Khảo sát chế độ ánh sáng thích hợp cho tích lũy astaxanthin ở vi tảo haematococcus pluvialis ở điều kiện phòng thí nghiệm

BAN QUẢN LÝ KHU NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP.HCM TRUNG TÂM NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO NGHIỆM THU KHẢO SÁT CHẾ ĐỘ ÁNH SÁNG THÍCH HỢP CHO TÍCH LŨY ASTAXANTHIN Ở VI TẢO Haematococcus pluvialis CHỦ NHIỆM NDNC (Ký tên) Th.S Nguyễn Thị Kim Liên CƠ QUAN QUẢN LÝ CƠ QUAN CHỦ TRÌ (Ký tên, đóng dấu xác nhận) (Ký tên, đóng dấu xác nhận) THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 12/2015 TÓM TẮT Đề tài khảo sát chế độ ánh sáng thích hợp cho tích lũy astaxanthin vi tảo Haematococcus pluvialis điều kiện phịng thí nghiệm thực từ tháng đến tháng 12 năm 2015 Trung tâm Nghiên cứu Phát triển Nông nghiệp Công nghệ cao Nghiên cứu gồm ba nội dung: (1) chọn lọc môi trường tối ưu để nhân sinh khối tảo H pluvialis, (2) ảnh hưởng loại ánh sáng khác đến vòng đời tăng trưởng tảo H pluvialis, (3) ảnh hưởng chế độ ánh sáng đến hiệu tích lũy astaxanthin H pluvialis Nội dung tiến hành theo mơ hình ni cấy hai pha, pha I tảo ni cấy điều kiện tối ưu để đạt mật độ tế bào cực đại, sau chuyển sinh khối tảo vào pha II sốc cường độ ánh sáng (120μmol/m2/s 180 μmol/m2/s) thời gian chiếu sáng (16 giờ, 24 giờ) Kết ghi nhận, bốn mơi trường nghiên cứu mơi trường RM tảo đạt mật độ tế bào cực đại, hàm lượng astaxanthin, trọng lượng khô cao với giá trị tương ứng 5,13x105 TB/ml, 487 μg/l, 2,32 g/l Tảo H pluvialis có khả phát triển loại ánh sáng (trắng, xanh, đỏ, tím) tảo sinh trưởng phát triển mạnh ánh sáng trắng (mật độ tế bào cực đại 5,53 TB/ml, hàm lượng astaxanthin 469,33 μg/l trọng lượng khô 2,35 g/l) thấp ánh sáng đỏ (mật độ tế bào cực đại 2,6 TB/ml, hàm lượng astaxanthin 66,67 μg/l trọng lượng khô 0,62 g/l) Kết ni tảo theo mơ hình ni cấy hai pha cho thấy, cường độ chiếu sáng cao, thời gian chiếu sáng kéo dài nhiệt độ cao làm tăng hiệu tích lũy astaxanthin tế bào Ở cường độ chiếu sáng 120 μmol/m2/s nhiệt độ 350C, tảo chuyển sang giai đoạn bào nang hoàn chỉnh sớm với hàm lượng astaxanthin, trọng lượng khô cao 4618,67 μg/l, 4,44 g/l tương ứng Công thức thí nghiệm sốc thời gian chiếu sáng 24 với nhiệt độ 330C hàm lượng astxanthin trọng lượng khô thu cao với giá trị 3076,8 μg/l, 3,72 g/l i MỤC LỤC TRANG Tóm tắt i Mục lục ii Danh sách chữ viết tắt v Danh sách bảng vi Danh sách hình ảnh vii Thơng tin đề tài Mở đầu CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm sinh học tảo Haematococcus pluvialis 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Đặc điểm hình thái 1.1.3 Sinh trưởng 1.1.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến tốc độ sinh trưởng H pluvialis 1.2 Tổng quan astaxanthin 1.2.1 Nguồn cung cấp astaxanthin 1.2.1.1 Astaxanthin tổng hợp hóa học 1.2.1.2 Astaxanthin có nguồn gốc tự nhiên 1.2.