BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ
DU AN SAN XUẤT THỬ NGHIỆM ĐỘC LẬP CÁP NHÀ NƯỚC
BAO CAO TONG HOP
KET QUA THUC HIEN CUA DU AN Tên dự án: “Sản xuất thử nghiệm vắcxit v6 hoat phong bénh
xuất huyết tuyền nhưãm 6 thé"
Mã số: DADL-2006/04
Linh vực: Nông — Lâm — Ngư nghiệp
Họ và tên Chủ nhiệm dự án: 7% Trân Thị Liên
Don vị chủ trì: Xi nghiệp thuốc thú y Trung trơng
7518
24/10/2009
Trang 2BAO CAO TONG HOP KET QUA THUC HIEN
L THONG TIN CHUNG VE DY AN
1.Tên dự án: "Sdn xuất thử nghiệm vắcxin vô hoạt phòng bệnh xuất huyết
truyền nhiễm ở thỏ"
Cấp quản lý : Nhà nước
Thuộc chương trình : Dự án sản xuất thử nghiệm độc lập cấp Nhà nước
2.Chủ nhiệm dự án: T5 Trần Thị Liên
3.Tổ chức chủ trì: Xí nghiệp thuốc thú y Trung ương
Địa chỉ: Đức Thượng — Hoài Đức - Hà Nội
Số điện thoại: 04.33862381 - 04.33661562
4.Danh sách cán bộ tham gia chính đên, học vị, chức danh, đơn vị công tac):
Họ và tân Chức đanh Cơ quan công tác Trần Thị Liên Phó giám đốc | Xí nghiệp thuốc thú y TƯ Lê Minh Hồng Giám đốc Xí nghiệp thuốc thú y TƯ Nguyễn Thị
Phó giám đốc | Xínghiệp thuốc thú y TƯ Minh Ước Š ghiệp Ỷ
Trần Danh Mạc Kế toán trưởng | Xí nghiệp thuốc thú y TỪ
Nguyễn Đức Truong phon š
oe Thing cung tiêu Bene | Xí nghiệp thuốc thú y TƯ Quản đốc phân Củ Hữu Lương xưởng Xí nghiệp thuốc thú y TƯ Nguyễn Hồn, Phó quân đốc Z my Minh ý phân xưởng, 2 Xí nghiệp thuốc thú y TƯ
Trung tâm nghiên cứu Dê
Trang 35.Thời gian thực hiện đã được phê duyệt:
Năm bắt đầu :2006 Năm kết thúc : 2008
6 Thời gian kết thúc thực tế (thời điểm nộp báo cáo kết quả): 31/12/2008
7 Kinh phí thực hiện dự á
7.600 triệu đồng
Trong đó : Ngân sách sự nghiệp khoa học : 2.250,00 triệu đồng, 'Vến tự có của cơ quan chủ trì : 5.350,00 triệu đồng
IL KET QUÁ THỰC HIỆN CỦA DỰ ÁN
1.Kết quả nghiên cứu:
a Hoan thiện và én định các qui trình về giống virus
- Đánh giá, bỗ sung các chỉ tiêu về giống virus
+ Xác định đặc tính của giống,
Qua nhiều lần thí nghiệm, chúng tôi đã xác định được các đặc tính của giống virus RHD như sau
~_ Giống hồn tồn vơ trùng, không phát hiên bất kỳ một loại khuẫn lạc nào
trên các môi trường kiểm tra
—_ Virus giống gây ngưng kết hồng cầu nhóm O của người, không gây ngưng kết hồng cầu ngựa, bò, cừu hoặc hồng cầu người khác nhóm ©
—_ Khi gây nhiễm vims giống trên thỏ có những biểu hiện triệu chứng lâm sing và bệnh tích giống với thỏ bị nhiễm bệnh tự nhiên ở các ỗ dich
+ Triệu chứng:Sốt, bỏ ăn, ù rũ, thở gấp, thở ra bọt có nhiều dịch nhầy, có dấu hiệu thần kinh, co giật, kêu rên, chảy nước mắt, nước mũi, xung huyết kết
mac mit
+ Bệnh tích: Gan sung to, xung huyết, thận sưng rất to, xung huyết, khí
quản, phổi xung huyết, nhiều dịch nhầy, một số cơ quan nội tạng xuất huyết
Trang 4Bang 1: Kết quả nghiên cứu về giống virus Xuất huyết truyền nhiễm thỏ Số lượng Bệnh tích nội tạng thỏ được gây nhiễm mẫu Biến màu, Có dịch nhầy, › thuỷ thũng kèm theo xuất huyết có bọt khí sưng to, xuất huyết, các tiểu thuỷ có hiện | xung | huyết tượng thoái hoá + Xác định độc lục của giống
Giống vims RHD ở đang đông khô được pha loãng với dụng địch PBS vô
trùng thành đây pha loãng từ 101! - 10, mỗi nồng độ tiêm cho 10 thỏ khoẻ mạnh,
