Nghiên cứu hoàn thiện quy trình và tạo chế phẩm xua diệt muỗi từ nhân hạt neem và thử nghiệm đánh giá hiệu lực đối với muỗi aedes aegypti của chế phẩm

1 Tên đề tài: “Nghiên cứu hồn thiện quy trình tạo chế phẩm xua diệt muỗi từ nhân hạt Neem thử nghiệm đánh giá hiệu lực muỗi Aedes aegypticủa chế phẩm” Chủ nhiệm đề tài: Họ tên: PGS.TS.Lê Thành Đồng Chức vụ: Viện trưởng Viện Sốt rét - Ký sinh trùng- Côn trùng TP.HCM Địa quan: 699, Trần Hưng Đạo, P.1, Q.5, TP.HCM Điện thoại quan:08 39239946 Fax: 08 39236734 Địa nhà riêng: 174/8 Lý Tự Trọng, Phường Bến Thành, Quận 1, TP HCM Điện thoại di động: 0912009217 Email: lethanhdong@gmail.com Đồng chủ nhiệm: Họ tên:TS Vũ Văn Độ Tên quan công tác: Viện Sinh học nhiệt đới Địa quan: Số 09/621, Xa lộ Hà Nội, KP 6, P Linh Trung, Q Thủ Đức Điện thoại quan: 08 22181635 Fax : 08 38978791 Địa nhà riêng: 14 B 3-3, Sky Garden III, Phú Mỹ Hưng, P Tân Phong, Q7, TP HCM Điện thoại di động: 0908 813939 Email: vuvdo@yahoo.com Cơ quan chủ trì đề tài Tên quan chủ trì đề tài: Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng TP.HCM Điện thoại quan: 08 39239946 Fax : 08 39236734 Email: info@impehcm.org.vn Website: www impehcm.org.vn Địa chỉ: 699 Trần Hưng Đạo, P.1, Q.5, TP.HCM Số tài khoản: 6223 201 002 596 Ngân hàng Nông nghiệp PTNT Việt Nam, Chi nhánh Thành Đơ, TP.HCM Tên quan đồng chủ trì đề tài: Viện Sinh học nhiệt đới TP HCM Điện thoại: 08 38978798 Fax: 08 38978791 Email: viensinhhocnd@gmail.com Website:www.itb.ac.vn Địa chỉ: Số 09/621, Xa lộ Hà Nội, khu phố 6, phường Linh Trung, Q.Thủ Đức Số tài khoản: 3713 1056780, Kho bạc Nhà Nước Q 1, Thành phố HCM Mã quan hệ ngân sách: 105 780 Cơ quan quản lý đề tài: Sở Khoa học Công nghệ thành phố Hồ Chí Minh Số tài khoản: 9527.2.1020854.00000, Kho bạc Nhà nước Quận Mã quan hệ ngân sách:1020854 Thời gian thực đề tài: 19 tháng(Từ tháng 9/2013 đến tháng 03/2015) Kinh phí đƣợc duyệt: 506.600.000 đồng Kinh phí cấp: 456.600.000 đồng Giai đoạn 1: 350.000.000 đồng, theo TB số: 206/TBKHCN ngày 26/9/2013 Giai đoạn 2: 106.600.000 đồng, theo TB số: 129/TBSKHCN ngày 08/7/2015 Mục tiêu: Mục tiêu tổng quát Nghiên cứu hoàn thiện quy trình tạo chế phẩm xuadiệt muỗi từ nhân hạt Neem thử nghiệm đánh giá hiệu lực muỗi Aedes aegypticủa chế phẩm Mục tiêu cụ thể Nghiên cứu hồn thiện quy trình tạo chế phẩm dịch phun dạng nhũ dầu xua diệt muỗi từ nhân hạt Neem (Azadirachta indica A juss) trồ ng ta ̣i Viê ̣t Nam Đánh giá hiệu lực xua diệt muỗi Aedes aegypti chế phẩm phòng thí nghiệm Đánh giá ảnh hưởng trực tiếp chế phẩm người trực tiếp phun Nội dung: Những nội dung thực giai đoạn (đối chiếu với hợp đồng ký): Công việc TT Công việc dự kiến thực Nghiên cứu bổ sung bƣớc, kỹ thuật để hồn thiện quy trình tạo chế phẩm dịch phun dạng nhũ dầu xua diệt muỗi từ nhân hạt Neem (Azadirachta indica A juss) trờ ng ta ̣i Viêṭ Nam Tiêu chí chuẩn hóa nguyên liệu đầu vào từ hạt Neem *Xửlý phân tích thành phần nguyên liệu đầu vào từ hạt 1.1 Đã thực Neem *Hồn thiện quy trình tách chiết Xây dựng cơng thức quy trình chế tạo nhũ dịch dầu -Xây dựng công thức quy trình Xây dựng cơng thức Xây dựng quy trình 1.2 Đã thực Đánh giá tính chất sản phẩm -Xây dựng tiêu chuẩn sở -Đánh giá độ ổn định chế phẩm 1.3 Xác định LD50 chế phẩm chuột nhắt trắng Đã thực Đánh giá hiệu lực xua diệt muỗi Aedes aegypti chế phẩm phịng thí nghiệm Thu thập bọ gậy Aedes aegypti điểm nghiên cứu 2.1 Đã thực nuôi bọ gậy Aedes aegypti thành muỗi trưởng thành Thử nghiệm đánh giá hiệu lực chế phẩm dịch chiết 2.2 Đã thực nhân hạt Neem phịng thí nghiệm Đánh giá ảnh hưởng trực tiếp củachế phẩm người 2.3 Đã thực trực tiếp thử nghiệm phịng thí nghiệm Giám định kỳ Đã thực Những nội dung thực giai đoạn (đối chiếu với hợp đồng ký): Công việc TT Công việc dự kiến thực Đánh giá hiệu lực xua diệt muỗi Aedes aegypti chế phẩm chỉ riêng dịch chiết từ nhân hạt Neem nồng độ 1600 ppm không có chấ t đồ ng tác dụng Cypermethrine phịng thí nghiệm Thu thập bọ gậy Aedes aegypti điểm nghiên cứu nuôi 1.1 bọ gậy Aedes aegypti thành muỗi trưởng thành Đã thực 1.2 Thử nghiệm đánh giá hiệu lực diê ̣t muỗi Aedes aegypti chế phẩ m chỉ riêng dich ̣ chiế t từ nhân ̣t Neem ở nồ ng đô ̣ Đã thực 1600 ppm không có chấ t đồ ng tác du ̣ng là Cypermet hrine phòng thí nghiệm 1.3 Đánh giá ảnh hưởng trực tiếp chế phẩm chỉ riêng dich ̣ chiế t từ nhân ̣t Neem ở nồ ng đô ̣ 1600 ppm không có chấ t đồ ng tác du ̣ng là Cypermethrine đ ối với người trực tiếp thử Đã thực nghiệm phịng thí nghiệm Nghiệm thu sở Đã thực Báo cáo nghiệm thu cấp quản lý Đã thực TÓM TẮT NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Tiêu chuẩn hóa nguyên liệu đầu vào từ hạt