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến tích lũy astaxanthin 11 1.3 Một số kết nghiên cứu tảo H pluvialis 12 1.3.1 Nghiên cứu nước 12 1.3.2 Nghiên cứu giới 14 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 15 ii 2.2 Nội dung nghiên cứu 15 2.3 Vật liệu nghiên cứu 15 2.3.1 Chủng tảo giống 15 2.3.3 Hóa chất thí nghiệm 15 2.3.4 Dụng cụ, thiết bị thí nghiệm 16 2.4 Phương pháp bố trí thí nghiệm 17 2.4.1 Nhân giống tảo H pluvialis phịng thí nghiệm 17 2.4.2 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 17 2.4.2.1 Chọn lọc môi trường, thiết lập điều kiện nhân sinh 18 khối H pluvialis qui mô bình ni 2.4.2.2 Khảo sát ảnh hưởng loại ánh sáng đến vòng đời tăng 18 trưởng H pluvialis qui mơ bình ni 2.4.2.3 Khảo sát ảnh hưởng chế độ ánh sáng đến hiệu tích 19 lũy astaxanthin H pluvialis qui mơ bình ni 2.5 Chỉ tiêu theo dõi 21 2.6 Phương pháp xác định mật độ tế bào 21 2.7 Phương pháp định lượng hàm lượng sắc tố 21 2.8 Phương pháp phân tích trọng lượng khơ tảo 22 2.9 Phương pháp xử lý số liệu 22 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23 3.1 Hình thái tế bào giai đoạn đặc trưng tảo H pluvialis 23 3.2 Chọn lọc môi trường, thiết lập điều kiện nhân sinh khối 25 H pluvialis qui mơ bình 10 lít 3.2.1 Ảnh hưởng mơi trường dinh dưỡng lên mật độ trọng lượng khô tảo H pluvialis iii 25 3.2.2 Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng lên hàm lượng sắc 28 tố chlorophyll a astaxanthin tảo H pluvialis 3.3 Ảnh hưởng loại ánh sáng đến vòng đời tăng trưởng 30 H pluvialis qui mơ bình ni 10 lít 3.4 Ảnh hưởng chế độ ánh sáng đến hiệu tích lũy 32 astaxanthin H pluvialis qui mơ bình ni 3.4.1 Ảnh hưởng cường độ chiếu sáng đến hiệu tích lũy 33 astaxanthin H pluvialis 3.4.2 Ảnh hưởng thời gian chiếu sáng đến hiệu tích lũy 38 astaxanthin H pluvialis 3.4.3 Tỷ lệ astaxanthin/chlorophyll a vi tảo H pluvialis 44 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 46 4.1 Kết luận 46 4.2 Đề nghị 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 PHỤ LỤC 51 iv DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT VIẾT TẮT THUẬN NGỮ TIẾNG VIỆT CTV Cộng tác viên TB Tế bào MĐTB Mật độ tế bào NTTS Nuôi trồng thủy sản TLK Trọng lượng khô TN Thí nghiệm KL Kết luận MT Mơi trường CT Cơng thức ĐC Đối chứng v DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng 2.1 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 3.10 Tựa bảng Thành phần dinh dưỡng môi trường C, RM, F/2 B Mật độ tế bào H pluvialis loại môi trường RM, C, B F2 (x104) Trọng lượng khô H pluvialis loại môi trường RM, C, B F2 Hàm lượng chlorophyll a H pluvialis môi trường nuôi cấy Hàm lượng astaxanthin H pluvialis gây sốc cường độ chiếu sáng khác Trọng lượng khô H pluvialis gây sốc cường độ chiếu sáng khác % astaxanthin/trọng lượng khô tảo H pluvialis cường độ chiếu sáng 120 μmol/m2/s Hàm lượng astaxanthin tảo H pluvialis gây sốc thời gian chiếu sáng khác Trọng lượng khô tảo H pluvialis gây sốc thời gian chiếu sáng khác % astaxanthin/TLK tảo H pluvialis thời gian chiếu sáng 24 Tỷ lệ astaxanthin/chlorophyll a tảo H pluvialis giai đoạn khác vi Trang 15 25 26 28 33 35 36 39 40 41 44 DANH SÁCH CÁC HÌNH ẢNH Tựa hình Hình 1.1 1.2 Sự thay đổi hình thái vòng đời H pluvialis Năm pha tăng trưởng nuôi vi tảo (Lavens Sorgeloos, 1996) Trang Bể ni tảo ngồi trời sản xuất astaxanthin sinh khối 1.3 astaxanthin dạng bột Trung Quốc (Lovatelli ctv, 10 2009) 2.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 17 2.2 Các loại ánh sáng khác thí nghiệm 19 Sự thay đổi hình thái tế bào vòng đời tảo 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 H pluvialis (độ phóng đại x400) Sự thay đổi màu sắc tảo H pluvialis quy mơ bình ni 10 lít Sự thay đổi mật độ tế bào H pluvialis loại môi trường RM, C, B F2 Trọng lượng khô H pluvialis loại môi trường RM, C, B F2 Sự thay đổi hàm lượng chlorophyll a H pluvialis môi trường nuôi cấy Sự thay đổi hàm lượng astaxanthin H pluvialis môi trường nuôi cấy Mật độ tế bào thay đổi theo thời gian thí nghiệm (x400 lần) Sự biến động mật độ tế bào H pluvialis loại ánh sáng khác Trọng lượng khô H pluvialis loại ánh sáng khác vii 23 24 25 25 28 28 29 30 30 3.10 3.11 3.12 3.13 3.14 Sự thay đổi hàm lượng chlorophyll a H pluvialis loại ánh sáng khác Sự thay đổi hàm lượng astaxanthin H pluvialis loại ánh sáng khác Sự thay đổi hàm lượng astaxanthin H pluvialis gây sốc cường độ chiếu sáng khác Trọng lượng khô H pluvialis sốc cường độ chiếu sáng khác Sinh khối tảo chứa astaxanthin 31 31 32 33 35 Hình thái tế bào hàm lượng sắc tố tảo H pluvialis 3.15 kính hiển vi quang học với độ phóng đại 400 lần 35 cường độ chiếu sáng khác 3.16 3.17 3.18 Sự thay đổi hàm lượng astaxanthin tảo H pluvialis gây sốc thời gian chiếu sáng khác Trọng lượng khô H pluvialis gây sốc thời gian chiếu sáng khác Sự thay đổi màu sắc tảo H pluvialis thời gian chiếu sáng khác 37 38 39 Hình thái tế bào hàm lượng sắc tố tảo H pluvialis 3.19 kính hiển vi quang học với độ phóng đại 400 lần thời gian chiếu sáng khác viii 40 THÔNG TIN ĐỀ TÀI Tên nội dung nghiên cứu: Khảo sát chế độ ánh sáng thích hợp cho tích lũy astaxanthin vi tảo Haematococcus pluvialis điều kiện phòng thí nghiệm Chủ nhiệm đề tài: Th.S Nguyễn Thị Kim Liên Cơ quan chủ trì: Trung tâm Nghiên cứu Phát triển Nông nghiệp Công nghệ cao Thời gian thực hiện: Từ tháng 1/2015 đến tháng 12/2015 Kinh phí duyệt: 148.129.000 đồng Mục tiêu nội dung nghiên cứu Chọn mơi trường thích hợp để nuôi sinh khối tảo H pluvialis Chọn loại ánh sáng thích hợp tăng trưởng H pluvialis Chọn chế độ ánh sáng thích hợp để tích lũy astaxanthin tảo H pluvialis Sản phẩm nội dung nghiên cứu: Báo cáo khoa học quy trình nuôi tảo H pluvialis pha [9] Bon J.A., Leathers T.D and Jayaswal R.K.,1997 Isolation of astaxanthin overproducing mutants of Phaffiarhodozyma Biotechnol Lett., 19: 