Nghiên cứu sulfate hóa exopolysaccharide từ dịch nuôi cấy nấm cordyceps sinensis và khảo sát hoạt tính sinh học của chúng

ỦY BAN NHÂN DÂN THÀNH ĐỒN TP HỒ CHÍ MINH THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH SỞ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ TRUNG TÂM PHÁT TRIỂN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẺ CHƢƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ “NGHIÊN CỨU SULFATE HĨA EXOPOLYSACCHARIDE TỪ DỊCH NUÔI CẤY NẤM CORDYCEPS SINENSIS VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CHÚNG” Cơ quan chủ trì nhiệm vụ: Trung tâm Phát triển Khoa học Công nghệ Trẻ Chủ nhiệm nhiệm vụ: ThS Trần Minh Trang Thành phố Hồ Chí Minh - 2017 ỦY BAN NHÂN DÂN THÀNH ĐỒN TP HỒ CHÍ MINH THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH SỞ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ TRUNG TÂM PHÁT TRIỂN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẺ CHƢƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ “NGHIÊN CỨU SULFATE HĨA EXOPOLYSACCHARIDE TỪ DỊCH NUÔI CẤY NẤM CORDYCEPS SINENSIS VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CHÚNG” (Đã chỉnh sửa theo kết luận Hội đồng nghiệm thu ngày 30/11/2017) Chủ nhiệm nhiệm vụ Trần Minh Trang Cơ quan chủ trì nhiệm vụ Đồn Kim Thành THÀNH ĐỒN TP HỒ CHÍ MINH CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRUNG TÂM PHÁT TRIỂN Độc lập - Tự - Hạnh phúc KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ TRẺ TP Hồ Chí Minh, ngày 14 tháng 12 năm 2017 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KH&CN I THƠNG TIN CHUNG Tên nhiệm vụ: Thuộc: Chương trình Vƣờn ƣơm Sáng tạo Khoa học Công nghệ trẻ Chủ nhiệm nhiệm vụ: Họ tên: Trần Minh Trang Ngày, tháng, năm sinh: 10/10/1991 Nam/ Nữ: Nam Học hàm, học vị: Thạc sĩ Chức danh khoa học: Chức vụ Điện thoại: Tổ chức: Nhà riêng: Mobile: 0909 979 5345 Fax: E-mail: trangbio.hcmus@gmail.com Tên tổ chức công tác: Địa tổ chức: Địa nhà riêng: 33/11 Vạn Kiếp, Phường 3, Quận Bình Thạnh, TP.HCM Tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Tên tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Trung tâm Phát triển Khoa học Công nghệ Trẻ Điện thoại: 8233363 - 8230780 Fax: 8244 705 E-mail: khoahoctre@gmail.com Website: www.khoahoctre.com.vn i Địa chỉ: Số Phạm Ngọc Thạch, P Bến Nghé, Q1, TP Hồ Chí Minh Họ tên thủ trưởng tổ chức: Đoàn Kinh Thành Số tài khoản: 3713.0.1083277 Kho bạc: Kho bạc Nhà nước Quận – TP Hồ Chí Minh Tên quan chủ quản đề tài: Sở Khoa học Cơng nghệ TP.HCM II TÌNH HÌNH THỰC HIỆN Thời gian thực nhiệm vụ: - Theo Hợp đồng ký kết: từ 12/2016 đến 12/2017 - Thực tế thực hiện: từ 2/2016 đến 12/2017 - Được gia hạn (nếu có): Khơng gia hạn Kinh phí sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí thực hiện: 80 triệu đồng đó: + Kính phí hỗ trợ từ ngân sách khoa học: 80 triệu đồng + Kinh phí từ nguồn khác: triệu đồng b) Tình hình cấp sử dụng kinh phí từ nguồn ngân sách khoa học: Số TT Thực tế đạt Theo kế hoạch Ghi Thời gian Kinh phí Thời gian Kinh phí (Số đề nghị (Tháng, năm) (Tr.đ) (Tháng, năm) (Tr.