có độ tuổi tử 2 tháng trở lên, hiệu giá kháng thể kháng virus RHD trước khi tiêm
là âm tính, theo đường tiêm bắp, mỗi con 1 ml Sau khi tiêm hàng ngày theo đối nhiệt độ và những biểu hiện lâm sàng của thỏ, thời gian theo đối khoảng 6 ngày Kết quả được ghi lại và tính toán theo công thức Reed & Muench xác định liều
gây chết thỏ 50% (Dan) Thí nghiệm được tiến hành lặp đi lặp lại nhiều lần Kết
quả được chúng tôi thể hiện trên bang 2
Bảng 2 Kết quả xác định độc lực của giống
Sé thé thi Liều gây Hiệu giá
Trang 5Qua bảng 2 chúng tôi xác định được hiệu giá trung bình của giếng virus
RHD 14 10°" LDgpf 1 ml
+ Xác định tính khẳng nguyên
Virus giống RHD có tính kháng nguyên ổn định, qua nhiều lần tiếp đời trên thỏ, virus giống RHD vẫn giữ được tính kháng nguyên, có tỷ lệ gây bệnh và
tử vong cao, gây ngưng kết hồng cầu người nhóm O 8au khi vô hoạt đưa vào cơ
thé, vcxin tao miễn địch nhanh và kéo đài
+_ Xác định hiệu giá ngưng kết hồng cầu người nhóm O
Phản ứng ngưng kết hồng cầu người nhóm O là phản ứng đầu tiên được
sir dung dé chin đoán bệnh Xuất huyết truyền nhiễm ở thỏ Virus RHD chỉ gây
ngưng kết hồng cầu người nhóm O, còn các loại hồng cầu khác, virus gây ngưng,
kết rất yếu hoặc không gây ngưng kết
Qua các thí nghiệm, chúng tôi đã xác định hiệu giá ngưng kết với hồng
cầu người nhóm O cao của virus giống RHD là 1/4096
- Kiểm tra sự Ôn định về cúc đặc tính sinh hoc cia ging trong những điều
Âiện khác nhau
Giống vims RHD được giữ ở hai đang khác nhau: dang tươi và dang dong
khô, bảo quản ở nhiệt độ -85”C Định kỳ 3, 6, 9, 12 tháng tiến hành kiểm tra các
đặc tính sinh học của chúng Qua kiểm tra đều nhận thấy: Đối với giống tươi sau
6 tháng, giống đông khô sau 1 năm, vẫn ỗn định và giữ nguyên các đặc tính sinh
HöšHHũ Hà Sötgiếng gấp
~ Eựa chọn phương pháp giữ giống
Qua quá trình kiểm tra các đặc tính sinh học của giống trong những điều
kiện khác nhau, chúng tôi đã xác định được phương pháp giữ giống tối ưu đó là
+ Giống virus RHD giữ ở dạng đông khô
+ Giống bảo quản ở -85”C theo hệ thống lô giếng gốc (8eed lot system) + Một năm cấy chuyển giống một lần
Trang 6~ Nôi cấy virus
+ Xác định nẵng độ virus thích hợp khi gây nhiễm trên thỏ
Giống virus RHD tươi hoặc đông khơ được pha lỗng với dung dịch PBS
vô trùng ở các độ pha loãng 1/5, 1/10, 1/20 sau đó tiêm cho 10 thỏ khỏe mạnh, có
độ tuỗi ít nhất từ 2 tháng tuổi trở lên, mỗi thỏ 1 ml theo đường tiêm bắp (Trước
khi tiêm hiệu giá kháng thể của thỏ phải là âm tính) Sau khi tiêm hàng ngày theo dõi nhiệt độ thỏ,
Kết quả thí nghiệm được trình bày trên bằng 3
Bảng 3 Kết quả xác định nông độ virus thích hợp khi gây nhiễm trên thé 86 thé chết ở các thời điểm sau khi gây nhiễm Nông độ | Số lượng thö gây
phaloung ane với các nẵng độ pha loãng khác nhau (con) Xing (eon) meio | asgio | 72gi0 | s6giờ 1⁄5 10 1⁄10 10 1⁄20 10
Qua bảng 3, chúng tôi nhận thấy ở nồng độ pha loãng virus 1/5, thỏ nung
bệnh và chết tập trung ở thời điểm 48 — 72 giờ (10/10 con) Ở nồng độ pha loãng virus 1/10 thỏ nung bệnh chết ở 48 — 96 giờ sau gây nhiễm Còn ở nồng độ 1/20,
thỏ chết chủ yếu ở 96 giờ sau gây nhiễm
Căn cứ lý lịch giống gốc, chúng tôi đã xác định được nồng độ pha loãng virus 1/5 và tiêm mỗi thỏ 1 ml theo đường tiêm bắp là thích hợp nhất
