Nghiên cứu phương pháp chế tạo một số vật liệu xenlulo cố định enzym phân huỷ protein sử dụng điều trị vết thương

BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN CÔNG NGHỆ MÔI TRƯỜNG NHIỆM VỤ HỢP TÁC QUỐC TẾ Theo Nghị định thư Khoa học - Công nghệ với Liên bang Nga (2010 - 2012) BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP CHẾ TẠO MỘT SỐ VẬT LIỆU XENLULO CỐ ĐỊNH ENZYM PHÂN HỦY PROTEIN SỬ DỤNG ĐIỀU TRỊ VẾT THƯƠNG Hà Nội - 2012 BÁO CÁO KẾT QUẢ THỰC HIỆN NHIỆM VỤ HỢP TÁC QUỐC TẾ (Theo Nghị định thư Khoa học – Công nghệ với Liên bang Nga) (2010 - 2012) Thông tin chung Nhiệm vụ: Tên Nhiệm vụ: Nghiên cứu phương pháp chế tạo số vật liệu xenlulo cố định enzym phân hủy protein sử dụng điều trị vết thương Thời gian thực hiện: 30 tháng Từ tháng năm 2010 đến tháng năm 2012 Họ tên Chủ nhiệm phía Việt Nam: Huỳnh Thị Hà Học hàm, học vị, chuyên môn: Tiến sỹ Khoa học Vật liệu Chức danh khoa học: Nghiên cứu viên Cơ quan chủ trì Việt Nam : Viện Cơng nghệ mơi trường, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Họ tên Chủ nhiệm đối tác nước ngoài: V N Filatov Học hàm, học vị, chun mơn: GS, TSKH, Hóa sinh Chức danh khoa học: Viện trưởng, Viện Nghiên cứu Vật liệu dệt, Viện Hàn lâm Kỹ thuật Nga Địa chỉ: 129344, 17a Ul Iskra, Moskva, LB Nga Xuất xứ thỏa thuận có với đối tác nước ngồi: Thời gian ký kết thoả thuận: Thỏa thuận với Viện Nghiên cứu Vật liệu dệt, Viện Hàn lâm Kỹ thuật Nga ký ngày 29 tháng năm 2009 Cấp ký kết thoả thuận: - Về phía đối tác Nga: Viện trưởng, Viện Nghiên cứu Vật liệu dệt, Viện Hàn lâm Kỹ thuật Nga, GS TSKH V N Filatov ký - Về phía Việt Nam: Viện trưởng, Viện Cơng nghệ mơi trường, Viện Khoa học Công nghệ Việt nam, PGS TS Nguyễn Hoài Châu ký DANH SÁCH CÁC CÁN BỘ THAM GIA NHIỆM VỤ STT Họ tên TS Huỳnh Thị Hà PGS TSKH Ngô Quốc Bưu PGS TS Nguyễn Hoài Châu CN Đào Trọng Hiền KS Nguyễn Thúy Phượng KS Lê Anh Bằng KS Hoàng Thị Mai TS Phạm Thị Bích Hợp TS Phí Quyết Tiến 10 Phan Thị Hồng Thảo 11 KS Vũ Văn Lợi 12 TS Nguyễn Duy Nhứt 13 PGS TS Nguyễn Gia Tiến 14 TS Nguyễn Như Lâm 15 Đơn vị Chủ trì Nhiệm vụ, phụ trách Viện Công mảng nghiên cứu phương pháp nghệ môi chế tạo số vật liệu xenlulo trường, Viện cố định enzym phân hủy KH&CN VN protein Viện Công nghệ Sinh học, Viện KH&CN VN Viện Bỏng Quốc gia GS VS Filatov V N Moskva TSKH Medusheva E O Đánh giá hoạt tính enzym hoạt tính vật liệu xenlulo cố định enzym phân hủy protein Viện NC&ƯD Tách chiết enzym từ gan tụy CN Nha Trang cua biển Việt Nam Viện NCVLD 16 Nội dung công việc Đánh giá tiền lâm sàng băng xenlulo cố định enzym phân hủy protein Thường xuyên cung cấp thông tin vật liệu xenlulo, giúp đỡ xác định phương hướng nghiên cứu, tạo điều kiện cho cán VN tiếp xúc với quan nhà khoa học Nga, cung cấp enzym, hướng dẫn phương pháp nghiên cứu tính chất đánh giá chất lượng sản phẩm, giảng tham dự hội thảo VN MỤC LỤC Thông tin chung Nhiệm vụ: DANH SÁCH CÁC CÁN BỘ THAM GIA NHIỆM VỤ MỤC LỤC СÁС TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH 11 ĐẶT VẤN ĐỀ 15 CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGỒI NƯỚC 17 1.1 Một số tính chất vật liệu xenlulo enzym sử dụng y học 17 1.2 Vật liệu phủ vết thương sở xenlulo cố định enzym 18 1.3 Viện NCVLD Moskva đầu nghiên cứu chế tạo vật liệu phủ vết thương hiệu cao 23 1.4 Một số tính chất đặc thù vật liệu phủ vết thương cố định enzym 25 1.5 Đặc tính cơng nghệ vật liệu phủ vết thương sở xenlulo biến tính Viện NCVLD Moskva đề xuất 26 1.6 Tình hình nghiên cứu nước 31 CHƯƠNG II ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ QUY TRÌNH NGHIÊN CỨU 33 2.1 Đối tượng nghiên cứu 33 2.2 Phương pháp nghiên cứu quy trình nghiên cứu 33 2.2.1 Lựa chọn vật liệu vải sợi xenlulo phù hợp cho việc chế tạo băng gạc điều trị vết thương hiệu cao 33 2.2.2 Nghiên cứu biến tính xenlulo periodat natri 36 2.2.3 Nghiên cứu xác định số lượng nhóm đialđehyt sau oxy hóa xenlulo 38 2.2.4 Nghiên cứu đánh giá mật độ nhóm đialđehyt phân bố sợi xenlulo 