Nghiên cứu ứng dụng chế phẩm từ kiến và trứng gai đen polyrhachis dives làm tăng sức khoẻ cho người cao tuổi

Trang 1

BOYTE

VỤ Y HỌC CỔ TRUYỀN

BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHCN CẤP BỘ

NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG CHẾ PHẨM TỪ KIẾN

VA TRUNG KIEN GAI DEN (POLYRHACHIS DIVES)

LÀM TĂNG SỨC KHOẺ CHO NGƯỜI CAO TUỔI CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI: BSCKII PHẠM HƯNG CỦNG

Đồng chủ nhiệm: TS NGUYÊN THỊ VÂN THÁI

6097 14/9/2006

Trang 2

TT

CAC CHU VIET TAT TRONG BAO CAO

Chit viet tat Ý nghĩa

DDVN Dược điển Việt Nam

HA Huyết áp

MDA Manylo dialdehyd

RLCD Rối loạn cương dương

RTK Rượu kiến và trứng kiến

TCCS Tiêu chuẩn cơ sở

Trang 3

ĐẶT VẤN ĐỀ

Tại Việt Nam, việc sử dụng cơn trùng làm thức ăn, làm thuốc phịng và chữa bệnh đã cĩ từ xa xưa [5] Theo kinh nghiệm dân gian, kiến gai đen (Hắc mã nghỉ) đã

được sử dụng nhiều trong ẩm thực và trong y học Kiến cĩ tác dụng thanh nhiệt, giải

độc, tiêu thũng, trứng kiến dùng để bởi bổ khí lực, làm cho sống lâu, trẻ đẹp [27]; [28] Hiệu quả chữa bệnh của một số lồi cơn trùng đã được khẳng định trong các cơng trình nghiên cứu của các nhà y sinh học, chủ yếu các nhà cơn trùng học ở các nuớc như: Trung quốc, Mỹ, Mêhicơ, Nga, Hàn quốc Các loại cơn trùng tuy cơ thể bé nhỏ, nhưng nếu được nhân nuơi thành một sinh khối lớn , sẽ cung cấp ra những sản

phẩm cĩ giá trị cao về dinh dưỡng và chữa được một số bệnh mạn tính Hiện nay, các

chế phẩm từ cơn trùng đã cĩ bán rộng rãi trên thị trường (rại Bắc Kinh một hộp kiến

đen (200gram) được bán với giá 500 nhân dân tệ, một kilosram trứng kiến cĩ giá trị 4500 USD và một chai rượu kiến hoặc rượu mối cĩ giá vào khoảng 12 USD [16]

Qua nghiên cứu chúng tơi nhận thấy, lồi kiến gai đen Polyrhachis dives Smith ờ nước ta cĩ hình dáng và tập tính sinh sống giống với lồi kiến gai đen Polyrhachis vicina Roger Trung Quốc- một lồi kiến đã được sử dụng rộng rãi làm thực phẩm chức năng, thuốc chữa bệnh, trong đĩ cĩ điều trị bệnh vơ sinh nam Hiện

nay ở nước ra, các cơng trình nghiên cứu vẻ tác dụng cĩ lợi của cơn trùng cịn chưa

nhiều Đặc biệt chưa cĩ nghiên cứu đánh giá khách quan hiệu quả, cũng như cơ

chế tác dụng của các vị thuốc, bài thuốc được bào chế từ cơn trùng Đây là một trong

những nguyên nhân hạn chế việc sử dụng các lồi cơn trùng để làm thuốc trong chăm sĩc sức khoẻ con người Nhằm gĩp phân khẳng định giá trị sử dụng của kiến

gai đen, một nguồn dược liệu quí từ cơn trùng trong chăm sĩc sức khoẻ cộng đồng,

chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài:

“ Nghiên cứu, ứng dụng chế phẩm từ kiến và trứng kiến gai den

(Polyrhachis Dives) lam tang stte khoé cho ngudi cao tuổi”

Để triển khai đẻ tài, chúng tơi thực hiện nhỮng nội dung sau:

1 Tập hợp, phân tích các thơng tin cĩ liên quan vẻ kiến, nghiên cứu xây dựng qui trình nhân nuơi kiến trong phịng thí nghiệm

2 Nghiên cứu thành phân hố học, hoạt chất sinh học của kiến và trứng kiến

3 Nghiên cứu xây dựng quy trình bào chế rượu thuốc trứng kiến (R TK) theo ácc quy

định trong Dược điển Việt Nam II

4 Nghiên cứu thực nghiệm tác dụng dược lý Đánh giá tính an tồn của chế phẩm

RTK

Trang 4

CHUONG 1 TONG QUAN TAILIEU

1.1.Tình hình nghiên cứu và sử dụng cơn trùng trong ẩm thực và y học

Lồi kiến thường sống thành đàn, cĩ tổ chức phân cơng rõ ràng Một đàn kiến lớn cĩ thể cĩ hàng chục kiến chúa, hàng trăm kiến đực, kiến thợ Kiến thợ đảm nhận mọi cơng việc như giữ nhà, đi kiếm ăn, canh gác cung cấp thức ăn cho kiến chúa và kiến đực Kiến sử dụng quả, hạt, làm thức ăn Thức ăn của kiến là chất thải của rệp

cây cĩ chứa đường và các chất dinh dưỡng khác (sâu ngài, xác chết, ) Ư Việt Nam, theo kết quả điều tra năm 1967-1968, đã phát hiện được 3§ lồi Tại Hội thảo khoa

hoc khu vue ASEAN (2001), số lượng lồi kiến cĩ mặt ở Việt Nam đã được xác định

là 55 lồi Vẻ ý nghĩa kinh tế của các lồi kiến và vai trị của chúng trong tự nhiên,

chúng ra cĩ thể thấy kiến vừa cĩ lợi và vừa cĩ hại giống như yếu tố tự nhiên khác

Van đẻ quan trọng là ở chỗ con người hiểu biết chúng đến đâu và cĩ thể chế ngự hay khai thác chúng một cách cĩ hiệu quả Việc đĩ hồn tồn phụ thuộc vào trình độ

phát triển khoa học ở mỗi cộng đồng dân cư Các chất đáng chú ý trong co thể kiến

a acid formic, hydrocacbon alphatic, isoxanthopterin, 2-amino-6-hydroxypreridin va biorerin Kiến cĩ giá trị dinh dưỡng cao, cơ thể cĩ chứa 40-67% Albumin với 28 loại

acid gốc amin tự do và 8 loại acid amin khơng thay thế, rất cần cho cơ thể con người;

đồng thời cơ thể kiến cịn chứa nhiều loại vitamin và nguyên tố vi lượng Kiến được

sử dụng trong ẩm thực, bảo vệ thực vật và chăm sĩc sức khoẻ cộng đồng Trong đề

tài này, chúng tơi trình bày vai trị của kiến đối với y học và ẩm thực 1.1.1 Cơn trùng — nguơn thực phẩm

Trong lịch sử cổ xưa, khi tìm kiếm thức ăn con người đã sử dụng một số lồi cơn

trùng làm nguồn thực phẩm Tại Irắc, hàng năm cĩ khoảng 35 tấn cơn trùng được thu thập và bán trên thị trường dùng làm thực phẩm Người dân Mêhicơ rất thích ăn

trứng cà cuống nên họ đã phải dìm những tấm vải xuống nước để cà cuống đẻ hàng triệu trứng rồi đem trứng đĩ phơi khơ và để dành làm thành bánh ngọt ăn quanh năm

Tại Thái Lan, cà cuống được xếp hàng đầu bảng trong nhĩm các thực phẩm cơn

trùng cùng với đế mèn, bọ xít, bọ xin cơm, nhộng dâu tăm, nhộng non chuồn chuồn lớn (họ Aeechnidae và họ Libellulidae), nhộng non của bọ hung dat (Copris sp,

Onthophagous sp.) hay cánh cứng ở nước [12]

Một số sản phẩm trong dân gian thường thấy như cháo kiến đen với đậu phụ,

trứng kiến ba mùi, trứng kiến hấp, bánh mạch kim cương và xơi kiến v.v Trứng kiến bơi độc, nhưng biết dùng sẽ rất tốt để bổ khí lực, cải lão hồn đơng, sống lâu,

trẻ đẹp Việt Nam ra cĩ nhiều giống kiến, song được sử dụng nhiều trong am thực

Trang 5

thường là những lồi kiến cĩ mặt trong các bài thuốc y học cổ truyền như: kiến đen -

Formiea fusea Linnaeus, thuộc họ kiến - Formicidae, kiến đị - Camponotus gồm

các lồi: C marginosus Latr., C Eiguiperlus Lianaeus, kiến nu - Manomorium Formicidae, kiến khâu - Oecophylia, kién Bong — Cremastogaster v.v [5]

1.1.2 Cân tring nguén được liệu chữa bệnh

Lồi kiến được sử dụng nhiều trong Y học Cổ truyền và trong văn hĩa ảm

thực là kiến gai đen (bắc mã nghỉ) Kiến và trứng kiến cĩ rất nhiều tác dụng tốt đối với cơ thể nhất là phụ nữ sau khi sinh Kiến là nguồn dược liệu quí cĩ tác dụng bổ

dưỡng, cải lão hồn đồng và chữa được một số bệnh như viêm Tai, suy giảm chức

năng sinh dục [5], [13] Sản phẩm sinh học do cơn trùng nĩi chung và kiến nĩi riêng tiết ra được dùng làm thuốc chữa bệnh viêm tai, điếc Ngồi ra, kiến cịn là một vị thuốc quí để điều trị những vết thương phần mềm lâu khỏi, cầm máu, giảm

đau [12]

Từ chiến tranh Thế giới Thứ Nhất, tiến sĩ W S Baer da ghi nhận biện pháp sử

dụng giịi ruồi nhà được nuơi vơ trùng cĩ rác dụng chữa lành các vết thương, bởi vì

giời ăn hết các vi sinh vật làm mũ và gây nhiễm trùng, 92% trong số 600 bệnh nhân được điều trị bằng phương pháp này đều đã khỏi hẳn Tiến sỹ William Robonson đã

tách chiết được một chất là chính chất tiết của giịi cĩ tác dụng chống nhiễm trùng vết thương như bản thân các con giịi Chất được biết là allanroin, thơng thường cĩ ở

thị thường và được mơ tả là vơ hại, khơng mùi, khơng vị, trong suốt, khơng đau, chế

thành rượu rẻ tiền được dùng cho bệnh loét mạn tính, bịng và vết thương đơn giản, kích thích cục bộ Do vậy đặc biệt tốt cho xử lý các vết thương sâu như bệnh tuỷ

xương, là nơi mà phân bên trong của vết thương cần được chữa trị trước tiên Chính

vì thế Robinson tỉn rằng dung dịch allantoin sẽ thay thế được các con giồi sống trong xương xử lý, bởi vì thật ra các con giời đã ăn bên ngồi màng hoại tử, giết các vi

khuẩn và tiếp tục dùng allantoin do chúng tiết ra đi sâu vào vết thương nên cĩ kết

quả hơn nhiều so với xử lý bằng dụng cụ y tế [12]