+ Xác định thời điểm thích hợp đễ thụ hoạch virus
Chúng tôi bố trí 5 lô thí nghiêm, mỗi lô 10 thỏ, mỗi thỏ được tiêm 1ml giống virus RHD được pha với dung dịch PBS vô trùng tỷ lệ 1/5 theo đường tiêm
Trang 7tạng như gan, thận, lá lách, phổi và kiểm tra hiệu giá virus ở các cơ quan đó Kết quả được trình bày trên bằng 4
Bảng 4 Kết quả xác định hiệu giá virus ở một số cơ quan nội tạng của thỏ
sau khi chết ở thời điểm 48 giờ và 72 giờ
Hiệu giá virus trung bình ở các cơ quan nội tạng (HA) Gan Lá lách Thận Phỗi 48 giờ | 72 giờ | 48 giờ | 72 giờ | 48 giờ | 72 giờ | 48 giờ 1/4096 | 1/2048 | 1/512 | 1/256 | 1/2048 | 1/2048 | 1/256 1/4096 | 1/4096 | 1/256 | 1/128 | 1/2048 | 1/1024 | 1/512 1/4096 | 1/2048 | 1/512 | 1/128 | 1/2048 | 1/2048 | 1/512 1/2048 | 1/1024 | 1/512 | 1/64 | 1/4096 | 1/4096 | 1/1024 1/4096 | 1/2048 | 1/512 | 1/128 | 1/4096 | 1/4096 | 1/1024
Qua bảng 4, chúng tôi nhận thấy:
- Gan là cơ quan có hàm lượng virus cao nhất, sau đó là thân, lá lách và phổi có hàm lượng virus thấp hơn
- Những thẻ chết ở 48-72 giờ có hàm lượng virus tương đương nhau
Như vậy, chúng tôi đã xác định được nội tang thu hoạch để làm vắcxin là gan và thân và thời điểm thích hợp nhất thu hoạch làm vắcxin là những thỏ chết
từ 48 - 72 giờ sau khi gây nhiễm
+ Xây dựng phương pháp tiếp đời trên thỏ
Giống virus RHD ding làm giống gốc hoặc giống sản xuất được tiếp đời
định kỳ trên thỏ như đã nêu ở trên
Thi tiếp đời lựa chọn thỏ khoẻ mạnh, có trọng lượng từ 1,8 - 2 kg, chỉ chọn những thỏ có hiệu giá kháng thể đối với virus RHD âm tính để gây nhiễm
Trang 8gan, thận và kiểm tra các đặc tính về giống sau đó đông khô và bảo quản ở nhiệt
độ -85°G
~ Vô họat kháng nguyên và Đỗ sung chất bỖ trợ
Trên cơ sở sản xuất các lô vắcxin thử nghiệm trong ba năm 2006 - 2008,
chúng tôi đã xác định được hoá chất, nồng độ hoá chất để vô hoạt kháng nguyên, xác định được dung môi bỗ trợ, nồng độ dung môi để bỗ xung vào vắc xin:
+ Dung dịch Formalin là hoá chất thích hợp nhất để vô hoạt virus RHD
+ Nông độ Formalin 0,2% ở nhiệt độ 37C trong thời gian 72 giờ được
khuấy liên tục trên máy khuấy từ sẽ có khả năng làm vơ hoạt hồn tồn virus HD nhưng vẫn giữ được tính kháng nguyên của nó
+ Chất bổ trợ: Keo phản được sản xuất tại Xí nghiệp thuốc thú y TU là
chất bỗ trợ thích hợp đối với vacxin RHD, loại keo phèn này đã được sử dụng để bổ sung vào vacxin
"Tiêu chuẩn hạt keo bao gồm:
THàm lượng clora không vượt quá 0,3
Tầm lượng sunfat không vượt quá 0,2 ~ 0,3
Hàm lượng kim loại năng không vượt quá một phần vạn Hàm lượng sắt không vượt quá 0,039
Độ pH từ 6,8~7,2
Sức hút có dé hap phu mau 1a dd Congo 0,077% Tầm lượng AlạOs phải đạt từ 4,2 ~ 5,đ⁄4
+ Tỷ lệ chất bé tro keo phèn trong vắcxin là 15%
+ Kiểm tra độ an toàn của chất bổ trợ keo phèn (Al(OH);) trên thỏ, chuột
lang và chuột bạch cho thấy: chất bỗ trợ keo phèn rất an toàn đối với cả 3 loại
động vật trên Theo dõi sau 14 ngày số động vật trên đều khỏe mạnh, phát triển
bình thường
c Hoàn thiện và ỗn định quy trình kiểm nghiệm vắcxin ~ Kiểm tra độ vơ hoại cđa virus trong vắcxin
Huyễn địch virus RHD sau khi được vô hoạt bằng Formalin 0,2% & 37°C/