39 2.2.5 Khảo sát hình thái học phổ FTIR mẫu DAC 41 2.2.6 Nghiên cứu cố định tổ hợp enzym hepatopancrease lên DAC 41 2.2.6.1 Phương pháp cố định chitosan lên DAC 42 2.2.6.2 Cố định enzym HP lên DAC-Chitosan 43 2.2.6.3 Nghiên cứu ảnh hưởng tham số lên hoạt tính cố định tổ hợp enzym HP lên vải DAC 43 2.2.6.4 Nghiên cứu đánh giá hoạt tính phân giải protein tổ hợp enzym HP 44 2.2.7 Khảo sát q trình giải phóng enzym 47 2.2.8 Khảo sát trình hình thành hạt micro nano xenlulo chứa tổ hợp enzym HP tiếp xúc với dung dịch đệm photphat, DMSO 48 2.2.8.1 Khảo sát trình giải phóng enzym 49 2.2.8.2 Khảo sát trình hình thành kết tập vi mô DAC - Chitosan - HP 49 2.2.9 Nghiên cứu chế tạo băng gạc Multiferm chứa tổ hợp enzym HP chitosan 50 2.2.10 Khảo sát phổ nhiệt vi sai phổ hồng ngoại mẫu vật liệu nhiệt độ khác 50 2.2.11 Nghiên cứu ảnh hưởng tia xạ gama lên hoạt tính phân hủy protein tổ hợp enzym HP phụ thuộc vào thời gian bảo quản 52 2.2.12 Nghiên cứu liều độc tính cấp dung dịch enzym HP 52 2.2.13 Nghiên cứu tác dụng điều trị vết thương băng gạc chứa enzym HP chitosan Multiferm động vật thí nghiệm 53 2.2.14 Nghiên cứu tách chiết tổ hợp enzym phân giải protein từ gan tụy số loài cua biển Việt Nam 55 2.2.14.1 Lựa chọn vật liệu phương pháp sàng lọc 57 2.2.14.2 Phương pháp tách chiết enzym từ nội tạng cua ghẹ 58 2.2.14.3 Nghiên cứu tinh chế enzym HP từ nội tạng cua ghẹ 60 2.2.14.4 Xác định hoạt tính protease tổ hợp enzym hepatopancreas 60 2.2.14.5 Xác định định lượng nồng độ protein 62 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 64 3.1 Lựa chọn vật liệu vải sợi xenlulo phù hợp cho việc chế tạo băng gạc điều trị vết thương hiệu cao 64 3.2 Nghiên cứu biến tính xenlulo periodat natri 67 3.2.1 Ảnh hưởng nồng độ HIO4 đến mức độ oxy hóa xenlulo 67 3.2.2 Ảnh hưởng modul bể đến mức độ oxy hóa xenlulo 68 3.2.3 Ảnh hưởng thời gian lên mức độ oxy hóa xenlulo 69 3.3 Nghiên cứu đánh giá số tính chất đialđehyt xenlulo 70 3.3.1 Khảo sát hình thái học mẫu DAC kính hiển vi điện tử truyền qua70 3.3.2 Khảo sát phổ FTIR mẫu DAC có mức độ oxy hóa khác 72 3.3.3 Kết đánh giá mức độ đồng phân bố nhóm đialđehyt vải xenlulo biến tính 75 3.4 Nghiên cứu cố định enzym HP lên DAC 78 3.4.1 Nghiên cứu cấy chitosan lên DAC 78 3.4.2 Ảnh hưởng mức độ oxy hóa xenlulo đến hoạt tính enzym HP 84 3.4.3 Khảo sát ảnh hưởng pH đến hoạt tính enzym HP 86 3.4.4 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt tính enzym HP 87 3.5 Q trình giải phóng enzym 88 3.5.1 Ảnh hưởng pH 88 3.5.2 Ảnh hưởng nhiệt độ lên hoạt tính enzym HP 91 3.6 Khảo sát trình hình thành hạt micro nano xenlulo chứa tổ hợp enzym HP tiếp xúc với dung dịch đệm photphat, DMSO 93 3.7 Nghiên cứu chế tạo băng gạc Multiferm VN chứa tổ hợp enzym HP 96 3.8 Khảo sát phổ nhiệt vi sai hồng ngoại mẫu vật liệu nhiệt độ khác 98 3.9 Nghiên cứu ảnh hưởng tia xạ gamma lên hoạt tính phân hủy protein tổ hợp enzym HP cố định DAC 101 3.10 Nghiên cứu tác dụng điều trị vết thương băng gạc chứa enzym HP động vật thí nghiệm 104 3.10.1 Nghiên cứu liều độc cấp tính dung dịch enzym HP kết mô bệnh học gan, lách chuột thí nghiệm cho uống enzym HP 104 3.10.1.1 Kết nghiên cứu liều độc tính cấp chuột nhắt trắng (LD50) 104 3.10.1.2 Kết mô bệnh học gan, thận uống dung dịch enzym HP 105 3.10.2 Kết nghiên cứu vết bỏng thỏ thực nghiệm 107 3.10.2.1 Diễn biến vết thương bỏng nhóm 107 3.10.2.2 Diễn biến vết thương bỏng nhóm 109 3.10.2.3 Diễn biến vết thương bỏng nhóm 112 3.10.2.4 Diễn biến vết thương bỏng nhóm 113 3.10.3 Kết giải phẫu bệnh vết thương bỏng 116 3.10.3.1 Đặc điểm mô bệnh học vết bỏng thực nghiệm trước đắp thuốc 116 3.10.3.2 Thay đổi mô học sau đắp gạc thuốc 116 3.11 Nghiên cứu tách chiết tổ hợp enzym phân giải protein từ gan tụy cua biển Việt Nam 120 3.11.1 Khảo sát ảnh hưởng dung dịch đệm đến hoạt tính proteaza 121 3.11.2 Tách phân đoạn enzym cồn theo tỷ lệ thể tích khác 121 3.11.3 Ảnh hưởng tốc độ ly tâm đến khả làm proteaza 122 