Quách Lai Vượng (1987) cho biết kiến cĩ tác dụng bổ thận, kiện tỳ, dưỡng

can, vinh cân, bổ mà khơng táo, rất nhiều người sau khi ăn kiến thấy tỉnh thần hưng

phấn, ăn uống ngon miệng [52]

Lý Tân Thành (1990) nghiên cứu cho biết sử dụng bột kiến thường xuyên cĩ

tác dụng phịng trị bệnh viêm khớp dạng thấp, liệt dương, hoa mắt ruổi già, viêm gan mạn, mất ngủ Riêng kiến gai đen cĩ rác dụng tư bổ tương đối mạnh, thường dùng trong trường hợp bệnh lâu ngày, phụ nữ ít sữa [53]

Tại Việt Nam việc sử dụng cơn trùng và chế phẩm của chúng trong chăm sĩc sức khoẻ ban đầu tại cộng đơng đã cĩ từ xa xưa Những kinh nghiệm dân gian quí

báu đĩ được lưu truyền từ thế hệ này qua thế hệ khác và được gìn giữ như bí quyết

Trang 6

riêng của rừng dịng họ tại cộng đồng dâu tộc thiểu số Hiện nay việc sử dụng cơn

trùng được phổ biến rộng hơn trong cộng đồng Đã cĩ một số nghiên cứu về giá trị

hống miễn dịch của sinh phẩm từ

dinh dưỡng, tăng cường trí nhớ, tác động lên hệ

tầm, mối, kiến, châu chấu, sâu chír nhằm gĩp phân khẳng định giá trị của cơn trùng

trong ẩm thực và y học [16]; [23]; [24]; [26]; [33]

Một số lồi kiến đen đã được đồng bào các dân rộc thiểu số thuộc vùng núi phía Bắc( Lạng Sơn, Bắc Cạn, Lai Châu, Phú Thọ, Bắc Giang ) thu gom kiến và trứng kiến sử dụng làm nguồn thực phẩm đặc sản cĩ giá trị dinh dưỡng cao.Người đân ở vùng này cịn dùng kiến trường thành giã nhị làm thuốc chữa các vết thương, mụn ohot

Trong khoảng một vài năm gần đây, hàng ngày qua cửa khẩu Hữu Nghị Quan,

Đơng Đăng đã

Polyrhachis vicina Roger (tén khac 1a Polyrhaehis afinie Smith) gần giống với lồi diễn ra việc rái xuất kiến đơng lạnh với khối lượng lớn lồi kiến Polyrhachis dives Smith cia Viet aam Loai kiga Polyrhachis vicina di được sử dụng để điều trị bệnh viêm khớp, thấp khớp, đau gan, bệnh hen Kiến được nhân nuơi ở Trung Quốc, đĩng gĩi đơng lạnh sau đĩ nhập vào cửa khẩu Đồng Đăng rồi xuất ở

cảng Hải Phịng để chuyển sang Đài Loan và một số nước trong khu vực Vì theo

kinh nghiệm của người Trung Quốc thì “Muốn sống lâu hãy ăn mối và kiến” [51] 'Theo dự báo của Liên Hiệp Quốc, đến năm 2050 dâu số thế giới sẽ tăng từ 6 tỷ

lên 9.3 tỷ người, rong đĩ Ấn Độ là 1.6 tỷ (răng 60%) Mỹ hiện cĩ 283 rriệu sẽ thành 400 triệu (chủ yếu do nhập cư) Dân số châu Phi tăng từ 1 tỷ thành 2 - 3 rỷ Tuổi thọ trung bình của nữ giới là 80, của nam giới là 75 Trung Quốc sẽ cĩ khoảng 99 triệu

người cĩ tuổi trên 80 so với 11 triệu hiện nay Các nước cơng nghiệp phát triển (châu

Âu, Bắc Mỹ, Nhật ) sẽ phải đối mặt với hiện tượng “cơng dân già” Từ đĩ sẽ xuất

hiện một nhu cầu lớn vẻ các sản phẩm cho lớp “cơng dân già” như các loại mỹ phẩm chăm sĩc sắc đẹp, thực phẩm chức năng chăm sĩc sức khỏe Nhằm gĩp phần nâng

cao chất lượng cuộc sống và phịng bệnh cho người cao tuổi cần cĩ thực phẩm thuốc

dành riêng nhằm đáp ứng cuộc sống tâm sinh lý khịe mạnh, yêu đời, ăn uống ngon

miệng v.v Do vậy, các thực phẩm chức năng cĩ nguồn gốc tự nhiên rất cần cho dân cư thế kỉ 21

1.2 Tổng quan vẻ bệnh học người cao tuổi 1.2.1 Sinh lý học người cao tuổi

Theo quy luật sinh học, con người trải qua thời gian sinh trường, phát triển,

Trang 7

- Ở mức phân tử: quá mình sinh lý hĩa già là kết quả diễn biến theo một chương trình di truyền đã được định sẵn cho mỗi giống, mỗi lồi, mỗi cá thể

Chương trình này nằm trong các nhiễm sắc thể của nhân tế bào, các phân tử ADN

Tuổi càng cao, lượng ADN càng giảm, các sai lầm trong các trình sao chép ADN, giải mã prorein càng cao rạo ra các biến dị, từ đĩ đắn đến các sai sĩt, các khuyết rat

trong cơ thể, gây nên bệnh tật

- Ở mức tế bào: sự hĩa già diễn ra khơng giống nhau ở mọi mơ do sự khác nhau về đặc điểm lần mức độ biệt hĩa Mức độ biệt hĩa càng cao thì khả năng sinh

sản càng kém Cụ thể tuổi càng cao thì sự sinh sản của các tế bào này càng giảm, sự

lão hĩa sẽ tăng lên: 1) Sự hĩa già của những tế bào khơng cịn khả năng sinh sản, đĩ là những tế bào thân kinh 2) Sự hĩa già của những tế bào gián phân ít, đĩ là ở tế bào

gan, tế bào nhân mắt, tế bào sừng hĩa, tế bào sụn, tế bào nội mơi, tế bào cơ trơn, tế

bào vỏ thượng thân, tế bào tuyến giáp 3) Sự già hĩa của những tế bào thường xuyên

thay đổi, đĩ là ở các nguyên bào sợi, tế bào da

- Ở mức cơ quan:

+ Ở não: hiện tượng giảm kích thước và giảm số lượng các tế bào, nơ ron thân

kinh, kèm theo đĩ là số lượng tế bào thần kinh đệm răng lên, thối hĩa thân nơ ron,

trụ trục hoặc xi nap thần kinh đệm, phì đại những tế bào thần kinh đệm hình sao

Lipofuscin là hiện tượng đặc trưng của sự hĩa già tế bào, hiện tương này cịn gặp ờ tế bào cơ tim, gan, lách, tuyến thượng thận, mào rinh hồn, tuyến tiền liệt, hồng thể

buồng trứng, kế tỉnh hồn

+ Ở gan và đường mật: lưới nội bào nh đi, số lượng cũng ít đi, tế bào tích lũy

nhiều sản phẩm chuyển hĩa và thối hĩa bạt nhân dạng hốc, màng nhân cĩ nhiều nếp sap

+ Ở thận: giảm số luợng các đơn vị thận và răng mơ xơ ở kẽ, trọng lượng của

thận giảm dân bắt đầu ở tuổi 30 đến 70 tuổi giảm mất 1/3, lịng động mạch thận hẹp lại, lưu lượng máu qua thận ít đi, khả năng tái hấp thu giảm dần

+ Ở tìm và mạch: tế bào cơ tỉm nhiều hạt lipofusein, màng đáy của mao mạch dày lên theo tuổi, tế mào nội mơ của thành dong mach it ty lap thể, lưới nội bào hẹp, tế bào sợi hĩa mỡ, chất chun ở thành mạch giảm làm mạch bị cứng, đàn hồi kém

+ Ở hệ miễn dịch: do các sai lệch ở mức phân tử tăng lên, sản sinh ra các phân tử protein lạ trong cơ thể, dẫn đến cơ chế kiểm sốt miễn dịch suy yếu, dễ phát sinh

ra các bệnh rự miễn, suy giảm miễn dịch, nhiễm trùng và dễ phát sinh một số bệnh ung thư Đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bào giảm rõ rột, cịn miễn dịch dịch

Trang 8

+ Ở hệ nội tiết: giảm vasopressia gây ảnh hường đến tái hấp thu nước ở thận gây đái nhiều, và cịn gây giảm sút trí nhớ Nữ giới mãn kinh, giảm tiết và đảo lộn

nhịp tiết trong ngày hocmơn prolacrin là do giảm eostrogen, trò khi ESH và L.H tăng

cao hơn lúc tuổi sinh đẻ và tỉ lệ FSH/LH >1 Nam giới cĩ tuổi, lượng FSH, LH tăng

dần đồng thời lượng restosteron giảm dân, tỉnh hồn giảm dân khả năng sinh hĩc

mơn này Tuổi già cĩ hiện tượng tăng cao coctison huyết tương, tăng thải 17 hydroxy

coctico-steroid, ty lệ androgen thượng thân trong máu giảm rõ, tỷ lệ aldosteron niệu

giảm Với chuyển hĩa canxi-phospho, do hoạt động của 2 chất tăng canxi máu là parahoemơn và 1-2-5 hydroxycaleiferol và một chất hạ canxi máu là thyrocaleitonin,

mà làm duy trì hằng định nội mơi của canxi bằng việc huy động lượng canxi từ

xương Do đĩ cĩ hiện tượng giảm khối lượng xương (lỗng xương) L/1 ở nam giới và 1/3 ờ nữ giới cĩ tuổi + Ư tổ chức liên kết: Các sợi tạo keo dày lên, rõ nhất & gan, thận và tụy, biểu hiện là sợi tạo keo muối thối hĩa trong haợc lắng đọng các sắc tố màu vàng hặc nâu hoặc bị nhiễ canxi

Những soi chun bi teo lại, eĩ khi bị đứt và trờ nên thưa thớt các nguyên bào

sợi của mơ liên kết được mã hĩa thơng qua một chương trình định sẵn (theo Robert’)