Trang 9Chọn 10 thỏ khoẻ mạnh, trọng lượng 1,8 - 2 kg, có hiệu giá kháng thể âm
tính với virus RHD, tiêm mỗi con 2 ml huyễn dịch virus RHD võ hoạt, 10 thỏ đối
chứng không tiêm, theo đối thỏ 14 ngày
Kết quả kiểm tra vô hoạt của các lô vắc xin thử nghiệm trong 3 năm 2006 — 2008 được thể hiện trên bảng 5
Bảng 5 Kết quả kiểm tra vô hoạt các lô vac xin RHD thử nghiệm trong ba
năm từ 2006 — 2008
Ngày | So thd song sau khi theo doi 14 ngay
kiểm tra | Lô thinghiệm Lô đôi chứng (con) (con) 29.03.06 10/10 10/10 10.04.06 27.04.06 14.05.06 18.06.06 21.07.06 21.08.06 15.09.06 30.10.06 20.11.06 27.01.07 11.02.07 21.03.07 23.05.07 02.07.07
Trang 10lô vắc xin đã sản xuất đều cho kết quả kiểm tra vô hoạt Tất cả số thỏ kiểm tra (cả
thí nghiêm, cả đối chứng) đều khoẻ mạnh, phát triển bình thường, không có bất kỳ biểu hiện lâm sàng nào của bệnh RHD
~ Kiểm tra vô trùng vắcxin RHD
Các lô vắc xin RHD đã sản xuất trong 3 năm (2006 — 2008) đều được
kiểm tra vô trùng theo quy trình như sau:
+ Lấy mẫu
'Vắcxin được lấy mẫu theo TCN 160-92 "Vắcxin thú y - Quy trình lầy mẫu
và sử dụng mẫu trong kiểm nghiêm" Mỗi lô vắczin lấy 1% số thành phẩm của
mỗi lô (Tối thiểu 3 mẫu, tối đa 10 mẫu),
+ Kiểm tra vi trùng
— Cấy huyễn dịch vắc xin vào các môi trường qui định (Thach máu, nước thịt, nước thịt gan yếm khí, thạch nấm), mỗi loại môi trường cấy 2 ống Các môi trường ở trên được chế theo qui định thông dụng để phát hiện các vi khuẩn
dụng huyết, hiểu khí, yếm khí và nấm có trong vắcxin
— Lượng vắcxin cấy kiểm tra bằng 1 đến 2 % dung tích môi trường
— Môi trường đã cấy kiểm tra đem bôi dưỡng trong tủ ấm 37C, theo đối
7 ngày Riêng môi trường nắm để ở nhiệt độ phòng (25 - 30 "Œ)
Kết quả kiểm tra vô trùng các lô vắc xin thử nghiêm được thể hiện trên
bang 6
Trang 11Bảng 6 Kết quả kiểm tra vô trùng các lô vắc xin RHD sản xuất trong 3 năm từ 2006 - 2008 Kết quả kiểm tra Ngày kiểm Thạch | Nước tra nẤm 29.08.06 21.07.06 21.08.06 15.09.06 30.10.06 20.11.06 27.01.07 11.02.07 21.03.07 23.05.07 11.07.07
©: Am tinh - khéng ¢6 khuan Lae moe
Kết quả kiểm tra cho thấy: Cả 17 lô vic xin RHD san xuất trong ba năm (2006 — 2008) đều cho kết quả vô trùng, không có bất kỳ một khuẩn lạc hay nắm nào mọc trên các môi trường kiểm tra
~ Kiểm tra ah tồn trên thơ
Các lô ắc xin RHD duoch kiểm tra an toàn theo quy trình như sau:
Trang 12Chọn 10 thỏ khoẻ mạnh, trọng lượng 1,8 - 2 kg, có hiệu giá kháng thể âm
tính với virus RHD, tiêm mỗi con 3 liều vắcxin sử dụng (3 ml) theo đường tiêm
bắp, 10 con đối chứng không tiêm Tất cả số thỏ được theo đối trong 21 ngày Két qua được thể hiện trên bảng 7
Trang 13Qua bảng 7 cho thấy, cả 17 lô vic xin RHD duoc kiém tra an toàn theo
quy trình trên đều cho kết quả an toàn, thỏ hoàn toàn khoẻ rnạnh, phát triển bình thường khi sử dụng 3 liều vắc xin theo đường tiêm bắp
Như vậy, cả 17 lô vắc xin RHD sản xuất trong ba năm (2006 — 2008) đầu
đạt tiêu chuẩn an toàn
~ Kiểm tra hiệu lực
Tắt cả các lô vắcxin được kiểm tra hiệu lực theo quy trình như sau
Lô thí nghiệm: Chọn 10 thẻ ít nhất 2 tháng tuổi, khoẻ mạnh, có hiệu giá
kháng thể âm tính với virus RHD, mỗi thỏ tiêm 1 liu v&exin sir dung (1 ml) theo đường tiêm bắp,