3.11.4 Tách phân đoạn tổ hợp enzym proteaza sử dụng màng siêu lọc 122 3.11.5 Tách chiết tổ hợp enzym proteaza từ gan tụy cua biển dùng (NH4)2SO4 123 3.11.6 Xác định hoạt tính enzym proteaza hàm lượng protein 124 3.12 Nghiên cứu tinh chế tổ hợp enzym phân hủy protein tách chiết từ cua ghẹ Việt Nam 124 3.12.1 Nghiên cứu tinh chế tổ hợp enzym phân hủy protein………………… 124 3.12.2 Xác định hiệu suất thu hồi độ tinh 130 3.12.3 So sánh thành phần enzyme chiết tách từ cua ghẹ Việt Nam với chế phẩm enzyme công nghiệp Nga…………………………………………… … 133 KẾT LUẬN 136 KIẾN NGHỊ 137 TÀI LIỆU THAM KHẢO 138 PHỤ LỤC 142 СÁС TỪ VIẾT TẮT ADCTA – 2-amino-4,6-dichlor-2-triazin APS – amonium persunfat APTES - 3-aminopropyl triethoxysilan BSA – bovine serum albumin DAC – đialđehyt xenlulo DAC-Enz – đialđehyt xenlulo -enzym DAC-Chit-EnzHP – đialđehyt xenlulo-chitosan-enzym hepatopancreat DAAO – D-Amino Acid oxidaza DMSO – dimethilsunfoxit DTGA – phương pháp nhiệt vi sai ĐHT – đỉnh hấp thụ CĐHT – cường độ hấp thụ FT-IR – quang phổ hồng ngoại biến đổi Fourier GO – grafen oxit HĐP – hoạt độ proteaza HP - hepatopancreas HPLC – sắc ký lỏng phân giải cao HTSH – hoạt tính sinh học HTSLH – hoạt tính sinh lý học LMW – low molecular weight MCM-41 – mesoporous silica MMW – medium molecular weight NSOM – kính hiển vi quang học trường gần NVS – nhiệt vi sai OD – mật độ quang PEG – polyethylen glycol PGP – phân giải protein PU – proteolytic unit SDS – sodium dodecyl sunfat SBA-15 – mesoporous silica SEM – hiển vi điện tử quét TCA – trichlor acetic axit TĐA – trao đổi anion TEM – hiển vi điện tử truyền qua TLPT – trọng lượng phân tử trung bình TRIS base – 2-amino-2-hydroxymethyl-propan-1,3-diol TES – dung dịch đệm: Tris-EDTA- dung dịch CaCl2 TTC – 2,3,5-triphenyltetrazol clorua VNCVLD – Viện Nghiên cứu Vật liệu dệt DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 26 1.1 Động học phân hủy thủy phân vật liệu mang cố định enzym dung dịch đệm phosphat so với vật liệu mang chưa cố định enzym 29 1.2 Hiệu điều trị vết thương băng DAC cố định enzym tripsin băng DAC cố định tổ hợp enzym hepatopancreat so sánh với băng không chứa enzym 2.1 Một số đỉnh hấp thụ đặc trưng phổ FTIR mẫu DAC oxy hóa với mức độ khác 40 2.2 Các tham số đường chuẩn phụ thuộc Mật độ quang – Hàm lượng tyrosin cho phép xác định hệ số tyrosin 45 2.3 Các loại băng gạc chế tạo 50 3.1 Độ thơng thống, độ mao dẫn độ ngậm nước vải xô xenlulo y tế Việt Nam trước sau xử lý oxy hóa so sánh với vải xơ xenlulo Nga 64 3.2 Độ cứng uốn tải lực kéo đứt vải xô xenlulo y tế Việt nam trước sau xử lý oxy hóa so sánh với vải xơ xenlulo Nga 65 3.3 Ảnh hưởng nồng độ HIO4 lên q trình oxy hóa xenlulo 67 3.4 Ảnh hưởng số modul bể oxy hóa lên q trình hình thành DAC 68 10 3.5 Ảnh hưởng thời gian oxy hóa lên hiệu oxy hóa xenlulo 69 70 11 3.6 Ảnh hưởng nồng độ axit periodic số modul bể oxy hóa lên mức độ oxy hóa xenlulo thời gian phản ứng 3.7 Tỷ số cường độ cặp đỉnh hấp thụ (ĐHT) đialđehyt xenlulo phụ thuộc vào mức độ oxy hóa xenlulo, xác định phổ FTIR 73 12 13 3.8 Tỷ số cường độ cặp đỉnh hấp thụ (ĐHT) phân đoạn sợi đialđehyt xenlulo 76 14 3.9 Các mức oxy hóa DAC sử dụng nghiên cứu 78 15 3.10 Kết phân tích hoạt tính enzym phụ thuộc vào mức độ 78 Số bảng oxy hóa DAC 16 3.11 Kết phân tích hoạt tính enzym phụ thuộc vào trọng lượng phân tử chitosan (Mẫu không rửa enzym –đợt 1) 79 17 3.12 Kết phân tích hoạt tính enzym phụ thuộc vào trọng lượng phân tử chitosan (Mẫu rửa enzym –đợt 1) 80 18 3.13 Kết phân tích hoạt tính enzym phụ thuộc vào trọng lượng phân tử chitosan (Mẫu không rửa enzym –đợt 2) 81 19 3.14 Kết phân tích hoạt tính enzym phụ thuộc vào trọng lượng phân tử chitosan (Mẫu rửa enzym –đợt 2) 82 20 3.15 Kết phân tích hoạt tính enzym phụ thuộc vào trọng lượng phân tử chitosan (Mẫu không rửa enzym –đợt 3) 82 21 3.16 Kết phân tích hoạt tính enzym phụ thuộc vào trọng lượng phân tử chitosan (Mẫu rửa enzym –đợt 3) 83 22 3.17 Mức độ oxy hóa số vật