Nghiên cứu ứng dụng chế phẩm vi sinh để ức chế nấm mốc gây hại trên da thuộc và các sản phẩm da thuộc

TẠP CHÍ KHOA HỌC  SỐ 4/2016 79 NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG CHẾ PHẨM VI SINH ĐỂ ỨC CHẾ NẤM MỐC GÂY HẠI TRÊN DA THUỘC VÀ CÁC SẢN PHẨM DA THUỘC Lƣu Ngọc Sinh1 Trường Đại học Thủ đô Hà Nội Tóm tắt: Trong nghiên cứu này, chúng tơi tiến hành xác định 16 loài nấm mốc thuộc 02 chi gây hại điển hình da thuộc sản phẩm da thuộc Nghiên cứu xây dựng công nghệ ứng dụng chế phẩm vi sinh để ức chế nấm mốc phát triển gây hại da thuộc sản phẩm da thuộc Từ khóa: PLA (axit phenyllactic); PDA (môi trường nuôi cấy nấm mốc); VSV (Vi sinh vật); CFU (Số đơn vị khuẩn lạc ml mẫu) MỞ ĐẦU Vấn đề nhiễm nấm mốc xảy nơi, thời điểm, ảnh hƣởng lớn đến giá trị sử dụng giá trị thẩm mỹ loại hàng hoá gây thiệt hại lớn cho kinh tế Các sản phẩm giầy da, dép da, cặp da… da thuộc thành phẩm lƣu thơng điều kiện nóng ẩm dễ bị nhiễm nấm mốc gây hại Khi nấm mốc phát triển da thuộc sản phẩm da thuộc, nấm mốc làm giảm giá trị thẩm mỹ, giá trị sử dụng sản phẩm Vì vậy, việc ngăn ngừa, ức chế phát triển nấm mốc da giầy có vai trị quan trọng, góp phần nâng cao hiệu kinh tế cho ngành da giầy Hiện nay, doanh nghiệp Thuộc da, sở sản xuất kinh doanh da giầy thƣờng sử dụng hóa chất độc hại để bảo quản da giầy trƣớc xâm nhiễm nấm mốc Các hóa chất đƣợc sử dụng ức chế đƣợc phát triển nấm mốc, nhƣng phần lớn hóa chất khơng an toàn với ngƣời, đặc biệt dùng với lƣợng dƣ thừa gây hậu xấu tới sức khỏe ngƣời sử dụng, ảnh hƣởng đến môi trƣờng sống Việc sử dụng chất có nguồn gốc sinh học để bảo quản da thuộc sản phẩm da thuộc hiệu quả, an toàn với ngƣời sử dụng thân thiện với môi trƣờng cần thiết Nhận ngày 16.04.2016, gửi phản biện duyệt đăng ngày 10.05.2016 Liên hệ tác giả: Lƣu Ngọc Sinh, Email: lnsinh@daihocthudo.edu.vn 80 TRƯỜNG ĐẠI HỌC THỦ ĐÔ HÀ NỘI VẬT LIỆU NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghi n cứu - Các mẫu da thuộc sản phẩm da thuộc nhiễm mốc - Chế phẩm vi sinh Chế phẩm bacillus, PLA, chế phẩm BioS đƣợc pha với tỷ lệ 1:1:2 - Các loại môi trƣờng: Môi trƣờng PDA; môi trƣờng Sabouraud; môi trƣờng Czapex – Dox 2.2 Nội dung nghi n cứu - Nghiên cứu xác định chủng nấm mốc phát triển da thuộc sản phẩm da thuộc dựa vào đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa ch ng - Nghiên cứu sử dụng chế phẩm vi sinh để ức chế nấm mốc - Xác định khả ức chế nấm mốc chế phẩm vi sinh chi Penicillium (Penicillium fellutanum, Penicillium pusillum Penicillium nalgiovensis…) chi Aspergillus (Aspergillus fumigatus, Aspergillus oryzae, Aspergillus asperescens…) - Nghiên cứu lựa chọn thông số kỹ thuật quy trình sử dụng chế phẩm vi sinh để ức chế nấm mốc gây hại da thuộc 2.3 Phƣơng pháp nghi n cứu thực nghiệm 2.3.1 Phương pháp phân lập Phân lập nấm mốc Phương pháp làm tiêu quan sát nấm mốc + Phƣơng pháp pha lỗng hàng loạt + Sử dụng khố phân