K
BẢO CÁO TÔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CÚU KHOA HỌC — 7 ]
CẤP QUẢN LÝ ĐỀ TÀI: CẤP VIỆN
Tên đề tài:
| XAC DINH DO NHAY VÀ ĐỘ ĐẶC |
| HEU CUA ELISA PHAT HIEN
KHANG NGUYEN TRONG CHAN
Trang 2
BỘ Y TẾ
VIỆN SỐT RÉT-KÝ SINH TRÙNG-CÔN TRÙNG-TRUNG ƯƠNG
Bao cao dé tai
XÁC ĐỊNH ĐỘ NHẠY VÀ ĐỘ ĐẶC HIỆU CỦA ELISA
PHÁT HIỆN KHÁNG NGUYÊN TRONG CHAN DOAN
BỆNH NGƯỜI NHIỄM AU TRÙNG SAN LON
Chủ trì đề tài: Bs Đặng Thị Cẩm Thạch
Người thực hiện: CN Nguyễn Bá Nền, Bs Vũ Thị Nhung,
NguyễnThiên Hương, Đoàn Thị Hạnh Nguyên, Phạm Thị La
Cấp quản lý: Viện sốt rét-Ký sinh trùng-Côn trùng-Trung
ương
Hà Nội tháng 3 năm 2003
Trang 3LDAT VAN DE:
Bệnh ấu trùng sán lợn là bệnh lan truyền chung giữa người và động vật
Bệnh phân bố giải rác khắp nơi nhưng phổ biến là các địa phương có tập quán ăn thịt lợn sống, tái Bệnh được chẩn đoán xác định qua sinh thiết nang sán ở dưới
da Song, đối với các trường hợp nang cư trú tại não hoặc các cơ quan khác thực
sự khó chấn đoán vì vậy chỉ có thể phát hiện chẩn đoán bằng phương pháp chẩn
đoán hình ảnh(CT scan sọ não) Nhưng phương pháp này đất tiền và nang thực sự
khó phát hiện nếu không nằm trong các lớp cất được nhìn thấy trong phim Như
vậy nếu phương pháp chẩn đoán huyết thanh học có độ nhậy và độ đặc hiệu cao sẽ giải quyết được vấn để khó khăn trong chấn đoán bệnh Nghiên cứu xác định kháng thể bệnh ấu trùng sán lợn bằng sử dụng kháng ngun thơ (Kháng ngun
tồn phần) để phát hiện kháng thể bệnh ấu trùng sán lợn cũng cho độ nhạy cao
81-94[2] nhưng cũng cho kết quả phản ứng chéo với loại sán khác Ngày nay
với nghiên cứu thử nghiệm chẩn đoán ELISA tại Bắc Ninh đã sơ bộ đánh giá kết
quả xét nghiệm ELISA để tìm kháng nguyên của nang sán lưu hành trên 210
người được lựa chọn ngẫu nhiên tại thôn Tỳ Điện, huyện Lương Tài, tỉnh Bắc
Ninh , 12 người có kết quả dương tính [3] Nghiên cứu này cho thấy vai trò của
xét nghiệm Ag- ELISA sẽ là một phương tiện hữu ích trong nghiên cứu dịch tế và
trong chẩn đoán bệnh nhiềm ấu trùng sán lợn ở người, Với lý do trên, nghiên cứu cần phải tiến hành trên nhiều đối tượng đề khẳng định kết quả của kỹ thuật
Mục tiêu chung:
Để phát triển và đánh giá kỹ thuật chấn đoán xác định sán đây lợn trưởng
thanh Taenia va bénh áu trùng sán lợn nhằm hỗ trợ cho chương trình quốc gia
Trang 4Mục tiêu cụ thể:
-_ Đánh giá kỹ thuật ELISA chẩn đoán nhiễm ấu trùng sán lợn bằng phương
pháp xác định kháng nguyên lưu hành trong máu
-_ Xác định tỷ lệ nhiễm sán dây trưởng thành ở nhóm bệnh nhân nhiễm ấu
trùng sắn lợn và nhóm chứng
2, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CÚU 2.1 Đối tượng và vật liệu nghiên cứu
2,1.1 Tiêu chẩn chọn đối tượng nghiên cứu;
Đối tượng nghiên cứu gồm hai nhóm được lựa chọn với tiêu chuẩn sau :
«_ Nhóm (1): gồm 100 bệnh nhân mắc bệnh ấu trùng sán lợn được chẩn đoán
xác định bằng chụp CT não có hình ảnh tổn thương của bệnh ấu trùng sán