109-112 [10] Boussiba S and Vonshak A., 1991 Plant cell physiol 32, 1077 – 1082 [11] Bubrick P., 1991 Bioresource technology, 38: 327 – 329 [12] Choi H.D., Kim J.H., Chang M.J., Kyu-Youn Y and Shin W.G., 2011 Effects of astaxanthin on oxidative stress in overweight and obese adults Phytother Research 25: 1813-1818 [13] Chumpolkukwong N., Kakizono T., NagaiS and Nishio N., 1997 Increased astaxanthinproduction by Phaffia rhodozyma mutantsisolated as resitant to diphenylamine J.Ferment Bioengng., 83: 429-434 [14] Dominguez-Bocanegra A.R., Guerrero L I.,Martinez J F and Tomasini C F., 2004 Influence of environmental and nutiritionalfactors in the production of astaxanthin from Haematococcus pluvialis Bioresour.Technol 92: 209-214 [15] Droop M.R., 1994 Condition governing Haematococcus formation and loss of alga Haematococcus pluvialis Flotow Arch Microbiol 20: 391 – 397 [12] Droop M.R., 1995 Carotenogenesis in Haematococcus pluvialis Nature, 175 – 42 [16] Esra Imamoglu., Meltem Conk Dalay and Fazilet Vardar Sukan., 2009 Influences of different stress media and high light intensities on accumulation of astaxanthin in the green alga Haematococcus pluvialis New Biotechnology , 26-34 [17] Fan L and et al., 1994 Phycol, 30: 829 – 833 [18] Fábregas J., Otero A., Maseda A and Domínguez A., 2001 Two-stage for production of Astaxanthin from Haematococus pluvialis Journal of Biotechnology 89: 65-71 [19] Garcia Malea and et al., 2006 Enzyme and microbial technology, 38: 981 – 989 [20] Hagen C and et al., 1993 J Photochem photobiol biol, 20: 153 – 160 [16] Harker M and et al., 1996 Fermentation andbioengineering, 82 (2): 113 – 118 [21] Hata N., Ogbonna J.C., Hasegawa Y.,Taroda H and Tanaka H., 2001 Productionof astaxanthin by Haematococcus pluvialisin a sequential heterotrophicphotoautotrophicculture J Appl Phycol.,13: 395-402 48 [22] Jeffrey S.W and et al., 1997 Phytoplankton pigments in oceanography: Guidelines to modern methods Unesco, paris: 37 – 84 [23] Johnson E.A and An G.H., 1991 Crit rev biotechnol, 11: 297 – 326 [24] Junfeng Wang & Danxiang Han & Milton R Sommerfeld & Congming Lu & Qiang Hu., 2013 Effect of initial biomass density on growth and astaxanthin production of Haematococcus pluvialis in an outdoor photobioreactor Journal of Applide Phycogyl 25:253–260 [25] Kang C D and et al., 2007 Appl microbiolbiotechmol, 74: 987 – 994 [26] Keong W.Ng., 2002 Palm Oil: Alternative Lipid Source in Aquaculture Feeds School of Biological Sciences, Universiti Sains Malaysia [27] Kobayashi M and et al., 1992 Fermentation and bioengineering, 74: 61 – 63 [28] Kobayashi M and et al., 1997 Journal of fermentation and bioengineering, 84: 94 – 97 [29] Kobayshi M., 1997 Morphological changes in the life cycle of the green alga Haematococcus pluvialis Journalo Fermentatioann Bioengineering 84:94-97 [30] Le Thi Phuong Hoa, Nguyen