Đánh giá độ đặc hiệu, độ nhạy và độ ổn định giới hạn phát hiện của kháng thể trong sinh phẩm sử dụng cho ngoại kiểm huyết thanh học truyền máu

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - ĐỖ THỊ THANH THƯ ĐÁNH GIÁ ĐỘ ĐẶC HIỆU, ĐỘ NHẠY VÀ ĐỘ ỔN ĐỊNH GIỚI HẠN PHÁT HIỆN CỦA KHÁNG THỂ TRONG SINH PHẨM SỬ DỤNG CHO NGOẠI KIỂM HUYẾT THANH HỌC TRUYỀN MÁU LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - ĐỖ THỊ THANH THƯ ĐÁNH GIÁ ĐỘ ĐẶC HIỆU, ĐỘ NHẠY VÀ ĐỘ ỔN ĐỊNH GIỚI HẠN PHÁT HIỆN CỦA KHÁNG THỂ TRONG SINH PHẨM SỬ DỤNG CHO NGOẠI KIỂM HUYẾT THANH HỌC TRUYỀN MÁU Chuyên ngành: KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC Mã số: 8720601 LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS TS VŨ QUANG HUY THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2020 LỜI CẢM ƠN Xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn đến Thầy PGS TS BS Vũ Quang Huy – Giám đốc Trung tâm Kiểm chuẩn Chất lượng Xét nghiệm – Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm Bộ môn Xét nghiệm giúp đỡ tạo điều kiện tốt để chúng tơi hồn thành luận văn Xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn đến tồn thể Ban cố vấn chương trình Ngoại kiểm huyết học Truyền máu, Quý thầy cô Bộ mơn Xét nghiệm, tồn thể nhân viên nhóm nghiên cứu Trung tâm Kiểm chuẩn Chất lượng Xét nghiệm – Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh tận tình hỗ trợ chun mơn tạo điều kiện thuận lợi để tơi có hội học tập hoàn thành đề tài nghiên cứu Thạc sĩ Xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn đến Trung tâm Truyền máu – Bệnh viện Chợ Rẫy ủng hộ, sẵn sàng hợp tác, phối hợp chúng tơi suốt q trình thực nghiên cứu Xin chân thành cảm ơn! Thành phố Hồ Chí Minh, tháng năm 2020 Đỗ Thị Thanh Thư i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu chúng tơi, chưa cơng bố cơng trình khác Các tài liệu trích dẫn, số liệu nghiên cứu hoàn toàn trung thực theo yêu cầu luận văn Thạc sĩ Tác giả Đỗ Thị Thanh Thư i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC BIỂU ĐỒ ix DANH MỤC HÌNH ẢNH x ĐẶT VẤN ĐỀ CÂU HỎI NGHIÊN CỨU MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Các hệ nhóm máu hồng cầu kháng thể nhóm máu 1.1.1 Sơ lược lịch sử phát hệ nhóm máu hồng cầu 1.1.2 Đặc điểm số nhóm máu quan trọng thực hành truyền máu.5 1.1.3 Kháng thể nhóm máu 1.2 Truyền máu xét nghiệm huyết học trước truyền máu 12 1.2.1 Khái quát chung truyền máu 12 1.2.2 Xét nghiệm huyết học trước truyền máu 13 1.3 Chương trình Ngoại kiểm huyết học Truyền máu 15 1.3.1 Ngoại kiểm tra chất lượng (External Quality Assessment – EQA) 15 1.3.2 Các loại mẫu ngoại kiểm yêu cầu chung mẫu ngoại kiểm 17 1.3.3 Tình hình triển khai ngoại kiểm giới Việt Nam 19 1.3.4 Ngoại kiểm tra huyết học truyền máu 21 v Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 Thiết kế nghiên cứu 27 2.1.1 Thời gian nghiên cứu 27 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 27 2.2 Đối tượng nghiên cứu 27 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu 27 2.2.2 Cỡ mẫu nghiên cứu 27 2.2.3 Kỹ thuật chọn mẫu 28 2.2.4 Tiêu chí chọn mẫu 28 2.3 Vật liệu nghiên cứu 29 2.4 Phương pháp tiến hành 30 2.4.1 Quy trình tạo mẫu huyết sử dụng cho chương trình Ngoại kiểm huyết học Truyền máu 32 2.4.2 Đánh giá mẫu huyết sử dụng cho chương trình Ngoại kiểm huyết học Truyền máu 34 2.5 Phương pháp thu thập xử lý số liệu 37 2.5.1 Thu thập số liệu 37 2.5.2 Xử lý số liệu 38 2.6 Kiểm soát sai lệch 38 2.6.1 Kiểm soát sai lệch chọn lựa 38 2.6.2 Kiểm soát sai lệch thông tin 38 2.7 Vấn đề đạo đức nghiên cứu tính ứng dụng 38 2.7.1 Vấn đề đạo đức nghiên cứu 38 2.7.2 Tính ứng dụng nghiên cứu 39 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 40 3.1 Kết sản xuất sinh phẩm huyết chứa kháng thể bất thường 40 3.2 Kết đánh giá độ đồng mẫu huyết 40 3.3 Kết đánh giá độ đặc hiệu độ nhạy kháng thể sinh phẩm huyết 41 3.4 Kết đánh giá độ ổn định mẫu sinh phẩm huyết 42 3.4.1 