loại, dựa vào đặc điểm hình thái, kích thƣớc, màu sắc khuẩn lạc hình dạng sợi nấm kính hiển vi quang học để xác định lồi nấm mốc Phương pháp kiểm tra nấm mốc Lấy mẫu giầy da bị nhiễm nấm mốc trình bảo quản lƣu thơng thị trƣờng Cắt cân mẫu cho vào nƣớc cất vơ trùng ống nghiệm, sau pha lỗng đến nồng độ 10-5 H t 1ml dịch pha loãng từ ống nhỏ vào đĩa Petri chứa sẵn môi trƣờng Czapek, chang đem nuôi tủ ấm 28 – 300C Sau – ngày, lấy ra, đếm số khuẩn lạc đĩa petri Số lƣợng bào tử nấm mốc có g mẫu đƣợc tính theo cơng thức: X Trong đó: X: Số lƣợng bào tử nấm mốc, a: Số khuẩn lạc trung bình đĩa Petri, k: Độ pha lỗng TẠP CHÍ KHOA HỌC  SỐ 4/2016 81 V: Thể tích pha loãng cấy đĩa Petri (ml) Phương pháp phân loại nấm mốc Các chủng loại nấm mốc đƣợc nuôi cấy tủ ấm 300C môi trƣờng Czapek, sau ngày lấy quan sát kính hiển vi quang học Để phân loại nấm mốc ch ng dựa vào tiêu chí: - Đặc điểm hình thái khuẩn lạc:  Quan sát dạng mặt khuẩn lạc  Quan sát màu sắc khuẩn lạc đĩa Petri, quan sát màu sắc hệ sợi nấm, màu sắc bào tử đặc điểm khác nhƣ kích thƣớc, mặt trái… - Đặc điểm hiển vi sợi nấm đĩa Petri:  Đặc điểm quan sinh bào tử trần bào tử trần (bào tử, cuống sinh bào tử, hình dạng, kích thƣớc…)  Đặc điểm bào tử t i (thể quả, nang bào tử, bào tử t i)  Dùng khóa phân loại H.L.Barnet phân loại  Phân loại đến chi Aspergillus dùng khóa phân loại Raper ctv [20]  Phân loại đến chi Penicillium ch ng tơi dùng khóa phân loại Chen,W.H.Hsu ( Đài loan) 2.3.2 Phương pháp bố trí thí nghiệm a Xác định mật độ chủng nấm mốc thuộc chi Aspergillus chi Penicillium gây hại da thuộc sản phẩm da thuộc Phƣơng pháp xác định số lƣợng tế bào vi sinh vật theo Bùi Xuân Đồng cộng [1] Cân gam da thuộc sản phẩm da thuộc (sau gọi chung mẫu da) bỏ vào ống nghiệm chứa ml nƣớc cất vô trùng Lắc máy lắc 200 vòng/ph t 30 ph t, để nhiệt độ phòng Dùng pipet h t 1ml dịch ống nghiệm cho vào ống ngiệm thứ có chứa ml nƣớc cất vô trùng, lắc ta đƣợc dịch pha loãng 10-2 Tiếp theo dùng pitpet h t 1ml từ dịch 10-2 cho vào ống nghiệm có chứa sẵn ml nƣớc cất vô trùng lắc thu đƣợc dịch pha loãng 10-3 Cứ tiếp tục nhƣ vật thu đƣợc dịch pha lỗng 10-5 dừng lại Dùng pipet h t 1ml nồng độ pha lỗng 10-5 chang bề mặt mơi trƣờng thạch nguội đĩa petri, đem đĩa nuôi tủ ấm 30oC 2- ngày lấy quan sát để xác định mật độ nấm mốc thuộc chi Aspergillus chi Penicillium (chỉ quan sát đĩa có khuẩn lạc nấm mốc riêng lẻ) Xác định số lƣợng tế bào vi sinh vật theo công thức sau: Cách 1: 82 TRƯỜNG ĐẠI HỌC THỦ ĐÔ HÀ NỘI N A Trong đó:  N: Tổng số CFU/g mẫu  A: Số lƣợng khuẩn lạc trung bình hộp petri độ pha loãng  n: Số giọt dung dịch trung bình 1ml dịch pha loãng  Df: Độ pha loãng  W: Trọng lƣợng khô 1g mẫu Cách 2: Tổng số bào tử nấm ml mẫu thử đƣợc tính theo cơng thức sau: N= C V (n1  0.1xn2 ).d Trong đó:  ∑ C : Tổng số khuẩn lạc đếm đƣợc tất đĩa chọn  V : Thể tích cấy đĩa tính ml   n1 n2 : Số đĩa đậm độ pha loãng thứ đƣợc giữ lại : Số đĩa đậm độ pha loãng thứ hai đƣợc giữ lại  d : Hệ số pha loãng đậm độ pha lỗng thứ Hình Sơ đồ phân lập, xác định nấm mốc TẠP CHÍ KHOA HỌC  SỐ 4/2016 b 83 Xác định ảnh hưởng nồng độ chế phẩm đến tỷ lệ ức chế nấm mốc Phương pháp sử dụng chế phẩm vi sinh ức chế nấm mốc Chế phẩm vi sinh: Các chế phẩm đƣợc pha loãng nồng độ khác Chế phẩm sinh học đƣợc pha loãng nồng độ khác (1.0%, 1.2%, 1.4%, 1.6%, 1.8%, 2.0%, 2.2%, 2.4%) Chế phẩm sau pha loãng đƣợc tiến hành phun lên mặt mặt da thuộc sản phẩm da thuộc Để 180 ngày sau tiến hành phân tích đánh giá khả ức chế chi Aspergillus Penicillium nấm mốc 2.3.3 Phương pháp thu thập số liệu, xác định tỷ lệ phần trăm ức chế nấm mốc gây hại Phương pháp xác định khả ức chế nấm mốc Tỉ lệ ức chế (%) = (C-T)/ T * 100% Trong đó: - C số bào tử công thức đối chứng (không sử dụng PLA) - T số bào tử, khuẩn lạc cơng thức thí nghiệm (có sử dụng PLA) Xác định thời gian ức chế nấm mốc chế phẩm Các mẫu da giầy nhiễm nấm mốc đƣợc xử lý chế phẩm sinh học nồng độ 2%, sau đƣợc để phịng nhiệt độ 28 – 30oC, độ ẩm 80% Sau thời gian 30 ngày, 45 ngày, 60 ngày, 75 ngày, 90 ngày, 105 ngày, 120 ngày, 135 ngày, 150 ngày, 165 ngày, 180 ngày lấy mẫu phân tích mật độ 16 chủng thuộc chi nghiên cứu tính tỉ lệ ức chế toán học thống kê Phƣơng pháp lấy mẫu đƣợc mô tả nhƣ phần phƣơng pháp phân lập nấm mốc; phƣơng pháp kiểm tra nấm mốc Khảo sát ảnh hưởng độ ẩm đến khả ức chế nấm mốc Ở Việt Nam, khí hậu thay đổi theo mùa, đặc biệt tỉnh Miền Bắc Theo thống kê cho thấy độ ẩm trung bình năm dao động mức 83% Độ ẩm yếu tố quan trọng, ảnh hƣởng trực tiếp đến sinh trƣởng phát triển nấm mốc gây hại Chế phẩm đƣợc pha lỗng nồng độ 2% Dùng bơng tẩm dung dịch, lau lên mặt sản phẩm phun lên bề mặt sản phẩm Sau đó, sản phẩm đƣợc đƣa vào phịng thí nghiệm độ ẩm khác 72%, 75%, 78%, 81%, 83%, 86%, 89%, 92% Sau 180 ngày đem phân tích, so sánh tỉ lệ ức chế nấm mốc thuộc chi nghiên cứu Xử lý toán học thống kê nhƣ mô tả phần phƣơng pháp nghiên cứu chung cho chi nấm mốc 84 TRƯỜNG ĐẠI HỌC THỦ ĐÔ HÀ NỘI Ảnh hưởng nhiệt độ môi trường đến khả ức chế nấm mốc chế phẩm Các mẫu da nhiễm nấm mốc đƣợc xử lý chế phẩm sinh học nồng độ 2%, sau đƣợc để tủ ni vi sinh, nhiệt độ 21oC, 24oC, 27oC, 30oC, 33oC, 36oC, 39 oC, độ ẩm 86% Sau thời gian 180 ngày lấy mẫu phân tích mật độ 16 chủng thuộc chi nghiên cứu xác định tỉ lệ ức chế toán học thống kê Nhiệt độ đƣợc điều chỉnh hệ thống tự động tủ ấm chuyên dụng dùng để nuôi cấy vi sinh vật KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Mật độ lo i nấm mốc thuộc chi Penicillium chi Aspergillus tr n mẫu da phân tích 3.1.1 Mật độ lồi nấm mốc thuộc chi Penicillium Dựa đặc điểm hình thái, màu sắc khuẩn lạc, kích thƣớc khuẩn lạc tiêu kính hiển vi… cho thấy kết hoàn toàn phù hợp với kết nghiên cứu trƣớc chi Penicillium Trong số loài thuộc chi Penicillium đó, ch ng tơi mơ tả xác định mật độ loài phổ biến theo kết nghiên cứu bảng dƣới đây: Bảng Mật độ lo i thuộc chi Penicillium tr n da thuộc v sản phẩm da thuộc Mẫu phân tích D1 D2 D3 D4 D5 S1 S2 S3 S4 CFUx 103/g CFUx 103/g CFUx 103/g CFUx 103/g S5 Tên chủng, STT Chi Penicillium T CFUx 103/g CFUx 103/g CFUx 103/g CFUx 103/g CFUx 103/g CFU x 103/g Tên loài Penicillium -baarnense 41 34 22 21 33 21 19 22 20 23 Penicillium -brefeldianum 31 35 32 32 31 19 17 21 24 18 Penicillium -fellutanum 23 33 31 23 26 18 21 20 19 17 Penicillium -implicatum 41 54 32 19 18 13 11 14 12 12 Penicillium -lapidosum 1.9 1.0 1.3 1.2 1.0 0.4 0.4 0.6 0.5 0.6 Penicillium -levitum 2.3 2.9 2.1 2.0 1.9 1.0 0.4 0.6 0.7 0.2 Penicillium- ochrochloron 2.1 2.8 1.4 1.0 0.9 0.2 0.5 0.8 0.5 0.3 Penicillium -oxalicum 1.2 1.8 1.3 1.4 1.0 0.9 1.1 0.3 1.2 0.5 Tổng 143.5 164.5 123.1 100.6 112.8 73.5 70.4 79.3 77.9 143.5 Dựa vào bảng phân tích mật độ lồi thuộc chi Penicillium mà nhóm nghiên cứu thu đƣợc cho thấy: Mật độ bào tử nấm mốc mẫu da thuộc (từ D1 dến D5) sản phẩm da thuộc (từ S1 đến S5) tƣơng đối lớn Mật độ lớn đạt 164.5x10 bào tử/g, mật độ nhỏ đạt 70.4x103 bào tử/gam TẠP CHÍ KHOA HỌC  SỐ 4/2016 85 3.1.2 Xác định mật độ loài nấm mốc thuộc chi Aspergillus Bằng phƣơng pháp pha loãng, phân lập, đếm khuẩn lạc xác định mật độ nấm mốc, phân tích đặc điểm hình thái, màu sắc, kích thƣớc khuẩn lạc tiêu tế bào kính hiển vi quang học Chúng tơi xác định đƣợc mật độ lồi thuộc chi Aspergillus mẫu giầy, dép da da thuộc thành phẩm nhƣ bảng dƣới đây: Bảng Mật độ lo i thuộc chi Aspergillus tr n da thuộc v sản phẩm da thuộc Mẫu phân tích STT Chi Aspergillus T Tên loài Aspergillus aculeatus Aspergillus arenarius Aspergillus asperescens Aspergillus fumigatus Aspergillus niger Aspergillus oyzae Aspergillus restrictus Aspergillus zonatus Tổng D1 D2 D3 D4 D5 S1 S2 S3 S4 S5 CFUx 103/g CFUx 103/g CFUx 103/g CFUx 103/g CFUx 103/g CFUx 103/g CFUx 103/g CFUx 103/g CFUx 103/g CFUx 103/g 27 20 15 12 22 32 24 31 183 27 19 13 13 27 34 21 31 185 21 16 17 15 24 31 20 27 171 32 21 12 13 24 31 25 32 190 23 21 15 13 23 29 19 29 172 19 18 12 11 21 28 12 22 143 17 15 14 17 19 26 13 19 140 23 13 11 13 23 22 11 17 133 21 16 19 21 18 11 21 21 148 22 11 17 11 17 16 15 19 128 Kết bảng cho thấy mật độ nấm mốc thuộc chi Aspergillus mẫu da thuộc lớn mẫu sản phẩm da thuộc Kết đƣợc lý giải tƣơng tự nhƣ phân bố nấm thuộc chi Penicillium Qua bảng nhận thấy: Mật độ nấm mốc thuộc chi Aspergillus da thuộc sản phẩm da thuộc lớn Mật độ lớn mẫu D1 190x103 bào tử/gam, mật độ nhỏ mẫu S5 128x103 bào tử /gam 3.2 Ảnh hƣởng nồng độ chế phẩm đến khả n ng ức chế nấm mốc thuộc chi Penicillium chi Aspergillus Chế phẩm vi sinh đƣợc pha loãng nồng độ khác (1.0%, 1.2%, 1.4%, 1.6%, 1.8%, 2.0%, 2.2%, 2.4%) Sử dụng bình phun sƣơng bơng khơ, thấm dung dịch pha loãng nồng độ trên, sau lau lên mặt sản phẩm giầy da, dép da da thành phẩm Để môi trƣờng độ ẩm 70%, nhiệt độ 28oC