Sự thối hĩa các đại phân tử các chất căn bản liên kết do tác dụng tiêu hủy của một số enzym như Colagenaza, Elastza, Glycosidaza , lam cho các cơ quan, rổ

chức trở nên ngày càng xơ cứng

1.2.2 Những bệnh lý thường gắp ở người cao tuổi

- Bệnh ở hệ tim mạch: thường gặp các cơn dau thắt ngực, nhồi máu cơ tim, tai

biến mạch máu não, tăng huyết áp, xơ vữa động mạch, tâm phế mạnh, rối loạn dẫn truyền nhịp tỉm, suy tỉm, giãn tĩnh mạch

- Bệnh hơ hấp: viêm phế quản mạn, giãn phế nang, ung thư phổi, viêm màng phổi

- Bệnh tiêu hĩa: ung thư gan, xơ gan, viêm gan mạn, sỏi mậiviêm rúi mật, viêm loét đạ dày tá tràng, viêm đại tràng mạn, táo bĩn, wi, viêm tụy mạn

- Bệnh thận và tiết niệu: viêm thận mạn, viêm bể thận mạn, sơi tiết niệu, rối loạn tiểu tiện các loại

- Bênh nội tiết chuyển hĩa : đái tháo đường, suy giáp trạng, suy sinh dục, răng cholesterol mau, tang acid uric mau, suy vỏ thượng thận

- Bệnh xương và khớp: lỗng xương, thối hĩa khớp, viêm đa khớp, bênh gut,

Trang 9

- Bệnh máu và cơ quan tạo huyết: thiếu máu do thiếu sắt, do thiếu acid folic,

hội chứng tăng đơng máu, bệnh bạch cầu cấp và mạn, đa u tủy xương, ung thư hạch các bệnh tự miễn cĩ kháng thể kháng nhân, các bệnh cĩ tự

- Bệnh tự mít

kháng thể đặc hiệ

- Bệnh mắt: đục tủy tinh thể, glơcom, thối hĩa võng mạch và mạch mạc, reo

dây thần kinh thị giác

- Bệnh tai mũi họng: giảm thính lực, ù tai, rối loạn tiền đình, ung thu ving tai,

(kháng hồng cầu, kháng giáp, kháng viêm niêm mac da day

mũi, họng

- Bệnh răng, hàm, mặt: tổn thương quanh răng, ở răng, viêm khớp thái dương

hàm, tân sản u lành tính, u ác tính khoang miệng

- Bệnh ngồi da: ngứa tuổi gài, dày sừng tuổi gìa, u tuyến mơ hơi, xuất huyết

dưới da, mụn cơm, rụng tĩc, ung thư biếu mơ, bệnh hắc tố da, teo niêm mạc sinh dục

nhất là ở nữ

- Bệnh tâm thần: lọan tâm thần như trầm cảm, hoang tường, loạn tâm thần ác

tính kiểu Kraepelin, trạng thái tăng trương lực muộn, bệnh Alzheimer, thể nhớ bịa,

mê sảng

- Bệnh thân kinh: rối loạn uần hồn não nhiều kiểu, nhiều mức độ, u nội sọ,

hội chứng ngoại tháp như bệnh parkinson, hội chứng Sreele, run tự phát, cơn động

kinh, viêm dạ dày thần kinh, các hội chứng chèn ép thân kinh

Trong số các bệnh lý ở các cơ quan nối trên, suy giảm nội tiết sinh dục kéo theo sức khỏe sinh sản cũng giảm rệt Vấn đề nâng cao chất lượng cuộc sống vẻ chức

năng sinh sản được đặt ra nhằm thu hút sự quan tâm của các nhà y sinh học Theo

cơng bố của WHO tính đến năm 2000 trên tồn thế giới vẻ tỷ lệ vơ sinh chiếm 8%

trong số các cặp vợ chồng và cĩ tới 300 triệu nam giới mắc bệnh rối loạn cương

dương

Tại Việt nam đã cĩ nhiều cơng trình nghiên cứu vẻ tình hình suy giảm chức

năng sinh sản [1]; [15]; [18]; [21]; [30]; [32] Tình trạng rối loạn cương dương ở Việt nam hiện nay khá cao, chiếm 21,8% ở tuổi 41-50; 28-57% ở tuổi trên 60

1.3 Tổng quan của YHHĐ về chức năng sinh san

Trong những năm gần đây sức khỏe sinh sản đang ngày càng được giới khoa

học trên thế giới quan tâm WHO nhận thấy vơ sinh là một vấn để mang tính tồn cầu, số liệu thống kê khơng chính xác và cĩ sự khác biệt theo từng khu vực trên thế

giới ước tính cĩ khoảng 8% các cặp vợ chồng ở độ tuổi sinh sản đang phải đối mặt

với vấn đề vơ sinh [3]; [19]; [35]; [46]

1.3.1, Chức năng sinh lý của hocmon (esiosteron,

Thời kỳ bào thai testosteron được bài tiết dưới tác dụng kích thích của HCG là một hormon do nhau thai bài tiết Testosteron là một hormon steroid cĩ 19C với

Trang 10

trọng lượng phân tử 288,4 dalton Testosteron là một hormon cĩ rác dụng trên nam

giới về sự phát triển cơ thể, thể chất, tâm lý, chức năng sinh sản và sinh dục Nam

giới trường thành bình thường nồng độ testosteron trong huyết tương là 6 mg / ngày, trong huyết thanh cĩ 10-35 nanomol/ L OH OH HO: s^? 'Testosteron Dihydrorestosieron

HE THONG THAN KINH ee

Trang 11

(Theo Ronal S $, M.D va Christina Wang, M.D }

Khi bệnh nhân nam cĩ nồng độ testosteron thấp là triệu chứng quan trọng để chẩn đốn suy giảm sinh dục thứ phát hay nguyên phát [47] Vai trị, rác dụng của

1estosterron đối với giới tính nam :

* Trong thời kỳ bào thai testosteron biệt hĩa trung khu sinh dục vùng dưới đơi

theo hướng nam (quy định giới tính nguyên phát), phát triển cơ quan sinh dục Vào tháng thứ 7- 8 của thai nhỉ, restosteron kích thích sự di chuyển của tỉnh hồn từ bụng

xuống bìu

*# Đến tuổi dậy thì testosteron kích thích sự phát triển và hồn thiện bộ máy

sinh dục: nh hồn, dương vật, bìu, tuyến tiền liệt, túi tinh nở To ra, túi tỉnh sản xuất

nhiều frucrose để nuơi dưỡng tỉnh trùng

*# Testosteron duy trì bản năng sinh dục, phát triển tâm lý nam, phát triển các

đặc điểm sinh dục phụ nam thứ phát: thanh quản ro, giọng trầm, mọc lơng nách, lơng

mu, mọc râu, xương - cơ phát triển, da khơng mịn màng và tăng bài tuyến chân lơng

Điều hịa bài tổiết testosteron qua sơ đồ trên

1.3.2 Chúc năng sinh lý của hocmon sinh duc nit (eostrogen)

Hocmon sinh dục nữ (eostrogen) do tế bào áo trong của nang, hồng thể, nhau

thai, tuyến thượng rhận, tinh hồn tiết ra Bản chất hĩa học: là một srerid loai C,,,

tên chung cho các dẫn chất hocmơn sinh dục nữ, gồm cĩ beta-eostradiol Trong

cơng thức cấu tạo cĩ nhân phenol Oestrogen được tổng hợp từ các mẫu Acetyl-CoA hay được chuyển từ testosteron Trong máu 3% oestradiol ở dạng tự do, cịn lại 60%

gắn với albumin, 7% gắn với globulin Tại gan, oestradiol bị oxy hĩa hay liên kết với acid glucuronic hay voi sunfar để sau đĩ được đào thải ra ngồi

'Vai trị của oestrogen đối với giớ tính nữ như sau:

* Tác dụng lên cơ quan sinh dục: phát triển cơ tử cung, tăng lượng protein cơ

tử cung Tăng sinh nội mạc tử cung nửa đầu thời kỳ kinh nguyệt, tăng dịng máu đến tử cung Tăng co bĩp cơ tử cung, đặc biệt khi cĩ thai Tăng bài tiết dịch nhảy quánh, trong và kiểm tính, tạo điều kiện cho tỉnh trùng sống và di chuyển Làm cho liên bào

am đạo sừng hĩa, tránh sang chấn, ma sát trong khi giao hợp Tăng nhu động và co

thắt, tăng bài tiết của các tế bào ống, tạo điều kiện rỉnh trung và hợp tử chuyển động

trong vịi trứng Làm răng mắn cảm buịng trứng với ESH và phối hợp với ESH Imà trứng chín, gây động dục và giúp thụ tinh Làm phát triển lớp mỡ, mơ đệm hệ thống ống tuyến vú, làm tuyến vú nờ to, đặc biết ở tuổi day thì, lúc cĩ thai Trong thời kỳ mang thai, cùng phối hợp với progeteron làm phát triển tử cung giúp thai lớn dần,

làm phát triển dây chẳng, khớp mu, khung chậu, tạo điều kiện thuận lợi sinh đẻ, phát

Trang 12

triển hệ thống tuyến, ống sữa, chuẩn bị nuơi con, phối hợp với progesreron chuẩn bị

cho tac dung ca prolactin

* Tác dụng lên chuyển hĩa: kích thích sinh tổng hợp ARN,, trong aban té bao,

tăng tổng hợp protein, đặc biệt ờ cơ tử cung, giảm thái triển prorein Tăng dự trữ lớp

mỡ dưới da, gây lắng đọng mỡ ở một số vị trí quan trọng như mơng, ngực, vú, tao đáng phụ nữ, làm giảm cholesteron máu tăng hấp thu canxi ở ruột, tăng lắng đọng

canxi đặc biệt ở xương, răng phát triển sụn liên hợp, làm cốt hĩa sụn liên hợp ờ đầu xương dầi, làm xương hơng rộng hơn xương vai

* Tác dụng lên đặc tính sinh dục phụ: tạo dáng nữ, tính cách nữ (vai hẹp,

mơng nờ, đùi phát triển theo kiểu hội rụ, rụ mỡ nhiều ở ngực, mơng, vú, da mịn

mềm, giọng nĩi thanh, tĩc nhiều, lơng ít, gây thái độ động dục )

Điều hịa bài tiết theo sơ đồ:

HE THONG THAN KINH ss

TRUNG ƯƠNG NGỒI ĐồiTHỊ Ế————_ Mơi rường by 'ÝNG Dưới BỒI Neurotransmitters Neuropeptids “ 4 GoRH đ Tuyến Yên Ỳ Ỷ oO LH (+) OQ FSH Buéng tring Té bào nang trứng, hồng thể, nhau thai (+) Oestrogen (-)

TRUC DUGI DOI THI - TUYEN YEN - BUONG TRUNG

Trang 13

1.4 Tổng quan của YHCT vẻ chức năng sinh sẵn

4.4.1 Quan niệm về tỉnh của YHCT

Trong các nguyên nhân gây võ sinh nam thì nguyên nhân do thay đổi vẻ số lư-

ợng và chất lượng tỉnh trùng chiếm tới 80% [2]; [9]; [32]; [59] Lý luận YHCT cho

rằng rỉnh là vật chất cơ bản tạo thành cơ thể và thúc đảy hoạt động sống của cơ thể "Trong quá trình phát triển cơ thể, rinh cũng thường xuyên bị tiêu hao và cũng luơn được bổ sung để duy trì hoạt động sống

Theo YHCT tỉnh bao gồm tỉnh tiên thiên (nh sinh dục) và tỉnh hậu thiên (tỉnh dinh dưỡng)

*# Tinh tiên thiên xuất hiện cùng với sự sống sau khi nam nữ giao hợp, thụ thai,

là vật chất nguyên thủy cấu rạo nên hình thể của bào thai Như vậy rỉnh tiên thiên là tinh (trứng) của mẹ kết hợp với tinh của cha thành bào thai

* Tinh hậu thiên là chất tỉnh vi do tỳ vị chuyển hĩa đổ ăn thức uống mà thành

Chất tinh dinh dưỡng chảy trong mạch được chờ đi khắp cơ thể đảm bảo cho sự sinh

trường của cơ thể

*# Giữa tỉnh tiên thiên và tỉnh hậu thiên cĩ mối quan hệ tác động gắn kết chặt

chẽ với nhau: phải cĩ tỉnh tiên thiên mới cĩ sự hình thành bào thai, đủ ngày tháng ra

đời thì được tỉnh hậu thiên bổ sung làm cho dồi dào, tiếp rục phát triển Hải thượng

lãn Ơng: “ Con người lúc mới phơi thai bắt nguồn từ tỉnh huyết, lúc đã sinh ra là nhờ đồ ăn dinh dưỡng ” Khơng cĩ tỉnh huyết thì khơng gây thành hình thể con

người, khơng cĩ đồ ăn rhì hình thể khơng cường tráng Tỳ vị là bể chứa cơm nước

nhưng phải nhờ chân dương, chân hịa của thận làm cho ngấu nhữ thức ăn hĩa sinh

thành chất tỉnh vi đi nuơi dưỡng cơ thể [7]; [18]; [27]; [28]

1.4.2 Thân và mệnh mơn

Theo y học cổ truyền thận nằm ở thắt lưng “Lưng là phủ của thận” “Thận cĩ

2 quả bám vào xương sống, khoảng giữa là huyệt mệnh mơn, một lỗ (khiếu) trắng bên tả là chân thủy, một lỗ (khiếu) trắng bên hữu là chân hỏa, làm căn bản cho âm dương, cha mẹ của khí huyết” Điều này cho thấy chức năng quan trọng của thận đối với cơ thể

Thao là nơi ràng tỉnh, thận chủ thủy, tiếp thu tỉnh của lục phủ ngũ tạng và tàng trữ

lại “5 rạng 6 phủ đều cĩ tỉnh của nĩ, khi đầy là chuyển vẻ thận Thận là nơi chứa giữ tỉnh” (Thận giả tỉnh chỉ xứ dã)

Tỉnh ràng trong thận cĩ hai nguồn gốc: một tỉnh tiên thiên từ cha mẹ truyền

lại, sau khi sinh ra cơ thể chuyển một phần từ tỉnh hoa của đổ ăn thức uống thành tỉnh hậu thiên

Tinh tiên thiên và rỉnh hậu thiên trong thận hịa vào làm một khơng thể phân

ly Lúc cịn rong bụng mẹ chưa cĩ nh hậu thiên, tỉnh tàng trong thận đơn thuần chỉ

Trang 14

thuộc tiên thiên Khi ra đời dần theo sự sinh trưởng phát dục của cơ thể tỉnh hậu

thiên khơng ngừng bổ sung cho tỉnh tiên thiên làm cho nĩ dần sung mãn Thận tỉnh

hố sinh thận khí và thận khí cĩ quá trình phát triển của nĩ theo quy luật chu ky

"bát" cho nam và "thất" cho nữ giới Cụ thé & nam giới:

8 tuổi : Thận khí đây, thay răng sữa, mọc dài tĩc

8x2 =16 tuổi: Thận khí thịnh , thiên qúy đến, tỉnh khí đầy đủ, âm dương hịa

cĩ thể cĩ con

8 x3 = 24 tuổi: Thận khí cân bằng gân cốt cứng cáp, răng khơn mọc 8x 4= 32tuối: Gân cốt thịnh , cơ nhục tráng kết

8x 5= 40 tuổi: Thận khí suy, tốc rụng, răng khơ

8x6=480

8x 7 =56 tuổi: Can khí suy, gân yếu, thiên qúy kiệt, tình ít, thận rạng suy

8 x8 = 64 tuổi: Răng, tĩc đều rụng : Dương khí suy ở trên, mặt sạm, tĩc hai bên thái dương bạc

7 tuổi : Thận khí đầy, thay răng sữa, mọc dài tĩc

7x 2 =14 muổi: Thận khí thịnh, thiên qúy đến, khí huyết đầy đủ, mạch xung

thơng với mạch nhâm, cĩ nguyệt rín,âm dương hịa cĩ thể cĩ con

7 x3 = 21 tuổi: Thận khí cân bằng gân cốt cứng cáp, răng khơn mọc, tĩc dài,

da mịn

7x 4= 28 tuổi: Gân cốt thịnh, da cơ nhục mềm mại

7x 5= 35 tuổi: Thận khí suy, tĩc rụng, răng khơ, da bắt đầu nhăn

'Tam dương khí suy, mặt sạm, tĩc hai bên thái dương bạc

"Thận can khí suy, gân yếu, thiên qúy kiệt, khí huyết suy, răng

tĩc khơ rụng

Như vậy, sự thịnh vượng của tỉnh khí trong thận sinh ra “Thiên qúy” Thiên

qúy là khái niệm chỉ một loại chất tỉnh tuý sinh ra khi tỉnh khí trong thận phát triển

đến một mức độ nhất định Loại chat tinh túy này cĩ tác dụng thúc đầy chức năng

sinh sản của cơ thể Nam giới cĩ rỉnh trùng và xuất tỉnh khi “tỉnh khí tràn đầy”; nữ

gi

trung niên thận khí suy giảm dân, thién gáy cũng dân suy kém, chức năng sinh dục

cĩ nỗn bào và phĩng nỗn khi tỉnh khí đầy, xung nhâm giao thơng Đến thời kỳ cũng suy yếu dân Đến tuổi (8x8=64 ở nam và 7x7=49 ở nữ) thiên qúy kiệt, chức năng sinh dục của cơ thể suy thối, cơ quan sinh dục thu nhỏ lại, cuối cùng mất hẳn chức năng sinh dục

Thận khí cịn

- Thận dương cĩ tác dụng làm ơn ấm, vận động, hưng phấn quá trình khí hĩa

tiết sự chuyển hĩa và chức năng sinh lý của cơ thể: của cơ thể nên cịn gọi là chân dương, nguyên dương, chân hịa

Trang 15

- Thận âm cĩ tác dụng làm tư nhuận, an thần, thành hình và chế ước châu

đương nên cịn gọi là chân âm, nguyên âm, chân thủy

1.4.3, Một số kết quả nghiên cứu điều trị rối loạn chức năng sinh bing YHCT

Vấn đề điều trị bệnh vơ sinh nam bằng động vật, thực vật đã và đang thu hút sự quan tâm của nhiều rác giả [3]; [19]; [13]; [27]; [28] Đã cĩ hàng loạt các cơng trình nghiên cứu sử dụng cây con điều trị chứng bệnh suy giảm sinh dục, đặc biệt sau

khuyến cáo tại Đại hội Nam khoa tồn Trung Quốc ( Lạc Dương, 4/2002): Điều trị vơ sinh nam nên tăng cường dược vật dạng hạt, dạng con do thuốc cĩ tác dụng rốt trên trục dưới đổi- tuyến yên- tỉnh hồn [59] Phạm Văn Trịnh (2002): Nghiên cứu

dịch té học liệt dương và độc tính trên thực nghiệm của bài thuốc YHCT điều trị

dương Qua điều tra 764 nam giới đã cĩ vợ ở uổi trên 18 ở 4 địa điểm với đại diện

cho miền Nam và miền Bắc, nơng thơn, thành thị, lao động trí ĩc và lao động chân

tay cho biết: rỷ lệ liệt dương chiếm 15,7%, rỷ lệ hoạt tỉnh 3%, mộng tỉnh 12,5%, di

tỉnh 0,9% Bài thuốc gồm: nhân sâm, nhục thung dung, dâm dương hoắc, đương quy,

rễ sâm cau, bài thuốc đáp ứng được kích thích tăng ham muốn tình dục, làm cương dương vật, kéo dài thời gian cường dương [31]; [32] Trịnh Hồi Nam: Nghiên cứu

ứng dụng bài thuốc “Tụ tỉnh thang” trong điều trị vơ sinh nam Bài thuốc gồm các vị: thục địa, hồng tỉnh, hà thủ 6, sa uyến tật lê, kỷ tử, phục linh, ý dĩ, ba kích Bài thuốc cĩ tác dụng chính là bổ thận kiện tỉnh, kiện tỳ trợ vận Bài thuốc cĩ tác dụng cải

thiện rõ ràng số lượng cũng như chất lượng rinh trùng Kết quả nghiên cứu 50 người

vơ sinh nam thì vợ của 6 người đã cĩ thai Chất lượng tỉnh dịch đạt loại A 44%, loại

36%, loại C 20% [35]; [36] Vũ Đức Mối (2003): Nghiên cứu bào chế và đánh giá

tác dụng của cao tráng dương CD trên lâm sàng và thực nghiệm Kết quả trên lâm

sàng sau khi uống cao CD ở những người tình nguyện đã làm tăng trung bình mức

testosteron rrong máu tăng lên 11,76 %, đánh giá chung về mặt lâm sàng CD cĩ hiệu lực tốt và khá trên người là 83,30% [21]

Kết quả nghiên cứu của Nguyễn Thị Van Thái và cộng sự cho thấy tác dụng

tăng cường trí nhớ của trứng kiến (Polyrachis đives), mối (Macrotermes anandelae) trên động vật thí nghiệm [16]; [24]; [25] Đánh giá tác dụng bổ dương của nam

