhẹ nhàng để chuột lên vĩ lưới, kéo nhẹ chuột phía sau để chuột bám vào vĩ lưới Tránh làm mạnh tay, gây kích thích chuột, làm chuột lên ĐÁNH DẤU THÚ VẬT - Trong thủ nghiệm sinh học, thử nghiệm độc tính cần phải dùng nhiều thú vật, phải đánh dấu chúng để tránh nhầm lẫn quan sát - Nếu số lượng chuột ít, dùng bút lơng đánh vịng trịn chuột - Nếu số lượng chuột nhiều, dùng acid picric để dánh dấu lên thân chuột vị trí đầu, lưng, đi, chân phải trước, chân phải sau, chân trái trươc, chân trái sau Ví dụ Đầu Lưng Đuổi Chấn trái trước Chân trái sau Chân phải trước Chân phải sau Đầu + lưng Đầu + đuổi 10 Đầu + chân trái trước 11 Đầu + chân trái sau 12 Đầu + chân phải trước 13 Đầu + chân phải sau 14 Lưng + đuổi 15 Lưng + chân trái trước 16 Lưng + chân trái sau 17 ………………………………… CÂN THÚ VẬT - Chuột cống, chuột nhắt, chuột lang: Cho vào bocal dùng cân điện tử để cân CÁC DỤNG CỤ THƯỜNG DÙNG - Bocal : chuột thử nghiệm, rác, xác thú vật chết cho vào bocal riêng biệt Không để chung thú vật thử nghiệm với thú vật chết rác - Vĩ lưới : dùng để giữ chuột chuẩn bị cho dùng thuốc hạn chế việc bị chuột cắn Dao mổ, kéo, kẹp (pince), kim gút, mâm nhựa, … dùng cho việc phẫu thuật - Kim tiêm, ống tiêm dùng cho việc đưa thuốc vào thể thú vật - Chuột nhắt dùng : o Kim số 25-27, có chiều dài từ ½-1 inch (1inch=25,4mm) o Ống tiêm: dung tích khơng q 1mL, có khắc độ 0,1-0,01 mL Có thể dùng ống tiêm loại thường dung tích 1mL hay 2mL - Cách cầm kim : mặt cắt chéo đầu kim ln ln nằm phía đưa vào thể thú PHƯƠNG CÁCH ĐƯA THUỐC VÀO CƠ THỂ - Chuột nhắt: đặt chuột lên vĩ sắt, tay phải nắm đuôi Tùy theo đường cho thuốc vào chuột mà có cách bắt giữ thích hợp 5.1 Bơm vào dày vào chuột nhắt: cho uống ( PO = per os) - Một tay nắm chuột, ngón ngón trỏ tay lại nắm chặt phần da gáy lỗ tai chuột, đặt chuột nằm ngữa lòng bàn tay, ngón cịn lại nắm da lưng chuột giữ thân chuột thẳng - Dùng ống tiêm kim đặc biệt (ống dò), cho kim đặc biệt vào mõm chuột, đẩy nhẹ từ từ vào thực quản Khi thấy ống nằm vị trí (chuột có cử động nuốt) bơm thuốc vào (0,20,5mL) - Khi cho chuột uống, chưa rút kim mà chuột chết kim vào nhầm khí quản làm chuột ngạt thở, gây chết tác động thuốc 5.2 Tiêm da chuột nhắt (SC: sous cutané) - Cho chuột nằm vĩ sắt Kẹp ngón áp út ngón út Dùng ngón ngón trỏ kéo nếp da lưng (phía gần đi), bôi cồn để lộ phần da muốn tiêm (phần da nằm đầu ngón tay trỏ) Mặt vát kim hướng lên trên, đâm kim vào song song mặt lưng, bơm thuốc Nghiêng kim góc 45 , rút kim để dung dịch tiêm không bị trào ngược trỏ lại Khơng dùng gịn chấm vết tiêm làm cho dung dịch tiêm trào ngược trở lại - Có thể tiêm đến mL Nếu tiêm có u phẳng lên 5.3 Tiêm da chuột nhắt ( ID : intradermique) - Tương tự tiêm da, không đâm sâu, đâm vào phần da - thường tiêm lịng bàn chân, tiêm đến 0,05mL Nếu tiêm thấy u lồi 5.4 Tiêm bắp thịt chuột nhắt (IM : Intramuscular) - Kim số 26 loại ngắn ½ inch - Cần người giúp kéo chân sau, giữ yên chuột Đâm kim vào đùi (mặt ngoài, tránh đâm sâu, chạm vào xương, rút kim từ từ), tiêm đến 0,5mL 5.5 Tiêm tĩnh mạch chuột nhắt (IV) - Đặt chuột vào hộp đặc biệt để ló ngồi hay vĩ sắt, kéo lên Ta chà mạnh đuôi với cồn 90 , hỗn hợp cồn đốt+xylol ngâm đuôi phút nước ấm 45 để làm trương tĩnh mạch đễ tiêm - Đặt định tiêm lên ngón trỏ trái, giữ với ngón ngón Nếu tiêm tĩnh mạch ta thấy rõ ràng dung dịch đẩy máu tĩnh mạch, tiêm chậm - Chuột nhắt : kim số 27 Có thể tiêm đến 0,5mL 0 5.6 Tiêm phúc mô chuột nhắt (IP) - Giữ chuột cho uống kẹp ngón út Tiêm ½ phần sau bụng (tránh đường bụng) Tiêm làm thời kỳ : - Để chuột nằm ngang, cầm nghiên kim đâm vào da, trút đầu chuột xuống đất để quan dịch phía tránh tổn thương - Ấn thẳng kim thêm vào lối 2-3mm để xuyên qua vào phúc mô Nếu không gặp trở ngại tiêm 1mL Trường hợp ngược lại (đụng vào quan) phải rút kim chút 5.7 Cách pha dung dịch để tiêm : 5.7.1 Từ hóa chất Ví dụ: Hãy pha dung dịch đủ để tiêm cho 10 chuột nhắt có trọng lượng trung bình 20g (20±2g) từ cloralhydrat dạng tinh thể Biết điều kiện tiêm 0,2mL/10g chuột liều tiêm 300mg/kg chuột Để từ hao hụt, pha thêm ml Gợi ý: - Liều tiêm 300mg/1000 g chuột Điều kiện tiêm: 0,2 mL/10g chuột ↔ 20 mL/1000 g chuột 20 mL/1000 g chuột Như 1000g chuột cần 300mg hoạt chất pha vào 20ml dung môi 🡪 nồng độ dung dịch cần pha 300mg/20ml = 15mg/ml - Tổng khối lượng chuột 10 *20 = 200 g - Thể tích lý thuyết cần pha: 200g * 0,2ml/ 10g = ml Hao hụt 2ml 🡪 thể tích cần pha + = 6ml - Khối lượng Cloralhydrat cần cân: *15 = 90 mg Kết luận: Cân 90mg cloralhydrat hịa tan 6mL dung mơi 5.7.2 Từ dung dịch Ví dụ : Pha dung dịch đủ để tiêm cho 10 chuột nhắt trắng nặng trung bình 18-22g (20±2g) từ ống tiêm Newbutal chứa 250mg pentobarbital natrium/5mL nước vô trùng Biết điều kiện tiêm 0,1mL/10g chuột nhắt liều tiêm 50mg/1kg chuột Để dự phòng hao hụt, pha dư thêm 50% Gợi ý: - Nồng độ dung dịch ban đầu: 250mg/5ml = 50mg/ml - Liều tiêm 50mg/ 1000g chuột Điều kiện tiêm 0,1 ml/10g ↔ 20 mL/1000 g chuột 10 ml/1000 g chuột Như 1000g chuột cần 50mg hoạt chất pha vào 10ml dung môi 🡪 nồng độ dung dịch cần pha 50mg/10ml = 5mg/ml - Tổng khối lượng chuột: 10 * 20 = 200g - Thể tích lý thuyết cần pha: 200g * 0,1ml/10g = 2ml 🡪Thể tích thực tế cần pha: + * 50% = 3ml - Ta có cơng thức: V1*C1 = V2 * C2 🡪Thể tích dung dịch ban đầu cần hút: * 3/ 50 = 0,3ml Kết luận: Hút 0,3ml dung dịch ban đầu, thêm (3 – 0,3 = 2,7) ml dung môi 5.7.3 Trường hợp pha nhiều liều khác Trong thử nghiệm độc tính ta có nhiều liều khác cần phải tiêm vào thú vật xem phản ứng hoàn toàn hay bất ứng Nếu cân thuốc riêng lẽ cho liều phần nhiều thời gian khơng xác đơi dùng liều nhỏ, dư vài microgram(µg) cần phải pha chế dung dịch mẹ trước từ pha dung dịch chứa liều thuốc mong muốn Ví dụ : Pha thuốc A cho lô chuột, chuột nặng khoảng 20 g Liều tiêm lô 250, 350,450, 550 mg/ kg Điều kiện tiêm 0,2 ml/10g Để dự phòng hao hụt, lơ pha dư thêm 150% thể tích cần dùng Gợi ý: - Nồng độ cần pha lô : C1 = 250/20 = 12,5 mg/ml C2 = 350/20 = 17,5 mg/ml C3 = 450/20 = 22,5 mg/ml C4 = 550/20 =27,5 mg/ml - Vì pha nhiều nồng độ khác nên để tránh sai sót tiết kiệm thời gian, ta pha dung dịch mẹ sau tiếp tục pha thành dung dịch dành cho lơ chuột Chọn dung dịch mẹ có nồng độ 100mg/kg - Khối lượng chuột lô : * 20 = 80g 🡪Thể tích lý thuyết cần : 80*0,2/10 = 1,6ml 🡪Thể tích cần pha cho lơ : 1,6 + 1,6*150% = 4ml - Thể tích dung dịch mẹ dung môi cần hút cho lô chuột : Lô Lô Lô Lô C cần (mg/ml) 12,5 17,5 22,5 27,5 V cần (ml) 4 4 C mẹ (mg/m) 100 100 100 100 V mẹ cần hút (ml) 0,5 0,7 0,9 1.1 V dung môi (ml) 3.5 3.3 3,1 2,9 - Tổng thể tích dung dịch mẹ cần : 0,5 +0,7 + 0,9 + 1,1 = 3,2ml, để dự phòng hao hụt ta pha 4ml Nồng độ dung dịch mẹ 100mg/ml 🡪 khối lượng A cần cân để pha dung dịch mẹ : * 100 = 400mg - Kết luận: Cân 400mg A, thêm ml để có dung dịch mẹ có nồng độ 100mg/ml Hút 0,5 ml dung dịch mẹ, thêm 3,5 ml dung mơi để có 4ml dung dịch cho lô Hút 0,7 ml dung dịch mẹ, thêm 3,3 ml dung mơi để có 4ml dung dịch cho lô Hút 0,9 ml dung dịch mẹ, thêm 3,1 ml dung mơi để có 4ml dung dịch cho lô Hút 1,1 ml dung dịch mẹ, thêm 2,9 ml dung mơi để có 4ml dung dịch cho lô VÀI HƯỚNG DẪN VỀ THỬ NGHIỆM TRÊN ĐỘNG VẬT CÁC LƯU Ý KHI THỬ MGHIỆM TRÊN ĐỘNG VẬT - Chủng thú vật - Giới tính - Trọng lượng - Đường hấp thu (uống PO, tiêm da SC, tiêm bắp IM, tiêm phúc mô IP, tiêm tĩnh mạch IV) - Liều lượng thuốc sử dụng - Ngày dùng thuốc CÁC PHẢN ỨNG PHẢI GHI CHÚ KHI THỬ NGHIỆM TRÊN THÚ - Tiềm thời thời gian tính từ lúc bắt đầu cho thuốc vào thể đến thuốc bắt đầu có hiệu lực - Vận tốc tác động tốc độ để đạt phản ứng cụ thể sau dùng thuốc - Thời gian tác động thời gian tính từ lúc thuốc bắt đầu có hiệu lực đến thuốc khơng cịn hiệu lực - Thời gian tác động trung bình trị số trung bình thời gian tác động tìm nhóm - Cường độ tác động mức độ phản ứng xảy thú sau dùng thuốc Cường độ tác động tối đa phản ứng tối đa xảy thú sau dùng thuốc MỘT VÀI PHẢN ỨNG CÓ THỂ XẢY RA 3.1 Khi dùng thuốc ngủ, phản ứng xảy theo trình tự sau: Thay đổi cử động tổng quát Thất điều Ngủ Mất phản xạ co rút chân Mất phản xạ thăng Mất cảm giác đau Mất phản xạ đau Các giai đoạn phục hồi - Thay đổi cử động tổng quát: liếm lông, đứng hai chân, nhịp thở thay đổi, di chuyển nhanh chậm,… - Chứng thất điều: thú di chuyển lảo đảo người say điều hòa vận động thể - Trạng thái ngủ: Khi thú nằm yên không cử động, ta đặt nhẹ trước mũi thú đầu que hay bút chì, đưa lên xuống mà khơng có phản ứng hít, ngửi, quay đi,… gọi ngủ Lưu ý: khơng chạm vào râu chuột Chuột mở mắt ngủ - Phản xạ co rút chân: Khi thú ngủ, tiến hành thử phản xạ co rút chân Bình thường vị trí nghỉ, kéo hai chân thú phía sau, phản xạ nhanh chóng, co rút chân vị trí cũ Nếu sau giây mà khơng rút chân xem phản xạ co rút chân - Phản xạ thăng bằng: Phản xạ thăng dùng để đánh giá tính gây mê hay gây ngủ sâu liều mạnh thuốc ngủ hay thuốc mê Khi thú phản xạ co rút chân, tiến hành thử phản xạ thăng Bình thường, lật vật nằm nghiêng hay ngửa, nhanh chóng lật úp lại, sau giây khơng lật úp lại xem phản xạ thăng - Phản xạ đau: Sau phản xạ thăng vài phút, ta thử phản xạ đau Khi dùng kim đâm nhẹ vào chuột, bình thường phản ứng tỉnh lại: bỏ chạy quay lại cắn vào đầu kim không tỉnh mà rung giật mạnh đuôi Chuột xem cảm giác đau nằm yên, không tỉnh lại mà rung giật mạnh đuôi Chuột xem phản xạ đau nằm yên đuôi không rung giật 3.2 Khi dùng thuốc khác, phản ứng xảy ra: - Chứng run - Co giật hồi - Co giật kiểu phong đòn gánh - Thay đổi nhịp tim - Thay đổi nhịp hô hấp - Mất phản xạ mí mắt - Dãn hay thu hẹp - Phản ứng chảy nước mắt - Phản ứng chảy nước bọt - Phản ứng dựng lông - Phản ứng Straub (dựng đuôi) - Tiêu chảy - Tiểu tiện - Chứng bì (tím tái tai, chân, niêm mạc) - Chết cấp thời: thời gian từ lúc tiêm dược phẩm đến lúc chết mà vật chưa tìm lại phản xạ thăng Sự chết cấp thời xảy lúc thực tập tiêm nhanh TÁC ĐỘNG ĐỐI KHÁNG ❖ Mục tiêu : Sau kết thúc thực tập, sinh viên : - Nhận mơ tả phản ứng co giật tượng phong đòn gánh xảy chuột bị kích thích sau tiêm schychnine sulfat - Quan sát, theo dõi mức độ phản ứng khác xảy cho chuột cho chuột dùng thuốc ngủ - Có