sau 180 ngày xác định tỉ lệ ức chế nấm mốc thuộc chi Aspergillus Penicillium theo phƣơng pháp đếm khuẩn lạc môi trƣờng thạch nhƣ mô tả phần phƣơng pháp nghiên cứu Các thí nghiệm đƣợc lặp lại, sau xử lý số liệu lấy kết trung bình theo tốn học thống kê Sau 180 ngày ch ng tơi tiến hành phân tích xác định tỉ lệ ức chế nấm mốc thuộc chi Aspergillus Penicillium cho kết sau: Kết đƣợc biểu diễn biểu đồ hình hình sau: 86 TRƯỜNG ĐẠI HỌC THỦ ĐÔ HÀ NỘI 100,00% 83,60% 80,00% 60,00% 40,00% 83,70% 84,30% 70,70% 50,20% 33,80% 36,30% 41% 20,00% 1,00% 1,20% 1,60% 1,40% 1,80% 2,00% 2,20% 2,40% 0,00% Series1 Series2 Hình Biểu đồ phụ thuộc nồng độ chế phẩm đến khả n ng ức chế nấm mốc Penicillium Series1 90,00% Series2 83,20% 83,60% 84,20% 74,30% 80,00% 70,00% 54% 60,00% 50,00% 40,00% 35,50% 40,50% 45% 30,00% 20,00% 10,00% 1,00% 1,20% 1,40% 1,60% 1,80% 2,00% 2,20% 2,40% 0,00% Hình Biểu đồ phụ thuộc nồng độ chế phẩm đến khả n ng ức chế nấm mốc Aspergillus Series 1: nồng độ chế phẩm, Series 2: tỉ lệ ức chế Số liệu cho thấy, nồng độ chế phẩm tăng lên, khả ức chế nấm tăng đáng kể, nồng độ 1.0% chế phẩm tỷ lệ ức chế phổ biến mức 30% - 40% phát triển nấm mốc Ở nồng độ 2% chế phẩm chủng nấm mốc thuộc chi Aspergillus Penicillium bị ức chế mức từ 81% đến 89% phát triển nấm mốc Khi nồng độ chế phẩm tăng hoạt chất chế phẩm hoạt động mạnh ngăn cản phát triển nấm mốc thơng qua chế làm thay đổi tính thẩm thấu màng tế bào nấm, phá hủy thành tế bào nấm… qua ức chế nấm mốc phát triển gây hại Trong bảng cho thấy, tăng nồng độ lên mức 2.2%, 2.4% tỉ lệ ức chế nấm tăng Tuy nhiên, tỉ lệ ức chế nấm tăng khơng đáng kể TẠP CHÍ KHOA HỌC  SỐ 4/2016 87 3.3 Ảnh hƣởng thời gian đến khả n ng ức chế nấm mốc Kết phân tích mẫu nhận thấy tỉ lệ ức chế giảm dần theo thời gian Kết cho thấy, sử dụng chế phẩm, ban đầu nồng độ chế phẩm nhiều nên tỉ lệ ức chế lớn, thời gian dài tỉ lệ nấm mốc mẫu thí nghiệm tăng dần hàm lƣợng chế phẩm giảm dần Trong nghiên cứu này, nhóm nghiên cứu khảo sát khoảng thời gian từ 30 ngày đến 180 ngày kể từ thời điểm phun chế phẩm, với bƣớc nhảy 15 ngày Bảng Ảnh hƣởng thời gian đến tỉ lệ ức chế nấm mốc Penicillium gây hại Thời gian thí nghiệm (ng y) STT Loài Penicillium brefeldianum Penicillium fellutanum Penicillium implicatum Penicillium lapidosum Penicillium levitum Penicillium ochro chloron Penicillium oxalicum Penicillium baarnense 30 45 60 75 99 98 99 98 98 99 99 99 99 97 99 98 98 98 97 98 98 97 98 98 98 98 97 97 97 97 97 98 98 96 97 97 Trung bình 98.6 98.0 97.6 97.1 90 105 120 Tỉ lệ ức chế nấm mốc (%) 97 96 94 97 97 93 96 96 96 97 97 92 98 98 97 96 95 93 97 97 97 96 96 95 96.7 96.5 94.6 135 150 165 180 93 91 92 90 89 91 94 91 87 90 90 90 89 90 87 84 80 89 86 85 86 88 83 81 77 89 84 85 86 88 82 78 91.3 88.3 84.7 83.6 150 165 180 88 91 91 90 88 91 88 87 89.2 82 89 86 86 86 88 82 85 85.5 80 89 85 86 86 88 82 84 85.0 Bảng Ảnh hƣởng thời gian đến