đ) toán) 1/2017 40 1/2017 40 c) Kết sử dụng kinh phí theo khoản chi: Đối với đề tài: Đơn vị tính: Triệu đồng Số Nội dung TT khoản chi Thực tế đạt Theo kế hoạch Tổng Trả công lao động 44,76 (khoa học, phổ NSKH 44,766 ii Nguồn khác Tổng 44,76 NSKH 44,766 Nguồn khác thông) Nguyên, vật liệu, lượng Chi in ấn tài liệu Chi lý nhiệm vụ KH&CN Tổng cộng 26,00 26,00 26,00 26,00 0,484 0,484 0,484 0,484 8,750 8,750 8,750 8,750 80 80 80 80 Các văn hành q trình thực đề tài/dự án: (Liệt kê định, văn quan quản lý từ công đoạn xét duyệt, phê duyệt kinh phí, hợp đồng, điều chỉnh (thời gian, nội dung, kinh phí thực có); văn tổ chức chủ trì nhiệm vụ (đơn, kiến nghị điều chỉnh có) Số Số, thời gian ban TT hành văn Tên văn Ghi Số 906/QĐ- Quyết định việc phê duyệt đề SKHCN, ngày tài nghiên cứu khoa học phát 7/12/2016 triển công nghệ Số 18/2016/HĐ2 KHCN-VƯ ngày Hợp đồng thuê khoán 30/12/2016 Biên Họp Hội đồng nghiệm Ngày 30/11/2017 thu Đề tài nghiên cứu khoa học công nghệ Tổ chức phối hợp thực nhiệm vụ: khơng có Số TT Tên tổ chức Tên tổ chức Nội dung Sản phẩm đăng ký theo tham gia thực tham gia chủ chủ yếu đạt Thuyết minh yếu iii Ghi chú* Công ty Công ty Nguyên Cung cấp EPS nguyên Nguyên Long, Long, Lạc dịch nuôi cấy liệu thô Lạc Dương, Dương, Lâm nấm Lâm Đồng Đồng Cordyceps sinensis Cá nhân tham gia thực nhiệm vụ: (Người tham gia thực đề tài thuộc tổ chức chủ trì quan phối hợp, khơng q 10 người kể chủ nhiệm) Số TT Tên cá nhân Tên cá nhân Nội dung đăng ký theo tham gia tham gia Thuyết minh thực Sản phẩm chủ yếu đạt Thuyết minh, xử ThS Trần ThS Trần Chủ nhiệm đề lý số liệu, báo Minh Trang Minh Trang tài cáo tổng kết, báo khoa học Cố vấn nội TS Đinh Minh TS Đinh Minh Hiệp Hiệp ThS Lê Thị ThS Lê Thị Khảo sát quy Thúy Hằng Thúy Hằng trình sulfate Học viên cao Học viên cao hóa học Nguyễn học Nguyễn exopolysaccha Thị Xuân Thị Xuân ride Phương Phương Khảo sát hoạt dung nghiên cứu tính kháng oxy ThS Huỳnh ThS Huỳnh hóa Thư Thư phương pháp hóa học iv Cố vấn nội dung nghiên cứu Khảo sát quy trình sulfate hóa exopolysacchari de Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa phương pháp hóa học Ghi * Tình hình hợp tác quốc tế: khơng có Tình hình tổ chức hội thảo, hội nghị: khơng có Tóm tắt nội dung, công việc chủ yếu: (Nêu mục 15 thuyết minh, không bao gồm: Hội thảo khoa học, điều tra khảo sát nước nước ngoài) Các nội dung, công - tháng … năm) chủ yếu (Các mốc đánh giá chủ yếu) (Bắt đầu, kết thúc việc Số TT Thời gian Theo Thực tế kế đạt Người, quan thực hoạch Xây dựng thuyết minh 12/201 chi tiết 12/2016 ThS Trần Minh Trang TS Đinh Minh Hiệp duyệt Chuẩn hóa nguồn 1/2017 1/2017- ThS Trần Minh Trang nguyên liệu - 4/2017 CN Nguyễn Thị Xuân Phương exopolysaccharid từ 4/2017 dịch nuôi cấy Cordyceps sinensis Khảo sát quy trình tạo 5/2017 5/2017 – ThS Trần Minh Trang dẫn xuất – 7/2017 exopolysaccharid – 7/2017 CN Nguyễn Thị Xuân Phương ThS Lê Thị Thúy Hằng sulfat Đánh giá hoạt tính 8/2017 8/2017 – ThS Trần Minh Trang kháng oxy hóa – 10/2017 phương pháp hóa 9/2017 CN Nguyễn Thị Xuân Phương ThS Huỳnh Thư học bắt gốc tự ABTS v Hydroxyl Báo cáo khoa học tổng 10/201 10/2017 kết đề tài dự 7- - án 12/201 12/2017 ThS