đơng trùng hạ thảo, Bành Khừu và cộng sự đưa ra kết quả khẳng định tiềm năng sử dụng cơn trùng theo y học Cổ truyền trong chăm sĩc sức khoẻ ban đầu rại cộng

đơng [17] Kiến (#ørmicidae) là một họ thuộc bộ cơn trùng cánh màng

(Hymenoptera), Két qua aghién citu hod thach cho biét ít nhất kiến đã xuất hiện trên

hành tỉnh của chúng ta cách đây hơn 45 triệu năm Trong rự nhiên kiến cĩ vai trị hết

sức quan trọng: chúng gĩp phần khơng nhỏ vào việc thụ phấn cho cây; tham gia tích

cực vào việc thu dọn vệ sinh mơi trường ăn xác động thực vật hối rữa và cịn một số

Trang 16

khác là thiên địch của sâu hại nơng lam nghiệp Kiến và mối cịn là nguồn thức ăn cho nhiều lồi động vật khác nhau, trong đĩ cĩ những lồi làm dược liệu quý hiếm

như tê tê, kỳ đà v.v

Theo kinh nghiệm dân gian và y học Cổ truyền, kiến là một trong số cơn trùng xã hội cĩ tác dụng bổ dưỡng, cải lão hồn đơng và chữa được một số bệnh lãng

Trang 17

CHƯƠNG 2 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Nguyên liệu, phương pháp nghiên cứu khảo sát thực địa, xây

dựng quy trình nhân nuơi kiến trong phịng thi ng)

2.1.1 Phương pháp nghiên cứu khảo sát thực địa

- Thời gian nghiên cứu từ tháng 5 đến tháng 11 năm 2003

- Địa điểm tiến hành khảo sát, thu thập thơng tin và vật mẫu tại thị xã Lạng Sơn, thành phố Việt Trì-Phú Thọ và vùng phụ cận

- Phương pháp nghiên cứu chủ yếu dựa trên phương pháp điều tra

thường quy đối với cơn trùng định tính

- Các thơng tin khác được thu thập, phân tích qua các nguồn tài liệu

tham khảo rong và ngồi nước; qua các cuộc tiếp xúc trao đổi với một số

lương y người địa phương, cán bộ quản lý khơa học cơng nghệ của tỉnh Tạng Sơn, Phú Thọ và một số người dân địa phương hữu quan

2.1.2 Xác định thành phân hố học đặc trưng của trứng kiến|20];/29]

Dinh lượng acid amin tồn phan bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu nang

cao với máy phân tích acid amin tự động HP-amino quant series II-1090;

các nguyên tố vi lượng Zn, Cu, Se, (theo phương pháp quang phổ hấp phụ

nguyên tử và nhiễu xạ huỳnh quang tỉa X ( xem các hình 3, 4) và tiền tố

hoĩc mơn Progesteron, Testosteron (theo phương pháp miễn dịch Enzym

ELIZA)

2.2 Nguyên liệu, phương pháp nghiên cứu bào chế rượu RTK [10]

2.2.1 Nguyên vật liệu:

-Trứng kiến gai đen khai thác tự nhiên, đạt tiêu chuẩn cơ sở

- Ethanol 909% Đạt tiêu chuẩn DĐVN III

- Nước tỉnh khiết, đạt tiêu chuẩn V iện vệ sinh dịch tễ

- Các hố chất kiểm nghiệm sản phẩm, đạt tiêu chuẩn DĐVN II và tiêu chuẩn phân tích kiểm nghiệm thuốc

2.2.2 Phương pháp nghiên cứu xây đựng cơng thức bào chế

- Nghiên cứu xử lý tạp chất trong nguyên liệu: trứng kiến trước khi đưa vào chiết tiến hành loại các tạp chất cơ học: đất cát cặn bản và xác kiến bằng phương pháp cơ học như rửa gạn, lọc Sau đĩ dùng tươi hoặc đem sấy

ở nhiệt độ 50C cho tới khơ ngâm để chiết hoạt chất

Trang 18

- Nghién ctu sir dung néng độ cồn để chiết xuất hoạt chất: sử dụng cồn cĩ nồng độ là: 40% ; 45% ; 50% Tiến hành ngâm lạnh với thời gian là 30

và quan sát tính chất của dịch chiết

- Nghiên cứu thời gian chiết xuất hoạt chất: sử dụng phương pháp chiết xuất ngâm lạnh với dung mơi là ethanol 45% để chiết hoạt chất từ trứng kiến gai đen Tiến hành ngâm 15 mẫu (10 mẫu tươi và 5 mẫu khơ) với

c

ngày Sau đĩ gan dich chiết do lại

thời gian của 2 lần là: lần 1 là 30 ngày, lằn 2 là 10 ngày San khoảng thời

gian đĩ tiến hành gộp 2 lần dịch chiết và đem định lượng nitrogen tồn

phan theo phương pháp DĐVN II, định tính axit amin bang phương pháp sắc ký kết hợp điện di trên giấy và quan sát tính chất của dịch chiết

- Dịch chiết thu được thường cĩ váng mỡ và cặn bã được liệu do ép

vắt Loại váng mỡ bằng cách hạ nhiệt độ xuống 5”C rồi gan vot di

2.2.3 Phương pháp nghiên cứu bào chế rượu thuốc RTK [10J

Bao chế rượu thuốc RTK theo phương pháp bào chế rượu thuốc động

vật ghỉ trong DĐVN IIL

- Xử lý nguyên liệu trứng kiến đạt TCCS trước khi đem chiết

- Điều chế dịch chiết bằng phương pháp ngâm lạnh với ethanol 45% Ngâm 2 lần, lần 1 là 30 ngày, lần 2 là 10 ngày

- Phối hợp dịch chiết của 2 lần ngâm

- Xử lý tạp chất trong dịch chiết, để lắng và lọc - Đĩng gĩi và hồn chỉnh thành phẩm

- Kiểm nghiệm sản phẩm

3.3.4 Phương pháp nghiên cứu xây đựng tiêu chuẩn nguyên liệu [10]

Tring kiến gai đen tự nhiên được thu mua vào mùa sinh sản (tháng 3 hoặc tháng 8), sau khi đã nhặt sạch hết kiến con và các tạp chất, đem rửa sạch, hong khơ tự nhiên Trứng kiến được thử bằng các tiêu chuẩn sau:

- Hình thức cảm quan: thử bằng cảm quan

- D6 am: thir theo PL 5.16 — DDVN IIL

- Định tính acid amin: phương pháp sắc ký kết hợp điện di trên giấy

- Dinh lượng nitrogen tồn phần: thử theo PL 6.5 - DDVNII

3.2.5 Phương pháp nghiên cứu xây đựng tiêu chuẩn rượu RTR [10J

Xây dựng tiêu chuẩn rượu thuốc RTK theo chuyên luận chung về rượu

thuốc trong DĐVN II

- Màu sắc: thử bằng cảm quan

Trang 19

- Mùi vị, độ trong và độ đồng nhất: thử theo PL 1.17- DDVN I - Ham luong ethanol: tht: theo PL 6.15- DDVN IL

- Tỷ trọng: thử theo PL 5.15- DDVN IIL

- Dinh tinh: dinh tính các acid amin bắng phương pháp sắc ký lỏng

hiệu năng cao với máy phân tích acid amin tự động HP-amino Quant series

T 1090, so sánh với acid amin chuẩn về thời gian lưu trén pic: Aspartic;

Glutamic; Serin; Histidin hydroclorid; Glycin; Threonin; Alanin; Arginin hydroclorid; Tyrosin; Valin; Methionin; Phenylalanin, Isoleucin; Leucin, Lysin hydroclorid; Prolin (xem biah 3)

2.3 Đối tượng và phương pháp nghiên cứu trên động vật thí nghiệm

Thực nghiệm đánh giá hiệu lực và tính an tồn của chế phẩm RTK

Xác định LDạy (Berehads) [8] và độc tính bán trường diễn (A wallace, Hayes, 1994) [40] 2.3.1 Phương pháp xác định liêu độc cấp (LD) - Động vật thí nghiệ: khơng phân biệt giống, trọng lượng nặng 19#1g do trại chăn nuơi Viện vệ : chuột nhắt trắng, chủng Swiss khoẻ mạnh sinh dịch tễ cung cấp (n=30)

- Phương pháp nghiên cứu: dùng cơng thức của Behrends để xác định liều LD„; (nếu cĩ chuột chết)

+Theo dõi triệu chứng của động vật thí nghiệm sau khi cho uống

RTK các liều khác nhau Ghi rõ thời điểm cĩ chuột chết ở các lơ sau

24,48,72 giờ

+ Mồ chuột và ghi các biểu hiện khác thường (quan sát đại thể phủ

tạng theo tiêu bản vi thể các cơ quan chịu rác dụng của thuốc như gan, tim,

than, da day)

2.3.2 Phương pháp xác định độc tính bán trường dién [40]

- Động vật thí nghiệm: thị khỏe mạnh, cĩ trọng lượng 2500- 3000g (n=6)

- Phương pháp nghiên cứu: so sánh sự thay đổi các chỉ số sinh hĩa, huyết học trước và sau 6 tuần sử dụng RTK

- Chi tiêu nghiên cứu: số lượng hồng cầu, huyết sắc tố, số lượng

bạch câu, cơng thức bạch câu, hàm lượng urê, ereatinin, SGOT,

SGPT trong huyết thanh

Trang 20

2.3.3 Phương pháp nghiên cứu tác dựng rượu RTK lên chức năng sinh

sẵn ở thơ và chuột

Đánh giá tác dụng bổ dương theo kiểu Androgen: xác định trọng

lượng túi tỉnh (trên chuột nhắt trắng), đánh giá tác dụng sinh tinh va chất

lượng tỉnh trùng (trên thỏ)

2 Ni;

- Đối tượng nghiên cứu: chuột nhắt đực trường thành (2 tháng tuổi) cĩ cứu tác dung nơi tiết kiểu testosteron của ruou RTK [11

trọng lượng 17 - 20 g/eon (n=75 )

- Phương pháp: sau phẫu thuật loại bỏ tỉnh hồn Ituần, chuột được

chia ngẫu nhiên làm 3 lơ thí nghiệm:

+Lơ 1 (20 con): lơ đối chứng uống nước đun sơi để nguội liên tục

trong 10 ngày

+L6 2 (25 con): lơ uống restosteron với liều 200 mg/kg thể trọng

chuộr/ngày, liên tục trong 10 ngày

+Lơ 3 (30 con): lơ uống rượu RTK với liều 25g/kpg thể trọng

chuộr/ngày, liên tục trong 10 ngày

- Các chỉ tiêu theo dõi: so sánh trọng lượng túi tỉnh (mg) cuả chuột

sau phẫu thuật loại bỏ tình hồn trong 3 lơ nghiên cứu

2.3.3.2 Nghiên cứu tác dung của RTK lên số lương và chất lương tỉnh, trùng thỏ

- Đối trọng nghiên cứu: Thỏ đực trưởng thành, khịe mạnh giống

New - Zealand 5 tháng tuổi, phát triển sinh lý bình thường, cĩ thể trọng

trung bình 3,0 +0,2 kg Thỏ được nuơi riêng biệt, chế độ dinh dưỡng, chăm sĩc theo chế độ của viện vệ sinh dịch tễ Sau 10 ngày nuơi cho thỏ ổn định , lấy tỉnh thỏ bằng âm đạo giả, nước trong thành âm đạo giả 42- 45°C, dùng thỏ cái động dục làm giá, khoảng cách hai lần lấy tỉnh là 3 ngày, lấy tỉnh

vào các buổi sáng

Động vật thí nghiệm được nuơi dưỡng trong điều kiện phịng thí

nghiệm với đầy đủ thức ăn, nước uống và chiếu sáng theo chu kỳ 12°/ngày - Phuong pháp và chỉ tiêu nghiên cứu: so sánh sự thay đổi số lượng,

chất lượng tinh trùng thỏ trước và sau uống RTK với liều 10g/kg thể trọng

trong 45 ngày:

+ Thể tích 1 lần xuất tỉnh V(ml): đo bằng ống đong ml

Trang 21

+ Hoạt lực A (%): sức hoạt động tiến thẳng của tỉnh trùng Sức hoạt

động (hoạt lực của tinh trùng) được tính bằng tỷ lệ % tỉnh trùng cĩ hoạt

động tiến thẳng so với tổng số tinh trùng cĩ trong vi trường quan sát được

Việc đánh giá được cho điểm theo thang 10 điểm (Milovanơp

V.K,1972) Soi tiêu bản dưới kính hiển vi ở vật kính 40 X

+_ Nơng độ tỉnh trùng C (Triệu/ ml): Tỉnh dịch được pha lỗng bằng

dung dịch NaHCO, 5% với tỷ 1¢ 1/20 (Cho 50 ml + 950 ml NaHCO, 5% vào

ống nghiệm rồi lắc đều) Dùng buồng dém Neubauer xác định được số tỉnh trùng/mÍ tỉnh dịch

+ Số lượng tỉnh trùng trong một lần lấy tinh V.C (triệu)

+ TỈ lệ tỉnh trùng sống Sg (%): Bằng phương pháp nhuộm eosin/ Nigrosia, xem dưới kính hiển vi và đếm ở vật kính 40X

2.3.4 Nghiên cứu tác dụng chống stress, chẳng oxy hod cita RTK

2.3.4.1.Nghiên cứu tác dung chống stress của RTK

¡ tượng nghiên cứu: chuột nhắt trắng chủng Swảss albino khoẻ

manh, cĩ trọng lượng nặng 19+1g Chuột được chia làm 3 lơ: lơ uống RTK (n=15), lơ uống Giloba (n=10) và lơ uống nước sơi để nguội (n=10)

- Phương pháp nghiên cứu: đánh giá tác dụng chống stress của RTK thơng qua sự thay đổi hệ số giảm đau sau strees shock điện ( hình 5 ) Chuột bị gây stress trong 6 ngày liên tiếp: 5 ngày đầu 15 phút mỗi ngày, đến ngày

thứ 6 động vật thí nghiệm chịu stress trong 2 giờ liên tục Hệ số giảm dau

là tỷ số giữa giá trị trung bình ngưỡng đau theo thời gian tiềm tầng của phản

xạ giật đuơi (Tail -Flick Test) chuột nhắt trắng sau đánh shock (W;) trên

ngưỡng xuất phát ( W,)

- Chỉ tiêu nghiên cứu: ngưỡng đau (g/s) theo phản xạ giật đuơi (Tail-flick Test)

2.3.4.2 Đánh giá tác duns chống peroxi hớa lipid mang té bao cla RTK

Nghiên cứu rác dụng chống stress bảo vệ tế bào của RTK, thơng qua xác định hàm lugag MDA (Malonyl dialdehyd)

- Déi nrong nghiên cứu: chuột nhất trắng, chủng Swiss albino khoẻ manh khơng phân biệt giống trọng lượng nặng 19+1g

- Phương pháp nghiên cứu: so sánh khả năng ức chế (%) phản ứng

peroxy hố lipid trong dịch nghiền đồng thể tế bào gan và não.Tác dụng

Trang 22

chống peroxi hĩa lipid màng tế bào thơng qua việc xác định hàm lượng MDA dựa theo phương pháp đã được miêu tả bởi Jadwiga R [43]

- Chỉ tiêu nghiên cứu: Hàm lượng MDA (amol/l)

2.4 Phương pháp nghiên cứu trên người tình nguyên và bệnh nhân

2.41 Phương pháp nghiên cứu ảnh hướng của RTK lên huyết áp, hoạt động phan xạ trên người tình nguyên

Do thời gian và kinh phí nghiên cứu được duyệt cĩ hạn, để tài này chỉ bước đầu đánh giá hiệu lực của rượu RTK trên một lượng nhỏ bệnh nhân Sau khi được nghiệm thu, chúng tơi mong se được nhận thêm kinh phí để triển khai thực nghiệm đủ lượng bệnh nhân để độ tin cậy kết quả nghiên cứu lớn hơn

- Đối tượng nghiên cứu: nam giới khoẻ mạnh cĩ tuổi từ 25 đến 55

(n=20)

- Phương pháp nghiên cứu:

+ Nghiên cứu ảnh hưởng của chế phẩm RTK (100mg/kg) lên hoạt động phản xạ thần kinh trên người tình nguyện thơng qua thời gian (msec) phản xạ thính giác - vận động và thị giác - vận động So sánh thời gian phản xạ (msec) trước và sau 30 ngày sử dụng RTK [14] Phản xạ thính giác, thị giác vận động được thực hiện trên máy tính sử dụng phần mềm SENUE chạy trên chương trình MS - DOS theo nguyên tắc: người tình nguyện sẽ

nhắn phím “*enter” khi nhận được tín hiệu mẫu sắc hiện trên màn hình (màu đỏ) hoặc âm thanh (tiếng chuơng)

+Theo dõi sự thay đổi huyết áp (tâm trương, tâm thu) trước và sau 30

ngày sử dụng RTK, theo phương pháp đo huyết áp thường quy - Chỉ tiêu nghiên cứu:

+ Thời gian (ms) phản xạ thính giác — vận động, thị giác - vận động

+ Huyết áp (mmHg)

2.4.2 Phuong pháp nghiên cứu ảnh hướng của RTK trên bệnh nhân rối loạn cương dương

- Đối tượng nghiên cứu: bệnh nhân suy giảm chức năng sinh dục

(n=13) được điều trị tại Viện Y học cổ truyền Quân đội cĩ độ tuổi từ 25 -

55 Bệnh nhân cĩ rối loạn cương dương được đánh giá theo thang điểm quốc

tế về chỉ số chức năng cương duong vat IIEF (Internatiol Index Erectile

Fuaction)

Trang 23

- Phương pháp nghiên cứu:

+ Đánh giá tác dụng điều trị của rượu thuốc RTK dựa trên kết quả so

sánh sự thay đổi chỉ số tỉnh dịch đổ, chức năng cương dương vật IIEE( phụ

lục) trước và sau 30 ngày sử dụng RTK (0,1g/kg)

+Theo đối tác dụng khơng mong muốn của RTK thơng qua các chỉ

số: huyết áp (tâm trương, tâm thu), chức năng gan, thận trước và sau 30

ngày sử dụng RTK (0,1g/kg)

- Chỉ tiêu nghiên cứu: chỉ sé IEF, tinh dich dé, huyết áp, chỉ số xét nghiệm sinh hố và huyết học của bệnh nhân

2.5 Phuong pháp phân tích, xử lý sở liêu

Trang 25

CHUONG 3 KET QUA NGHIEN CUU 3.1 Tình hình nghiên cứu và sử dụng kiến làm thuốc trong y học 3.1.1 Các lồi kiến thuộc giống Polyrhachis da phat hién 6 Viét nam

nay đã phát hiện được 5 lồi kiến thuộc giống Polgrhachis tơn tại ở

miền Bắc Việt nam:

- Lồi Polyrhachis armata Le Guillon: thường sinh sống ở vùng nương rấy trồng lúa, khoai, lạc, chè, bười và cây dại Chúng được phân bố chủ yếu ở Lạng

Sơn, Nam Hà, Nghệ An, Nghĩa Lộ, Quảng Bình và Vĩnh Phúc

- Lồi Polsrhachis hipponeanes moesia Smith: chúng sinh sống gắn với cây

ngơ, vừng, chè và rau muống cạn Cĩ vùng phân bố ờ Bắc Thái, Nghệ An và

Thanh Hod

- Loai Polyrhachis magi Roger: thường sinh sống và phát triển ở nơi trồng lúa, ngơ và chè Vùng phân bố ờ Hà Giang, Nghệ An, Nghĩa Lộ và Yên Bái

- Loai Polyrhachis thosmponi Bingham: cĩ mặt ờ vùng trồng dâu và các cây

cỏ dại Vùng phân bố ờ các tỉnh Bắc thái, Hà giang, Hà Tây và Nghĩa lộ

- Loai Polyrhachis dives Smith: sinh s6ng ven suGi trên các cây bụi và cị dại đã thu được mẫu ở Quế Phong (Nghệ An), vườn quốc gia Cúc phương (Ninh Bình),

Thanh Ba (Phú Thọ) và Lạng sơn

Trên thế giới các lồi kiến này đã được phân bố rộng ở Nhật bản, Đài Loan,

Trung Quéc, Dong Nam A va New Guinea

3.1.2 Đặc điểm hình thái và sinh học lồi Polyrhachis dives Smith:

Cơ thể màu đen, kích thước 5-6 mm Đầu và bụng bao phủ lơng trắng vàng dày đặc Dorsum (ngực ) hơi gù cao U vai phát triển thành gai nhọn Đốt trung

gian giữa bụng và ngực uốn cong thành gai nên cĩ tên là kiến gai đen Trước đây lồi này được xếp vào giống phụ ÄZyrmhopia Forel, 1915 Lồi kiến gai đen sống

trên cây, rạo tổ bằng cách ghép lá do tơ của ấu trùng tuổi cuối tiết ra, kết các mảnh lá lại với nhau Cĩ thể rìm thấy tổ ở trên cây hoặc trong đám cỏ Lồi này cĩ rất

nhiều dạng hình thái (Polygyaous) Trong mỗi tổ cĩ khoảng 50 kiến chúa làm nhiệm vụ sinh sản, chứng tỏ lồi này sinh sản rất mạnh Thường phân tán hoặc

chia thành nhĩm nhỏ khi đi kiếm ăn

Trang 26

1mm

Hinh 6 Kién gai den Polyrhachis dives Smith

Như vậy qua kết quả khảo sát chúng tơi nhận thấy các lồi kiến den thuộc giống Polsrhachis đang sinh tổn ờ miền núi phía Bắc nước ma tương đối phong phú Trong số 5 lồi đã phát

Smith) cĩ đặc điểm hình thái gần giống với lồi kién gai den (Polyrhachis vicina

iện được thì lồi kiến gai den (Polyrhachis dives Roger) đang được nhân nuơi và khai thác ở Trung quốc, mang lại ý nghĩa kinh tế

Tất rõ rằng

3.1.3 Nghiên cứu xây dựng qui trình nhân nuơi kiến

Những nhân tố ảnh hưởng tới sinh trưởng và phát triển của kiến:

- Điều kiện nhiệt độ, nhiệt độ từ 25-30°C, thời gian phát triển của kiến từ trứng tới trường thành từ 30 — 35 ngày; nhiệt độ từ 12 — 20 °C, thời gian phát triển

của kiến từ trứng tới trưởng thành từ 50-60 ngày

- Điều kiện độ ẩm: độ ẩm thích hợp cho kiến phát triển bình thường là 85-

90%; độ am trên 95% hoặc 80% khơng thích hợp cho kiến phát triển

- Điểu kiện ánh sáng: kiến ưa hoạt động đẻ trứng và chăm sĩc ấu trùng

trong bĩng dâm

Quy trình nhân nuơi kiến trong phịng thí nghiệm

Bước 1: Chuẩn bị giống kiến nuơi: kiến được thu thập ngồi tự nhiên đảm

bảo cả tổ kiến cĩ đầy đủ con chúa, kiến thợ, kèm theo cả các vật liệu xây tổ ngồi

tự nhiên

Bước 2: Tạo lồng nuơi kiến trong phịng thí nghiệm:

- Kích thước lồng: Dài x rộng x cao = 40 x 40 x 50 cm;

- Lơng được bao bọc kính xung quanh Để tạo nơi đẻ trứng của kiến bằng cách: xung quang lồng cĩ 8 ống tube thuỷ tỉnh đường kính 2 em thơng vào bên

trong lồng Bên đầu mỗi ống thuỷ rỉnh cĩ một nút bơng giữ nước rạo độ ảm trong

Trang 27

ống Bên ngồi mỗi ống được bao bọc bằng giấy nhơm tạo bĩng tối cho kiến đẻ

trứng Phía đáy lồng cĩ một lưới sắt dùng để dọn vệ sinh và thay thức ăn cho kiến

Lơng cĩ 4 chân cao đặt trên các bát nước để ngăn chặn kiến đi ra khỏi lồng, đồng thời ngăn chặn các lồi kiến khác gây bại Lồng cĩ một cánh cửa để giúp cho việc thay thức ăn, dọn vệ sinh Trong lồng đặt ẩm và nhiệt độ kế để theo dõi nhiệt độ và để điều chỉnh ẩm độ trong lồng

Bước 3:Thức ăn nuơi kiến:

- Nước đường 10%, thức ăn được tạo thành dưới dạng bột khơ bao gồm

thành phần dinh dưỡng như vitamin B,, B;, PP, C, chất khống và vi lượng Ca, Fe ,

phụ gia và các hương liệu khác

ước 4: Chế độ chăm sĩc kiến:

- Hàng ngày cho kiến uống nước đường 10% và cho kiến ăn vào lúc 9-10 giờ sáng

- Hàng tuần tiến hành dọn vệ sinh lồng bằng cách loại bỏ thức ăn thừa - Chú ý ngăn chặn kiến chui ra khỏi lồng

- Khơng để các lồi kiến khác gây hại xam nhập vào trong lồng

- Bảo đảm độ ẩm trong lồng từ 85-95% Tránh tình trạng độ ẩm trong lồng

nuơi kiến quá thấp hoặc quá cao (dưới 80% cao hơn 95%)

Chúng tơi đã nghiên cứu thiết kế lồng nuơi kiến với đây đủ thức ăn, nước uống và điều kiện vi khí hậu gần giống ngồi tự nhiên tạo điều kiện cho kiến phát

triển (hình 7)

Kết quả bước đâu cho thấy rõ tính khả thi của việc nuơi kiến rạo nguồn nguyên liệu ổn định nếu được đầu tư đúng mức Hy vọng đề tài được tiếp tục và

quy trình nhân nuơi kiến cơng nghiệp sẽ được hồn thiện vì nĩ phụ thuộc vào sự

đầu tư kinh phí lớn hơn

3.2 Hàm lượng hormon sinh dục, arinoacids, các vỉ chất trong kiến

Chúng tơi đã tiến hành xác định hàm lượng hormon sinh dục, aminoacids,

các nguyên tố vi lượng Kết quả cho thấy hàm lượng cao các acid amin và các nguyên tố vi lượng cĩ ảnh hưởng trực tiếp tới hoạt động thần kinh cao cấp (tăng cường trí nhớ, chống stress, giảm đau, an thần nhẹ) Kết quả trình bày trong bảng

12,34

Trang 28

Bảng 1 Hàm lượng các hormone steroid trong kiến, mối ; Progesteron (ng/g) | Testosteron (ng/g) Tên mÉu Kiến Mối Kến Mối Mẫu 1 0.198 0.240 0.282 0.200 Mẫu 2 0.201 0.239 0.283 0.150 Mẫu 3 0.188 0.234 0.276 0.140 Tổng số 0.587 0.713 0.841 0.490 TB 0.196 0.237 0.280 0.163 (ngíg/vck)

Kết quả trình bày trong bảng 1 cho thấy việc bố sung hàm lượng các hormone steroids từ kiến, mối cho cơ thể con người là cơ sờ khoa học gĩp phần

giải thích cơ chế tác dụng của việc sử dụng cơn trùng trong điều trị một số bệnh cĩ

liên quan với suy giảm chức năng sinh dục

Kết quả trình bày trên bảng 2 cho thấy hàm lượng cao các vi chất trong hai

mẫu kiến Trung Quốc (nuơi cơng nghiệp) và kiến Việt Nam (thu bắt tự nhiên)

Trang 29

Kết quả xác định hàm lượng aminoaeids trong kiến nuơi cơng nghiệp của

Trung Quốc và kiến Việt Nam thu ngồi tự nhiên (12/2003) được trình bày trên

bảng 3, cho thấy tổng hàm lượng acid amin tồn phân trong cơ thể kiến VN thấp

hơn kiến TQ Song trong kiến Việt Nam chứa một số aminoacid cĩ hàm lượng cao hơn so với kiến Trung Quốc như Lysine trong kiến đen TQ (1,81 g%) thấp hơn

Trang 30

trong kiến VN (2,32g%), Isoleucine 2.168% trong kiến VN cao hon so với kiến TQ (2,01g%), Leucine trong kién VN nhiều hơn hẳn so với kiến TQ (3.08g% so

với 2,76 g%) Hai loại aminoaeids này cĩ vai trị chủ yếu trong quá trình sinh tổng hợp protein của eơ bắp, chống mệt mỗi co thé, Arginine (loại aminoaeid liên

quan tới hormon sinh trưởng và chất lượng tỉnh trùng) trong kiến VN (1,27g%) thấp hơn kiến TQ (1.65g%)

Kết quả xác định các aminoacids trong trứng kiến (Tr.) thu mua tại Thanh

Ba- Phú Thọ (TB) và Nha Trang- Khánh Hồ (NT) được trình bày trong bảng 4

Bang 4 Ham lugng aminoacids trong các mẫu trứng kiến thu mua tai Thanh Ba -

Phú Thọ và Nha Trang - Khánh Hồ

Trang 31

Leucine Lysine Proline Fong sd

Kết quả xác định thành phần aminoacids trình bày trên bảng 4 cho thấy sự chênh lệch khơng nhiều của hàm lượng amiaoacids cĩ trong trứng kiến đã thu mua tại Nha Trang-Khánh Hồ và Thanh Ba- Phú Thọ Cĩ thể coi đây là những gợi ý cho các nhà cơn trùng học vẻ cơ sờ ban đầu trong việc định hướng nghiên cứu xây

dựng làng nghẻ nuơi kiến rại hai vùng sinh thái này

3.3 Kết quả nghiên cứu xây dựng cơng thức bào chế rượu thuốc RTK

3.3.1 Kết quả nghiên cứu sử đựng nồng độ ethanol trong quá trừnh chiết

Dung mơi là ethanol 90% pha lỗng thành các nồng độ trong ứng: 40%;

45%; 50% Tiến hành chiết hoạt chất trong trứng kiến với các dung mơi trên với thời gian 30 ngày San đĩ đo lại độ cồn và quan sát tính chất của dịch chiết Kết

quả được trình bày trên bảng 5

Bang 5 Kết quả nghiên cứu sử dụng nồng độ ethanol chiết hoạt chất

ng độ con

40% 45% 30%

Chỉ tiêu

Độ cồn đo lại 2741 3541 4041

Đục, cĩ nhiều Trong, cĩ váng | Trong, cĩ ít ván;

Tie dich chiết — váng mỡ & cĩ mỡ vững ¬ mỡ

- Sử dụng cồn 40% để chiết thì dịch chiết thu bị đục, cĩ nhiều váng mỡ vì vậy khơng thuận lợi cho quá trình tỉnh chế, xử lý và bảo quản sau này

- Nếu sử dụng cồn 50% thì độ rượu thu được quá cao, cĩ thể khơng tốt cho người sử dụng

” Sử dụng cồn 459% để chiết là thích hợp nhất vì dịch chiết thu được cĩ độ rượu thu được vừa phải mà lại lại dễ dàng tinh chế và xử lý tạp chất ở giai đoạn sau của quá trình bào chế