tỉ lệ ức chế nấm mốc Aspergillus Thời gian thí nghiệm (ng y) STT Lồi Aspergillus arenarius Aspergillus asperescens Aspergillus fumigatus Aspergillus niger Aspergillus oyzae Aspergillus restrictus Aspergillus zonatus Aspergillus aculeatus Trung bình 30 45 60 99 99 98 98 99 98 99 99 98.6 98 98 98 98 98 98 99 98 98.1 98 97 97 98 98 97 98 98 97.6 75 90 105 120 135 Tỉ lệ ức chế nấm mốc (%) 98 98 98 96 95 97 97 97 94 91 97 97 97 96 94 97 96 96 95 91 98 98 97 97 89 97 96 96 95 91 98 98 98 96 93 97 97 97 97 92 97.3 97.1 97.0 95.7 92.0 Kết bảng cho thấy, sau 30 ngày sử dụng chế phẩm vi sinh để bảo quan nấm mốc bị ức chế 98.6%, tỉ lệ giảm dần, thời điểm 180 ngày sau phun chế phẩm tỉ lệ đạt 85.0% 3.4 Ảnh hƣởng độ ẩm đến khả n ng ức chế nấm mốc Kết phân tích ảnh hƣởng độ ẩm đến khả ức chế nấm mốc chế phẩm vi sinh đƣợc xử lý cơng thức tốn, lấy giá trị trung bình đƣợc mơ tả bảng Bảng Sự phụ thuộc độ ẩm môi trƣờng v tỉ lệ ức chế nấm mốc Độ ẩm mơi trƣờng (%) STT Lồi Penicillium brefeldianum Penicillium fellutanum Penicillium implicatum Penicillium lapidosum 72 75 91 97 97 98 78 90 97 96 97 88 97 95 92 81 84 87 Tỉ lệ ức chế nấm mốc (%) 87 87 85 92 87 85 91 90 86 90 90 85 90 93 73 75 72 76 70 70 69 65 88 10 11 12 13 14 15 16 TRƯỜNG ĐẠI HỌC THỦ ĐÔ HÀ NỘI Penicillium levitum Penicillium ochro chloron Penicillium oxalicum Penicillium baarnense Aspergillus arenarius Aspergillus asperescens Aspergillus fumigatus Aspergillus niger Aspergillus oyzae Aspergillus restrictus Aspergillus zonatus Aspergillus aculeatus Trung bình 98 86 97 85 97 96 97 97 98 96 98 84 94.5 98 83 97 83 97 95 96 97 96 96 98 83 93.7 97 81 96 79 97 93 94 93 96 95 96 81 91.8 89 88 94 77 89 91 93 91 92 91 93 78 89.1 89 78 91 76 88 90 87 90 90 91 88 75 86.7 86 77 86 73 86 88 80 89 86 88 82 74 83.5 71 73 77 70 74 74 71 73 75 72 73 70 73.1 64 69 70 65 65 62 66 67 65 69 61 63 66.3 Kết cho thấy: Khi độ ẩm mơi trƣờng tăng tỉ lệ ức chế nấm mốc giảm dần (độ ẩm môi trƣờng tăng từ 75 % đến 92% tỉ lệ ức chế nấm mốc giảm dần từ 95% xuống 66 %) 3.5 Ảnh hƣởng nhiệt độ đến khả n ng ức chế nấm mốc Tiến hành khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ đến khả ức chế nấm mốc thuộc chi nghiên cứu Ch ng tiến hành phun chế phẩm 2%, mẫu đƣợc bảo quản độ ẩm 80%, 180 ngày sau đem phân tích để xác định ảnh hƣởng nhiệt độ đến khả ức chế nấm chế phẩm Sau phân tích kết nấm mốc, tính giá trị trung bình biểu diễn đồ thị hình dƣới đây: Hình Biểu đồ phụ thuộc nhiệt độ đến khả n ng ức chế nấm mốc phát triển Biểu đồ cho thấy: Khi nhiệt độ môi trƣờng thấp (17 oC – 19oC) cao (36oC – 41oC) khả ức chế nấm mốc cao Với mức nhiệt cực thuận cho nấm mốc phát triển khả ức chế nấm mốc thấp Vì vậy, việc ngăn ngừa nấm mốc đạt hiệu cao kết hợp với yếu tố sinh thái làm giảm phát triển nấm mốc TẠP CHÍ KHOA HỌC  SỐ 4/2016 89 3.6 Kết thực nghiệm quy trình sử dụng chế phẩm sinh học chống nấm mốc tr n sản phẩm