Trần Minh Trang III SẢN PHẨM KH&CN CỦA NHIỆM VỤ Sản phẩm KH&CN tạo ra: a) Sản phẩm Dạng I: Số TT Tên sản phẩm tiêu chất Số lượng lượng chủ yếu Chỉ tiêu, chất Theo kế Thực tế lượng hoạch đạt Hiệu suất Hiệu suất (g/L) (g/L) TLPT TLPT 2,75 g/L 1085,4 kDa; 59,8 kDa; 1,2 kDa Nhóm chức Nhóm chức O-H, C-H, C=O, EPS thô glucopyranose, C-O-C Polysaccharide 68,81% Protein 0,19% Số phân EPS-1 EPS- đoạn Nâu đất, thơm Màu sắc Dẫn xuất EPSsulfate mùi đường Hiệu suất Hiệu suất 13,78 % TLPT TLPT 0,76 kDa vi O-H, C-H, Nhóm chức Nhóm chức C=O, C-O-C, S=O, C-O-S Polysaccharide 51,31% Không phát Protein Sulfate 47,15% Số phân S-EPS11-1 đoạn Độ thay Độ thay DS = 1,59 Xám nâu, mùi Màu sắc hắc Hoạt tính Hoạt tính bắt bắt gốc tự gốc tự OH OH Hoạt tính bắt Hoạt tính gốc tự bắt gốc tự ABTS ABTS 95,24% 4000µg/mL 98,02% 4000µg/mL b) Sản phẩm Dạng II: Yêu cầu khoa học Số TT Tên sản phẩm cần đạt Theo kế hoạch Ghi Thực tế đạt Quy trình thu nhận + Hiệu suất thu nhận sulfate hóa + Tỷ lệ CSA/Pyr exopolysaccharide từ dịch + Thời gian + Tỷ lệ 1:3 nuôi cấy nấm C sinensis + Nhiệt độ +6h + Các nhóm + 65 oC vii + 13,78% + O-H, C-H, + Độ thay C=O, C-O-C, S=O, C-O-S + 1,59 Báo cáo tổng hợp (chính, Thể nội dung Thể nội tóm tắt, CD) nghiên cứu dung nghiên cứu c) Sản phẩm Dạng III: Số TT Tên sản phẩm Yêu cầu khoa học Số lượng, nơi cần đạt công bố Theo Thực tế (Tạp chí, nhà kế hoạch đạt xuất bản) báo Tạp chí khoa Bài báo khoa học học chuyên ngành tong nước Tạp chí Phát thuộc Tạp chí triển Khoa học Phát triển Công nghệ, Khoa học Đại học Quốc Công nghệ, Gia-HCM Đại học Quốc Gia-HCM d) Kết đào tạo: Số Cấp đào tạo, Chuyên TT ngành đào tạo Thạc sỹ Số lượng Theo kế hoạch Ghi Thực tế đạt (Thời gian kết thúc) thạc sĩ Hóa thạc sĩ Hóa sinh sinh 12/2017 đ) Tình hình đăng ký bảo hộ quyền sở hữu cơng nghiệp: khơng có e) Thống kê danh mục sản phẩm KHCN ứng dụng vào thực tế: khơng có Đánh giá hiệu nhiệm vụ mang lại: viii cultured mycelium of Cordyceps sinensis Food and bioproducts processing 87(2), 139-144 (2009) [16] Dong, C., Guo, S., Wang, W., and Liu, X., Cordyceps industry in China Mycology 6(2), 121-129 (2015) [17] Du, M., Zhao, L., Li, C., Zhao, G., and Hu, X., Purification and characterization of a novel fungi Se-containing protein from Se-enriched Ganoderma Lucidum mushroom and its Se-dependent radical scavenging activity European Food Research and Technology 224(5), 659-665 (2007) [18] Fung, S.Y., Lee, S.S., Tan, N.H., and Pailoor, J., Safety assessment of cultivated fruiting body of Ophiocordyceps sinensis evaluated through subacute toxicity in rats Journal of Ethnopharmacology (2017) [19] Helbert, W., Marine Polysaccharide sulfatases Frontiers in Marine Science 4, (2017) [20] Hsieh, C., Tsai, M.-J., Hsu, T.-H., Chang, D.-M., and Lo, C.-T., Medium optimization for polysaccharide production of Cordyceps sinensis Applied biochemistry and biotechnology 120(2), 145 (2005) [21] Huang, G., Shu, S., Cai, T., Liu, Y., and Xiao, F., Preparation and deproteinization of garlic polysaccharide International journal of food sciences and nutrition 63(6), 739-741 (2012) [22] Huang, G., Yang, Q., and Wang, Z.B., Extraction and deproteinization of mannan oligosaccharides Zeitschrift für Naturforschung C 65(5-6), 387-390 (2010) [23] Huang, Q.