Lô đối chứng: 10 thỏ cùng nguồn gốc với lô thí nghiệm không tiêm làm đối chứng
Tất cả số thỏ của lô thí nghiệm và lô đối chứng sau 3 biần được công cường độc theo đường tiêm bắp, mỗi con 1 liều virus RHD cường độc chứa it
nhất 100 LDap,
Toàn bộ số thỏ được theo đối trong 14 ngày
Kết quả kiểm tra hiệu lực các lỗ vắc xin thành phẩm sản xuất trong ba năm 2006 - 2008 được thể hiện trên bảng 9
Trang 14Bing 9 Kết quả kiểm tra hiệu lực các lô vắc xin RHD thành phẩm sản xuất trong ba nam (2006 — 2008) Kết quả theo déi 1ô đối chứng 30.03.06 | 20.04.06 11.04.06 | 02.5.06 28.04.06 | 19.05.06 15.05.06 | 05.06.06 19.06.06 | 10.07.06 22.07.06 | 12.08.06 22.08.06 | 12.09.06 16.09.06 | 07.10.06 31.10.06 | 21.11.06 21.11.06 | 12.12.06 28.01.07 | 18.02.07 12.02.07 | 05.03.07 22.03.07 | 12.04.07 24.05.07 | 14.06.07 12.07.07 | 02.08.07 2 3 4 5 6 7 8 9 =
Như vậy, tất cả số thỏ được tiêm vắcxin đều sống khoẻ, phát triển bình
thường, không có bắt kỳ triệu chứng lâm sàng và bệnh tích nào của bệnh RHD,
Thỏ đối chứng không tiêm vắcxin có tỷ lệ chết tử 80 — 100 %
8o sánh với tiêu chuẩn của OIE, chúng tôi nhận thấy các lô vắcxin chúng
tôi kiểm tra đều đạt kết quả hiệu lực
Trang 15~ Xác định độ đài niễn địch của thé sau thi được tiêm vắcxim
Chọn 40 thỏ khoẻ mạnh, ít nhất 2 tháng tuổi có hiệu giá kháng thể âm tính
đối với virus RHD, tiêm mỗi con 1 liều (1 ml) vắcxin sử dụng theo đường tiêm
bắp hoặc tiêm đưới đa Sau khi tiêm kiểm tra hiệu giá kháng thể kháng virus RHD bằng phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HT) tại các thời điểm khác nhau,
Két qua được thể hiện trên bảng 10
Bang 10 Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể của thö ở các thời điểm sau
khi tiêm vắcxin
te THiệu giá kháng thể trung,
Thời điểm kiểm tra sau khi tiêm Tỷ lệ bảo hộ Š bình (tuần) (®) (ng,) 78 100 93 100 S97 100 100 100 100 100 100 100 75 50 40
Qua các thí nghiệm cho thấy độ đài miễn dịch của thỏ kéo dài đến 24 tuần
(6 tháng) sau khi tiêm vắcxin Tuy nhiên, ở thời điểm 24 tuần hiệu giá kháng thể
Trang 16trung bình và tỷ lệ bảo hộ thấp Ở giai đoạn này, thỏ để bị tác động của virus
EHD ngồi mơi trường Do vậy, cần phải tiêm phòng vắcxin RHD cho thỏ vào
thời điểm này để thỏ có đủ kháng thể kháng lại virus RHD
d Hoàn thiện và n định quy trình sử dụng và bảo quản vắcxin ~ Khẳng định lại độ tuỗi và thời gian tiêm phòng vắcxim
Chúng tôi tiền hành kiểm tra kháng thể của những thỏ con đẻ ra từ thỏ mẹ
đã được tiêm phòng vắcxin RHD ở các lứa tuổi khác nhau —_ Nhóm 1: 10 thỏ 1 tháng tuổi
— Nhóm 2: 10 thỏ 1,5 tháng tuổi
—_ Nhóm 3: 10 thỏ 2 tháng tuổi
Các nhóm thỏ được lấy máu ở các thời điểm 0 ngày, 5 ngày, 10 ngày, 15
ngày, chất huyết thanh và kiểm tra kháng thể thụ đông Kết quả kiểm tra được thể hiện trên bằng 11
Bảng 11 Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thé thy động khang virus RHD trong huyết thanh của thö
Hiệu giá kháng thể trung bình của các nhóm thổ thí nghiệm
Qua theo đôi, chúng tôi nhận thây hiệu giá kháng thê trung bình của cả 3 nhóm thỏ đều giảm dần qua các thời điểm kiểm tra Thỏ ở 1 tháng tuổi có hiện
giá kháng thể trung bình là 7,2 loga, sau đó giảm dần đến 1,5 tháng tuổi là 5,7 -
5,8 log va dén 2,5 thang tudi chi con 3,2 loge