da thuộc Các mẫu giầy, dép nhiễm nấm mốc đƣợc xử lý chế phẩm sinh học nồng độ 2%, sau đƣợc để phòng nhiệt độ 28 – 30 oC, độ ẩm 75% Sau 180 ngày, xác định tỷ lệ sống sót tỷ lệ ức chế nấm mốc thuộc chi Aspergillus Penicillium Kết đƣợc thống kê bảng sau: Bảng Tỷ lệ ức chế nấm mốc tr n sản phẩm giầy da, dép da có nguồn gốc nƣớc Mẫu phân tích T n chủng, STT Chi Penicillium TT 10 11 12 13 14 15 16 Tên loài Penicillium baarnense Penicillium brefeldianum Penicillium fellutanum Penicillium implicatum Penicillium lapidosum Penicillium levitum Penicillium ochro chloron Penicillium oxalicum Aspergillus aculeatus Aspergillus arenarius Aspergillus asperescens Aspergillus fumigatus Aspergillus niger Aspergillus oyzae Aspergillus restrictus Aspergillus zonatus Trung bình S1 S2 S3 S4 S5 % ức chế % ức chế % ức chế % ức chế % ức chế 67 82 79 85 86 76 86 87 87 80 92 89 71 69 83 82 81.3 81 75 79 90 87 78 79 85 77 75 74 87 69 86 79 79 80.0 66 86 92 78 81 83 89 76 83 74 71 86 88 87 81 84 81.5 70 79 82 79 86 70 76 68 91 87 85 78 87 79 92 79 80.5 76 65 68 74 76 87 81 92 87 91 77 81 67 77 94 89 80.1 Qua bảng cho thấy, sau 180 ngày phân tích, kiểm tra nấm mốc mẫu đối chứng tỷ lệ nấm mốc gần nhƣ khơng thay đổi, cịn mẫu thực nghiệm có sử dụng chế phẩm tỷ lệ nấm mốc cịn lại khoảng 20%, tức chế phẩm ức chế 80% phát triển nấm mốc, kết đƣợc trì kéo dài đến thời gian 180 ngày 3.7 Kết thực nghiệm quy trình sử dụng chế phẩm sinh học chống nấm mốc tr n da thuộc th nh phẩm Các mẫu da thành phẩm bị nhiễm nấm mốc đƣợc xử lý chế phẩm sinh học nồng độ 2% , sau đƣợc để phịng nhiệt độ 28 – 30 oC, độ ẩm 75% Sau 180 ngày, ch ng xác định tỷ lệ ức chế nấm mốc thuộc chi Aspergillus Penicillium Kết 90 TRƯỜNG ĐẠI HỌC THỦ ĐÔ HÀ NỘI đƣợc thống kê bảng 7: Bảng Tỷ lệ ức chế nấm mốc da thuộc thành phẩm có nguồn gốc nƣớc Mẫu phân tích T n chủng, STT D1 D2 D3 D4 D5 Tên loài % ức chế % ức chế % ức chế % ức chế % ức chế Penicillium baarnense Penicillium brefeldianum Penicillium fellutanum Penicillium implicatum Penicillium lapidosum Penicillium levitum Penicillium ochro chloron Penicillium oxalicum Aspergillus aculeatus Aspergillus arenarius Aspergillus asperescens Aspergillus fumigatus Aspergillus niger Aspergillus oyzae Aspergillus restrictus Aspergillus zonatus Trung bình 60 82 86 82 84 87 65 89 87 76 86 85 77 82 80 79 80.4 68 80 87 89 84 84 71 84 89 78 77 82 67 83 88 75 80.3 65 86 76 69 84 91 89 87 88 87 81 90 84 69 73 85 81.5 82 74 89 86 77 84 84 83 81 76 87 86 86 65 80 61 80.0 84 79 76 88 92 95 76 73 82 72 86 80 87 79 90 87 82.8 Chi Penicillium T T 8 Nhƣ vậy, sử dụng chế phẩm sinh học để chống mốc chủng nấm mốc thuộc chi Aspergillus Penicillium bị ức chế mức từ 81% Nhƣ vậy, sau 180 ngày sử dụng chế phẩm điều kiện nhiệt độ 28 oC – 30oC, độ ẩm 80%, chủng nấm mốc thuộc chi Aspergillus Penicillium bị ức chế mức từ 79 % đến 80% KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Trong