-L., Siu, K.-C., Wang, W.-Q., Cheung, Y.-C., and Wu, J.-Y., Fractionation, characterization and antioxidant activity of exopolysaccharides from fermentation broth of a Cordyceps sinensis fungus Process Biochemistry 48(2), 380-386 (2013) 64 [24] Jiao, G., Yu, G., Zhang, J., and Ewart, H.S., Chemical structures and bioactivities of sulfated polysaccharides from marine algae Marine drugs 9(2), 196-223 (2011) [25] Jin, M., Lu, Z., Huang, M., Wang, Y., and Wang, Y., Sulfated modification and antioxidant activity of exopolysaccahrides produced by Enterobacter cloacae Z0206 International journal of biological macromolecules 48(4), 607-612 (2011) [26] Jing, Y., Zhu, J., Liu, T., Bi, S., Hu, X., Chen, Z., Song, L., Lv, W., and Yu, R., Structural characterization and biological activities of a novel polysaccharide from cultured Cordyceps militaris and its sulfated derivative Journal of agricultural and food chemistry 63(13), 3464-3471 (2015) [27] Jiraungkoorskul, K and Jiraungkoorskul, W., Review of naturopathy of medical mushroom, Ophiocordyceps sinensis, in sexual dysfunction Pharmacognosy reviews 10(19), (2016) [28] Jung, H.Y., Bae, I.Y., Lee, S., and Lee, H.G., Effect of the degree of sulfation on the physicochemical and biological properties of Pleurotus eryngii polysaccharides Food hydrocolloids 25(5), 1291-1295 (2011) [29] Kim, H and Yun, J., A comparative study on the production of exopolysaccharides between two entomopathogenic fungi Cordyceps militaris and Cordyceps sinensis in submerged mycelial cultures Journal of Applied Microbiology 99(4), 728-738 (2005) [30] Ko, Y.-F., Liau, J.-C., Lee, C.-S., Chiu, C.-Y., Martel, J., Lin, C.-S., Tseng, S.-F., Ojcius, D.M., Lu, C.-C., and Lai, H.-C., Isolation, Culture and Characterization of Hirsutella sinensis Mycelium from Caterpillar Fungus Fruiting Body PloS one 12(1), e0168734 (2017) [31] Koh, J.-H., Yu, K.-W., Suh, H.-J., Choi, Y.-M., and Ahn, T.-S., Activation of macrophages and the intestinal immune system by an orally administered 65 decoction from cultured mycelia of Cordyceps sinensis Bioscience, biotechnology, and biochemistry 66(2), 407-411 (2002) [32] Kozarski, M., Klaus, A., Nikšić, M., Vrvić, M.M., Todorović, N., Jakovljević, D., and Van Griensven, L.J.L.D., Antioxidative activities and chemical characterization of polysaccharide extracts from the widely used mushrooms Ganoderma applanatum, Ganoderma lucidum, Lentinus edodes and Trametes versicolor Journal of Food Composition and Analysis 26(1), 144-153 (2012) [33] Kruger, N.J., The Bradford method for protein quantitation The protein protocols handbook 17-24 (2009) [34] Leung, P.H., Zhao, S., Ho, K.P., and Wu, J.Y., Chemical properties and antioxidant activity of exopolysaccharides from mycelial culture of Cordyceps sinensis fungus Cs-HK1 Food Chemistry 114(4), 1251-1256 (2009) [35] Li, R and Feke, D.L., Rheological and kinetic study of the ultrasonic degradation