liệu DAC 84 23 3.18 Hoạt tính cịn lại tổ hợp enzym HP Mẫu M3-D5 sau ngâm dung dịch đệm với thời gian khác 88 24 3.19 Hoạt tính cịn lại tổ hợp enzym HP Mẫu M4-D5 sau ngâm dung dịch đệm với thời gian khác 89 25 3.20 Hoạt tính cịn lại tổ hợp enzym HP Mẫu Nga sau ngâm dung dịch đệm với thời gian khác 90 26 3.21 Quá trình phân hủy thủy phân enzym HP cố định vải DAC (3,12%) phụ thuộc vào thời gian thủy phân 93 27 3.22 Hoạt độ enzym mẫu băng DAC-Chit-EnzHP (“Multiferm”) 96 28 3.23 Kết phân tích nhiệt vi sai số mẫu DAC cấy chitosan sau cố định enzym hepatopancrease 100 29 3.24 Hoạt độ enzym băng Multifern Việt Nam Multiferm Nga đo sau chế tạo 101 30 3.25 Hoạt độ enzym băng Multifern Việt Nam Multiferm Nga, đo sau chiếu xạ gama 101 31 3.26 Hoạt độ enzym băng Multifern Việt Nam Multiferm Nga, đo sau chiếu xạ gama tháng 102 32 3.27 Hoạt độ enzym băng Multifern Việt Nam Multiferm Nga, sau 2,5 tháng chiếu xạ gama 102 33 3.28 Hoạt độ enzym băng Multifern Việt Nam Multiferm Nga, đo sau tháng chiếu xạ gama 102 34 3.29 Hoạt độ enzym băng Multifern Việt Nam Multiferm Nga, đo sau 7,5 tháng chiếu xạ 103 35 3.30 Kết nghiên cứu liều độc cấp tính chuột nhắt trắng 104 36 3.31 So sánh diễn biến chỗ vết bỏng nhóm 107 37 3.32 Sự thu hẹp vết bỏng nghiên cứu nhóm (cm2) 108 38 3.33 Diễn biến chỗ vết bỏng nhóm 110 39 3.34 Sự thu hẹp vết bỏng nghiên cứu nhóm (cm2) 111 40 3.35 So sánh diễn biến chỗ vết bỏng nhóm 112 41 3.36 Sự thu hẹp vết bỏng nghiên cứu nhóm (cm2) 113 42 3.36a Diễn biến chỗ vết bỏng nhóm 113 43 3.36b Sự thu hẹp diện tích vết bỏng (cm2) nhóm 114 44 3.37 Biến đổi mơ học nhóm 117 45 3.38a Diễn biến mơ học nhóm theo thời gian 118 46 3.38b Diễn biến mô học theo thời gian hai vùng tiêu sinh thiết 119 47 3.39 Ảnh hưởng dung dịch đệm đến hoạt tính enzym 121 48 3.40 Tách phân đoạn enzym cồn theo tỷ lệ thể tích khác 121 49 3.41 Ảnh hưởng tốc độ ly tâm đến khả tinh proteaza 122 50 3.42 Kết đo hoạt tính dịch chiết tách theo phân đoạn (NH4)2SO4 123 51 3.43 Xác định hàm lượng protein phân đoạn (NH4)2SO4 123 52 3.44 Hoạt tính proteaza hàm lượng protein 124 53 3.45 Kết xác định hàm lượng protein mẫu dịch enzym HP 129 54 3.46 Kết xác định hoạt tính enzyme mẫu dịch enzym HP 130 55 3.47 Hiệu suất thu hồi giai đoạn kết tủa phân đoạn 130 56 3.48 Hiệu suất thu hồi giai đoạn cột IRA 420 131 10 i ii iii iv Báo cáo phân tích kết cố định tổ hợp Nêu bước Kết luận enzym hepatopancreas chitozan lên vải xơ quy trình chế tạo vải xenlulo đề xuất khả sử xenlulo ơxy hóa, kết nghiên cứu ơxy hóa, phụ dụng chế tạo vật liệu phủ vết thương sở thuộc hoạt tính phân hủy sở đialđehyt xenlulo, kết phân lập tổ hợp protein tổ hợp enzym chữa bệnh enzym hepatopancreas tách chiết từ cua biển hepatopancreas vào mức độ Việt nam ơxy hóa xenlulo, pH nhiệt Báo cáo hiệu điều trị vết thương độ môi trường phản ứng băng gạc chứa enzym hepatopancreas động vật thí nghiệm thử nghiệm lâm sàng (lấy băng gạc loại Nga làm đối chứng) 21 Yêu cầu kỹ thuật,chỉ tiêu chất lượng sản phẩm tạo (dạng kết I, II) T T Tên sản phẩm tiêu chÊt l­ỵng chđ u i ii Số lượng vải xenlulo Đơn vị đo Cần đạt iii Gam Mức chất lượng Mẫu tương tự Trong Thế giới nước iv ialehyt Mức độ ơxy hóa (kết % - 30 v vi RUPatent - No 2280076 chưa có (2006.01) bước đầu) ≤40 Băng gạc sở RUPatent Băng gạc chứa đialđehyt xenlulo cố định clastơ Xen- tổ hợp enzym -Chi-Enz hepatopancreas chưa có có kích thước 200- chitozan (kết bước Số lượng băng Hàm lượng tổ hợp enzym mg/g xen Hàm lượng chitozan mg/g xen (2006.01) - 6-9 - 4-5 200 Tổ hợp enzym hepatopancreas từ cua 2280076 400nm đầu): Dù kiÕn số lượng sản phẩm tạo vii 100 USPatent cht 5143837 biển Việt Nam dạng - 22 - (Sep.1992) bột (kết bước đầu): Khối lượng mg Mức độ làm lần 50 chưa có 80 Hiệu suất thu hồi % 40 chưa có 50 PU/mg 800 chưa có 1000 Hoạt tính phân hủy 1000 collagen Quy trình chế tạo băng gạc sở đialđehyt xenlulo cố định tổ hợp enzym hepatopancreas chitozan Quy trình quy mơ Có tính khả thi 