q trình thực nghiệm, ch ng tơi đƣa số kết luận sau: Các chủng loại nấm mốc gây hại da thuộc sản phẩm da thuộc đa dạng, phong ph Tuy nhiên chi điển hình số lƣợng mức độ gây hại chi Aspergillus chi penicillium Nấm mốc phát triển da thuộc sản phẩm da thuộc gây ảnh hƣởng lớn đến giá trị sử dụng giá trị thẩm mỹ sản phẩm gây hại cho ngƣời Nồng độ chế phẩm 2% đƣợc sử dụng để ức chế nấm mốc đạt hiệu cao, tỉ lệ ức chế TẠP CHÍ KHOA HỌC  SỐ 4/2016 91 nấm thuôc chi nghiên cứu khoảng 81% Sau thời gian 180 ngày kể từ sử dụng chế phẩn để bảo quản tỷ lệ ức chế nấm mốc 80% Độ ẩm 75% cho kết ức chế nấm mức cao (93.7%) Nhiệt độ từ 17 oC – 19oC từ 36 oC – 41oC tỉ lệ ức chế nấm đạt 75% – 80% 4.2 Kiến nghị Từ kết thu đƣợc q trình thực nghiệm đề tài, chúng tơi có số kiến nghị sau:  Tiếp tục nghiên cứu, lựa chọn chế phẩm vi sinh để tăng hiệu ức chế nấm lên mức cao  Tiếp tục xây dựng hồn thiện quy trình cơng nghệ sử dụng chế phẩm vi sinh để ức chế nấm mốc gây hại da thuộc sản phẩm da thuộc chi nấm khác TÀI LIỆU THAM KHẢO Bùi Xuân Đồng, Hà Huy Kế (1999), Nấm mốc phương pháp phòng chống, Nxb Khoa học Kỹ thuật Bùi Xuân Đồng (1998), Nấm mốc bạn thù, Nxb Khoa học Kỹ thuật Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Tiến, Phạm Văn Ty (2000), Vi sinh vật học, Nxb Giáo dục Thực tốt việc xử lý nấm mốc để tránh tồn thất không cần thiết - Vina giầy-8/2002; Dieuleveux, V., S Lemarinier, and M Gueguen (1998), Antimicrobial spectrum and target site of D-3-phenyllactic acid Int J Food Microbiol, pp.177-183 Dieuleveux, V., S Lemarinier, and M Gueguen (1998), “Antimicrobial spectrlum and target site of D-3-PLA”, Int J Food Microbiol 40 pp.177-183 Mold_inhibitor http://homeguides.sfgate.com/add-mold-inhibitors-paints-40907.html Fungicidal mixtures based on amide compounds and azoles, US 6,350,765 B1 APPLIED RESEARCH OF BIOLOGICAL PRODUCTS TO INHIBIT MILDEW ON LETHER SHOES Abstract: In this study, we conducted identified 16 species belonging to 02 detailed mold damage in the typical leather and leather products Research building application technology biological products to inhibit mold growth and damage on leather and leather products Keywords: PLA (Phenyllactic Acid); PDA (Potato Dextro Agar); VSV ( microbiology); CFU (colony-forming unit) ... tục nghiên cứu, lựa chọn chế phẩm vi sinh để tăng hiệu ức chế nấm lên mức cao  Tiếp tục xây dựng hồn thiện quy trình cơng nghệ sử dụng chế phẩm vi sinh để ức chế nấm mốc gây hại da thuộc sản phẩm. .. định nấm mốc TẠP CHÍ KHOA HỌC  SỐ 4/2016 b 83 Xác định ảnh hưởng nồng độ chế phẩm đến tỷ lệ ức chế nấm mốc Phương pháp sử dụng chế phẩm vi sinh ức chế nấm mốc Chế phẩm vi sinh: Các chế phẩm. .. DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghi n cứu - Các mẫu da thuộc sản phẩm da thuộc nhiễm mốc - Chế phẩm vi sinh Chế phẩm bacillus, PLA, chế phẩm BioS đƣợc pha với tỷ lệ 1:1:2 - Các loại