of xanthan gum in aqueous solution: effects of pyruvate group Carbohydrate polymers 124, 216-221 (2015) [36] Li, S., Xiong, Q., Lai, X., Li, X., Wan, M., Zhang, J., Yan, Y., Cao, M., Lu, L., and Guan, J., Molecular modification of polysaccharides and resulting bioactivities Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety 15(2), 237-250 (2016) [37] Li, S.P., Li, P., Dong, T., and Tsim, K.W.K., Anti-oxidation activity of different types of natural Cordyceps sinensis and cultured Cordyceps mycelia Phytomedicine 8(3), 207-212 (2001) [38] Li, X.-L., Xiao, J.-J., Zha, X.-Q., Pan, L.-H., Asghar, M.-N., and Luo, J.-P., Structural identification and sulfated modification of an antiglycation Dendrobium huoshanense polysaccharide Carbohydrate polymers 106, 247254 (2014) 66 [39] Lo, H.-C., Hsieh, C., Lin, F.-Y., and Hsu, T.-H., A Systematic Review of the Mysterious Caterpillar Fungus Ophiocordyceps sinensis in Dong ChongXiaCao (Dōng Chóng Xià Cǎo) and Related Bioactive Ingredients Journal of Traditional and Complementary Medicine (1): 16(32) (2013) [40] Mestechkina, N and Shcherbukhin, V., Sulfated polysaccharides and their anticoagulant activity: A review Applied Biochemistry and Microbiology 46(3), 267-273 (2010) [41] Ong, B.Y and Aziz, Z., Efficacy of Cordyceps sinensis as an adjunctive treatment in kidney transplant patients: A systematic-review and meta-analysis Complementary Therapies in Medicine 30, 84-92 (2017) [42] Onishi, A., St Ange, K., Dordick, J.S., and Linhardt, R.J., Heparin and anticoagulation Front Biosci 21, 1372-1392 (2016) [43] Sheng, L., Chen, J., Li, J., and Zhang, W., An exopolysaccharide from cultivated Cordyceps sinensis and its effects on cytokine expressions of immunocytes Applied biochemistry and biotechnology 163(5), 669-678 (2011) [44] Shi, W.-L., Han, H., Chen, G.-Z., Chen, X., Hong, Y.-K., Chen, L.-K., Chen, D., and Lu, Z., Extraction, characterization of the polysaccharide extracts from Seenriched G lucidum (Se-GLP) and its inhibition against oxidative damage in ischemic reperfusion mice Carbohydrate Polymers 80(3), 774-778 (2010) [45] Sigdel, S.R., Rokaya, M.B., Münzbergová, Z., and Liang, E., Habitat Ecology of Ophiocordyceps sinensis in Western Nepal Mountain Research and Development 37(2), 216-223 (2017) [46] Sugahara, K., Mikami, T., Uyama, T., Mizuguchi, S., Nomura, K., and Kitagawa, H., Recent advances in the structural biology of chondroitin sulfate and dermatan sulfate Current opinion in structural biology 13(5), 612-620 (2003) 67 [47] Sung, G.-H., Hywel-Jones, N.L., Sung, J.-M., Luangsa-ard, J.J., Shrestha, B., and Spatafora, J.W., Phylogenetic classification of Cordyceps and the clavicipitaceous fungi Studies in Mycology 57, 5-59 (2007) [48] Terho, T.T and Hartiala, K., Method for determination of the sulfate content of glycosaminoglycans Analytical biochemistry 41(2), 471-476 (1971) [49] Tran, M.T., Huynh, T., Le-Thi, T.H., and Dinh, M.H., Extraction of exopolysaccharide from the culture fluid Cordyceps sinensis and its effects on proliferation of the peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) Journal of Science and Technology 53 (2015) [50] Vasconcelos, A.F.D., Dekker, R.F., Barbosa, A.M., Carbonero, E.R., Silveira, J.L., Glauser, B., Pereira, M.S., and da Silva, M.d.L.C., Sulfonation and anticoagulant activity of fungal exocellular β-(1→ 6)-D-glucan (lasiodiplodan) Carbohydrate polymers 92(2), 1908-1914 (2013) [51] Wang, J., Bao, A., Wang, Q., Guo, H., Zhang, Y., Liang, J., Kong, W., Yao, J., and Zhang, J., Sulfation can enhance antitumor activities of Artemisia sphaerocephala polysaccharide in vitro and vivo International Journal of Biological Macromolecules (2017) [52] Wang, J., Guo, H., Zhang, J., Wang, X., Zhao, B., Yao, J., and Wang, Y., Sulfated modification, characterization and structure–antioxidant relationships of Artemisia sphaerocephala polysaccharides Carbohydrate Polymers 81(4), 897-905 (2010) [53] Wang, J., Nie, S., Chen, S., Phillips, A.O., Phillips, G.O., Li, Y., Xie, M., and Cui, S.W., Structural characterization of an α-1, 6-linked galactomannan from natural Cordyceps sinensis Food Hydrocolloids (2017) [54] Wang, J., Niu, S., Zhao, B., Luo, T., Liu, D., and Zhang, J., Catalytic synthesis of sulfated polysaccharides II: Comparative studies of solution conformation and antioxidant activities Carbohydrate polymers 107, 221-231 (2014) 68 [55] Wang, L., Li, X., and Chen, Z., Sulfated modification of the polysaccharides obtained from defatted rice bran and their antitumor activities International Journal of Biological Macromolecules 44(2), 211-214 (2009) [56] Wang, W., Wang, K., Wang, X., Yang, R., Li, Y., and Yao, Y., Investigation on natural resources and species conservation of Ophiocordyceps sinensis, the famous medicinal fungus endemic to the Tibetan Plateau Protein & Cell 1-3 (2017) [57] Wang, Z.-M., Peng, X., Lee, K.-L.D., Tang, J.C.-o., Cheung, P.C.-K., and Wu, J.Y., Structural characterisation and immunomodulatory property of an acidic polysaccharide from mycelial culture of Cordyceps sinensis fungus Cs-HK1 Food chemistry 125(2), 637-643 (2011) [58] Wielgos, T., Havel, K., Ivanova, N., and Weinberger, R., Determination of impurities in heparin by capillary electrophoresis using high molarity phosphate buffers Journal of pharmaceutical and biomedical analysis 49(2), 319-326 (2009) [59] Wijesinghe, W and Jeon, Y.-J., Biological activities and potential industrial applications of fucose rich sulfated polysaccharides and fucoidans isolated from brown seaweeds: A review Carbohydrate Polymers 88(1), 13-20 (2012) [60] Wu, Y.H.S., Tseng, J.K., Chou, C.H., Chiu, C.H., Lin, Y.L., and Chen, Y.C., Preventive effects of Ophiocordyceps sinensis mycelium on the liver fibrosis induced by thioacetamide Environmental Toxicology 32(6), 1792-1800 (2017) [61] Xia, E.-H., Yang, D.-R., Jiang, J.-J., Zhang, Q.-J., Liu, Y., Liu, Y.-L., Zhang, Y., Zhang, H.-B., Shi, C., and Tong, Y., The caterpillar fungus, Ophiocordyceps sinensis, genome provides insights into highland adaptation of fungal pathogenicity Scientific Reports (2017) [62] Xie, J.-H., Wang, Z.-J., Shen, M.-Y., Nie, S.