100 Việt Nam chưa có băng/mẻ Băng gạc Tiêu chuẩn sở đialđehyt xenlulo cố định Cơ sở tổ hợp enzym chưa có hepatopancreas chitozan có HTSH 0,1PU/g Đào tạo Bài báo khoa học Thạc sỹ 22 Phương thức chuyển giao kết nghiên cứu Phía đối tác Nga cung cấp cho phía Việt nam tài liệu kết nghiên cứu công nghệ chế tạo vật liệu phủ vết thương sở xenlulo cố định enzym phân hủy protein ứng dụng chúng y học; - Hướng dẫn cán khoa học Việt Nam nắm bắt công nghệ chế tạo vật liệu phủ vết thương xenlulo biến tính cố định loại enzyme; - Chuyển cho phía Việt Nam kết đánh giá số liệu thực nghiệm băng gạc loại Multiferm chứa tổ hợp enzym hepatopancreas sở nguyên vật liệu Việt Nam 23 Các tác động kết nghiên cứu  Bồi dưỡng, đào tạo cán khoa học cơng nghệ: Nâng cao trình độ, kiến thức chun mơn kỹ thực công việc cụ thể cho cán tham gia thực đề tài nghiên cứu Tạo điều kiện để cán khoa học công nghệ nắm bắt công nghệ chế tạo vật liệu sở xenlulo vi mô phương pháp cố định loại enzym hợp chất có HTSH khác 23  Đối với lĩnh vực khoa học có liên quan : Góp phần đưa cơng nghệ nano vào ứng dụng thực tiễn y học nước nhà nhằm chữa trị loại vết thương lâu lành – vấn đề nan giải lĩnh vực điều trị bệnh ngày  Đối với kinh tế - xã hội: Các loại băng gạc sở xenlulo biến tính cố định enzym hoạt chất sinh học khác có tác dụng điều trị kéo dài - sản phẩm công nghệ tiên tiến giới - đưa vào sử dụng nước ta nâng cao hiệu điều trị vết loét lâu lành - vấn đề nan giải điều trị bệnh, góp phần ngăn chặn dịch bệnh, bảo vệ nâng cao sức khỏe nhân dân IV CÁC TỔ CHỨC, CÁ NHÂN THAM GIA THỰC HIỆN NHIỆM VỤ 24 TT A Hoạt động tổ chức phối hợp tham gia thực nhiệm vụ Tªn tỉ chức Địa Phớa Vit Nam Vin Nghiờn cu v Ứng 02 dụng cơng nghệ Nha Trang Đường Vương, Ho¹t ®éng/®ãng gãp cho nhiƯm vơ Hùng Phân lập, thu nhận tinh chế tổ hợp Nha enzym hepatopancreas từ cua biển Việt Tp Trang Viện Công nghệ sinh học 18 Hồng Nam Quốc Đánh giá hoạt tính sinh học Việt, Q Cầu Giấy, chế phẩm đialđehyt xenlulo cố định tổ hợp enzym hepatopancreas chitozan Hà Nội Bệnh viện quân đội 108 02 Trần Hưng Đạo, Thử nghiệm hiệu điều trị vết thương động vật thí nghiệm Hà Nội băng gạc chứa enzym phía Việt nam chế tạo so sánh với băng gạc loại phía đối tác Nga cung cấp Viện Bỏng quốc gia Tân Triều, Thanh Thử nghiệm lâm sàng sản phẩm băng gạc chứa enzym điều trị vết Trì, Hà Nội thương khó lành Việt Nam chế tạo, so sánh với băng gạc loại phía đối tác Nga cung cấp Viện Da liễu Quốc gia Phương Mai, Đống Thử nghiệm lâm sàng sản phẩm Đa, Hà Nội băng gạc chứa enzym điều trị vết thương khó lành Việt Nam chế tạo B Phía đối tác nước ngồi 24 Tổ hợp “Polyferm”, Trung 129344, 17a Ul Giúp đỡ đối tác Việt Nam nắm bắt tâm KH-KT – Viện Hàn lâm Iskra, Moskva, phương pháp ơxy hóa xenlulo để thu nhận Kỹ thuật Nga, Viện Nghiên LB Nga DAC cố định enzym phân hủy protein cứu Vật liệu dệt, Moskva lên xenlulo đialđehyt, nắm bắt phương pháp xác định số lượng nhóm đialđehyt hình thành phân tử xenlulo số lượng enzym cố định, phương pháp xác định hoạt tính cuả enzym Đánh giá đặc trưng kỹ thuật số băng gạc đialđehyt xenlulo chứa tổ hợp enzym hepatopancreas chế tạo từ nguyên vật liệu Việt Nam Các kết thu chuyển cho phía Việt nam làm sở để triển khai nghiên cứu chế tạo vật liệu phủ vết thương Việt Nam 25 TT A Đội ngũ cán thực nhiệm vụ (Ghi tất người có đóng góp thuộc tất tổ chức chủ trì tham gia đề tài, không 05 người/mỗi bên) Họ tên Cơ quan công tác, Số tháng làm việc cho nhiệm vụ tel, fax, email Phía Việt Nam Viện KH vật liệu, TS Huỳnh Thị Hà 20 VKH&CNVN Viện CNMT, PGS TSKH Ngô Quốc Bưu VKH&CNVN Viện CNMT, TS Nguyễn Hồi Châu TS Phạm Thị Bích Hợp TS Nguyễn GiaTiến TS.BS Nguyễn Quốc Gia B Phía đối tác nước ngồi GS.TSKH Filatov V N VKH&CNVN 18 Viện CNSH 10 Viện Bỏng Quốc gia Quân y viện 108 Viện trưởng Viện 20 NCVLD Moskva TS Medusheva E O 26 Liên kết với sản xuất đời sống Viện NCVLD 20 - Các kết nghiên cứu sau nghiệm thu chuyển giao cho đơn vị nghiên cứu- triển khai sở