Neem Đã đưa tiêu kĩ thuật cần đạt cách bảo quản nguyên liệu đầu vào hạt Neem khô(bảng sơ đồ) Xử lý phân tích nguyên liệu đầu vào từ nhân hạt Neem Hạt neem khô (5-7% ẩm), tạp chất, đem ép dầu máy ép dầu chuyên dụng KOMET để thu dầu bánh dầu, hai nguyên liệu dùng cho sản xuất chế phẩm xua diệt muỗi Quy trình ép dầu được xây dựng với tiêu phân tích sinh hoá nhân hạt neem bánh dầu neem, hàm lượng hoạt chất Azadirachtin, Salannin Nimbin dầu bánh dầu, thành phần hàm lượng axít béo dầu Neem Quy trình tạo cao chiết giàu azadirachtin số thử nghiệm làm bền dịch chiết giàu azadirachtin PABA Đã đưa sơ đồ chiết tách tạo cao chiết giàu Azadirachtin từ bánh dầu Neem.Kết quảthử nghiệm làm bền dịch chiết bánh dầu Neem PABA cho thấy dùng tỷ lệ bổ sung 0,4% có hiệu ổn định cao Xây dựng công thức chế tạo dịch nhũ dầu xua, diệt muỗi Đã xây dựng công thức chế phẩm dịch nhũ dầu với hàm lượng Azadirachtin 1.600 ppm, tiêu hóa lý chế phẩm đạt tiêu chuẩn Việt Nam(TCVN) FAO Chế phẩm bảo quản năm với hàm lương Azadirachtin 75% so với ban đầu Xây dựng quy trình chế tạo dịch nhũ dầu Đã xây dựng quy trình tạo chế phẩm dịch phun dạng nhũ dầu xua, diệt muỗi truyền bệnh sốt xuất huyết bao gồm: Quy trình tách chiết hoạt chất từ nhân hạt Neem,quy trình tạo chế phẩm cơng thức tạo chế phẩm với hàm lượng azadirachtin 1600 ppm Đánh giá tính chất sản phẩm xây dựng tiêu chuẩn sở Trên sở thí nghiệm làm, từ khâu tuyển chọn nguyên liệu, phân tích chất lượng nguyên liệu đầu vào, thiết bị sử dụng để tạo chế phẩm xua diệt muỗi dạng nhũ dầu, đề xuất số tiêu chuẩn sở để sản xuất chế phẩm quy mô pilot với dây truyền máy(gồm 16 máy, Việt nam tự chế tạo được) Đánh giá độ ổn định chế phẩm Thông qua kết nghiên cứu thu cho thấy chế phẩm xua diệt muỗi dịch chiết dạng nhũ dầu từ Neem cho thấy: Các số hóa lý đạt tiêu chuẩn Việt Nam FAO(TCVN 3771-82; tiêu chuẩn FAO) Chế phẩm để năm, với hàm lượng hoạt chất azadirachtin 75% so với ban đầu Chế phẩm loại dung dịch dạng nhũ dầu, màu vàng lạt, hắc mùi hạt Neem Khuếch tán tốt nước dung mơi hữu Đánh giá độ an tồn chế phẩm chuột nhắt trắng Kết thử nghiệm xác định độ độc cấp(LD50) chuột nhắt trắng dịch chiết nhân hạt neem cho thấy: Nguyên liệu dịch chiết nhân hạt Neem(với hoạt chất Azadirachtin) dùng tạo chế phẩm xua diệt muỗi truyền bệnh sốt xuất huyết(Aedes aegypti) không gây độc hại cho động vật thí nghiệm Đánh giá hiệu lực xua diệt muỗi Aedes aegypti chế phẩ m dich ̣ chiế t tƣ̀ nhân ̣t neem có chất đồng tác dụng Cypermethrineở phịng thí nghiệm Ở lồng kính 70 x 70 x 70 cm có tác du ̣ng diê ̣t t ốt đố i với muỗi Aedes aegypti tỷ lệ pha loãng từ Neem – Nước đến Neem – Nước Ở lồng Peet Grady 1180 x 180 x 180 cm có tác dụng diệt t ốt đố i với muỗi Aedes aegypti tỷ lệ pha loãng từ Neem – Nước đến Neem – Nước 10 Đánh giá hiệu lực xua diệt muỗi Aedes aegypti chế phẩ m chỉ riêng dich ̣ chiế t tƣ̀ nhân ̣t neem ở nồ ng đô ̣ 1600 ppm không có chất đồng tác dụng Cypermethrineở phịng thí nghiệm Ở lồng kính 70 x 70 x 70 cm có tác du ̣ng diê ̣t t ốt đố i với muỗi Aedes aegypti tỷ lệ pha loãng từ Neem – Nước đến Neem – Nước Ở lồng Peet Grady 180 x 180 x 180 cmcó tác dụng diệt t ốt đố i với muỗi Aedes aegypti tỷ lệ pha loãng: Neem – Nước 11 Mức độ an toàn Chế phẩm dịch chiết từ nhân hạt Neem không gây phản ứng phu ̣ đố i với người trực tiế p tiế p xúc người tham gia thử nghiệm SUMMARY OF RESEARCH CONTENT Standardizing input material from neem seeds Giving technical targets to be achieved and the preservation method for raw material, namely dry neem seeds, (tables and diagrams) Handling and analyzing input material from neem kernel Dry neem seeds which 5-7% moisturized and purified from impurities are pressed (cold pressing) with special cold pressing machine KOMET to collect neem oil and oil cake which are two main raw materials used for manufacturing of repelling and killing mosquito preparations Oil extraction processes are built with the neem seed and neem cake analyzing biochemical indicators, active ingredients of Azadirachtin, Salannin and Nimbin contents in neem oil and cake, composition and fatty acid content in neem oil Building up the process of receiving neem paste rich in azadirachtin and some tests of stabilizing neem cake extract with PABA Giving out the diagram of neem cake extraction for receiving paste rich in azadirachtin The test results of stabilizing Neem cake axtracts with PABA showed that the additional using rate of 0.4% have the highest stabilized effect Creating the manufacturing formula of neem oil emulsion for repelling and killing mosquitos The formula of Neem oil emulsion with azadirachtin