Trang 32

3.3.2 Kết quả nghiên cứu thời giam chiết xuất

Trứng kiến khai thác tự nhiên sau khi đĩ được loại tạp chất, được đem

ngâm lạnh 2 lần (lần 1 là 30 ngày, lần 2 là 10 ngày) trong dung mơi 1a ethanol 45% Tiếp theo, tiến hành gộp 2 lần dịch chiết và đem định lượng nirogen tồn phần bằng phương pháp ghi trong DĐVN IH, tính hiệu suất chiết Kết quả được trình bày trong bảng 6 Bang 6 Kết quả định lượng nitrogen trong dịch chiết ˆ ˆ 5 Hàm lượng | Hiệu Nguyên | Số | Ngâm | Ngâm : STT ` nitrogen suất Hệa | mẫu | 30 ngày | 40 ngày @ng/100m) | @) 1 Tươi 3 x - 10245,5 70,5 2 Tươi 5 - X 131,646,8 91,2 3 Khơ 5 - % 1113343 78,2

-Trứng kiến tươi ngâm trong 30 ngày hàm lượng nitrogen trong dược liệu được chiết ra chưa kiệt hết, chỉ đạt 70,5% so với trứng kiến ngâm 40 ngày (91,2%)

-Tning kiến tươi ngâm trong 40 ngày (lần 1-30 ngày, lần 2-10ngày) thì hiệu suất chiết (91,2%) tăng lên đáng kể so với chiết một lần trong thời gian 30 ngày

(78%)

-Dùng trứng kiến tươi hiệu suất chiết tăng hon so với trứng kiến khơ, vì vậy

lựa chọn trứng kiến tươi với thời gian ngâm là 40 ngày theo 2 lần ( 30 và 10 ngày)

là đủ để cĩ thể chiết được phần lớn hoạt chất trong nguyên liệu (91,29%)

-Tiến hành định lượng các aminoacids cĩ trong chế phẩm của mẫu trứng kiến tươi ngâm 40 ngày, kết quả cho thấy hàm lượng aminoacids tồn phần cĩ

trong 100 ml địch chiết là 535,2 mạ

- _ Kết quả nghiên cứu xử lý loại rạp chất trong dịch chiết: đã tiến hành loại

tạp chất như váng mỡ, cặn bã cĩ trong dịch chiết bằng các phương pháp

cơ học như gạn, lọc

Trang 33

3.3.3 Kết quả nghiên cứu bào ché rou thudc RTK

Trang 34

Từ các kết quả ở phần nghiên cứu xây dựng cơng thức bào chế, chúng tơi đã đưa ra được cơng thức bào chế như sau:

Céng thn

Tring kién gai den tươi 25 gam

Ethanol 45% 250 ml

3.3.4 Kết quả nghiên cứu xây đựng tiêu chuẩn nguyên liệu

- Hình thức cảm quan: trứng kiến hình ơ van, dài khoảng 1 - 1,5 mm bên ngồi mịn bĩng, màu trắng vàng, mùi hơi tanh đặc trưng của nguyên liệu Khi sấy

khơ trứng bị đẹt, cĩ màu vàng sẫm

- Độ ẩm: nguyên liệu trứng kiến gai đen phải cĩ độ ẩm khơng quá 10%

(trứng kiến khơ) và khơng quá 85% (trứng kiến tươi) - Định tính: 17 aminoacids

- Định lượng: Hàm lượng (% ) nitrogen khơng ít hơn 3% so với khối lượng

mẫn khơ, và khơng ít hơn 0,25% so với khối lượng mẫu tươi

3.3.5 Kết quả nghiên cứu xây đựng tiêu chuẩn chất lượng rượu thuốc RTK Tiêu chuẫn rượu thuấc RTE

- Màu sắc: chế phẩm cĩ màu vàng nâu nhạt

- Mùi vị: chế phẩm vị cay của rượu và mùi thơm hắc

- Độ trong và độ đồng nhất: rượu trong, đồng nhất và khơng cĩ cặn bã dược

liệu

- Hàm lượng ethanol: Đạt 35% - 40% - TY trong (6 20°C): dat 0.940 — 0.980

- Dinh tinh cdc aminoacids: 16 acid amin trong sắc ký đồ thời gian lưu (

Aspartic; Glutamic; Serin; Histidin; Glycin; Threonin; Alanin; Arginin; Tyrosin; Valin; Methionin; Phenylalanin, Isoleucin; Leucin, Lysin; Prolin) trên mẫu thử

trùng với thời gian lưu của aminoacids tương ứng trên mẫu chuẩn

- Định lượng: lượng aminoacids tồn phẩn trong 250 ml chế phẩm nằm

trong khoảng 875 ~ 1500 mg

Như vậy, đã đưa ra cơng thức bào chế (trứng kiến gai đen tươi 25 gam; Ethanol 45% vd 250 ml) va tiêu chuẩn cơ sở của rượu thuốc RTK được ghỉ trong phiếu kiểm nghiệm của Viện Kiểm nghiệm, Bộ Y tế ( xem phần phụ lục)

Trang 35

Hình § Rượu thuốc RTK

3.4, Kết quả nghiên cứu trên động vật thực nghiệm

3.4.1 Kết quả nghiên cứu đánh giá độc cấp (LD„) của RTK

Thí nghiệm được tiến hành trên 30 chuột nhất trắng, midu thử là RTK từ Tiêu 12,5g/kg đến liên 100g/kg thể trọng chuột, kết quả cho thấy:

- Liễu 12,5g/kg; 25g/kg Sau khi uống thuốc chuột vẫn hoạt động bình thư- ờng Chuột sống hồn tồn qua 24, 48 và 72 giờ

- Liêu 50g/kg: 75g/kg chuột RTK gây tăng hoạt động nhọ; sau 2 giờ uống thuốc, chuột năm lim dim như ngủ, thở đều Chuột sống hồn tồn qua 24, 48 và

72 giờ

- Liễu 100g/kg chuột ( liễu đặc nhất nhưng vẫn cĩ thể cho chuột uống được

bằng kim đầu tị) Sau 5 - L0 phút uống thuốc chuột bất đầu lăng cường hoạt động,

Trang 36

và càng tăng mạnh khi cĩ tay người sờ vào Tại liều này, sau 120 phút uống RTK

chuột ia phân nát Các hiện tượng trên giảm dần sau 4 giờ uống thuốc, sau 6 giờ

chuột nằm lim dim như ngủ thở đều Chuột sống hồn tồn qua 24, 48 và 72 giờ Kết quả nghiên cứu được trình bày trong bảng 7

Lơ4 6 | 7 0 6 | Tăng hoạt động

- Hoạt động tăng, đi ngồi `”

Lơ 5 6 100 0 6 phân hơi nát ee sine lia ĐƠNG,

Sau 24, 48 và 72 giờ tất cả chuột ở 5 lơ đều sống khoẻ mạnh

Như vậy, rượu RTK khơng thể hiện độc tính tại các liều 12,3g, 25g, 30g,

73g, 100g/kg Trong thí nghiệm chưa tìm thấy liều LDs với liều cơ đặc tối đa của rượu thuốc RTK (100g/kg)

34.2 Kết qủa nghiên cứu độc tính bán trường diễn

Sư biến đơng các chỉ số huyết học trước và sau ố tt it dung RTK voi

u23

- Kết quả nghiên cứu sự biến động các chỉ số huyết học trước và sau ố tuần

sử dụng RTK được trinh bay trong bảng 8

Bảng 8 Số lượng HC, HST, số lượng BC của thỏ trước và sau ố tuần uống RTK Tên xÐt Trước uống thuốc | Sau 6 tuân uống thuốc | p nghiƯm HC @&105) 3,04+0,50 5,30 + 1,60 > 0,05 HST (g/dl) 11,20 + 1,00 11/62 + 1,20 >0,05 ĐC (10) 7,50 + 1,40 6,90 + 120 >0,03

Các số liệu trên bảng 8 cho thấy, số lượng HC, HST sau khi uống thuốc cĩ tăng hơn so với trước khi uống thuốc song khơng cĩ ý nghĩa thống kê Số lượng

Trang 37

ĐC giảm so với trước khi uống thuốc, nhưng sự thay đổi này khơng cĩ ý nghĩa

thống kê ( p > 0,05)

- Kết quả xác định cơng thức BC của thỏ trước và sau ố tuần uống RTK

được thể hiện ở bảng 9 (n=6)

Bảng 9 Cơng thức bạch cầu của thỏ trước và sau ố tuần uống RTK

34 Sư thay đổi các chỉ số sinh hĩa trước và sau sử dung RTK

Kết quả nghiên cứu sự thay đổi chỉ số SGOT, SGPT, Ure, Creatinin trước và

sau sử dụng RTK được trình bày trong bảng 10

Kết qủa trong, bảng 10 cho thấy các chỉ số urê, creatinin, SGOT và SGPT trước và sau dùng thuốc cĩ thay đổi, song khơng cĩ ý nghĩa thống kê

34.23 Kết quả điện di protein huyết thanh trước và sau sử dung RLK

Trang 38

Kết quả trong bảng 11 cho thấy nơng độ albumia sau uống thuốc cĩ tăng lên, song sự thay đổi này khơng cĩ ý nghĩa thống kê với p > 0,05 Nơng độ œ globulia khơng thay đổi Nơng độ B globulia và ÿ globulia thay đổi khơng đáng kể, Hàm lượng globulia giảm hơn so với trước thí nghiệm, nhưng sự thay đổi này khơng cĩ ý nghĩa thống kê với p > 0,05 Tỷ lệ A/Œ cĩ tăng lên, song khơng cĩ ý

nghĩa thống kê

Kết quả nghiên cứu độc bán trường diễn trên thỏ cho thấy tại liêu 25g/kg TK khơng gây ảnh hưởng xấu tới chức năng gan, thận sau 6 tuần sử dụng RTK Q3g/kg) các chỉ số sinh hĩa, huyết học trong giới hạn bình thường Trên tiêu bản

vi phẫu khơng cĩ hình ảnh tổn thương trên tế bào não, gan, thận, tỉm

(xem các hình và biểu đồ)

Hình 9 Dạ dầy chuột nhất sau 72 giờ uống RTK

Trang 39

Hình 11 Hình ảnh vi thể gan chuột sau thử độc cấp tính co ee eS Hình 12 Mơ tuột chuột nhất trắng sau 72 giờ uống RTK 12 10 6 mac 7 ose must 2

ø Trước uống Sau 6 tuần uống thuốc thuốc

Biểu đỏi Số lượng HC, HST, số lượng BC của thỏ trước và sau sử dụng RTK

Trang 40

so so 40 30 20 10 Trước uổng thuốc uống thuốc Sau 6 tuần EBC truag tính BBC Lym phĩ CITE bàc khác êu đỏ 2 Cơng thức bạch cầu trước và sau sử dụng RTK Imseor]| lserr

Trước uống Sau 6 tuần thuốc uống thuốc

Định dạng
Số trang	65
Dung lượng	10,24 MB