sản xuất có quan tâm để sản xuất đưa vào sống 25 sản phẩm nhiệm vụ nhằm đáp ứng nhu cầu an toàn vệ sinh ngày cao sống - Các sản phẩm nhiệm vụ đăng ký chất lượng theo quy định hành để lưu thơng thị trường - Những bí cơng nghệ xác lập q trình thực nhiệm vụ đăng ký quyền V DỰ KIẾN KINH PHÍ THỰC HIỆN NHIỆM VỤ VÀ NGUỒN KINH PHÍ 27 TT Nguồn kinh phí Việt Nam (triệu đồng) Nguồn kinh phí Tổng số Th khốn chuyên môn - 800 818 Ngân sách SNKH (đối ứng) Thu hồi 28 Nguồn kinh phí đối tác nước ngồi: - Từ Chính phủ nước đối tác: - Từ ngân sách tự có đối tác: Trong Nguyên, Thiết bị, Xây vật liệu, máy móc dựng, lượng sửa chữa nhỏ 453.68 0 Chi khác 528.32 Số tiền: Số tiền: Ngày … tháng … năm BÊN A Tl BỘ TRƯỞNG BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VỤ TRƯỞNG VỤ KHOA HỌC Xà HỘI VÀ TỰ NHIÊN BÊN B CHỦ TRÌ NHIỆM VỤ Huỳnh Thị Hà Nghiêm Xuân Minh VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM TRƯỞNG BAN KẾ HOẠCH TÀI CHÍNH 26 CƠ QUAN CHỦ TRÌ NHIỆM VỤ VIỆN CÔNG NGHỆ MÔI TRƯỜNG Những người tham gia Nhim v TT Họ tên Cơ quan công tác, Số tháng làm việc cho tel, fax, email nhiệm vô Huỳnh Thị Hà Viện KH vật liệu, VKH&CNVN 20 Ngô Quốc Bưu Viện CNMT, VKH&CNVN 18 Nguyễn Hoài Châu Viện CNMT, VKH&CNVN 06 Đào Trọng Hiền, Viện CNMT, 18 Nguyễn Thúy Phượng, Viện CNMT, 18 Lê Anh Bằng Viện CNMT, 18 Hoàng Thị Mai Viện CNMT, 18 Phạm Thị Bích Hợp Viện CNSH 10 Phí Quyết Tiến Viện CNSH 10 10 Phan Thị Hồng Thảo Viện CNSH 10 11 Vũ Văn Lợi Viện CNSH 10 12 Nguyễn Duy Nhứt Viện NC&ƯD CN Nha Trang 13 Nguyễn GiaTiến Viện Bỏng Quốc gia 14 Nguyễn Quốc Gia Quân y viện 108 15 Filatov V N Viện NCVLD Moskva 20 16 Medusheva E O Viện NCVLD Moskva 20 27 Phụ lục I DỰ TỐN KINH PHÍ CỦA NHIỆM VỤ TT Triệu đồng Nội dung khoản chi Thành tiền Tỉ lệ % Nm 2010 Nm 2011 Thuê khoán chuyên môn 818 45.44 469 349 Nguyên, vật liệu, lượng 453.68 25.20 442.68 11 Thiết bị, máy móc chuyên dùng 0 0 Đoàn 309.24 17.18 153.72 155.52 Đoàn vào 58.26 3.24 58.26 Chi kh¸c 160.82 8.93 76.34 84.48 Tỉng céng 1800 28 100 % 1200 600 Phần I: Dự toán kinh phí theo Mục lục NSNN Đơn vị tính : Triệu đồng ST T Mục chi A Nội dung chi Nội dung chi giao khoán Tổng số Chia năm 2010 2011 1061.08 616.6 444.48 6500 Thanh toán dịch vụ cơng cộng 24 13 11 6550 Vật tư văn phịng 10 5 6600 Thông tin, tuyên truyền, liên lạc 12 6 6650 Hội nghị 20.9 8.54 12.36 6700 Cơng tác phí 31.92 13.8 18.12 6850 Chi đồn vào 7000 Chi phí nghiệp vụ chun mơn 58.26 862 58.26 491 371 (Tiểu mục 7012:Chi toán hợp đồng thực nghiệp vụ chuyên môn 818 469 349 Tiểu mục 7017: Chi thực đề tài NCKH theo chế độ,: PC chủ nhiệm ĐT ) 44 22 22 Chi khác 42 21 21 738.92 583.4 155.52 309.24 153.72 155.52 429.68 429.68 1200 600 7750 B Nội dung chi khơng giao khốn 6750 Chi phí th mướn (Th phương tiện vận chuyển, thuê nhà, đất, thiết bị loại ) 6800 Chi đoàn 6900 Sửa chữa thường xuyên tài sản phục vụ công tác chuyên môn, tu bảo dưỡng CT sở hạ tầng 7000 Chi phí nghiệp vụ chun mơn (Gồm vật tư, hố chất, , trang TBị chuyên dùng TSCĐ) 9000 Tài sản vơ hình 9050 Tài sản hữu hình 0 1800 Tổng cộng 29 Phụ lục II GIẢI TRÌNH CỤ THỂ CÁC KHOẢN CHI Đơn vị tính : Triệu đồng TT A I I.1 I.2 I.3 4 I.4 I.5 Mục chi Nội dung th khốn Đơn vị tính Số lượng Tổng số Năm 2010 Năm 2011 818 469 349 14 12 Nội dung chi giao khốn 7000 Chi phí nghiệp vụ chun mơn (các báo cáo, chun đề) Thu thËp, tỉng hỵp vµ xư lý tµi liƯu Xây dựng thuyết minh chi tiết nhiệm vụ b/cáo 2 Viết báo cáo tóm tắt, tổng kết b/cáo 12 12 báo cáo 16 16 110 110 Khảo sát thông số vật liệu vải xenlulo Việt Nam phù hợp cho nghiên cứu ơxy hố (độ thơng khí, bền dai, độ cứng, hấp thụ nước…) Nghiên cứu ơxy hóa xenlulo periodat để thu nhận đialđehyt xenlulo Nghiên cứu q trình ơxy hóa xenlulo để thu nhận đialđehyt xenlulo với hàm lượng nhóm đialđehyt thay đổi Nghiên cứu xác định số lượng nhóm đialdehyt (áp dụng phương pháp so màu) Nghiên cứu đánh giá mật độ nhóm đialđehyt phân bố theo chiều dài sợi xenlulo (áp dụng phương pháp nhuộm chọn