content of 1,600 ppm is made with the physical and chemical indicators that qualify the Vietnamese standards (TCVN) and FAO The composition can be stored in more than year with the Azadirachtin content is 75% compared to the origin Buiding up the process of manufacturing neem oil emulsion Success in giving out the process of creating spraying neem oil emulsion scareproducts which can killing mosquitos that transmit dengue fever includes: the process of extracting substance from neem kernel, the process of creating products with 1600ppm azadirachtin in contents Evaluating the product figures and building the basic standards On the basis of conducted experiments, from the selection of raw materials, analyzing the quality of input materials, equipments used to make the neem oil emulsion preparations of repelling ang killing mosquitoes, we have proposed a number of basis standards to produce pilot size preparations with machine lines (including 16 machines manufactured in Vietnam) 7 Evaluating the stability of preparations The research results showed that the neem oil emulsion preparations of repelling and killing mosquitoes have some figures: the physicochemical indicators qualify the Vietnam standard and FAO (TCVN 3771-82; FAO standards) Preparations can be stored over year with the 75% active azadirachtin in content compared to the origin The preparations are oily emulsion fluid, yellowith, slightly pungent odor Neem seed, diffuse well in water and organic solvents Evaluating the safety of products on mice The test results which specify the toxicity levels (LD50) in mice of neem seed kernel extract showed that: The main material, namely neem seed kernel extract (with the main active ingredient is Azadirachtin) used to create compositions, repelling, killing mosquito transmit dengue (Aedes aegypti) is non-toxic to laboratory animals Assessing the Aedes aegypti mosquitos repellent effect of neem seed kernel extracted preparations which have the co-reaction Cypermethrine in laboratory Killing Aedes aegypti mosquito effect: good with glass cage 70 x 70 x 70 cm with dilution from Neem – Water to Neem - Water, good at cage Peet Grady 180 x 180 x 180 cm with dilution from Neem - Water to Neem - Water 10 Assesing the Aedes aegypti mosquitor repellent effect of composition extracts from neem kernels at concentrations of 1600 ppm which not have co-reaction Cypermethrine in laboratory Killing Aedes aegypti mosquito effect: good with glass cage 70 x 70 x 70 cm with dilution from Neem - Water to Neem – 1Water, good with cage Peet Grady 180 x 180 x 180 cm with dilution from Neem - Water 11 Safety: Preparations of Neem extracts from kernels not cause side effects to the direct contact and people involved in the trials MỤC LỤC Trang I 1.1 1.2 II 2.1 a) b) 2.2 III 3.1 3.1.1 3.1.2 3.1.2.1 3.1.2.2 3.1.3 3.1.3.1 3.1.3.2 3.1.4 3.1.5 3.1.6 3.1.7 3.1.8 Tóm tắt nội dung nghiên cứu Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục hình Danh mục sơ đồ Danh mục bảng TỒNG QUAN Tổng quan vấn đề nghiên cứu Nghiên cứu hồn thiện quy trình Các nhóm hoạt chất neem Đánh giá hiệu lực xua diệt Cơ chế tác động Azadirachtin lên côn trùng Liệt kê danh mục cơng trình nghiên cứu có liên quan Tính cấp thiết đề tài PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Phương pháp thực Tạo chế phẩm phun dạng nhũ dầu có độ ổn định hoạt chất cao Thử nghiệm phịng thí nghiệm Xử lý số liệu KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI Nghiên cứu bổ sung bước, kỹ thuật để hoàn thiện quy trình tạo chế phẩm dịch phun dạng nhũ dầu xua diệt muỗi từ nhân hạt Neem (Azadirachta indicaA juss) trờ ng ta ̣i Viê ̣t Nam Tiêu chí chuẩn hóa nguyên liệu đầu vào từ hạt Neem Xử lý phân tích nguyên liệu đầu vào từ nhân hạt Neem Xử lý nguyên liệu đầu vào Thành phần hàm lượng axít béo dầu Neem Xây dựng công thức chế tạo dịch nhũ dầu Kết tách chiết azadirachtin từ bánh dầu Neem Thử nghiệm làm bền dịch chiết bánh dầu Neem PABA Xây dựng công thức chế tạo dịch nhũ dầu xua diệt muỗi Xây dựng quy trình chế tạo dịch nhũ dầu Đánh giá tính chất sản phẩm xây dựng tiêu chuẩn sở Đánh giá độ ổn định chế phẩm Giá thành chế phẩm dịch chiết dạng nhũ dầu 11 12 12 13 14 14 14 14 15 16 18 21 21 21 21 22 22 23 23 23 25 25 28 29 29 32 33 37 41 42 42 3.1.9 3.1.9.1 3.1.9.2 3.2 3.2.1 3.2.2 3.2.2.1 3.2.2.2 3.2.2.3 3.3 3.3.1 3.3.2 3.3.2.1 3.3.2.2 3.3.2.3 IV 4.1 4.2 Đánh giá độ an toàn chế phẩm chuột nhắt trắng Khảo sát độc tính cấp đường uống Tiến hành thử nghiệm: Đánh giá hiệu lực xua diệt muỗi Aedes aegypti chế phẩm phịng thí nghiệm Thu thập bọ gậy Aedes aegypti điểm nghiên cứu nuôi thành muỗi trưởng thành labo Thử nghiệm đánh giá hiệu lực chế phẩm dịch chiết từ nhân hạt Neem để diệt muỗi Aedes aegyptitại labo Đánh giá hiệu lực diệt muỗi Aedes aegypti dịch chiết từ nhân hạt Neem lồng kính 70 x 70 x 70 cm Đánh giá hiệu lực diệt muỗi Aedes aegypti dịch chiết từ nhân hạt Neem buồng Peet Grady 180 x 180 x 180 cm Đánh giá mức độ an toàn dịch chiết từ nhân hạt Neem người sử dụng: Đánh giá hiệu lực xua, diệt muỗi Aedes aegypti chế phẩm chỉ riêng dich ̣ chiế t từ nhân ̣t Neem ở nồ ng đô ̣ 1600 ppm không có chấ t đờ ng tác du ̣ng là Cypermethrine phịng thí nghiệm Thu thập bọ gậy Aedes aegypti điểm nghiên cứu nuôi thành muỗi trưởng thành labo Thử nghiệm đánh giá hiệu lực diê ̣t muỗi Aedes aegypti của chế phẩ m chỉ riêng dich ̣ chiế t từ nhân ̣t Neem ở nồ ng đô ̣ 1600 ppm không có chấ t đồ ng tác dụng Cypermethrine phòng thí nghiê ̣m Đánh giá hiệu lực diệt muỗi Aedes aegypti dịch chiết từ nhân hạt Neem nồng độ 1600 ppm không có chấ t đồ ng tác du ̣ng là Cypermethrine lồng kính 70 x 70 x 70 cm Đánh giá hiệu lực diệt muỗi Aedes aegypti dịch chiết từ nhân hạt Neem nồng độ 1600 ppm không có chấ t đồ ng tác du ̣ng là Cypermethrine buồng Peet Grady 180 x 180 x 180 cm Đánh giá mức độ an toàn dịch chiết từ nhân hạt Neem nồng đô ̣ 1600 ppm không có chấ t đồ ng tác du ̣ng là Cypermethrine người sử dụng: KẾT LUẬN Nghiên cứu hoàn thiện quy trình tạo chế phẩm dịch phun dạng nhũ dầu xua, diệt muỗi từ nhân hạt Neem (Azadirachta indica A juss) trồ ng ta ̣i Viê ̣t Nam Đánh giá hiệu lực xua, diệt muỗi Aedes aegypti chế phẩm 43 43 43 47 47 47 47 48 48 49 49 50 50 50 51 53 53 54 10 4.2.1 4.2.2 4.3 4.3.1 4.3.2 4.4 V phịng thí nghiệm Hiệu lực Mức độ an toàn Đánh giá hiệu lực xua, diệt muỗi Aedes aegypti chế phẩm chỉ riêng dich ̣ chiế t từ nhân ̣t Neem ở nồ ng đô ̣ 1600 ppm không có chấ t đờ ng tác du ̣ng là Cypermethrine phịng thí nghiệm Hiệu lực Mức độ an tồn So sách loại chế phẩm Kiến nghị Phụ lục Phụ lục 1.Kết phân tích Phụ lục Thơng tin thiết bị dây truyền máy Phụ lục Phương pháp xác định độ bền sản phẩm Phụ lục Phiếu ghi kết thử nghiệm muỗi Phụ lục Bảng câu hỏi vấn tác dụng phụ Phụ lục Cấu trúc hóa học tác dụng số hóa chất sử dụng 54 54 54 54 54 54 56 57 43 3.1.9 Đánh giá độ an toàn chế phẩm chuột nhắt trắng Chúng thực tính LD50 chuột nhắt trắng qua đường uống dịch chiết giàu Azadirachtin dùng làm nguyên liệu tạo chế phẩm dịch nhũ dầu xua, diệt muỗi truyền bệnh sốt xuất huyết(Aedes aegypti) theo phương pháp sau: 3.1.9.1 Khảo sát độc tính cấp đường uống -Nguyên tắc chung: Nghiên cứu độc tính cấp mẫu thử động vật thí nghiệm, chủ yếu xác định liều chết trung bình có (liều làm chết 50% số vật thí nghiệm = LD50:lethal dose 50%) điều kiện định Biết LD50 xác định số điều trị TI thông số quan trọng để định liều điều trị, thường khoảng 1/10 LD50 nhỏ Chỉ số điều trị TI (therapeutic index) tỉ số liều chết trung bình LD50 liều hữu hiệu trung bình ED50: TI = LD50 ED50 Điều kiện: TI ≥ 10 - Điều kiện thử nghiệm: Chuột nhắt trắng đực chủng Swiss albinotrưởng thành, trọng lượng 18-22 g, cung cấp Viện Pasteur TP Hồ Chí Minh để ổn định tuần trước thử nghiệm Chuột nuôi lồng nhựa, lồng 10 chuột Chuột nuôi đầy đủ thức ăn: thực phẩm viên cung cấp Viện Pasteur TP Hồ Chí Minh.Chuột để ổn định mơi trường phịng thí nghiệm ngày trước thử nghiệm Chuột cho nhịn đói 3-4 trước thử nghiệm vòng 1-2 sau cho uống mẫu thử.Chuột chia ngẫu nhiên thành nhiều lô, lô con, lặp lại lần.Thể tích cho chuột uống 20 ml/kg thể trọng chuột Thời gian cho chuột uống thuốc khoảng – sáng.Khi cho chuột uống cao thuốc phải cho uống chậm cẩn thận, cho uống nhanh chuột dễ bị tắt thở cao thuốc vào khí quản, gây tổn thương đến cổ họng, chuột không ăn dẫn đến chết lỗi kỹ thuật 3.1.9.2 Tiến hành thử nghiệm: - Thử nghiệm sơ khởi:Chọn liều sơ khởi để sau 24h tìm liều tối đa dung nạp bơm qua kim (với thể tích khơng q 0,5 ml/chuột) mà khơng có thú vật chết (d1) liều tối thiểu làm chết tất thú thử nghiệm (d2) Khoảng cách (d1) (d2) giới hạn từ chọn liều để tiến hành thử nghiệm xác định - Thử nghiệm xác định:Liều khoảng (d1) (d2) nên chọn cấp số nhân Liều LD50 nên gia tăng số lượng súc vật để đo lường xác Sau uống thuốc chuột đặt nhẹ nhàng vào hộp nhựa cho phép chuột di chuyển tự 44 hộp nhựa Quan sát sau 72h ghi nhận triệu chứng quan sát lô -Chỉ tiêu đánh giá kết quả: Sự đánh giá dựa vào phản ứng toàn ứng hay bất ứng (sống hay chết) nhận thấy chuột nhóm sau 72 Theo dõi biểu hành vi chuột thí nghiệm vòng 72 sau dùng thuốc hai tuần Ghi chép biểu thời gian (theo bảng) Ghi mốc thời gian cho chuột uống thuốc, thời gian xuất triệu chứng khác thường.Ghi nhận số chuột chết lô Quan sát đại thể (quan sát phổi, tim, gan, thận, ruột) sau chết chuột bị chết Nếu cho chuột uống mà tỉ lệ chết 100% liều chết tuyệt đối (LD100) tiếp tục tìm liều tối đa mà khơng có vật chết, gọi liều liều chết (infralethal dose) ký hiệu LD0 Sau thực liều theo cấp số nhân khoảng LD100 LD0 LD50 tính theo phương pháp KarberBehrens sau: LD50 = LD100- ∑ad N Trong đó: LD50: Liều gây chết 50% số chuột thí nghiệm LD100: Liều nhỏ gây chết 100% số chuột thí nghiệm a: Số chuột chết trung bình liều d: Hiệu số hai liều N: Số chuột trung bình dùng liều Trường hợp khơng xác định LD50 Về nguyên tắc, nói đến xác định độc tính phải xác định LD50.Tuy nhiên có trường hợp khơng thể xác định LD50.Có nhiều thuốc chủ yếu cao chiết từ dược liệu, cho uống với liều đậm đặc mà vật khơng chết Có thể gặp trường hợp sau: Đã thử đến liều đậm đặc tối đa bơm qua kim cho chuột uống ghi nhận tỷ lệ chuột chết < 100% nên khơng thể xác định tiếp LD100 Khi không xác định LD50, xác định liều tối đa mà khơng có vật chết liều LD0 Trong nghiên cứu để xác định LD50 thơng thường gấp 2-3 lần LD0 Vì liều tương đối an toàn DS dùng cho thực nghiệm dược lý ban đầu lấy giá trị tối thiểu 1/5 LD0 Nếu cho chuột uống mẫu thử liều đậm đặc tối đa bơm qua kim cho chuột uống mà khơng có chết xác định liều cao mà không làm chết chuột, ký hiệu Dmaxvà liều tương đối an tồn Ds dùng cho thực 45 nghiệm dược lý 1/5 Dmax lớn 1/5 Dmaxtùy theo kinh nghiệm nhà nghiên cứu dược lý Bảng9.1 Các hành vi chuột cần ý thời gian theo dõi Hệ thống Quan sát thử nghiệm Dấu hiệu chung độc tính quan Hung hăng, bồn chồn, chạy vịng Hành vi quanh lồng ni Hệ thống Co giật, tê liệt, run, giảm trương lực thần kinh cơ, liệt cơ, tăng co thắt cơ.Mất phản trung ương Vận động xạ thăng bằng, ngủ, hôn mê Phản hệ thần xạ Straub đuôi kinh vận động Dễ bị kích thích, thụ động, Phản ứng lại kích thích tăng cảm giác đau, khứu giác Phản ứng não tủy sống Chậm chạp, lờ đờ, cảm giác Trương lực Co cứng hay mềm nhũn Hệ thần kinh thực vật Kích thước đồng tử Giãn đồng tử, co đồng tử Lỗ mũi Chảy nước mũi Hệ hơ hấp Đặc tính tốc độ Nhịp thở châm, khó thở, co giật khí quản Hệ tim mạch Dấu hiệu tim mạch Hồi hộp, loạn nhịp tim, nhịp đập nhanh yếu Các triệu chứng Độ màu sắc phân Tiêu chảy, táo bón Đầy hơi, tăng nhu động, đau xoắn bụng Khơng điển hình phân đen Cơ quan sinh dục Dương vật Sa xuống, trạng thái căng phồng Da lơng Màu, tình trạng Dạ dày, ruột Màng nhày Mắt Hình dáng bụng Ửng đỏ, phát ban, da nhăn nheo, xù lông Màng kết, miệng Tiết dịch, sung huyết Mi mắt, nhãn cầu, tính Sa mi mắt, lồi nhãn cầu, co giật suốt nhãn cầu Thân nhiệt Cơ quan khác Dưới bình thường hay tăng Vị trí tiêm thuốc (nếu sử dụng Sưng tấy đường tiêm) Tình trạng chung Bất thường, gầy yếu 46 Bàn luận liều tƣơng đối an toàn Liều tương đối an toàn Ds chuột nhắt trắng lấy giá trị bằng: + 1/5 nhỏ (1/10 - 1/100) LD0 + >1/5 nhỏ 1/5 (1/10 - 1/100) Dmax + 1/10 nhỏ (1/20 - 1/100) LD50 Liều tương đối an toàn người ngoại suy từ liềutương đối an toàn Ds chuột nhắt trắng theo cách tính sau: Liều chuột nhắt trắng x 0,085 (= hệ số ngoại suy liều có hiệu tương đương chuột nhắt trắng người) x thể trọng trung bình người trưởng thành (# 50-60 kg) Kết khảo sát độc tính cấp đường uống cao nhân hạt Neem giàu Azadirachtin Dịch chiết ethanol 96% chiết từ nhân hạt Neem giàu Azadirachtin (dạng lỏng) cho chuột nhắt trắng uống xuất triệu chứng ngộ độc thần kinh ethanol 96% (chuột phản xạ thăng bằng, ngủ) gây tử vong 60% vòng 24 sau uống (chết mê, co giật) Do cần thiết phải loại bỏ ethanol Dịch chiết cô loại bỏ ethanol đông khô thu dạng cao nhân hạt Neem giàu Azadirachtin (1.000 ml dịch chiết đông khô thu 157,25g cao) Theo dõi sau 72 thử nghiệm, liều tối đa cho uống cao nhân hạt Neem giàu Azadirachtin chuột nhắt trắng (n = 10) 16,52 g cao/kg thể trọng chuột,có phân suất tử vong 0% xác định LD50 Do đó, xác định liều Dmax = 16,52 g cao/kg thể trọng chuột Nhận xét kết độc tính cấp: Cao nhân hạt Neem giàu Azadirachtin khơng độc tính cấp đường uống chuột nhắt trắng, tồn chuột ăn uống sinh hoạt bình thường 72 quan sát Chuột tiếp tục theo dõi sau 14 ngày uống không ghi nhận triệu chứng bất thường Hàm lượng hoạt chất Azadirachtin dịch chiết ban đầu 9040,6 ppm (1000 ml dịch chiết có 9040,6 mg), tương đương với 5749,2 mg hoạt chất Azadirachtin 100 g cao đông khô Vậy liều Dmax 16,52 g cao/kg thể trọng chuột cao đông khô tương đương với 949,77 mg hoạt chất Azadirachtin Ngoại suy liều an toàn người Liều chuột nhắt trắng x 0,085 (= hệ số ngoại suy liều có hiệu tương đương chuột nhắt trắng người) x thể trọng trung bình người trưởng thành (50-60 kg) Vậy liều Dmax ngoại suy người trọng 60 kg 84,25 g cao đông khô tương đương với 4843,83 mg hoạt chất Azadirachtin Liều tương đối an tồn người DS 1/5 Dmax lớn 1/5 Dmax 47 3.2 ĐÁNH GIÁ HIỆU LỰC XUA DIỆT MUỖI AEDES AEGYPTI CỦA CHẾ PHẨM DICH CHIẾT TƢ̀ NHÂN HA ̣T NEEM CÓ CHẤT ĐỜNG TÁC DỤNG ̣ LÀ CYPERMETHRINEỞ PHỊNG THÍ NGHIỆM 3.2.1 Thu thập bọ gậy Aedes aegypti điểm nghiên cứu nuôi thành muỗi trƣởng thành labo Thu thập bọ gậy Aedes aegypti tiến hành xã Bà Điểm xã Xn Thới Thượng, huyện Hóc Mơn, TP HCM, sau đem ni phòng ni động vật thực nghiệm Viện tạo hệ F1 với số lượng 3.500 muỗi trưởng thành sử dụng thử nghiệm Muỗi Aedes aegypti ni phịng thí nghiệm, đủ tiêu chuẩn, chưa hút máu từ – ngày tuổi, nuôi đường glucose 10% 3.2.2 Thử nghiệm đánh giá hiệu lực chế phẩm dịch chiết từ nhân hạt Neem để diệt muỗi Aedes aegyptitại labo Chế phẩm dịch chiết từ nhân hạt Neem Viện Sinh học nhiệt đới cung cấp pha loãng với nước tỷ lệ từ 1:1 (1ml chế phẩm pha với ml nước) đến 1:12 (1ml chế phẩm pha với 12 ml nước) Thực đánh giá hiệu lực diệt muỗi tỷ lệ thực theo Quy trình Khảo nghiệm hóa chất, chế phẩm diệt côn trùng Bộ Y tế (ban hành kèm theo Quyết định số 120/ QĐ-BYT ngày 24/1/2000) Cụ thể: 3.2.2.1 Đánh giá hiệu lực diệt muỗi Aedes aegypti chế phẩmdịch chiết từ nhân hạt Neem lồng kính 70 x 70 x 70 cm Thử nghiê ̣m đươ ̣c tiế n hành lầ n cho nồng độ dị tìm có kết sau: Bảng II.1 Kết hiệu lực diệt muỗi Aedes aegypti chế phẩm có chất Cypermethrineở lồng kính 70 x 70 x 70 cm Tỷ lệ pha loãng chế phẩmdịch chiết từ nhân hạt Neem với Nƣớc 1:1 1:2 1:3 1:4 1:5 1:6 1:7 1:8 1:9 1:10 Tỷ lệ % muỗi 100 100 100 100 100 98,75 95,00 91,25 86,25 77,5 chết sau 24 1:11 1:12 61,25 51,25 Theo tiêu chuẩ n c Bộ Y tế đánh giá hiê ̣u lực của ch ế phẩm dịch chiết từ nhân hạt Neem lồng kính 70 x 70 x 70 cm: - Có hiệu lực diệt tớ t đớ i với muỗi Aedes aegypti (chủng thực địa huyện Hóc Mơn, TP HCM) tỷ lệ pha lỗng từ 1-1 đến 1-8 - Có hiệu lực diệt trung bình tỷ lệ pha loãng từ 1-9 1-10 48 - Có hiệu lực diệt tỷ lệ pha loãng từ 1-11 trở sau 3.2.2.2 Đánh giá hiệu lực diệt muỗi Aedes aegypti chế phẩm dịch chiết từ nhân hạt Neem buồng Peet Grady 180 x 180 x 180 cm Thử nghiê ̣m đươ ̣c tiế n hành lầ n cho nồng độ dị tìm có kết sau: Bảng II.2 Kết hiệu lực diệt muỗi Aedes aegypti chế phẩm có chất Cypermethrineở buồng Peet Grady 180 x 180 x 180 cm Tỷ lệ pha loãng chế phẩm dịch chiết từ nhân hạt Neem với Nƣớc 1:1 1:2 1:3 1:4 1:5 1:6 1:7 1:8 1:9 1:10 1:11 1:12 Tỷ lệ % muỗi chết 100 100 100 100 98,33 96,67 91,60 88,30 81,67 76,67 58,33 48,33 sau 24 Theo tiêu chuẩ n c Bộ Y tế đánh giá hiê ̣u lực của ch ế phẩm dịch chiết từ nhân hạt Neem buồng Peet Grady 180 x 180 x 180 cm: - Có hiệu lực diệt tớ t đố i với muỗi Aedes aegypti (chủng thực địa huyện Hóc Mơn, TP HCM) tỷ lệ pha lỗng từ 1-1 đến 1-7 - Có hiệu lực diệt trung bình tỷ lệ pha lỗng từ 1-8 đến 1-10 - Có hiệu lực diệt tỷ lệ pha loãng từ 1-11 trở sau 3.2.2.3 Đánh giá mức độ an toàn dịch chiết từ nhân hạt Neem người sử dụng: Phỏng vấn người trực tiế p tham gia thử nghiê ̣m nồng độ theo mẫu câu hỏi Bộ Y tế có kết sau: - Tất người trực tiếp thực thử nghiệm trang bị bảo hộ an tồn phịng thí nghiệm rửa tay sau hồn thành cơng việc - Khơng có phản ứng phụ triệu chứng trình thử nghiệm: 49 Bảng II.3 Kết vấn chế phẩm có chất Cypermethrine Tỷ lệ pha loãng chế phẩm dịch chiết từ nhân hạt Neem với Nƣớc Triệu chứng 1:1 1:2 1:3 1:4 1:5 1:6 1:7 1:8 1:9 1:1 1:1 K K K K K K K K K K K Nóng rát K K K K K K K K K K K Ngứa K K K K K K K K K K K Dị ứng da K K K K K K K K K K K Buồn nôn, nôn K K K K K K K K K K K Đau đầu, chóng mặt K K K K K K K K K K K Hắt hơi, sỗ mũi K K K K K K K K K K K Đau bụng, tiêu chảy C C C C C C C C C C C Mùi , K K K K K K K K K K K Ho K K K K K K K K K K K Sốt K K K K K K K K K K K Kích ứng mắt Ghi chú: “K”= khơng; “C”= có - Kết cho thấy, chế phẩm không gây phản ứng phụ tất độ pha lỗng - Chế phẩm có mùi dầu Neem tất nồng độ pha loãng - 100% người trực tiếp tham gia khảo nghi ệm có nhận xét phẩm khơng gây phản ứng phụ suố t quá trin ̀ h khảo nghiê ̣m 1:1 K K K K K K K C K K K nồng chế 3.3 ĐÁNH GIÁ HIỆU LỰC XUA DIỆT MUỖI AEDES AEGYPTI CỦA CHẾ PHẨM CHỈ RIÊNG DICH CHIẾT TƢ̀ NHÂN HA ̣T NEEM Ở NỒNG ĐỘ ̣ 1600 PPM KHÔNG CÓ CHẤT ĐỒNG TÁC DỤNG LÀ CYPERMETHRINEỞ PHỊNG THÍ NGHIỆM Đề tài khơng thực cộng đồng đề cương nghiên cứu ban đầu chế phẩm thử nghiệm giai đoạn phịng thí nghiệm có chất đồng tác dụng Cypermethrine hàm lượng 3% Nên hội đồng nghiệm thu thống không thực phun chế phẩm thực địa thực đánh giá chế phẩm khơng có chất đồng tác dụng Cypermethrine phịng thí nghiệm 3.3.1 Thu thập bọ gậy Aedes aegypti điểm