Kết đánh giá độ ổn định ngắn hạn 42 3.4.2 Kết đánh giá độ ổn định dài hạn 46 3.4.3 So sánh độ ổn định sinh phẩm huyết hai phương pháp: ống nghiệm (TT) ngưng kết cột (CAT) 57 Chương BÀN LUẬN 62 4.1 Quy trình sản xuất mẫu ngoại kiểm sử dụng cho chương trình Ngoại kiểm huyết học Truyền máu 64 4.2 Đánh giá độ đồng mẫu sinh phẩm 65 4.3 Đánh giá độ đặc hiệu, độ nhạy kháng sinh phẩm huyết 66 4.4 Đánh giá độ ổn định mẫu sinh phẩm huyết 68 4.4.1 Độ ổn định ngắn hạn mẫu sinh phẩm huyết 68 4.4.2 Độ ổn định dài hạn mẫu sinh phẩm huyết 70 KẾT LUẬN 74 KIẾN NGHỊ 76 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Viết đầy đủ AHG Anti Human Globulin ATTM British Committee for BCSH Standards in Haematology BM BYT CE CLSI CAT CDC CRM Conformite Europeenne Clinical and Laboratory Standards Institute Column agglutination technology Centers for Disease Control and Prevention Certified Reference Material ĐC ĐP ĐHG EQA FDA External Quality Assessement Food and Drug Administration GHD HGKT ISO International Organization for Standardization Ý nghĩa Kháng globulin người An toàn truyền máu Ủy ban tiêu chuẩn huyết học Anh Quốc Bộ mẫu Bộ Y tế Chứng nhận hợp chuẩn Liên minh Châu Âu Viên tiêu chuẩn phịng thí nghiệm lâm sàng Hoa Kỳ Kỹ thuật xét nghiệm ngưng kết cột Trung tâm kiểm sốt phịng ngừa dịch bệnh Hoa Kỳ Mẫu tham chiếu chứng nhận Hồng cầu phenotype biết trước dùng để đối chiếu Điểm phản ứng kháng nguyên – kháng thể Tổng điểm phản ứng hiệu giá kháng thể Ngoại kiểm tra chất lượng Cục quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa Kỳ Giới hạn phát Hiệu giá kháng thể Tổ chức tiêu chuẩn hóa quốc tế i ISBT HMTN KN KT KTBT LOD PT PXN RM se sp SPHT T1m T2m T3m T1M T2M T3M International Society of Blood Transfusion Limit of detection Proficiency testing Reference Material Sensitivity Specificity T1w Tvc TCVN TT Tube test UK WHO United Kingdom World Health Organization Hiệp hội Quốc tế Tuyền máu Hiến máu tình nguyện Kháng nguyên Kháng thể Kháng thể bất thường Giới hạn phát Thử nghiệm thành thạo Phòng xét nghiệm Mẫu chuẩn Độ nhạy Độ đặc hiệu Sinh phẩm huyết Thời điểm tháng, tháng, tháng kể từ ngày sản xuất điều kiện bảo quản 2oC – 6oC Thời điểm tháng, tháng, tháng kể từ ngày sản xuất điều kiện bảo quản – 20oC Thời điểm ngày kể từ ngày sản xuất điều kiện bảo quản 2oC – 6oC phòng xét nghiệm Thời điểm sau vận chuyển tới đơn vị tham gia Tiêu chuẩn Việt Nam Kỹ thuật xét nghiệm ống nghiệm Vương quốc Anh Tổ chức y tế giới ii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Kháng thể hệ nhóm máu có ý nghĩa lâm sàng Bảng 1.2 Các kháng thể hoạt động 37°C có ý nghĩa lâm sàng Bảng 1.3 Tính sinh miễn dịch kháng nguyên nhóm máu 11 Bảng 2.1 Xác định cỡ mẫu tối thiểu 28 Bảng 2.2 Các máy móc thiết bị dùng sản xuất đánh giá 29 Bảng 2.3 Dụng cụ vật tư tiêu hao dùng nghiên cứu 29 Bảng 2.4 Hóa chất, thuốc thử dùng nghiên cứu 30 Bảng 3.1 Kết đánh giá độ đồng (p-value) 40 Bảng 3.2 Kết đánh giá độ đặc hiệu độ nhạy kháng thể sinh phẩm huyết 41 Bảng 3.3 Kết đánh giá độ đặc hiệu, độ nhạy kháng thể sinh phẩm huyết phương pháp ống nghiệm (TT) ngưng kết cột (CAT) 42 Bảng 3.4 Kết đánh giá độ ổn định ngắn hạn mẫu 43 Bảng 3.5 Kết đánh giá độ ổn định ngắn hạn mẫu 44 Bảng 3.6 Kết đánh giá độ ổn định ngắn hạn mẫu 45 Bảng 3.7 Kết đánh giá độ ổn định ngắn hạn mẫu 46 Bảng 3.8 Kết đánh giá độ ổn định dài hạn 2oC – 6oC mẫu 48 Bảng 3.9 Kết đánh giá độ ổn định dài hạn 2oC – 6oC mẫu 49 Bảng 3.10 Kết đánh giá độ ổn định dài hạn 2oC – 6oC mẫu 50 Bảng 3.11 Kết đánh giá độ ổn định dài hạn 2oC – 6oC mẫu 51 Bảng 3.12 Kết đánh giá độ ổn định dài hạn -20oC mẫu 53 Bảng 3.13 Kết đánh giá độ ổn định dài hạn -20oC mẫu 54 Bảng 3.14 Kết đánh giá độ ổn định dài hạn -20oC mẫu 55 Bảng 3.15 Kết đánh giá độ ổn định dài hạn -20oC mẫu 56 Bảng 4.1 Độ đặc hiệu độ nhạy kháng thể sinh phẩm huyết ngưỡng xác định ngưng kết khác 67 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn