Nghiên cứu khả năng chuyển hóa zn của nấm cordyceps sp

TĨM TẮT ĐỀ TÀI Cordyceps lồi nấm có giá dƣợc liệu cao y học cổ truyền Các nghiên cứu cho thấy nấm có khả sinh kháng sinh, kháng virus, kháng ung thƣ Kẽm đƣợc biết đến nhƣ yếu tố cần thiết cho thể ngƣời thành phần Cordyceps có chứa lƣợng kẽm nhỏ Vì chúng tơi nghiên cứu chọn loại muối kẽm phù hợp (một loại muối: ZnCl2, ZnSO4, Zn-gluconate, Znacetate) tối ƣu hóa môi trƣờng nuôi C sinensis hấp thu kẽm Kết tối ƣu môi trƣờng nuôi: môi trƣờng dịch chiết khoai tây có bổ sung 150 mg/L Zn2+ dƣới dạng muối ZnCl2, 7,54 g/L cao nấm men, 36,2 g/L saccharose 1,75 g/L MgSO4.7H2O, pH 6,5 Điều kiện nuôi tối ƣu pH 6,5, 21oC, nuôi tối liên tục Trọng lƣợng sinh khối khô thu đƣợc hàm lƣợng kẽm hấp thu vào sinh khối tƣơng ứng 17,2 g/L 5,32 mg/g BM20-QT.QLKH Trang i MỤC LỤC Trang TÓM TẮT ĐỀ TÀI i MỤC LỤC ii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH SÁCH BẢNG v DANH SÁCH HÌNH vi THÔNG TIN ĐỀ TÀI vii MỞ ĐẦU CHƢƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.Tổng quan tài liệu 1.1.1.Vai trò sinh học kẽm (Zn) 1.1.2.Cordyceps sinensis 1.1.2.1.Vòng đời 1.1.2.2.Hình thái 1.1.2.3.Phân bố 1.1.2.4.Công dụng nấm Cordyceps 1.1.2.5.Ảnh hƣởng thành phần môi trƣờng lên phát triển Cordyceps 1.1.2.6.Ảnh hƣởng điều kiện khác đến sinh trƣởng nấm Cordyceps 11 1.1.2.7.Tình hình nghiên cứu Cordyceps Việt Nam 11 1.1.3.Sự chuyển hóa Zn 12 1.1.3.1.Tƣơng tác Zn nấm 12 1.1.3.2.Chuyển hóa Zn nấm men 13 1.1.4.Các nghiên cứu tƣơng tác Zn C sinensis 16 1.2.Ý nghĩa khoa học khả ứng dụng thực tiễn 17 1.2.1.Ý nghĩa khoa học 17 1.2.2.Khả ứng dụng thực tiễn 17 CHƢƠNG II NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 18 2.1.Nội dung 1: Nghiên cứu chuyển hóa Zn vô cơ/ hữu Cordyceps sinensis 18 BM20-QT.QLKH Trang ii 2.1.1.Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ Zn2+ dạng muối khác đến Cordyceps sinensis qua tốc độ lan tơ môi trƣờng thạch 18 2.1.2.Thí nghiệm 2: Khảo sát thời gian chuyển hóa Zn C sinensis 19 2.2.Nội dung 2: Tối ƣu hóa mơi trƣờng ni cấy C sinensis chuyển hóa Zn 20 2.2.1.Thí nghiệm 1: Khảo sát thành phần C, N môi trƣờng nuôi cấy C sinensis 20 2.2.2.Thí nghiệm 2: Tối ƣu hóa mơi trƣờng ni cấy C sinensis chuyển hóa Zn 20 2.3.Nội dung 3: Nghiên cứu tối ƣu hóa điều kiện chuyển hóa Zn nuôi cấy C sinensis môi trƣờng lỏng nhƣ nhiệt độ, pH, ánh sáng 21 CHƢƠNG III KẾT QUẢ THẢO LUẬN 24 3.1.Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ Zn2+ dạng muối khác đến Cordyceps sinensis qua tốc độ lan tơ môi trƣờng thạch 24 3.2.Khảo sát thời gian chuyển hóa Zn nấm C sinensis 26 3.3.Tối ƣu hóa mơi trƣờng ni cấy C sinensis chuyển hóa Zn 26 3.3.1.Thí nghiệm 1: Khảo sát thành phần C, N môi trƣờng nuôi cấy C sinensis 26 Đối với nguồn C 26 Đối với nguồn N 28 3.3.2.Thí nghiệm 2: Tối ƣu hóa mơi trƣờng ni cấy C sinensis chuyển hóa Zn 30 3.3.2.1.Mơ tả hình thái 30 3.3.2.2 Trọng lƣợng sinh khối khô hàm lƣợng Zn2+ chuyển hóa vào sinh khối nghiệm thức 31 3.4.Nghiên cứu tối ƣu hóa điều kiện chuyển hóa Zn nuôi cấy C sinensis môi trƣờng lỏng nhƣ nhiệt độ, pH, ánh sáng 36 3.4.1.Mơ tả hình thái 36 3.4.2.Trọng lƣợng sinh khối khô hàm lƣợng Zn2+ cịn lại dịch lỏng ni cấy 38 CHƢƠNG IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44  Kết luận 44  Kiến nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 PHỤC LỤC BM20-QT.QLKH Trang iii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT VIẾT TẮT THUẬT NGỮ TIẾNG VIỆT AAS (Atomic Absorption Spectrophotometric) Quang phổ hấp thu nguyên tử NT Nghiệm thức Ctv Cộng tác viên Zn Kẽm Zn2+ Ion kẽm Y1 Trọng lƣợng sinh khối khơ Y2 Hàm lƣợng Zn2+ cịn lại dịch nuôi PDA Potato dextrose agar PDB Potato dextrose broth BM20-QT.QLKH Trang iv DANH SÁCH BẢNG Bảng Tựa bảng Trang 1.1 Các thành phần kim loại có hệ sợi tơ thể C sinensis (Zhou ctv, 2009) 1.2 Hoạt chất hoạt tính sinh học C sinensis (Le ctv, 2006) 7 3.1 Tốc độ lan tơ C sinensis mơi trƣờng thạch có bổ sung Zn2+ dƣới dạng muối khác 3.2 Tốc độ lan tơ C sinensis môi trƣờng có bổ sung 150 mg/L Zn2+ 24 25 3.3 Sự thay đổi trọng lƣợng sinh khối khô hàm lƣợng Zn2+ cịn lại dịch ni theo thời gian 26 3.4 Đƣờng kính khuẩn lạc tốc độ lan tơ C sinensis môi trƣờng thạch với nguồn C bổ sung khác sau 20 ngày 27 3.5 Đƣờng kính khuẩn lạc tốc độ lan tơ C sinensis môi trƣờng thạch với nguồn N bổ sung khác sau 20 ngày 29 3.6 Trọng lƣợng sinh khối khơ hàm lƣợng Zn2+ cịn lại dịch nuôi 32 3.7 Trọng lƣợng sinh khối khô hàm lƣợng Zn2+ cịn lại dịch ni 38 BM20-QT.QLKH Trang v DANH SÁCH HÌNH Hình Tựa hình Trang 1.2 Vòng đời Cordyceps sinensis (Zhang ctv, 2012) 1.1 Nấm Cordyceps sinensis môi trƣờng tự nhiên 1.3 Tóm tắt q trình vận chuyển phân phối Zn S cerevisiae (David, 2006) 14 3.1 Khuẩn lạc C sinensis môi trƣờng thạch với nguồn C bổ sung khác sau 20 ngày 28 3.2 Khuẩn lạc C sinensis môi trƣờng thạch với nguồn N bổ sung khác sau ngày 20 30 3.3 C sinensis môi trƣờng lỏng tĩnh sau tuần 31 3.4 Mối liên hệ yếu tố đến trọng lƣợng sinh khối khô 34 3.5 Mối liên hệ yếu tố đến hàm lƣợng Zn2+ lại dịch nuôi 36 3.6 Sinh khối C sinensis môi trƣờng lỏng 38 3.7 Mối liên hệ yếu tố đến trọng lƣợng sinh khối khô 40 3.8 Mối liên hệ yếu tố đến hàm lƣợng Zn2+ chuyển hóa vào sinh khối 42 BM20-QT.QLKH Trang vi THÔNG TIN ĐỀ TÀI Tên đề tài/dự án: Nghiên cứu khả chuyển hóa Zn nấm Cordyceps sp Chủ nhiệm đề tài/dự án: Huỳnh Thị Diễm Phúc Cơ quan chủ trì: Trung tâm Nghiên cứu Phát triển Nông nghiệp Công nghệ cao – Ban Quản lý Khu Nơng nghiệp Cơng nghệ cao Tp Hồ Chí Minh Thời gian thực hiện: 1/2015-12/2015 Kinh phí đƣợc duyệt: 150.000.000 đồng Mục tiêu: Nghiên cứu khả chuyển hóa Zn C sinensis mơi trƣờng có bổ sung loại muối Zn khác đánh giá yếu tố ảnh hƣởng đến chuyển hóa Zn: nhiệt độ, pH, thời gian ni cấy, thành phần môi trƣờng Nội dung đề tài: Nội dung 1: Nghiên cứu chuyển hóa Zn vơ cơ/ hữu Cordyceps sinensis Nội dung 2: Tối ƣu hóa mơi trƣờng ni cấy C sinensis chuyển hóa Zn Nội dung 3: Nghiên cứu tối ƣu hóa điều kiện chuyển hóa Zn ni cấy C sinensis mơi trƣờng lỏng nhƣ nhiệt độ, pH, ánh sáng Sản phẩm đề tài /dự án: Sinh khối C sinensis có chứa Zn; báo cáo khoa học BM20-QT.QLKH Trang vii MỞ ĐẦU Kẽm (Zn) chất khoáng vi lƣợng thiết yếu cho sinh vật sức khỏe ngƣời Việc thiếu Zn gây ảnh hƣởng đến sức khỏe khoảng tỷ ngƣời nƣớc phát triển, gây số ảnh hƣởng nhƣ giảm testosterone huyết tƣơng hỏng chức hoạt động tế bào lymphô T, giảm tổng hợp chất tạo collagen từ vết thƣơng không liền đƣợc giảm hoạt động RNA polymerase nhiều mơ Ngồi ra, thiếu Zn cịn liên quan đến nguyên nhân gây số bệnh trẻ em (chậm phát triển, phát dục muộn, dễ nhiễm khuẩn, tiêu chảy) gây thiệt mạng khoảng 800.000 trẻ em toàn giới năm Các enzyme liên kết với Zn trung tâm phản ứng có vai trị sinh hóa quan trọng nhƣ alcohol dehydrogenase ngƣời Zn đóng vai trị quan trọng, nhƣng sử dụng ngƣỡng cho phép gây tác dụng phụ ngộ độc Zn, dẫn đến biến chứng nguy hiểm nặng gây tử vong Việc sử dụng Zn dạng muối vô thƣờng tiềm ẩn nhiều ảnh hƣởng độc hại, Zn từ nguồn thiên nhiên, dạng hợp chất hữu đƣợc thể dung nạp tốt hơn, đƣợc tập trung nghiên cứu nhiều Các nghiên cứu hƣớng đến việc tạo nguồn Zn hữu cơ, giúp thể ngƣời hấp thụ, bổ sung Zn an toàn, hiệu Một đối tƣợng nghiên cứu đƣợc quan tâm nhiều sử dụng vi sinh vật, chuyển hóa Zn vô thành Zn hữu Bên cạnh nấm men Saccharomyces, nấm Cordyceps sp ni cấy tạo sinh khối giàu Zn Cordyceps sinensis, Cordyceps militaris loại dƣợc liệu cổ truyền đƣợc sử dụng từ lâu để chữa trị nhiều loại bệnh Trung Quốc số nƣớc Châu Á có Việt Nam Cordyceps chứa nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học nhƣ cordycepin, adenosin, ergosterol, polysaccharid, acid amin, vitamin nguyên tố vi lƣợng Polysaccharid từ Cordyceps có tiềm chống oxy hóa, chống khối u, kháng virus khả điều hòa miễn dịch Một số nghiên cứu đối tƣợng C sinensis tự nhiên cho thấy có chứa hàm lƣợng nhỏ Zn hữu cơ, điều tạo sở khoa học cho nội dung nghiên cứu “Nghiên cứu khả chuyển hóa Zn nấm Cordyceps sp.”, làm tăng giá trị loài nấm dƣợc liệu quý BM20-QT.QLKH Trang CHƢƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan tài liệu 1.1.1 Vai trò sinh học kẽm (Zn) Kẽm (Zn) kim loại lƣỡng tính, số nguyên tử 30, nguyên tố nhóm 12 bảng tuần hồn ngun tố hóa học, hoạt động trung bình, phản ứng với acid lỗng giải phóng H2, dễ dàng phản ứng với kiềm phi kim khác Trong dung dịch kiềm yếu, ion Zn2+ chuyển thành hydrocide Zn [Zn(OH)2] - dạng kết tủa màu trắng Trong dung dịch kiềm mạnh hơn, hydrocide Zn bị hòa tan tạo thành zincat Zn ([Zn(OH)4]2-) Ở trạng thái oxy hóa, Zn tồn dạng Zn+1 Zn2+, nhƣng đặc trƣng Zn2+ (Nakashima Dyck, 2009), (Prasad, 2003) Về mặt sinh học, Zn vi chất thiết yếu Trong thể ngƣời có khoảng 70-100 loại enzyme cần Zn để thực chức xúc tác Zn liên quan đến tăng sinh, biệt hóa tế bào apoptosis Trong thể, hàng loạt chức sinh học cần có mặt Zn nhƣ: tăng cƣờng miễn dịch, kháng oxy hóa, khâu chuyển hóa trung gian, sửa chữa DNA, sinh sản, quan sát, vị giác, nhận thức/hành vi Thêm vào đó, Zn cần thiết cho tăng trƣởng tế bào thần kinh dẫn truyền synap Zn thiếu q trình chuyển hóa protein, carbohydrate, mucopolysaccharid, lipid acid nucleic Zn đóng vai trị nhƣ ligand, liên kết làm ổn định nhiều hợp chất Zn ảnh hƣởng quan trọng đến cân nội mơ nhƣ điều hịa miễn dịch, stress oxy hóa, apoptosis, lão hóa tế bào… (Hershfinkel ctv, 2007), (Prasad, 2008) Một tiến khoa học lớn thập kỉ vừa qua việc xác lập đƣợc hệ thống protein kiểm soát hàm lƣợng Zn tế bào cách phối hợp yếu tố nhập, xuất, phân phối cảm biến tình trạng Zn Sự đột biến protein cân nội mô làm tăng khả biến đổi hoạt động biến dƣỡng Zn (Aydemir ctv, 2006) Cơ thể ngƣời trƣởng thành chứa 2-3 g Zn, khoảng 0,1% số đƣợc bổ sung hàng ngày Ở Mỹ, chế độ ăn định (Recommended Dietary Allowance - RDA) mg/ngày nữ giới 11 mg/ngày nam giới (Berdanier ctv, 2007), (Wapnir, 1990) BM20-QT.QLKH Trang Tuy nhiên, lạm dụng nhiều, tình trạng Zn vƣợt mức cần thiết có hại cho sức khỏe Hấp thụ nhiều Zn làm ngăn chặn hấp thu Cu Fe WHO cảnh báo, Zn phá hủy thụ thể thần kinh mũi gây chứng khứu giác (Bhutta ctv, 2000), (Blake, 2007), (DiSilvestro, 2004), (Fosmire, 1990), (Hambidge Krebs, 2007), (Keen Gershwin, 1990), (Milbury Richer, 2008) Ngũ cốc nguồn bổ sung Zn chủ yếu cho thể ngƣời Tại Mỹ, ngƣời ta xác đinh đƣợc rằng, đậu ngũ cốc cung cấp khoảng 30% Zn, thịt – 50% Zn, sản phẩm sữa – 20% Zn Thịt đỏ nguồn thực phẩm cung cấp Zn dễ hấp thụ Thịt gia cầm cá thƣờng cung cấp Zn Tính khả dụng sinh học (cơ thể hấp thu dễ dàng) bị ảnh hƣởng thành phần khác thực phẩm Thực vật chứa thành phần khơng tiêu hóa đƣợc nhƣ chất xơ, lignin, sản phẩm phản ứng Maillard liên kết với Zn, ức chế hấp thu Zn, dễ dẫn đến nguy thiếu hụt Zn (Berdanier, 2007), (Brandt ctv, 2009), (Whitney, 2005) Kết nhiều nghiên cứu gần cho thấy, khống hữu có tính khả dụng sinh học cao khống vơ Ngồi tác dụng giúp ngăn ngừa, điều trị phục hồi sức khỏe, nấm ăn, nấm dƣợc liệu nguồn cung cấp khống vi lƣợng tuyệt vời tính dễ hấp thụ chúng Trong năm gần đây, nhiều nghiên cứu đƣợc thực nhằm làm giàu khoáng thiết yếu nhƣ Se, Cu, Zn sợi nấm, cung cấp khoáng chất cần thiết dạng khả dụng sinh học cao (Lê Thị Anh Đào ctv, 2010), (Le ctv, 2006) Kết số nghiên cứu gần rằng, Zn môi trƣờng nuôi cấy chìm cịn có tác dụng kích thích phát triển sợi nấm Pleurotus florida, Grifola frondosa, Agaricus blazei, Ganoderma lucidum, Lentinus edodes (De´bora ctv, 2010), (Jadwiga ctv, 2007), (Maia ctv, 2007), (Ramiro ctv, 2011) 1.1.2 Cordyceps sinensis Nấm Cordyceps sinensis đƣợc phân loại nhƣ sau: Giới: Fungi Phân giới: Dikarya Ngành: Ascomycota Lớp: Sordariomycetes BM20-QT.QLKH Trang [8] Đặng Hoàng Quyên, Trần Phi Hoàng Yến, Võ Thị Xuyến, Đinh Minh Hiệp, Trƣơng Bình Nguyên (2014), Khảo sát khả cải thiện suy giảm trí nhớ cao chiết từ sinh khối Cordyceps sp chuột nhắt, Tạp chí Sinh học, 36: 203-208 [9] Phạm Nguyễn Thanh Thảo (2012), Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa, kháng phân bào in vitro số cao chiết từ sinh khối hai loài nấm Cordyceps sưu tập Đà Lạt, Luận văn Thạc sĩ Sinh học, trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên TP.HCM [10] Phạm Quang Thu (2009), Điều tra phát nấm đông trùng hạ thảo Cordyceps nutans pat phân bố khu bảo tồn thiên nhiên Tây Yên Tử - Sơn Động - Bắc Giang, Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển Nơng thơn, 133: 91 - 94 [11] Phạm Quang Thu (2009), Phát nấm đông trùng hạ thảo Cordyceps gunnii (Berk.) vƣờn quốc gia Tam Đảo, tỉnh Vĩnh Phúc, Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển Nông thôn, 135: 96 - 99 [12] Phạm Quang Thu, Nguyễn Mạnh Hà, Lê Thị Xuân (2011), Phân bố nấm Đông trùng hạ thảo (Isaria tenuipes (Peck) Samson) Việt Nam, Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển Nông thôn, 9: 93-97 [13] Huỳnh Thƣ, Ngô Đại Nghiệp, Võ Thị Xuyến, Đinh Minh Hiệp, Trƣơng Bình Nguyên (2012), Nghiên cứu khả kháng oxy hóa cao chiết từ số chủng nấm Cordyceps sp phân lập Việt Nam, Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 10: 1041-1046  Tiếng Anh [14] Amin S.M.R., Alam N., Tania M and Khan Md.A (2008), Study of Mycelial Growth of Cordyceps sinensis in Different Media, at Different pH level and Temperature, Bangladesh J Mushroom, 2(2): 43-48 [15] Aydemir T B., Blanchard R K., Cousins R J (2006): Zinc supplementation of young men alters metallothionein, zinc transporter, and cytokine gene expression in leukocyte populations, PNAS103 (6): 1699–704 [16] Berdanier C D., Dwyer J T.; Feldman E B (2007): Handbook of Nutrition and Food, Boca Raton, Florida: CRC Press ISBN 0849392187 BM20-QT.QLKH Trang 46 [17] Bhutta ZA., Bird SM., Black RE., Brown KH., Gardner JM., Hidayat A., Khatun F., Martorell R (2000),Therapeutic effects of oral zinc in acute and persistent diarrhea in children in developing countries: pooled analysis of randomized controlled trials, The American journal of clinical nutrition, 72 (6): 1516–22 [18] Blake S (2007), Vitamins and Minerals Demystified McGraw-Hill Professional Pp 242, ISBN 0-07-148901-0 [19] Brandt E G., Hellgren M., Brinck T., Bergman T., Edholm O (2009), Molecular dynamics study of zinc binding to cysteines in a peptide mimic of the alcohol dehydrogenase structural zinc site Chem Phys,11 (6): 975–83 [20] Chioza A., Ohga S (2013), Mycelial growth of Paecilomyces hepiali in various agar media and yield of fruit bodies in rice based media, Advances in Microbiology, 3: 529-536 [21] David E (2006), Zinc transporters and the cellular trafficking of zinc, Biochim Biophys Acta, 1763(7): 711-722 [22] De´bora F., Micaela O., Ne´stor C (2010), Bioaccumulation and bioavailability of copper and zinc on mineral-enriched mycelium of Grifola frondosa, J Med Food, 13(2): 469-475 [23] DiSilvestro R A (2004), Handbook of Minerals as Nutritional Supplements, CRC Press, pp 135, 155 [24] Dong C H., Yao Y J (2005), Nutritional requirements of mycelial growth of Cordyceps sinensis in submerged culture, Applied Microbiology, 99: 483–492 [25] Dong C H., Yao Y J (2011), On the reliability of fungal materials used in studies on Ophiocordyceps sinensis, J Ind Microbiol Biotechnol, 38: 1027-1035 [26] Fosmire G J (1990), Zinc toxicity, American Journal of Clinical Nutrition 51 (2): 225 [27] Gonen T F., Yamac M., Cabuk A., Yildiz Z (2008), Selection of newly isolated mushroom strains for tolerance and biosorption of zinc in vitro, J Microbiol Biotechnol, 18(3), pp 483-489 BM20-QT.QLKH Trang 47 [28] Hambidge K M and Krebs N F (2007), Zinc deficiency: a special challenge J Nutr, 137 (4): 1101 [29] Hershfinkel M., Silverman W F., Sekler I (2007): The Zinc Sensing Receptor, a Link Between Zinc and Cell Signaling, Molecular Medicine 13 (7–8): 331 [30] Hobbs C.H., (1995), Medicinal mushrooms: anexploration of tradition, healing, and culture, Santa Cruz (CA): Botanica Press, pp 251 [31] Holliday J., Cleaver P., Loomis-Powers M and Patel D (2004), Analysis of quality andtechniques for hybridization of medicinal fungus Cordyceps sinensis, I J Med.Mushr., 6:147-160 [32] Holliday J., Cleaver M (2008), Medicinal Value of the Caterpillar Fungi Species of the Genus Cordyceps (Fr.) Link (Ascomycetes), International Journal of Medicinal Mushrooms, 10:219–234 [33] Jadwiga T., Bozenna G., Malgorzata K., Michal N (2007), Accumulation of zinc by Lentinus edodes (Berk.) mycelium cultivated in submerged culture, Acta Pol Pharm, 1(64): 45-51 [34] Kai Y., Meng Y., Xiao L., Zuji Z (2013), The Artificial Cultivation of Medicinal Caterpillar Fungus, Ophiocordyceps sinensis (Ascomycetes): A Review, International Journal of Medicinal Mushrooms, 15(5), 425–434 [35] Keen CL., Gershwin ME (1990), Zinc deficiency and immune function, Annual review of nutrition, 10: 415–31 [36] Kohen A., Limbach H (2006), Isotope Effects in Chemistry and Biology, Boca Raton, Florida: CRC Press, pp 850, ISBN 0824724496 [37] Le J., Lui J., Bo Z., Feng X., Kexue Fujiang W., (2006), The effect of Zn on the Zn accumulation and biosynthesis of amino acids in mycelia of Cordyceps sinensis, Biol Trace Elem Res, 113(1), pp 45-52 [38] Lo H C., Hsieh C., Lin F Y., Hsu T H (2013), A systematic review of the mysterious caterpillar fungus Cordyceps sinensis in dong-chongxiacao and related bioactive ingredients, J Tradit Complement Med, (1): 16-32 BM20-QT.QLKH Trang 48 [39] Maia R., Débora F., Silvia D., Néstor C (2007), Copper- and zinc-enriched mycelium of Agaricus blazei Murrill: Bioaccumulation and bioavailability, J Med Food, 10(1):175–183 [40] Milbury P E., Richer A C (2008), Understanding the Antioxidant Controversy: Scrutinizing the ‘fountain of Youth’, Greenwood Publishing Group pp 99 [41] Nakashima A., Dyck R (2009), Zinc and cortical plasticity, Brain Res Rev, 59 (2): 347 [42] Nasser P., Abas A., Gholam R B (2015), Improvement of zinc bioaccumulation and biomass yield in the mycelia and fruiting bodies of Pleurotus florida cultured on liquid media, Appl Biochem Biotechnol [43] Prasad A S (2003), Zinc deficiency: Has been known of for 40 years but ignored by global health organisations, British Medical Journal, 326 (7386): 409 [44] Prasad A S (2008), Zinc in Human Health: Effect of Zinc on Immune Cells, Mol Med.14 (5–6): 353 [45] Ramiro G M., Analia S., Debora F., Ne´stor C (2011), Copper and zinc bioaccumulation and bioavailability of Ganoderma lucidum, J Med Food, 14(10), pp 1273-1279 [46] Singh S., Ranjan S., Negi P S., Arif M (2014), Optimization of nutritional necessities for in vitro culture of Cordyceps sinensis, IJSR, 5(3): 1523-1528 [47] Sung G H., Hywel-Jones N L., Sung J M., Luangsaard J J., Shrestha B., Spatafora J W (2007), Phylogenetic classification of Cordyceps and the clavicipitaceous fungi, Stud Mycol, 57: 5-59 [48] Sung G H., Shrestha B., Han S and Sung J (2011), Growth and Cultural Characteristics of Ophiocordyceps longissima Collected in Korea, Mycobiology, 39(2): 85-91 [49] Venkatratnam A., Nathan L (2011), Zinc Reduces the Detection of Cocaine, Methamphetamine, and THC by ELISA Urine Testing, Journal of Analytical Toxicology, 35 (6): 333–340 BM20-QT.QLKH Trang 49 [50] Wapnir R A (1990), Protein Nutrition and Mineral Absorption, Boca Raton, Florida: CRC Press ISBN 0849352274 [51] Whitney E N., Rolfes S R (2005), Understanding Nutrition (10), Thomson Learning pp 447–450, ISBN 978-1-4288-1893-4 [52] Xia F., Liu Y., Shen G R., Guo L X., Zhou X W (2015), Investigation and analysis of microbiological communities in natural Cordyceps sinensis, Microbiol, 61(2):104-111 [53] Zeng L., Hao L., Ma H., Tian C., Li T., Jia M., Jia L (2014), Production and in vivo antioxidant activity of Zn, Ge, Se-enriched mycelia by Cordyceps sinensis SU-01, Curr Microbiol, 69(3): 270-276 [54] Zhang Q., Wu J., Hu Z., Li D (2004), Induction of HL-60 apoptosis by ethyl acetate extract of Cordycepssinensis fungal mycelium, Life Sciences 75: 2911 – 2919 [55] Zhang Y., Li E., Wang C., Li Y., Liu X (2012), Ophiocordyceps sinensis, the flagship fungus of China: terminology, life strategy and ecology, Mycology, 3(1): 2-10 [56] Zhou X., Gong Z., Su Y., Lin J., Tang K (2009), Cordyceps fungi: natural products, pharmacological functions and developmental products, Pharmacy and pharmacology, 61: 279-291 BM20-QT.QLKH Trang 50 PHỤC LỤC Thành phần môi trƣờng  PDA Khoai tây 200g/L Dextrose 20g/L Agar 16g/L  PDB Khoai tây 200g/L Dextrose 20g/L Khảo sát ảnh hƣởng Zn2+ dƣới dạng muối khác đến C sinensis qua tốc độ lan tơ mơi trƣờng thạch Bảng Đƣờng kính khuẩn lạc C sinensis mơi trƣờng có ZnCl2 20 ngày Nồng độ Đƣờng kính khuẩn lạc (mm) Zn2+ Ngày 11 Ngày 13 Ngày 15 Ngày 18 Ngày 20 42,8±0,9 56,8±0,2bcd 66,3±0,6cde 72,4±0,2abc 77,5±0,6abc 79,7±0,4a 50 43,1±0,5 56,6±0,1bcde 66,3±0,6cde 74,6±2,2a 78,2±0,4a 79,8±0,3a 100 44,6±1,8 56,6±1,2bcde 66±0,9cde 73,5±0,5ab 77,7±0,5bc 78,8±0,3bc 150 45,7±2,4 58,4±1,1abc 70±1,4a 73,3±0,3ab 78,8±0,2a 79,9±0,1a 200 44,9±0,2 59,1±0,5a 68,9±0,4ab 72,7±1,2abc 77,2±1,4abcd 79,3±0,6ab 250 43,8±1,3 58,6±1,4ab 68,9±1,9ab 74,4±0,5a 77,2±0,6abcd 79,4±0,5ab 300 42,8±1 67,5±1,4bc 72,4±1,3abc 76,4±0,2bcd 78,1±0,3b 350 42,2±0,6 54,2±0,4f 63,9±1,2e 70,7±0,7c 77,6±0,7abc 78,1±1,1b 400 42,6±1,6 54,6±0,4ef 65,5±1cde 70,9±0,5c 75,9±0,9cd 78,1±0,2b 450 44,1±2,2 57±2,4bcd 65,3±1,8cde 70,7±2,5c 76,3±1,4bcd 75,3±2,5c 500 43,9±1,5 56,5±2bcde 66,8±2,1bcd 71,6±1,5cb 77,4±1,2abc 79,5±0,9ab 550 42±1,1 64,8±1,3de 71,5±1,6cb 76,1±0,5bcd 78,6±0,8bc (mg/L) Ngày 56,3±0,5cdef 54,8±1def 600 42,1±1 55,9±1,8def 64,5±1,6de 70,6±1,4c 75,6±1,5d 78,8±0,3ab Các mẫu tự kèm theo sau số trung bình sai số chuẩn biểu khác biệt theo cột mức p = 0,05 Đối chứng 50 mg/L 100 mg/L 150 mg/L 200 mg/L 250 mg/L 300 mg/L 350 mg/L 400 mg/L 450 mg/L 500 mg/L 550 mg/L 600 mg/L Hình Khuẩn lạc C sinensis mơi trƣờng có chứa ZnCl2 với nồng độ Zn2+ khác sau 20 ngày Bảng Đƣờng kính khuẩn lạc C sinensis mơi trƣờng có ZnSO4 20 ngày Nồng độ Đƣờng kính khuẩn lạc (mm) Zn2+ Ngày Ngày 11 Ngày 13 Ngày 18 Ngày 20 42,8±0,9 56,8±0,2bcd 66,3±0,6ab 72,4±0,2 77,5±0,6ab 79,7±0,4a 50 43,9±1,5 59,1±1,2a 67,9±0,8a 72,6±0,7 78,2±1,4a 80±0a 100 43,1±0,9 57,7±0,5abc 67,2±1,1a 72,4±0,9 77,8±0,7ab 80±0a 150 42,5±0,5 57,9±0,1ab 66,3±0,8ab 72,9±0,7 77,4±0,4ab 79,5±0,9a 200 42,5±0,2 55,5±0,4cd 63,4±0,2b 72,8±4,5 75,8±0,7cde 77,9±0,9b 250 40,7±0,8 55,5±0,9cd 66,3±0,8ab 71,2±1 77,1±1abc 80±0a 300 42,2±0,4 54,8±0,5d 63,7±0,4b 69,6±0,6 75,2±0,8e 77,1±0,6b 350 42,3±0,2 55,5±0,2cd 63,2±0,2b 70,1±0,1 75,5±0,8de 77±0,8b 400 42,9±1,8 57,3±0,9abc 65,2±1,6ab 70,9±0 75,6±1,1de 79,2±1,4a 450 43±0 56,2±0,7bcd 64,1±0b 70,2±0 75,6±0de 76,9±0b 500 42,1±1 52,7±3,3e 65,4±4,2ab 68,1±4,1 75,6±0,4de 76,9±0,8b 550 42,6±0,7 55,6±0,6cd 