nghiên cứu nuôi thành muỗi trƣởng thành labo Thu thập bọ gậy Aedes aegypti tiến hành xã Bà Điểm xã Xuân Thới Thượng, huyện Hóc Mơn, TP HCM, sau đem ni phòng nuôi động vật thực nghiệm Viện tạo hệ F1 với số lượng 3.500 muỗi trưởng thành sử dụng thử nghiệm Muỗi Aedes aegypti nuôi phịng thí nghiệm, đủ tiêu chuẩn, chưa hút máu từ – ngày tuổi, nuôi đường glucose 10% 50 3.3.2 Thử nghiệm đánh giá hiệu lực chế phẩm chỉ riêng dịch chiết từ nhân hạt neem nồng độ 1600 ppm không có chấ t đồ ng tác du ̣ng là cypermethrine để diệt muỗi Aedes aegyptitại labo Chế phẩm dịch chiết từ nhân hạt Neem Viện Sinh học nhiệt đới cung cấp pha loãng với nước tỷ lệ từ 1:0 (1ml chế phẩm pha với ml nước) đến 1:9 (1ml chế phẩm pha với ml nước) Thực đánh giá hiệu lực diệt muỗi tỷ lệ thực theo Quy trình Khảo nghiệm hóa chất, chế phẩm diệt trùng Bộ Y tế (ban hành kèm theo Quyết định số 120/ QĐ-BYT ngày 24/1/2000) Cụ thể: 3.3.2.1 Đánh giá hiệu lực diệt muỗi Aedes aegypti chế phẩmchỉ riêng dịch chiế t từ nhân hạt neem ở nồ ng độ 1600 ppm không có chấ t đồ ng tác dụng là Cypermethrinetrong lồng kính 70 x 70 x 70 cm Thử nghiê ̣m đươ ̣c tiế n hành lầ n cho nồng độ dị tìm có kết sau: Bảng III.1 Kết hiệu lực diệt muỗi Aedes aegypti chế phẩm khơng có chất Cypermethrineở lồng kính 70 x 70 x 70 cm Tỷ lệ pha loãng chế phẩm dịch chiết từ nhân hạt Neem với Nƣớc :0 1:1 1:2 1:3 1:4 1:5 1:6 1:7 1:8 1:9 Tỷ lệ % muỗi 95,00 91,33 78,75 72,50 70,00 65,00 45,00 31,25 25,00 11,25 chết sau 24 Theo tiêu chuẩ n c Bộ Y tế đánh giá hiê ̣u lực của ch ế phẩm dịch chiết từ nhân hạt Neem nồng độ 1600 ppm không có chấ t đồ ng tác du ̣ng là Cypermethrinetrong lồng kính 70 x 70 x 70 cm: - Có hiệu lực diệt tố t đố i với muỗi Aedes aegypti (chủng thực địa huyện Hóc Mơn, TP HCM) tỷ lệ pha lỗng từ 1-0 đến 1-1 - Có hiệu lực diệt trung bình tỷ lệ pha lỗng từ 1-2 1-4 - Có hiệu lực diệt tỷ lệ pha loãng từ 1-5 trở sau 3.3.2.2 Đánh giá hiệu lực diệt muỗi Aedes aegypti chế phẩmchỉ riêng dịch chiế t từ nhân hạt neem ở nồ ng độ 1600 ppm không có chấ t đồ ng tác dụng là Cypermethrinetrong buồng Peet Grady 180 x 180 x 180 cm Thử nghiê ̣m đươ ̣c tiế n hành lầ n cho nồng độ dị tìm có kết sau: 51 Bảng III.2 Kết hiệu lực diệt muỗi Aedes aegypti chế phẩm khơng có chất Cypermethrineở buồng Peet Grady 180 x 180 x 180 cm Tỷ lệ pha loãng chế phẩm dịch chiết từ nhân hạt Neem với Nƣớc 1:0 1:1 1:2 1:3 1:4 1:5 1:6 1:7 1:8 Tỷ lệ % muỗi 95,00 73,33 53,33 50,00 45,00 35,00 33,33 31,66 20,00 chết sau 24 1:9 8,33 Theo tiêu chuẩ n c Bộ Y tế đánh giá hiê ̣u lực của ch ế phẩm dịch chiết từ nhân hạt Neem buồng Peet Grady 180 x 180 x 180 cm: - Có hiệu lực diệt tớ t đớ i với muỗi Aedes aegypti (chủng thực địa huyện Hóc Mơn, TP HCM) tỷ lệ pha lỗng 1-0 (Khơng pha lỗng) - Có hiệu lực diệt trung bình tỷ lệ pha lỗng: 1-1 - Có hiệu lực diệt tỷ lệ pha loãng từ 1-2 trở sau 3.3.2.3 Đánh giá mức độ an toàn chế phẩmchỉ riêng dịch chiết từ nhân hạt neem ở nồ ng độ 1600 ppm không có chấ t đồ ng tác dụng là Cypermethrine người sử dụng: Phỏng vấn người trực tiế p tham gia thử nghiê ̣m nồng độ theo mẫu câu hỏi Bộ Y tế có kết sau: - Tất người trực tiếp thực thử nghiệm trang bị bảo hộ an tồn phịng thí nghiệm rửa tay sau hồn thành cơng việc - Khơng có phản ứng phụ triệu chứng q trình thử nghiệm: 52 Bảng III.3 Kết vấn chế phẩm khơng có chất Cypermethrine Triệu chứng Tỷ lệ pha loãng chế phẩm từ nhân hạt Neem với Nƣớc 1:0 1:1 1:2 1:3 1:4 1:5 1:6 1:7 1:8 1:9 Nóng rát K K K K K K K K K K Ngứa K K K K K K K K K K Dị ứng da K K K K K K K K K K Buồn nôn, nôn K K K K K K K K K K Đau đầu, chóng mặt K K K K K K K K K K Hắt hơi, sỗ mũi K K K K K K K K K K Đau bụng, tiêu chảy K K K K K K K K K K Mùi C C C C C C C C C C Ho K K K K K K K K K K Sốt K K K K K K K K K K Kích ứng mắt K K K K K K K K K K Ghi chú: “K”= khơng; “C”= có - Kết cho thấy, chế phẩm không gây phản ứng phụ tất nồng độ pha loãng - 100% người trực tiếp tham gia khảo nghi ệm có nhận xét chế phẩm không gây phản ứng phụ suố t quá trình khảo nghiê ̣m 53 IV KẾT LUẬN 4.1 Nghiên cứu hồn thiện quy trình tạo chế phẩm dịch phun dạng nhũ dầu xua, diệt muỗi từ nhân hạt Neem (Azadirachta indica A juss) trồ ng ta ̣i Viêṭ Nam + Phương pháp tuyển chọn, thu hái bảo quản hạt Neem (Bảng 2.1, sơ đồ 1) + Quy trình tách chiết hoạt chất từ nhân hạt Neem theo (sơ đồ 4.1) + Quy trình tạo chế phẩm xua, diệt muỗi dịch nhũ dầu từ nhân hạt Neem theo (sơ đồ 4.2) + Thành phần chế phẩm xua diệt muỗi dạng nhũ dầu(Bảng 4.1) Với tiêu cần đạt: Chỉ số lý hóa chế phẩm độ bền nhũ tương, độ tự nhũ, độ tái nhũ: Đạt tương đương tiêu chuẩn TCVN 3711-82 tiêu chuẩn FAO, Hàm lượng hoạt chất Azadirachtin