Theo kết quả bảng 10, chúng tôi đã xác định được hiệu giá kháng thể của thỏ là 6,2 logz có tỷ lệ bảo hộ là 75%, 5,4 log; là 501 Như vậy, vào thời điểm
Trang 171,5 thang tuổi, hàm lượng kháng thể thụ đông của đã giảm, một số thỏ đã không còn đủ khả năng chống đỡ lại virus RHD khi virus xâm nhập vào cơ thể
Do đó, chúng tôi đã xác định được thời gian tiêm mũi vắcxin RHD đầu
tiên cho thé con ti 1,5 - 2 tháng tuổi để thỏ kịp thời có đáp ứng miễn dịch khang lại virus RHD,
~ Khng định lại đường tiêm, liều tiêm vắcxin cho thổ
+ Khẳng định lại liều tiêm vắcxi cho thé
Bé trí 4 lô thỏ thí nghiệm, mỗi lô 10 con thỏ khoẻ mạnh, 2 tháng tuổi
+ Lô thí nghiệm 1: Tiêm 0,5 ml vắcxin sử dụng theo đường tiêm bắp
+ Lô thí nghiêm 2: Tiêm 1 ml vắcxin sử dụng theo đường tiêm bắp
+ Lô thí nghiệm 3: Tiêm 1,5 ml vắcxin sử dụng theo đường tiêm bắp
+ Lô thí nghiêm 4: Không tiêm vắcxin làm đối chứng,
Sau 7 ngày, 14 ngày, 21 ngày, 28 ngày, lấy máu kiểm tra kháng thể kháng EHD Kết quả được thể hiện trên bảng 12
Trang 18Qua bảng 12 cho thấy với liều tiêm là 0,5 ml vắcxin sử dụng, hàm lượng kháng thể của thỏ sau 28 ngày vẫn chưa đạt mức bảo hộ 100% Còn ở lô thí
nghiêm 2 và 3 sau 7 ngày tiêm vắcxin thỏ đã đủ lượng kháng thể bảo hô kháng lại vims RHD Nhưng để tính hiệu quả kinh tế và tránh gây sốc cho thỏ khi tiêm vắcxin, chúng tôi đã xác định liều tiêm thích hợp cho thỏ là 1 ml
+ Khẳng định lại đường tiêm vắcxin cho thỏ
hi xác định được liều tiêm thích hợp, chúng tôi tiếp tục bố trí 2 lô thỏ thí
nghiêm, mỗi lô 10 con thỏ khoẻ mạnh, ít nhất hai tháng tuỗi, trọng lượng 1,8 - 2
kg
Lô thí nghiệm 1 tiêm 1 rnl vắcxin sử dụng theo đường tiêm đưới da cỗ Lô thí nghiệm 2 tiêm 1 rnl vắcxin sử dụng theo đường tiêm bắp,
8au 7, 14, 21, 28 ngày tiến hành lấy máu chắt lấy huyết thanh và kiểm tra
khang thé khéng virus RHD
Két qua được thể hiện trên bảng 13
Bảng 13 Hiệu giá kháng thể trung bình của thö sau khi tiêm theo các đường
tiêm khác nhau
giá kháng thể trung b
Qua hai thí nghiệm đều cho thấy sau 7 ngày tiêm vắcxin lượng kháng thể trung bình của hai lô thỏ thí nghiêm đã đạt mức bảo hộ 100%
Do vậy, chúng tôi đã xác định đường tiêm vắcxin thích hợp cho thẻ là
tiêm dưới đa cỗ hoặc tiêm bắp
~ Theo đối thỗ sai: Khi tiêm vẮc xin
Trang 19Sau khi được tiêm vắcxin RHD với liều và đường tiêm đã khẳng định, thỏ được theo dõi trong vòng 3 tuần Tất cả thỏ đều khoẻ mạnh, phát triển bình
thường, không có con nào có biểu hiện lâm sàng của bệnh RHD
~ Khẳằng định nhiệt độ và thời gian bảo quan vdexin
Vắcxin EHD là vắcxin vô hoạt có chất bỗ trợ là keo phèn (Al(OFDz), do
đó vắcgin phải được bảo quản ở nhiệt độ 2 - 8C, không được làm đông đá
Cứ sau 3 tháng, 6 tháng, 9 tháng và 12 tháng, các lô vắc xin được lấy rnẫu và kiểm tra hiệu lực theo quy trình Kết quả được trình bày trên bảng 14
Bảng 14 Kết quả xác định tính bền vững của vắcxin Xuất huyết truyền
nhiễm thỗ bảo quản ở nhiệt độ 2-8°C
Bá lượng mẫu kiểm tral Tỷ lệ bảo hộ
@%)
Trang 20
Qua bảng 14 cho thấy, sau 1 năm bảo quản ở nhiệt độ 2 - 8C, vắcxin vẫn
tạo miễn dịch cho thỏ và có tỷ lệ bảo hộ 90 - 95% Theo tiêu chuẩn OIE, vc xin
vẫn đạt tiêu chuẩn hiệu lực