66±2ab 71,6±0,9 76,5±0,4bcde 79,3±0,5a 600 42±1,1 55,9±1,8bcd 64,1±2,3b 70,5±0,5 76,6±0,5bcd 77,9±0,6b (mg/L) Ngày 15 Các mẫu tự kèm theo sau số trung bình sai số chuẩn biểu khác biệt theo cột mức p = 0,05 Đối chứng 50 mg/L 100 mg/L 150 mg/L 200 mg/L 250 mg/L 300 mg/L 350 mg/L 400 mg/L 450 mg/L 500 mg/L 550 mg/L 600 mg/L Hình Khuẩn lạc C sinensis mơi trƣờng có ZnSO4 sau 20 ngày Bảng Đƣờng kính khuẩn lạc C sinensis mơi trƣờng có Zn-acetate 20 ngày Nồng độ Đƣờng kính khuẩn lạc (mm) Zn2+ (mg/L) Ngày Ngày 11 Ngày 13 Ngày 15 Ngày 18 Ngày 20 42,8±0,9abc 56,8±0,2abc 66,3±0,6ab 72,4±0,2abc 77,5±0,6 79,7±0,4a 50 40,6±0,6bcd 56,3±2,9bcd 62,1±0,2cd 70,3±2,4bcd 74,8±1,7 75,8±0,2b 100 44±0,8a 59,7±0,7a 68,7±0,5a 73,1±0,1abc 77,2±0,6 78,8±0,6ab 150 43,4±0,2ab 58±0,7ab 68,2±1,1a 73,5±0,9ab 77,8±0,4 79,9±0,1a 200 41,7±0,2abcd 55,8±0,8bcd 64,3±0,7bc 70,3±0,1bcd 75,5±0,2 77,4±0,3ab 250 41±1,2bcd 54,5±1,5cd 62,9±2bcd 69,7±1,1bcd 74,9±0,9 77,4±0,5ab 300 39,6±1,1d 53,8±0,9cd 63,6±4bcd 70,2±4,2bcd 74,3±3,7 77,5±3,1ab 350 35,3±1,6e 50,2±1,3e 60,3±1,9de 67,3±2,1de 73,5±2 77±1,2ab 400 32,4±3,3f 46,7±3,5f 57±2,6de 65,5±2,7ef 74,1±1 77,4±1ab 450 40,6±1,5bcd 54,5±2,3cd 63,1±2,7bcd 73±0,6abc 76,1±0,6 76,7±1,6b 500 40,4±0,9cd 55,1±0,3bcd 63,1±1,2bcd 69,5±0,1 75,5±0,5 77,3±1,4ab 550 42,1±3,3abcd 54,6±3,1cd 58,6±3,6de 62,7±3,8e 70,4±8,6 71±3,9c 600 39,8±1,8cd 53,1±0,7d 62,3±0,5cd 74,3±1,6a 75,9±0,7 77,5±0,4ab Các mẫu tự kèm theo sau số trung bình sai số chuẩn biểu khác biệt theo cột mức p = 0,05 Đối chứng 50 mg/L 100 mg/L 150 mg/L 200 mg/L 250 mg/L 300 mg/L 350 mg/L 400 mg/L 450 mg/L 500 mg/L 550 mg/L 600 mg/L Hình Khuẩn lạc C sinensis mơi trƣờng có Zn-acetate sau 20 ngày Bảng Đƣờng kính khuẩn lạc C sinensis mơi trƣờng có Zn-gluconate 20 ngày Nồng độ Đƣờng kính khuẩn lạc (mm) Zn2+ (mg/L) Ngày Ngày 11 Ngày 13 Ngày 15 Ngày 18 Ngày 20 42,8±0,9 56,8±0,2 66,3±0,6 72,4±0,2 77,5±0,6abc 79,7±0,4a 50 41,4±4,4 57±0 69,2±3 71,8±0,6 78,1±0,6ab 77,7±0,7bc 100 43,5±0 57,7±0,2 69,3±3,2 72,8±2,4 76,2±0,2bcd 77,7±0,7bc 150 43,5±1 58,8±1,1 70,1±5,6 72,6±0,4 76,2±0,2bcd 78±1bc 200 43,9±1,5 60,5±4,7 69,1±0,9 72,5±0,4 76,7±0,9abc 77,4±0,3bc 250 46,3±4,9 61,5±5,3 70,3±1,5 74,1±0,8 77,2±0,7abc 78,4±1ab 300 42,5±1,4 59,8±3,9 69,1±1,6 74±1,1 78,9±0,7a 78,3±1,5ab 350 42,2±0,4 56,5±0,9 67,9±1,3 73,2±2,1 77,3±0,2abc 78,2±0,4ab 400 41,6±0,4 57,6±0,3 66,9±0,2 72,9±0,4 75,4±4,5cd 78,6±0,5ab 450 41,1±0,4 56±0,5 66,3±0,7 71,2±0,6 76,8±0,9abc 78,6±0,5ab 500 39,2±4,2 55,9±0,3 65,3±0,9 71,3±0b 73,9±2,4d 78,1±0,6bc 550 39,1±0,3 54±0,7 63,9±0,3 75,5±5,9 75,2±1,3cd 76,7±0,8c 600 44,2±1,8 59,7±2 67,7±2,1 73,1±0,1 76,3±0,7bc 77,1±0,9bc Các mẫu tự kèm theo sau số trung bình sai số chuẩn biểu khác biệt theo cột mức p = 0,05 Đối chứng 50 mg/L 100 mg/L 150 mg/L 200 mg/L 250 mg/L 300 mg/L 350 mg/L 400 mg/L 450 mg/L 500 mg/L 550 mg/L 600 mg/L Hình Khuẩn khuẩn lạc C sinensis môi trƣờng có Zn-gluconate sau 20 ngày Nghiệm thức Nghiệm thức Nghiệm thức Nghiệm thức Nghiệm thức Nghiệm thức Nghiệm thức Nghiệm thức Nghiệm thức Nghiệm thức 10 Nghiệm thức 11 Nghiệm thức 12 Nghiệm thức 13 Nghiệm thức 14 Nghiệm thức 15 Nghiệm thức 16 Nghiệm thức 17 Nghiệm thức 18 Nghiệm thức 19 Hình Sinh khối C sinensis thu đƣợc sau tuần