Thử nghiệm khả năng kháng bệnh gan thận mủ của chủng bacillus amyloliquefaciens agwt 13 031 ở quy mô sản xuất cá tra giống

SỞ NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG THÔN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRUNG TÂM CƠNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO NGHIỆM THU NHIỆM VỤ KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ THỬ NGHIỆM KHẢ NĂNG KHÁNG BỆNH GAN THẬN MỦ CỦA CHỦNG Bacillus amyloliquefaciens AGWT 13-031 Ở QUY MƠ SẢN XUẤT CÁ TRA GIỐNG Đơn vị chủ trì nhiệm vụ: Phòng CNSH Thủy Sản Chủ nhiệm nhiệm vụ: ThS Lê Lưu Phương Hạnh Cán tham gia: ThS Lê Văn Hậu ThS Bùi Thị Thanh Tịnh ThS Trần Phạm Vũ Linh Cố vấn khoa học: TS Nguyễn Quốc Bình Hình thức thực hiện:  Nghiên cứu bản;  Dự án sản xuất thử nghiệm;  Nghiên cứu ứng dụng;  Nghiệp vụ thường xuyên Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 06/2019 MỤC LỤC MỤC LỤC DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC HÌNH DANH MỤC BẢNG BIỂU TÓM TẮT PHẦN THÔNG TIN CHUNG PHẦN NỘI DUNG KHOA HỌC I ĐẶT VẤN ĐỀ II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 10 III VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 3.1 Vật liệu 18 3.2 Phương pháp 19 3.2.1 Chuẩn bị vi khuẩn 19 3.2.2 Nội dung 1: Hồn thiện quy trình sử dụng chủng vi khuẩn B amyloliquefaciens AGWT 13-031 để kiểm sốt vi khuẩn E ictaluri gây bệnh mơi trường nuôi quy mô pilot 19 3.2.3 Nội dung 2: Hồn thiện quy trình sử dụng chủng vi khuẩn B amyloliquefaciens AGWT 13-031 trình ương cá tra bột quy mô pilot 23 3.2.4 Phương pháp phân tích mẫu cá chết thử nghiệm 25 3.2.5 Nội dung 3: Thử nghiệm khả kháng bệnh gan thận mủ chủng vi khuẩn B amyloliquefaciens AGWT 13-031 cá tra quy mô sản xuất 25 3.2.6 Xử lý thống kê 27 IV KẾT QUẢ - THẢO LUẬN 27 4.1 Nội dung 1: hồn thiện quy trình sử dụng chủng vi khuẩn B amyloliquefaciens AGWT 13031 để kiểm soát vi khuẩn E ictaluri gây bệnh môi trường nuôi quy mô pilot 27 4.1.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát nồng độ B amyloliquefaciens AGWT 13-031 sử dụng để xử lý cá tra giống 27 4.1.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát thời gian phương pháp xử lý B amyloliquefaciens AGWT 13031 lên cá tra giống 28 4.1.3 Thí nghiệm 3: Sử dụng B amyloliquefaciens AGWT 13-031 để ức chế vi khuẩn E ictaluri môi trường trước thả cá 31 4.2 Nội dung 2: Hoàn thiện quy trình sử dụng chủng vi khuẩn B amyloliquefaciens AGWT 13031 trình ương cá tra bột quy mô pilot 33 4.2.1 Thí nghiệm 1: khảo sát thời điểm bổ sung B amyloliquefaciens AGWT 13-031 vào môi trường quy trình ương cá tra bột 33 4.2.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát khả kháng bệnh gan thận mủ cá tra ni mơi trường có B amyloliquefaciens giai đoạn ương cá tra bột 35 4.3 Nội dung 3: Thử nghiệm khả kháng bệnh gan thận mủ chủng vi khuẩn B amyloliquefaciens AGWT 13-031 cá tra quy mô sản xuất 36 V KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ 44 Kết luận 44 Đề nghị 44 PHẦN SẢN PHẨM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ 45 PHẦN TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 I TIẾNG VIỆT 46 II TIẾNG ANH 46 PHỤ LỤC 51 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT BHI: Brain Heart Infusion TSB: Tryptone Soy Broth TSA: Tryptone Soy Agar ĐBSCL: Đồng sông Cửu Long RPS: relative percent survival (tỷ lệ sống tương đối) EIM: môi trường Edwardsiella ictaluri medium CFU: colony forming unit DANH MỤC HÌNH Hình Những tác động có lợi probiotic nuôi trồng thủy sản Đường màu đỏ: hoạt tính ức chế, Mũi tên xanh lá: hoạt tính bổ trợ (Zorriehzahra cộng sự, 2016) .11 Hình Mẫu cá chết mang biểu đặc trưng bệnh gan thận mủ (A) kết điện di sản phẩm PCR khuẩn lạc phân lập từ cá bệnh với cặp mồi F2SerC/R2SerC (B) 28 Hình Hình thái bên cá hương 21 ngày tuổi 34 Hình Mẫu cá thu thử nghiệm (đợt 1) ao thử nghiệm (A) ao ĐC (B) 39 Hình 4 Mẫu cá bệnh gan thận mủ ao sau tháng nuôi 39 Hình So sánh mẫu nước ao thử nghiệm ao đối chứng (A)Lượng tảo phát triển nhiều ao ĐC; (B) Màu nước ao ĐC ngả vàng; (C),(D) nước ao thử nghiệm giữ màu xanh tốt 40 Hình Mật độ vi khuẩn tổng mẫu nước ao kiểm tra môi trường LB agar .41 Hình Kiểm tra mẫu nước ao thử nghiệm, ao ĐC so màu kit Sera 42 DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 3.1 Bảng tóm tắt vật liệu sử dụng nghiên cứu 18 Bảng Các thơng số quy trình xử lý B amyloliquefaciens AGWT 13-031 .19 Bảng 3 Thời điểm bổ sung B amyloliquefaciens AGWT 13-031 trình ương cá tra bột 24 Bảng Các thơng số kỹ thuật quy trình thử nghiệm chủng B amyloliquefaciens AGWT 13-031 quy mô đồng ruộng 26 Bảng Tổng kết thông số chất lượng nước (Đo test Sera- Thời điểm đo: 12-13h)……………………………………………………………………………… 41 TÓM TẮT Hiện nay, việc ứng dụng vi sinh vật có lợi để kiểm sốt phát triển vi khuẩn gây bệnh, hỗ trợ kháng bệnh, tạo nguồn cá giống chất lượng tốt cải thiện môi trường nuôi biện pháp phòng bệnh quan tâm Nghiên cứu ghi nhận hiệu sử dụng chủng Bacillus amyloliquefaciens AGWT 13-031 cá tra bột cá tra giống xử lý nuôi trường nuôi Thử nghiệm quy mô pilot cho thấy, bổ sung chủng B amyloliquefaciens AGWT 13-031 vào môi trường nuôi 24h, 48h 72h trước cảm nhiễm với E ictaluri tỷ lệ chết cá giảm dần, 62,79%; 41,67% 26,74%, thấp so với nhóm đối chứng 86,07% Khi sử dụng B amyloliquefaciens AGWT 13-031 để xử lý dịch vi khuẩn E ictaluri vòng 24 - 48h trước cảm nhiễm với cá tra tỷ lệ chết cá tra giảm (p