Như vậy, chúng tôi đã xác định được hạn sử dụng vắcxin là 12 tháng kể từ
khi xuất xưởng,
e Thử nghiệm váexin tại cơ sở
Là một dự án được triển khai nghiên cứu và sản xuất ngay trong điều kiện sản xuất của 3í nghiệp thuốc thú y Trung Ương Vì vậy việc nghiên cứu phải gắn liền với phục vụ sản xuất cũng như nhu cầu kinh doanh của Xí nghiệp, do đó
vacxin sau khi sản xuất sẽ được kiểm tra chất lượng ngay tại Xí nghiệp và cũng
đã gửi mẫu các lô vắcrin đại điên kiểm nghiệm tại Trung tâm kiểm nghiêm Trung ương 1
Chúng tôi cũng đã cho thử nghiêm vácxin ngay trên trại thỏ của Xí nghiệp và thử nghiệm ở một số cơ sở nuôi thỏ khác theo một quy trình sử dụng như sau:
+_ Tiêm miễn địch vácxin 2 lần cho thỏ, mỗi lần 1 liều
+ Lần đầu khi thỏ được 2 hoặc 3 tháng tuổi Lần thứ 2 nhắc lại sau 2
tuần
+ Vị trí tiêm: Bắp đủi hoặc vùng đưới da ở cổ
Việc thử nghiêm vácxin trên đàn thỏ của Xí nghiệp được tiến hành từ năm
2005 - 2008 cho kết quả tốt, đàn thỏ được sử dụng vácxin đều khoẻ ranh, sinh
sản và phát triển bình thường,
Ngoài việc thử nghiêm tại Xí nghiệp, chúng tôi đã thử nghiệm ở một số địa điểm môi thỏ thường xuyên có dịch bệnh này xảy ra như: Thị trấn Phùng huyện Đan phượng — Hà Tây, huyện Phú Bình tỉnh Thái Nguyên, Trung tâm nghiên cứu đê thỏ Sơn Tây,Viện kiểm nghiệm thuốc thuộc Viên vệ sinh dich tễ Hà nội, trại đê thỏ An Việt thuộc tỉnh Bình Phước, Các cơ sở đã sử dụng vácxin %uất huyết truyền nhiễm thỏ đều cho biết bệnh không xảy ra và đàn thỏ
sinh trưởng phát triển bình thường,
Kết quả thử nghiệm vắcxin Xuất huyết trên đàn thỏ ở một số cơ sở được
trình bày ở bằng 15
Trang 22* Kết luận:
- Giống dùng để sản xuất vácxin Xuất huyết truyền nhiễm thỏ trong dự án
thử nghiêm là giống vims Xuất huyết truyền nhiễn ở thẻ, giống được sản xuất theo hệ thống lô giéng Seed lot system dưới dạng tươi hoặc đông khô, bảo quản
giống ở nhiệt độ 85C, Giống hoàn toàn vô trùng, có hiệu giá từ 1/4096 trở lên Thời gian gây chết thỏ và có hiệu giá virus cao nhất là 48 - 72 giờ
Ham lượng virus nhiều nhất là tổ chức gan và thận
Dung dịch Formalin 0,2% 14 thich hợp nhất để vô họat virus trong vắcxin - Vắcxin an toàn tuyệt đối khi sử dụng 3 liều đối với thỏ
ắcxin đạt tiêu chuẩn vơ trùng, an tồn, hiệu lực khi kiểm nghiêm trên thể
'Vắcxin xuất huyết truyền nhiễm thỏ đã được thử nghiệm tại một số cơ sở chăn nuôi đều cho kết quả tốt
2 Ý nghĩa khoa học của kết quả nghiên cứu
- Đã xác định được các đặc tính sinh học của chủng virus giống xuất huyết truyền nhiễm thỏ
- Xây dựng được quy trình giữ giống, bảo quản và sử dụng giống rong
sản xuất vắc xin
- Xây dựng được quy trình sản xuất vắc xin xuất huyết truyền nhiễm ở thỏ
với quy mô lớn (4 — 8 triệu liều vắc xin/ 3 năm),
- Xây dựng được quy trình kiểm nghiêm vắc xin xuất huyết truyền nhiễm
ở thỏ
- Xây dựng được quy trình bảo quản, sử dụng vắc xin xuất huyết truyền
nhiễm ở thỏ
3 Ý nghĩa thực tiễn và khả năng ứng dụng kết quả khoa học
Sau khi dự án thành công, Xí nghiệp thuốc thú y Trung ương đã hoàn ở thể từ khâu
thiên được quy trình sản xuất xin xuất huyết truyền nhiễt
giống đến khâu hoàn thiện sản phẩm cuối cùng Trên cơ sở đó, Xi nghiệp sẽ mở
rông quy mô sản xuất với số lượng lớn đáp ứng đầy đủ nhu cầu về vắc xin phòng