đạt 1.600 ppm + Độ bền bảo quản: Với việc sử dụng chất chống ơxy hóa PABA (0,4%),có thể bảo quản chế phẩm phun dạng nhũ dầu năm, hoạt chất Azadirachtin sản phẩn giữ 75% so với ngày đầu sản xuất Chế phẩm loại dung dịch dạng nhũ dầu, màu vàng lạt, hắc mùi hạt Neem Khuếch tán tốt nước dung môi hữu Kết xác định LD50 chuột nhắt trắng cho thấy dịch chiết nhân hạt neem (dung làm nguyên liệu tạo chế phẩm), khơng gây độc hại cho động vật máu nóng + Dây truyền sản xuất quy mô pilot: Khoảng 20 lít/ mẻ, đóng chai nhựa màu, lượng dịch chế phẩm 500ml/trai(40 chai) Toàn dây truyền gồm máy sau: Máy sấy – Máy tách vỏ - Máy ép dầu – Máy lọc dầu/ Máy li tâm tách nước(máy lọc) – Máy khuấy trộn – Máy cô quay chân khơng – Máy đồng hóa – Máy chiết dót – Máy dán nhãn Máy hút chân không Một số đề nghị: (Về phần nghiên cứu hồn thiện quy trình): Do số hạn chế kinh nghiệm sản xuất sản phẩm để đưa thực tế nên xin đề nghị số ý kiến sau: Khảo sát kĩ thêm thông số máy phải sử dụng dây truyền sản xuất chế phẩm quy mơ sản xuất thực tế 54 Tính tốn lại kĩ hơn, cho hết chi phí cần thiết cho đơn vị sản phẩm(giá thành sản phẩm) 4.2 Đánh giá hiệu lực xua diệt muỗi aedes aegypti chế phẩ m dich ̣ chiế t tƣ̀ nhân ̣t Neem có chất đồng tác dụng C ypermethrineở phịng thí nghiệm(Giai đoạn 1) 4.2.1 Hiệu lực: a) Ở lồng kính 70 x 70 x 70 cm có tác du ̣ng diê ̣t t ốt đố i với muỗi Aedes aegypti (chủng thực địa huyện Hóc Mơn, TP HCM) tỷ lệ pha loãng từ Neem – Nước đến Neem – Nước b) Ở lồng Peet Grady 1,8 x 1,8 x 1,8 m có tác du ̣ng diê ̣t tốt đố i với muỗi Aedes aegypti (chủng thực địa huyện Hóc Mơn, TP HCM) tỷ lệ pha loãng từ Neem – Nước đến Neem – Nước 4.2.2 Mức độ an toàn: Chế phẩm dịch chiết từ nhân hạt Neem không gây phản ứng phụ người trực tiếp tiếp xúc người tham gia thử nghiệm 4.3 Đánh giá hiệu lực xua diệt muỗi Aedes aegypti chế phẩ m chỉ riêng dich ̣ chiế t tƣ̀ nhân ̣t neem ở nồ ng đô ̣ 1600 ppm khơng có chất đồng tác dụng Cypermethrineở phịng thí nghiệm (Giai đoạn 2) 4.3.1 Hiệu lực: a) Ở lồng kính 70 x 70 x 70 cm có tác du ̣ng diê ̣t t ốt đố i với muỗi Aedes aegypti (chủng thực địa huyện Hóc Mơn, TP HCM) tỷ lệ pha loãng từ Neem – Nước đến Neem – Nước b) Ở lồng Peet Grady 180 x 180 x 180cm có tác du ̣ng diê ̣t t ốt đố i với muỗi Aedes aegypti (chủng th ực địa huyện Hóc Mơn, TP HCM) tỷ lệ pha loãng: Neem – Nước 4.3.2 Mức độ an toàn Chế phẩm dịch chiết từ nhân hạt Neem không gây phản ứng phu ̣ đố i với người trực tiế p tiế p xúc người tham gia thử nghiệm 4.4 So sánh loại chế phẩm: Chế phẩm dịch chiết từ nhân hạt Neem có chất đồng tác dụng (Giai đoạn 1) không có chấ t đồ ng tác du ̣ng là Chế phẩm dịch chiết từ nhân hạt Neem (Giai đoạn 2) 55 Tỉ lệ hiệu lực diệt muỗi giảm hẳn chế phẩm không có chấ t đồ ng tác du ̣ng Cypermethrine: Bảng IV.1 So sánh hiệu diệt muỗi loại chế phẩm Chế phẩm dịch chiết từ nhân hạt Neem Ở lồng kính 70 x 70 x 70 cm Diệt tốt Diệt trung bình Diệt Ở lồng Peet Grady 1,8 x 1,8 x 1,8 m Diệt tốt Diệt trung bình Diệt Mức độ an toàn Hiệu lực diệt muỗi Có chất đồng tác dụng Không có chấ t đồ ng tác Cypermethrine dụng Cypermethrine (Giai đoạn 1) (Giai đoạn 2) Có tác dụng diệt tốt tỷ lệ Có tác dụng diệt tốt tỷ lệ pha loãng từ Neem – pha loãng từ Neem – Nước đến Neem – Nước đến Neem – Nước Nước Neem – Nước đến 1 Neem – Nước đến Neem – Nước Neem – Nước Neem – Nước đến 1 Neem – Nước đến Neem – 10 Nước Neem – Nước Neem – 11 Nước trở Neem – Nước trở sau sau Có tác dụng diệt tốt tỷ lệ pha lỗng từ Neem – Có tác dụng diệt tốt tỷ lệ Nước đến Neem – pha loãng: Neem –0 Nước Nước Neem – Nước đến 1 Neem – Nước Neem – Nước Neem – Nước đến 1 Neem – Nước Neem – 10 Nước Neem – 11 Nước trở Neem – Nước trở sau sau Không gây phản ứng phu ̣ đố i với người trực tiế p tiế p xúc người tham gia thử nghiệm Ghi 56 V KIẾN NGHỊ Từ kết thử nghiệm nhóm nghiên cứu đề xuất: Chế phẩmdịch chiết từ nhân hạt Neem có chất đồng tác dụng Cypermethrine sử dụng để diệt muỗi Aedes aegyptivới tỷ lệ pha loãng Neem:1 Nước đến Neem: Nước Chế phẩmchỉ riêng dịch chiết từ nhân hạt N eem ở nờ ng ̣ 1600 ppm khơng có chất đồng tác dụng Cypermethrine :không thể sử dụng để diệt muỗi Aedes aegypti, cần tiếp tục nghiên cứu tạo chế phẩm dịch chiết từ nhân hạt Neem với hợp chất tự nhiên để làm tăng hiệu lực diệtmuỗi 57 PHỤ LỤC I Phụ lục Kết phân tích xác định hàm lƣợng Azadirachtin dịch chiết nhân hạt Neem xác định độ độc tính cấp LD50 chuột II Phụ lục Thông tin thiết bị dây truyền máy III Phụ lục Phƣơng pháp xác định độ bền sản phẩm IV Phụ lục4 Phiếu ghi kết thử nghiệm muỗi V Phụ lục Bảng câu hỏi vấn tính an tồn chê phẩm VI Phụ lục Cấu trúc hóa học tác dụng số hóa chất sử dụng