-P., Gong, B., Li, H.-S., Zhao, Q., Li, W.-J., and Xie, M.-Y., Sulfated modification, characterization and antioxidant 69 activities of polysaccharide from Cyclocarya paliurus Food Hydrocolloids 53, 7-15 (2016) [63] Xing, R., Liu, S., Guo, Z., Yu, H., Wang, P., Li, C., Li, Z., and Li, P., Relevance of molecular weight of chitosan and its derivatives and their antioxidant activities in vitro Bioorganic & medicinal chemistry 13(5), 1573-1577 (2005) [64] Xu, Y., Song, S., Wei, Y., Wang, F., Zhao, M., Guo, J., and Zhang, J., Sulfated modification of the polysaccharide from Sphallerocarpus gracilis and its antioxidant activities International journal of biological macromolecules 87, 180-190 (2016) [65] Yan, J.-K., Li, L., Wang, Z.-M., and Wu, J.-Y., Structural elucidation of an exopolysaccharide from mycelial fermentation of a Tolypocladium sp fungus isolated from wild Cordyceps sinensis Carbohydrate Polymers 79(1), 125-130 (2010) [66] Yan, J.-K., Wang, W.-Q., Ma, H.-L., and Wu, J.-Y., Sulfation and enhanced antioxidant capacity of an exopolysaccharide produced by the medicinal fungus Cordyceps sinensis Molecules 18(1), 167-177 (2012) [67] Yan, J.-K., Wang, W.-Q., and Wu, J.-Y., Recent advances in Cordyceps sinensis polysaccharides: Mycelial fermentation, isolation, structure, and bioactivities: A review Journal of Functional Foods 6, 33-47 (2014) [68] Yan, J.K., Li, L., Wang, Z.M., Leung, P.H., Wang, W.Q., and Wu, J.Y., Acidic degradation and enhanced antioxidant activities of exopolysaccharides from Cordyceps sinensis mycelial culture Food Chemistry 117(4), 641-646 (2009) [69] Yanhua, W., Fuhua, W., Zhaohan, G., Mingxing, P., Yanan, Z., Ling, P.Z., Minhua, D., Caiying, Z., and Zian, L., Optimization of Extraction Process for Polysaccharide in Salvia Miltiorrhiza Bunge Using Response Surface Methodology The open biomedical engineering journal 8, 153 (2014) 70 [70] Yin, D and Tang, X., Advances in the study on artificial cultivation of Cordyceps sinensis Zhongguo Zhong yao za zhi= Zhongguo zhongyao zazhi= China journal of Chinese materia medica 20(12), 707 (1995) [71] Yu, Y., Shen, M., Wang, Z., Wang, Y., Xie, M., and Xie, J., Sulfated polysaccharide from Cyclocarya paliurus enhances the immunomodulatory activity of macrophages Carbohydrate Polymers 174, 669-676 (2017) [72] Zhang, J., Hu, Y., Wang, D., Qin, T., Liu, C., Liu, X., Sheng, X., Chang, S., Fan, Y., and Guo, L., The optimization of sulfation modification conditions for ophiopogonpolysaccharide based on antiviral activity International journal of biological macromolecules 51(4), 657-662 (2012) [73] Zhang, K., Liu, Y., Zhao, X., Tang, Q., Dernedde, J., Zhang, J., and Fan, H., Anti-inflammatory properties of GLPss58, a sulfated polysaccharide from Ganoderma lucidum International Journal of Biological Macromolecules (2017) [74] Zhang, W., Lu, Y., Zhang, Y., Ding, Q., Hussain, S., Wu, Q., Pan, W., and Chen, Y., Antioxidant and antitumour activities of exopolysaccharide from liquid‐ cultured Grifola frondosa by chemical modification International journal of food science & technology 51(4), 1055-1061 (2016) [75] Zhang, W., Yang, J., Chen, J., Hou, Y., and Han, X., Immunomodulatory and antitumour effects of an exopolysaccharide fraction from cultivated Cordyceps sinensis (Chinese caterpillar fungus) on tumour‐ bearing mice Biotechnology and applied biochemistry 42(1), 9-15 (2005) [76] Zhao, H., Wang, Q., Sun, Y., Yang, B., Wang, Z., Chai, G., Guan, Y., Zhu, W., Shu, Z., and Lei, X., Purification, characterization and immunomodulatory effects of Plantago depressa polysaccharides Carbohydrate polymers 112, 6372 (2014) 71 [77] Zhao, J., Wu, S.-Q., and Liu, B.-X Studies on sulfated modification of Cordyceps polysaccharide in New Technology of Agricultural Engineering (ICAE), 2011 International Conference on 2011 IEEE [78] Zhu, J., Li, F., and Sheng, Y., Deproteinization methods from polysaccharides of Armillariella tabescens Medicinal Plant 2(7), 18-20 (2011) PHỤ LỤC 72 Phụ lục Đƣờng chuẩn saccharose Nồng độ 10 20 30 40 50 60 70 OD490nm 0,053 0,13 0,22 0,32 0,43 0,55 0,64 0,74 OD490nm 0,077 0,166 0,265 0,378 0,501 0,585 0,682 (µg/ml) 0.8 Phương trình đường chuẩn: y = 0,0097x; R² = 0,9949 Giá trị ∆OD 490 nm 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 20 40 73 60 80 Nồng độ saccharose (µg/mL) Phụ lục Đƣờng chuẩn albumin Phương trình đường chuẩn: y = 0,0007x; R² = 0,998 0.04 Giá trị ∆OD 595 nm 0.035 0.03 0.025 0.02 0.015 0.01 0.005 0 10 20 30 40 50 60 Nồng độ a bumin (µg/mL) Nồng độ 10 20 30 40 50 OD595nm 0,062 0,068 0,75 0,082 0,088 0,096  OD595nm 0,006 0,013 0,02 0,03 0,034 (µg/ml) 74 Phụ lục Đƣờng chuẩn sulfate Na2SO4 Phương trình đường chuẩn: y = 0,007x; R² = 0,9579 0.25 Giá trị ∆OD 520 nm 0.2 0.15 0.1 0.05 0 Nồng độ su fat (µg/ml) OD 520 10 15 0,018 10 20 25 30 Nồng độ Na2SO4 (µg/mL) 15 20 25 0,0487 0,0922 0,1417 0,1907 75 Phụ lục Khả bắt gốc tự ABTS• Vitamin C Phương trình đường thẳng: y = 0,9356x - 2,3749; R2 = 0,9972 100.00 % bắt gốc tự 80.00 60.00 40.00 20.00 0.00 20 40 60 80 -20.00 100 120 Nồng độ Vitamin C (µg/mL) Nồng độ mẫu (µg/ml) OD đo lần OD đo lần OD đo lần 100 0,048 0,047 0,047 91,90 ± 0,10 80 0,154 0,153 0,150 73,94 ± 0,44 60 0,279 0,275 0,277 52,62 ± 0,27 40 0,396 0,394 0,396 32,38 ± 0,13 20 0,496 0,487 0,498 15,57 ± 0,66 0,585 0,582 0,587 0,00 ± 0,00 IC50 = 52,65 µg/ml 76 Tỷ lệ bắt gốc ABTS• (%) Phụ lục Khả bắt gốc tự OH• Vitamin C 120.00 Phương trình đường thẳng: y = 0,5239x - 2,9357; R2 = 0,9848 % bắt gốc tự 100.00 80.00 60.00 40.00 20.00 0.00 50 100 -20.00 150 200 250 Nồng độ Vitamin C (µg/mL) Nồng độ mẫu (µg/ml) OD đo lần OD đo lần OD đo Tỷ lệ bắt gốc OH• (%) lần 200 0,004 0,006 0,007 96,99 ± 0,81 150 0,030 0,028 0,030 84,40 ± 0,55 100 0,097 0,098 0,097 48,23 ± 0,56 50 0,149 0,150 0,151 20,21 ± 0,49 25 0,173 0,172 0,176 7,63 ± 0,65 0,188 0,187 0,189 0,00 ± 0,00 IC50 = 101,04 µg/mL 77 Phụ lục Chuẩn hóa nguyên liệu EPS Chỉ tiêu kinh tế - kỹ thuật Nguyên liệu Hiệu suất 2,75 g/L TLPT 1085,4 kDa; 59,8 kDa; 1,2 kDa Nhóm chức O-H, C-H, C=O, glucopyranose, C-O-C Polysaccharide 68,81% Protein 0,19% Số phân đoạn EPS-1 EPS-2 Nâu đất, thơm mùi đường EPS thô Màu sắc 78