Trang 23bệnh xuất huyết truyền nhiễm cho đàn thỏ trong cả nước với chất lượng cao đảm bảo các chỉ tiêu kỹ thuật của Nhà nước
UL TÌNH HÌNH TỎ CHỨC THỰC HIỆN DỰ ÁN
1 Tỗ chức thực hiện
& Thuận lợi:
Co quan chủ trì đự án là cơ sở chuyên sản xuất và cung cấp các loại vacxin thú y cho gia súc, gia cầm với thiết bị công nghệ hiện đại, đội ngũ cán bô,
công nhân lành nghề, cơ sở vật chất kỹ thuật hiện có tương đối đầy đủ, năng lực
khoa học, kỹ thuật về sản xuất vắc xin chuyên sâu nên việc thực hiện dự án có rất nhiều thuận lợi
Õ khó khăn
Tuy nhiên thời điểm thực hiện dự án tiến hành khi địch cúm gia cầm hoành hành do đó việc Ấp nở vịt con bị cắm, số lượng đàn vịt bị giảm do đó làm ảnh hưởng đến khả năng tiêu thụ sản phẩm, số lượng sản phẩm tiên thụ chưa đạt với yêu cầu mong muốn của cơ quan chủ trì dự án
2 Sử dụng kinh phí
Dự án sản xuất thử nghiệm vắc xin xuất huyết truyền nhiễm ở thỏ thuộc chương trình Dự án sản xuất thử nghiệm độc lập cấp Nhà Nước có thu hdi 60%
kinh phí hỗ trợ Thời gian thực hiện Dự án trong 3 năm : 2006-2008 Tổng số
kinh phí dự án được cấp và đã sử dụng trong ba năm như sau
Trang 242006 — 2007 2008 Tổng 3 năm đriêu đồng | đriệu đồng | (riệu đồng) Kinh phí đã sử đụng 189584 212631 - Hỗ trợ công nghệ 399,96 450,00 - Chỉ phí lao động 426,62 480,00 - Nguyên vật liêu, năng lượng | _ 1.048,28 1164/22 - Chỉ khác 20,98 32,09 Kinh phi chưa sử đựng 104,16 123,69 - Nguyên vật liên 23,272 23,272 - Xăng dầu 0,008 0,008
- Chỉ phí đào tạo công nhân 8,89 10,00
- Hội thảo chuyên đề 13,33 13,33 - Chỉ phí nghiêm thu 13,33 23,40 - Chỉ khác 377 - Quản lý phí 4/58 Sản phẩm của dự án 'Vắc xin thành phẩm điều) 5.054.000 858.000 5.858.000 Doanh thu (đồng) 332.751.000 | 148.486.500 | 481.237.500
3 Các trang thiết bị được mua sắm từ kinh phí của dự án:
Trong quá trình thực hiện dự án, Xí nghiệp đã sửa chữa và nâng cấp được
một số trang thiết bị như sau:
Trang 25+ Xí nghiệp đã xây dựng và và hồn thiên mơ hình nuôi thỏ sạch để cung cấp thỏ làm nguyên liệu cho sản xuất và phục vụ kiểm nghiệm vắcxin vô hoạt
Xuất huyết truyền nhiễm
+ 01 phéng thi nghiệm để mỗ thỏ sau gây nhiễm virus
+ Đã đầu tư được một số thiết bị, máy móc để phục vụ cho việc sản xuất vacxin xuất huyết truyền nhiễm ở thỏ như:
- 01 may xié nut nhôm bán bự động,
- 01 may bom chin khéng,
~ 01 cối xay để nghiền gan, thận trong sản xuất vacxin,
-_01 hộp phin lọc cấp 2 HEPA cho hệ thống lọc không khí phòng vô
trùng,
~_ Hai máy khuấy tử của Mỹ
TV ĐÁNH GIÁ, KIÊN NGHỊ
1 Đánh giá về việc thực hiện dự án
Trong thời gian thực hiện dự án, cơ quan chủ trì và chủ nhiệm dự án đã thực hiện tuần tự các phần nội dung công việc mà dự án yêu cầu
Phần nghiên cứu để én định chất lượng sản phẩm và xây dựng các qui trình công nghệ được tiến hành nghiêm túc và theo đúng tiến độ, các kết quả thu được bổ sung đáng kể cho việc hoàn thiện công nghệ
Sản phẩm vacxin của Dự án đã được sản xuất và cung cấp theo yêu cầu
thực tế chăn nuôi
Các chương trình quảng bá sản phẩm cũng được tiến hành theo kế hoạch của dự án
Chương trình đào tạo chuyên môn sản xuất vacxin xuất huyết truyền
Trang 26Ngày 15 thắng 12 năm 2008 Xác nhận của đơn vị chủ trì Chủ nhiệm dự án