lọc thuốc thử triphenyltetrazol clorua ) Nghiên cứu ảnh hưởng mức độ ơxy hóa lên số kỹ thuật vật liệu xenlulo: khả hấp thụ nước, độ thơng khí, độ cứng Cố định tổ hợp enzym hepatopancreas (HP) lên đialđehyt xenlulo Cố định tổ hợp enzym HP điều kiện thay đổi pH dung dịch đệm phosphat, thay đổi mức độ ơxy hóa mơđun bể Xác định số lượng enzym cố định đialđehyt xenlulo Xác định hoạt tính phân giải protein sản phẩm enzyme cố định đialđehyt xenlulo Nghiên cứu cố định chitozan lên vải đialđehyt xenlulo Nghiên cứu xác lập chủng loại chitozan, nồng độ 30 Quy trình 30 30 c/đề 25 25 c/đề 25 25 c/đề 30 30 81 81 Quy trình 30 30 c/đề 25 25 c/ đề 26 26 80 80 30 30 c/ đề I.6 pH phù hợp dung dịch chitozan sử dụng phản ứng cố định Nghiên cứu xác lập điều kiện cố định chitozan (nhiệt độ, thời gian phản ứng, thời điểm tiến hành cố định chitozan quy trình cơng nghệ chế tạo vật liệu phủ vết thương chứa enzym proteaza) Nghiên cứu ảnh hưởng chitozan lên hoạt tính enzym hepatopancreas cố định đialđehyt xenlulo phụ thuộc vào pH mật độ nhóm đialđehyt Quy trình 20 20 c/ đề 30 30 135 125 10 Động học trình phá hủy đialđehyt xenlulo chứa enzym dẫn đến suy giảm hoạt tính enzym hình thành nano xenlulo Nghiên cứu trình phá hủy thủy phân vật liệu c/ đề 20 20 c/ đề 30 30 xenlulo thông qua ảnh hưởng mức độ ơxy hóa xenlulo pH dung dịch đệm lên hoạt tính cịn lại enzym Kiểm sốt q trình phá hủy thủy phân vật liệu xenlulo cố định enzym enzym thông qua nghiên cứu ảnh hưởng mức độ ơxy hóa xenlulo pH dung dịch đệm Khảo sát phổ nhiệt vi sai phổ hồng ngoại mẫu vật liệu nhiệt độ khác c/ đề 25 25 Khảo sát độ bền nhiệt tổ hợp enzym hepatopancreas (hoạt tính cịn lại enzyme) vật liệu chứa enzym dạng huyền phù ngâm vào dung dịch đệm pH nhiệt độ khác Khảo sát độ bền axit tổ hợp enzym hepatopancreas vật liệu chứa enzym dạng huyền phù ngâm vào dung dịch đệm pH nhiệt độ khác Khảo sát trình hình thành hạt micro nano xenlulo chứa enzym hepatopancreas gạc tiếp xúc với dung dịch đệm phosphat, DMSO Nghiên cứu phân lập tổ hợp enzym phân giải protein từ gan tụy số loài cua biển Việt Nam Thu mua nội tạng cua biển sàng lọc mẫu theo định hướng tổ hợp enzym phân giải protein Phân lập thu nhận tổ hợp enzym hepatopancreas dạng sản phẩm thô Nghiên cứu tinh chế tổ hợp enzym c/ đề 30 30 c/đề 30 20 10 c/đề 30 30 55 55 I.7 I.8 I.9 31 kg 25 30 30 mẫu 25 25 118 118 I.10 I.11 I.12 I.13 I.14 I.15 hepatopancreas Nghiên cứu quy trình làm lần thứ tổ hợp enzym hepatopancreas thô (phương pháp muối đẩy (NH4)2 SO4, thẩm tách tách cột DEAESephadex A-50) Nghiên cứu quy trình tinh tổ hợp enzym hepatopancreas (màng siêu lọc + giải hấp enzym gradient NaCl) Thuê sấy khô lạnh để bảo quản enzym (-70oC, 70 giờ) Nghiên cứu thử hoạt tính trọng lượng phân tử tổ hợp enzym hepatopancreas thu c/đề 25 25 c/đề 20 20 đợt 20 20 c/ đề 15 15 Nghiên cứu thay đổi hoạt tính sinh học tổ hợp enzym hepatopancreas thu ảnh hưởng pH dung dịch đệm nhiệt độ Nghiên cứu độ bền nhiệt tổ hợp enzym hepatopancreas thu ảnh hưởng pH dung dịch đệm (6.5 – 8.5) nhiệt độ Chế tạo băng gạc Multiferm chứa tổ hợp enzym hepatopancreas chitozan Nghiên cứu ảnh hưởng tia xạ gamma lên hoạt tính phân hủy protein tổ hợp enzym HP enzym tự nhiên phụ thuộc vào liều lượng phóng xạ thời gian bảo quản c/ đề 18 18 c/ đề 20 20 c/ đề 30 30 c/đề 30 30 Nghiên cứu tác dụng điều trị vết thương băng gạc chứa enzym hepatopancreas động vật thí nghiệm Xây dựng tiêu chuẩn sở băng gạc đialđehyt xenlulo cố định chitozan - tổ hợp enzym hepatopancreas Thử nghiệm lâm sàng tác dụng điều trị vết thương băng gạc chứa enzym hepatopancreas Thử nghiệm (khoảng 200 gạc 10x10cm) c/đề 30 30 Tiêu chuẩn 30 30 c/đề 30 30 mẫu 200 gạc 29 29 8 Điều chế đialđehyt xenlulo phương pháp ơxy hóa xenlulo tự nhiên Cố định chitozan lên đialdehyt xenlulo (tính cho 200 băng gạc) kg kg 1,5 7 kg 8 Cố định tổ hợp enzym HP lên đialđehyt xenlulo (tính cho 200 băng gạc) Chế tạo băng gạc phủ vết thương sở đialđehyt xenlulo - chitozan - tổ hợp enzym HP với lớp vải giữ ẩm không dệt kg 2,2 6 II 7000 Chi thực đề tài NCKH theo chế 44 22 22 32 độ In ấn, phô tô tài liệu cho chuyên môn PC chủ nhiệm ĐT Dịch tài liệu III 24 6500 Thanh tốn dịch vụ cơng cộng - Điện - Nước IV tháng Kwh m3 19 000 1000 6550 Vt t phũng Văn phòng phẩm V 6600 Thông tin, tuyên truyền,liên lạc Thông tin, Internet VI tháng 6650 Hội nghị Chi phÝ kiÓm tra, đánh giá kì Chi phÝ nghiƯm thu néi bé Bồi dưỡng báo cáo viên In mua tµi liƯu lần lần lần lần lần Hội thảo VII 24 2 6700 Cơng tác phí 10 24 10 12 5 12 24 13 11 19 10 10 5 10 5 12 6 12 6 20.9 8.54 12.36 1.5 1.0 5.4 10 1.0 0.4 3.4 3.74 0.5 0.6 6.26 31.92 13.8 18.12 20.8 7.2 3.92 10.4 2.4 1.0 10.4 4.8 2.92 58.26 58.26 39.69 16.8 1.17 0.6 39.69 16.8 1.17 0.6 13 21 21 30 12 15 15 Địa điểm đến công tác: Tp HCM, Nha Trang, thời gian công tác: tổng cộng 56 ngày số người : TiÒn vÐ m¸y bay (tính trung bình 2,6 tr/người) Tiền th phòng nghỉ = 0,15/đêm PC lưu trú = 0,07 /ngày lần đêm ngày 48 56 VIII 6850 Chi đoàn vào Tiền ở: (0.75x2người x27 đêm ngày) Tiền lưu trú (0.3x2người x28ngày) Tiền lại sân bay: 0.4x2 người x 2lượt Chi khác IX đêm ngày lượt lượt 54 56 7750 Chi khác Chi quản lý phí Dịch vụ cơng (cho phịng thí nghiệm): 0.5/tháng 33 năm tháng 24 0 Đơn vị tính : Triệu đồng (1800/1U$) TT Mc chi B I Nội dung Đơn vị tính Đơn giá Thành tiền Nm 2010 309.24 153.72 Năm 2011 Nội dung chi khơng giao khốn 6800 Chi đoàn 7000 155.52 người 1200$ 129.60 64.80 64.80 đêm ngày người người 78 84 60$ 55$ 50$ 80$ 84.24 83.16 3.60 8.64 42.12 41.58 90 4.32 42.12 41.58 2.7 4.32 Chi phí nghiệp vụ chun mơn 429.68 429.68 Chi mua vật tư, hoá chất Vải xơ xenlulo tự nhiên 417.29 417.29 TiỊn vÐ m¸y bay (nước Nga) (2 đoàn, 3người/đoàn 14 ngày) TiỊn ë TiỊn lưu trú Lệ phí visa Tiền lại sân bay II Sè l­ỵng Vải nilon khơng dệt HIO4 2H2O NaOH Dimethylsulfooxide DMSO Chitozan Tripsin, TPCK treated Tổ hợp enzym hepatopancreat -aminopropyl trimethoxysilane (C18H23NO3Si) Silicagel 70 - 230mesh, 60A0, -casein (≥ 70%) Triphenyltetrazol chloride (TTC) Tris (NH2C(CH2OH)3) Anthraquinone Cồn etylic tuyệt đối Acetic acid Acrylamide-500G Ammonium persulfate-25G BaSO4 Bis acrylamide kg kg 100g kg lít 100g 500mg 1g 250ml 10 10 10 10 250 0.420 0.735 4.855 0.409 1.393 2.685 7.145 0.612 2.016 4.200 3.675 48.55 2.045 13.93 26.85 28.58 153.000 12.096 4.200 3.675 48.55 2.045 13.93 26.85 28.58 153.00 12.096 0 0 0 0 kg 1.962 1.920 1.920 250g 100g 2.5kg 100g lít 1 100 1.822 8.053 9.234 0.608 0.06 1.822 16.106 9.234 0.608 1.822 16.106 9.234 0.608 Lit Lọ 500g Lọ 25g Kg Lọ 100g 1 0.4 3.2 0.8 1.3 0.8 3.2 0.8 1.3 3.2 0.8 1.3 0 0 0 0 0 34 Bradford Reagent-500ML CaCO3 Casein PA CoCl2 Collagen type I Coomassie Brilliant Blue G Eppendorf 2ml Ethanol 990 Fe2(SO4)3 Folin & Ciocalteu’s phenol reagent -500ML HCl (Merck) HgSO4 H2SO4 K2HPO4 KH2PO4 MnSO4 NaCl Na2CO3 NaHCO3 NaH2PO4 Na2HPO4 (NH4)2SO4 N-Lauroylsarcosine sodium salt 50G PbCl2 SDS-500G Silicagel SnCl2 Than hoạt tính TEMED-30ML Tris HCl Triton X-100-100ML Zn2SO4 (Merck) Dơng cơ, phơ tïng thÝ nghiƯm Cốc chén, dụng cụ thủy tinh Cột sắc ký: + KH-34695-36 (Cole-Palmer) + KH-34695-36 (Cole-Palmer) + DEAE- Sephadex A-50 (Amersham) 3.Găng tay Lọ 500ml Kg Kg Lọ 250g Lọ 5g Lọ 25g Túi 500 Lit Kg Lọ 500ml Lit Kg Kg Kg Kg Kg Kg Kg Kg Kg Kg Kg 1 1.9 2.5 6.8 1.67 3.2 3.8 2.5 6.8 3.34 3.2 3.8 2.5 6.8 3.34 3.2 1 0.4 2.3 3.5 0.4 2.3 3.5 0.4 2.3 3.5 2 1 3.5 0.45 3.8 0.5 1.05 0.85 1.8 0.52 0.8 0.95 0.85 0.85 0.92 0.9 3.8 2.5 1.05 1.70 1.8 1.56 1.6 0.95 0.85 2.55 0.92 0.9 3.8 2.5 1.05 1.70 1.8 1.56 1.6 0.95 0.85 2.55 0.92 Lọ 50g Kg Lọ 500g Kg Lọ 250g Kg Lọ 30ml Kg Lọ 100 ml Kg 0.5 1 1 0.95 2.8 2.8 3.8 0.5 0.8 3.43 1.9 1.4 2.8 3.8 2.5 0.8 3.43 1.9 1.4 2.8 3.8 2.5 0.8 3.43 1 1.1 Bộ 0.400 1.1 12.39 1.6 1.1 12.39 1.6 Bộ Bộ Cột 1 2.08 2.21 2.08 2.21 2.08 2.21 Hộp 50 0.10 0.5 0.5 35 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 đôi Hộp Giấy lọc TỔNG CỘNG 10 0.1 1.0 800 36 1.0