lợn hoặc sinh thiết nang dưới đa có thấy ấu trùng sán Số bệnh nhân này
được điều trị nội trú tại khoa Khám bệnh chuyên ngành
« Nhóm (2) : gồm 100 bệnh nhân được chụp CT scan não kết quả không có hình ảnh tồn thương dạng ấu trùng sán lợn và không có nang dưới da
2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ:
© Nhém (1) Nhóm bệnh nhân:
-_ Những bệnh nhân mắc ấu trùng sán lợn có kết quả sinh thiết nang âm tinh
và không có nang sán trên não
- Những bệnh nhân có nang sán đã vơi hố hồn tồn
© Nhóm (2)Nhóm chứng:
- Những bệnh nhân có hình ảnh nghỉ là ấu trùng sán lợn trên não
~ Xét nghiệm phân cổ trứng sán day
Trang 5Nghiên cứu phân tích đánh giá độ nhạy, độ đặc hiệu của kỹ thuật ELISA phát hiện kháng nguyên ấu trùng sán lợn trong huyết thanh người
2,3 Chất liệu nghiên cứu:
~ Huyết thanh bệnh nhân; Huyết thanh đối chứng dương; huyết thanh đối chứng
am
~ Phân tươi
- Hồ sơ bệnh án của từng đối tượng nghiên cứu (Phụ lục L) 2.4 Thiết bị nghiên cứu:
~ Kính hiển vi soi kí sinh trùng - Máy khuấy từ - Tủ ấm - Tủ sấy 115 °C; máy chuẩn PH ~ Máy nước cất 02 lần - Máy ly tâm 12.000 vòng/ph - Pipe man 20u1, 100041 Pipett Effendor 1000 ml loại 01 kênh; 8 kênh; 12 kênh - ống cffendor 1,5ml, giá đựng ống effendor, đầu côn các loại, giá đựng đầu côn - Đĩa làm phản ứng 2.5 Thuốc và hoá chất:
- Hoá chất xét nghiệm phân: dd Giyccril; Xanh malachite 3%
- BO kit amELISA phat hiện kháng nguyên ấu trùng sán lợn gồm:
+ Kháng thể đơn dòng Mab 1 và Mab 2 do Viện Nhiệt đới Bỉ cung cấp
+ Hoá chất khác: Cacbonat-Bicarbonate buffer, BPS; Twcen 20 ;H;O;; OPD,
dung dich H,SO,
Trang 6- Thuốc magiesulfate loại bột đồng 30gr/gói 2.6 Kỹ thuật nghiên cứu
2.6.1 Thăm khám lâm sàng:
- Bệnh nhân được khám lâm sàng theo mẫu bệnh án
2.6.2 Sinh thiết nang, tìm ấu trùng sán để chẩn đoán xác định
2.6.3 Kỹ thuật chụp CT não : Chụp cắt lớp não vi tính ghỉ nhận kết quả ở 12 lớp
cất
2.6.4 Kỹ thuật xét nghiệm phân: phương pháp Kato-Katz chuẩn của WHO 2001
2.6.5, Phuong pháp điều trị Praziquantel liều 15mg/kg trong ngày đầu Sau đó
uống magiesulfate 30 gr để tẩy đãi san
- Liệu trình điều trị: Praziquantel liều 30mg/kg/24h trong 15 ngầy 2.6.6 Kỹ thuat ELISA
Nguyên tắc phản ứng: Dùng hai loại kháng thể đơn dòng để phát hiện kháng
nguyên huyết thanh bệnh ấu trùng sán lợn
Kỹ thuật tiến hành: theo nguyên tắc phản ứng huyết thanh học: Phủ kháng thể 1-
kháng nguyén- Khang thé 2- ding phan ứng
2.7 Các chỉ số đánh giá
~ Xác định tỷ lệ nhiễm sán đây trưởng thành
- So sánh kết quả chụp CT não và kết quả ELISA
- Đánh giá độ nhạy, độ đặc hiệu của xét nghiệm Ag- ELISA theo công thức
Trang 7AgEELISA” [3LI CI-Seanner+/ Sính thiết 3.12 Tổng cộng đương tính âm tính
đươngtính | TP(dươngtínhthậQ | FP(dương tinh gid) | Ag-ELISA (+) âm tính EN (am tinh gia) TN (âm tính thật) | Ag-ELISA () Tổng cộng | Bệnh nhân ấu trùng Nhóm chứng Tổng số cá thể sản lợn (100) (100) (200) TP Độ nhậy = (a) DO Mn S Toe EH (b) Độ đặc hiệu = —!P IN +P 2.8 Địa điểm nghiên cứu: - Khoa khém bệnh chuyên ngành