khả đo đường kính thỏ nhận tác dụng atropine pilocarpin mắt thỏ phản ứng phụ khác - Biện luận kết kết luận tác động đối kháng strychnine sulfate barbituric chuột nhắt atropine pilocarpin mắt thỏ NGUYÊN TẮC - Hai dược phẩm đối kháng hoạt tính hai dược phẩm làm giảm tiêu hủy tác động dược phẩm Trong thực tập quan sát : - Tác động đối kháng strychnine sulfat barbituric chuột nhắt - Tác động đối kháng atropine pilocarpin mắt thỏ VẬT DỤNG 2.1 Thử nghiệm chuột nhắt - ống tiêm 1mL+kim số 26 - Bocal thủy tinh đựng chuột - chuột nhắt có trọng lượng xấp xỉ nhau, phái, lứa tốt Dung dịch strychnine sulfat 0.019% (0,019g/100mL) - Dung dịch barbital sodium 1,5% (1,5g/100mL) - Gòn, cồn 2.2 Thử nghiệm Thỏ - ống nhỏ mắt - Dung dịch atropine sulfat 1% - Dung dịch pilocarpin 1% - Thước kẽ miếng kính (lame) có kẽ số dùng đo Thỏ - Hộp đựng thỏ - Kéo nhỏ KỸ THUẬT 3.1 Thử nghiệm chuột nhắt - Cân chuột, đánh dấu Đặt chuột vào bocal riêng để theo dõi - Chuột A : Tiêm da dung dịch Strychnin sulfat liều 1,9mg/kg Kích thích nhẹ chuột tiếng động gõ nhẹ vào bocal Quan sát ghi nhận thời điểm xảy phản ứng co giật nhẹ, mạnh mô tả tượng phong địn gánh - Chuột B: Tiêm qua phúc mơ dung dịch barbital sodium 150mg/kg (hoặc Pentobarbital sodium 50mg/kg) Quan sát ghi nhận thời điểm xảy phản ứng thất điều, ngủ, phản xạ co rút chân, phản xạ thăng bằng, cảm giác đau phản xạ đau Xác định tốc độ tác động, thời gian tác động cường độ tác động tối đa - Chuột C: Chuẩn bị sẵn ống tiêm chứa dung dịch thuốc strychnine sulfat 1,9mg/kg ống tiêm chứa dung dịch thuốc barbital sodium 150mg/kg Để phòng ngừa tác động sulfat strychnine, tiêm qua đường phúc mô 150mg/kg barbital sodium Liền sau tiêm thêm sulfat strychnine 1,9mg/kg da Ghi nhận phản ứng xảy chuột C gây strychnin sulfat barbital sodium So sánh phản ứng xảy chuột C với chuột A B - Chuột D: Tiêm da sulfat strychnine 1,9mg/kg Khi thấy xuất triệu chứng co giật (dùng kẹp gõ nhẹ vào thành bocal, nghe tiếng động chuột bị co giật) điều trị cách tiêm qua phúc mô 150mg/kg barbital sodium 50mg/kg pentobarbital sodium - So sánh phản ứng xảy chuột D với phản ứng chuột C 3.2 Thử nghiệm thỏ - Cố định thỏ đựng hộp thỏ, đặt thỏ nguồn ánh sáng - Cắt lông mi thỏ, đo đường kính mắt thỏ - Mắt trái nhỏ giọt NaCl 0,9%, mắt phải nhỏ giọt Atropin 1% Đo đường kính cách khoảng phút lần 25 phút - Mắt phải mắt trái: nhỏ vào mắt thỏ, mắt giọt pilocarpin 1% Đo đường kính phút lần 30 phút - So sánh tác động atropine pilocarpin mắt thỏ tác động thuốc mắt phải