-_ Viện Thú Y Quốc gia
- Trung tâm chẩn đoán hình ảnh quận Đống Đa
2.9.Thời gian tiến hành nghiên cứu: Tháng 2năm 2002- 2 năm 2003
3 KET QUA NGHIEN COU
3.1 Đánh giá tỷ lệ nhiễm sán đây trưởng thành Tổng số Có sán trường | Tỷ lệ(%) thành Nhóm bệnh nhân | 75 5 67 Nhóm chứng T5 9 0 Cong 150 IR
Tổng số bệnh nhân được xét nghiện bằng ELISA : 125 Trong đó 75 bệnh nhân
Trang 8Số bệnh nhân nhiễm au tring s4n lợn có sán trưởng thành: 5/75 chiếm 6,5 %
Không tìm thấy sán trưởng thành trong 75 trường hợp nhóm chứng, 3.2 Kết quả xétnghiệm ELISA theo vị trí nang sán ,
Ag- ELISA [BN có nang đưới đa | BN có nang dưới đa|Bn có nang đơn
đơn thuần Yà ở não thuần ở não Téng s6 | Týlệ(%) | Tổng số | Tỷ lệ(%) | Tổng số | Tỷ lệ (%) Duong tinh | 16 213 32 42.6 10 133 Amtinh |4 5,3 2 26,6 11 146 Cộng ˆ 20 ị HE! 21 Tổngcộng 75
Nhận xét: Trong tổng số 75 bệnh nhận nhiễm ấu trùng sán lợn được xét nghiệm
để chẩn đoán phát hiện Ag-ELISA có tỷ lệ dương tính cao (42,6%) ở nhóm bệnh
nhân có nang ở não và dưới da Tỷ lệ xét nghiệm đương tính 20% ở nhóm bệnh
nhân có nang sán đưới da đơn thuần Nhóm có kết quả xét nghiệm đương tính
thấp nhất (13%) là nhóm bệnh nhân chỉ có nang ở não
3.5, Kết quả xét nghiệm ELISA trên bệnh nhân có ấu trùng sán lợn ký sinh don
Trang 9Nhận xét ; Các trường hợp nhiễm ấu trùng sán lợn đơn thuận chỉ ở trên não hoặc ở dưới da với các số lượng khác nhau cho kết quả ELISA khác nhau theo từng nhóm Với số lượng nang dưới da đơn thuần ở nhóm từ 1- 3 nang ELISA đương tính 5/9 = 55%; nhóm có từ 4 nang trở lên ELISA dương tinh 11/11=100% Tuy nhiên với nhóm bệnh nhân có nang sán trên não dơn thuần có kết quả ELISA thấp hơn: nhóm 1-3 nang dương tính 2/7 = 28%; nhóm 4- L9 nang dương tính 3/1 =75 % và nhóm > 10 nang dương tính 6/10 =60% 3.3.Kết quả Độ nhậy và độ đặc hiệu của xét nghiệm Ag-ELISA
Ag-ELISA CT-Scanner+/- Sinh thiết Tong cong |
Duong tinh đương tính thật đương tính giả = | Ag-ELISA (+) =| 57 0 5 Ẩm tính âm tính gi = 18 [âm tnhthật=75 |Ag.ELISA Q © 9 "Tổng cộng Bệnh nhân ấu|Nhóm chứng =[150 ~ | trùng sán lợn =75 | 75 $7 (a) Độ nhậy = — xI00 =76% 57+ 18 75 (b) DE dgchigu= —— x100 = 100% 1540
Trang 104 BẢN LUẬN:
Nghiên cứu đánh giá độ nhạy, độ đặc hiệu của xét nghiệm chẩn đoán bệnh
ấu trùng sán lợn bằng phương pháp Ag- ELSA đã được tiến hành trên 125 bệnh
nhân trong đồ 75 bệnh nhân được chẩn xác định có mắc bệnh ấu trùng sán lợn
dựa trên kết quả chấn đoán bằng sinh thiết nang tìm kén sán hoặc chụp CT não
tìm thấy hình ảnh kén sắn trong não; 75 bệnh nhân có biểu hiện triệu chứng lâm
sàng về bệnh thần kinh nhưng kết quả chụp CT -Scanner không có hình ảnh kén sắn trong não
Kết quả nghiên cứu cho thấy:
- Tỷ lệ bệnh nhân mắc bệnh ấu trùng sán lợn có tìm thấy sán trưởng thành trong phân là 5/75 (6.7%) 5/5 trường hợp đều có thời gian mắc bệnh dưới một năm
Kết quả này cũng phù hợp với kết quả nghiên cứu của Đoàn hạnh nguyên [1]
- Kế quả xét nghiệm phát hiện kháng nguyên ấu trùng sán lợn bằng phương pháp
BLISA cho thay độ nhạy của xét nghiệm là 76% và độ đặc hiệu là 100% Phân
tích các trường hợp xét nghiệm có kết quả ELISA dương tính có 42,6 % ở các
trường hợp có kén ở não và dưới da; 20% trường hợp cố kén sán dưới da đơn
thuần và 13% trường hợp có kén sán ở não đơn thuần Tuy nhiên các trường hợp âm tính giá cũng còn phụ thuộc vào số lượng kến sắn có trên người, và vị trí kén
ký sinh đưới đa hay trên não So sánh kết quả ELISA ở từng nhóm các trường
hợp có số lượng nang sán tương đương cho thấy kết quả xét nghiệm ở nhóm có
nang đưới đa cao hơn so với nhóm chỉ có nang ở não điều này cũng phù hợp với
vị trí ký sinh của nang dẫn đến sự phân bố lượng kháng nguyên hoà tan của ấu
trùng sán trong máu khác nhau
So sánh độ nhạy (76%) của xét nghiệm Ag-ELISA ấu trùng sán lợn tại
nghiên cứu này thấp hơn độ nhạy của xét nghiệm phát hiện Ab-ELISA ấu trùng
Trang 11hiệu (100%) của nghiên cứu này chứng tỏ không có phản ứng chéo với các loại
giun, sán khác Điều này cũng gợi ý cho nghiên cứu tiếp theo đó là sự đánh giá
và theo dõi diễn biến của bệnh bằng xét nghiệm Ag-ELISA phát hiện nồng độ
kháng nguyên trong máu bệnh nhân sẽ khả quan hơn so với phương pháp ELISA
phát hiện kháng thể ấu trùng sán lợn với kit được sản xuất bằng kháng nguyên
thê ở Việt Nam
5 KIẾN NGHỊ :
Xét nghiệm chẩn đoán bệnh ấu trùng sán lợn bằng phương pháp Ag-
ELISA có độ nhạy và độ đặc hiệu cao, đặc biệt là trong các trường hợp bệnh nhân nhiễm ấu trùng sắn lợn có kén sán phối hợp trên người hoặc các trường hợp
nhiễm đơn thuần trên người Tuy nhiên số lượng 150 bệnh nhân ở 2 nhóm vẫn
còn hạn chế vì vậy cần được hoàn chỉnh kỹ thuật xét nghiệm với số lượng bệnh
nhân lớn hơn và nghiên cứu cần được mở rộng ở vùng có dịch tễ nhiễm sán đây
cao để sớm chẩn đoán bệnh ấu trùng sán lợn, bệnh mang tính nguy hiểm cho tính
mạng bệnh nhân
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 Đoàn Thị Hạnh Nguyên Điều trị bệnh ấu trùng sán lợn bằng Albendazol
(2001) Kỷ yếu công trình nghiên cứu khoa học 1996-2000, Nhà xuất bản Y học, Hà Nội, Tr 642-644
2 Phạm Trí Tuệ Đánh giá hiệu áp dụng kỹ thuật miễn dịch để chẩn đoán
một số bệnh kí sinh trùng(1997) Kỷ yếu công trình nghiên cứu khoa học
(1991-1996) Nhà xuất bản Y học, Hà Nội, Tr 100-108
3 Erhart A., Dorny P., De N.V., Vien H.V,, Thach D.C., Toan N.D., Cong L.D., Geerts S., Speybroeck N., Berkvens D., Brandt J Taenia solium
Trang 12Study using an ELISA for detecting circulating antigen Transaction of the Royal
Society of Tropical Medicine Ngày 21 tháng 7 năm 2003 Chủ tịch hội đồng nghiệm thu Chủ trì để tài ST TS Nguyễn Mạnh Hùng Bs, Đặng Thị Cẩm Thạch
Ney AS org 2 nem Ave Viện trưởng Viện Sốt Rét
-Côn trùng Trung ương,