Thi Hoai Ha, Pham Thi Bich Dao, Luu Thi Thuy Giang, Luong Thanh Hao., 2010 Biological properties and the nutrition value of an Isochrysis strain as a livw food for geo-duck larve, J Sc Tech., 48(2A): 683 – 688 [31] Lee Y.K and Soh C.W., 1991 Phycol, 27: 575 – 577 [32] Lorenz R.T and Cysewski G R., 2000.Commercial potential for Haematococcusmicroalgae as a natural source ofastaxanthin TibTech., 18: 160-167 [33] Lorenz R.T and Cysewski G.R., 2000 Trends biotechmol, 18: 160 – 167 [34] Lorenz R.T and Cysewski G.R., 2000 Commercial potential for Haematococcus microalgae as a natural source of astaxanthin TIBTECH APRIL 2000 (Vol 18) Elsevier Science Ltd [35] Lovatelli Alessandro and ChenJiaxin., 2009 Use of environmental friendly feed additives and probiotics in Chinese aquaculture Yellow Sea Fisheries Research Institute, China 49 [36] Makio Kobayashi., 1997 Morphological Changes in the Life Cycle of the Green Alga Haematococcus pluvialis Journalo F Fermentatioann D Bioengineering 84:94-97 [37] Miki W., 1991 Biological functions andactivities of animal carotenoids Pure Appl.Chem., 63: 141-146 [38] Olaizola M., 2000 Commercial production of astaxanthin from Haematococcus pluvialis using 25,000-liter outdoor photobioreactors J Appl Phycol., 12: 499-506 [39] Ranjbar R., Inoue R., Shiraishi H., Katsuda T and Katoh S., 2008 High efficiency production of astaxanthin by autotrophic cultivation of Haematococcus pluvialis in a bubble column photobioreactor Biochemical Engineering Journal, 39: 575-580 [40] Renstrom B and et al., 1981 Optical purity of astaxanthin from Haematococcus pluvialis Phytochemistry 20 (11): 2561 – 2564 [41] Riley L.W and et al., 1983 Hemorrhagic colitis associated with a rare Escherichia coli serotype N Engl J Med; 308: 681 – [42] Smith G.M., 1950 Freshwater algae (n p) Mcgraw hill book, pp 109 - 111 [43] Sperry., 1970 Psychlogical review, volume 77, issue 6, November 1970: 585 - 590 [44] Suh I.S., Joo H.N., Lee C.G., 2006 Anovel double-layered photobioreactor forsimultaneous Haematococcus pluvialis cellgrowth and astaxanthin accumulation.Journal of Biotechnology, 125: 540-546 [45] Tjahjono A.E and et al., 1994 Fermentation andbioengineering, 77 (4): 352 – 357 [46] Yuan J P and Chen F., 2000 Purification oftrans-astaxanthin from a highyieldingastaxanthin ester-producing strain of themicroalga Haematococcus pluvialis FoodChem, 68: 443-448 [47] Yuan J P and Chen F., 2001 Indirect photometric ion chromatographic analysis of anions in Haematococcus pluvialis culture media Biotechol Lett., 23: 757-760 50 PHỤ LỤC Phụ lục Quy trình ni tảo H pluvialis pha Tảo giống H pluvialis (1) Nhân ni tăng sinh khối bình erlen 500ml (2) Nuôi tảo pha I (3) Nuôi tảo pha II (4) Thu sinh khối tảo chứa astaxanthin sau ngày (1) Cấy chuyển mẫu tảo giống từ ống nghi m vào bình erlen 500 ml Sinh khối tảo giữ giống ống nghiệm cấy chuyển sang cấp độ bình erlen 500 ml ni môi trường lỏng RM, cường độ chiếu sáng 90 μmol/m2/s, thời gian chiếu sáng 12 giờ, sục khí liên tục, cung cấp khí CO2 cho tảo quang hợp, MĐTB ban đầu 105 TB/ml Tảo tiếp tục ni phịng thí nghiệm với nhiệt độ trì 250C 51 (2) Cấy chuyển tảo từ bình erlen 500 ml sang bình nhựa 10 lít ni tảo pha I Sau - ngày nuôi cấy cấp độ bình erlen 500 ml, sinh khối tảo cấy chuyển cách pha loãng mẫu theo tỉ lệ 50: 50 môi trường lỏng RM, cường độ chiếu sáng 90 μmol/m2/s, thời gian chiếu sáng 12 giờ, sục khí liên tục, cung cấp khí CO2 cho tảo quang hợp chuyển từ bình erlen 500 ml sang bình erlen 1000 ml cho MĐTB ban đầu đạt khoảng 105 TB/ml Tảo tiếp tục ni phịng thí nghiệm với nhiệt độ trì 250C (3) Cấy chuyển tảo từ pha I sang pha II Sau khoảng 14 ngày nuôi cấy pha I tảo đạt mật độ tế bào cực đại chuyển tảo vào ni pha II với điều kiện môi trường RM, ánh sáng trắng, cường độ chiếu sáng 120 μmol/m2/s thời gian chiếu sáng 24 giờ, cung cấp khí CO2, sục khí liên tục (4) Thu sinh khối tảo TB tảo chín hồn tồn Sử dụng kính hiển vi để theo dõi thay đổi kích thước, hình thái màu sắc tế bào tảo H pluvialis tế bào phát triển thành bào nang trưởng thành dùng màng lọc có kích thước khoảng 150 µm để tiến hành lọc thu sinh khối tảo tươi (sau ngày nuôi pha II) Phụ lục Mật độ trung bình tảo H pluvialis mơi trường thí nghi m (x104) Ngày RM C B F2 Ngày RM C B F2 6,33 6 10 45 34,67 35 13,67 8,33 10,33 10 12 49 36 38 26,33 17 19 7,33 14 51,33 39,33 43 31,33 21 24,33 16 46 33,67 36 38,33 28 32,33 18 37,67 26 27,33 52 Phụ lục Hàm lượng sắc tố trung bình mơi trường thí nghi m tảo H pluvialis Ngày Astaxanthin (μg/l) Tên mẫu Chlo a (μg/l) RM 105,8 41,2 C 110,15 40,8 Ngày Tên mẫu Chlo a (μg/l) Astaxanthin (μg/l) RM 582,26 303 C 457,5 252 292 10 B 111,07 44,93 B 501,91 F2 110,73 44 F2 RM 177,88 65 RM 782,25 345 C 144,18 48 C 609,62 289 B 160,02 60 B 667,13 321 F2 22,38 35,73 F2 0 RM 187,01 127,67 RM 794,03 404 C 153,53 102 C 713,05 307 12 14 B 176,64 114 B 740,53 333 F2 10,55 27,73 F2 0 RM 313,46 153 RM 727,86 454 C 275,61 133 C 702,03 320 B 295,61 140 B 695,94 400 F2 8,12 19,2 F2 0 RM 473,77 261 RM 650,4 487 C 275,61 180 C 654,97 375 16 18 B 295,61 228 B 555,68 453 F2 8,12 5,87 F2 0 53 Phụ lục Trọng lượng khô tảo H pluvialis mơi trường thí nghi m Ngày Tên mẫu TLK (mg/ml) Ngày Tên mẫu TLK (mg/ml) 0,63 Ngày 1,14 M1 M1 M2 0,55 1,22 0,74 0,64 M2 0,53 M3 0,18 0,66 M3 M3 0,63 C1 0,56 0,69 C1 C1 0,54 C2 0,65 0,63 C2 C2 0,41 C3 0,68 C3 0,55 0,88 B1 0,71 B1 0,39 B2 0,68 0,72 B2 B2 0,55 B3 0,68 0,88 B3 B3 0,55 0,08 F1 0,07 F1 0,57 F1 0,08 F2 0,07 F2 0,56 F2 0,08 F3 0,06 F3 1,87 M1 1,64 F3 M1 1,54 1,54 M2 1,79 1,41 M3 1,54 0,99 C1 1,45 0,90 C2 1,24 C3 1,45 1,95 B1 1,49 0,53 B2 1,76 1,20 B3 1,50 M1 0,78 M2 M2 0,91 M3 M3 0,65 C1 C1 0,25 C2 C2 1,37 C3 1,83 10 C3 1,61 B1 B1 0,82 B2 B2 0,61 B3 B3 0,04 F1 0,03 F1 F1 0,04 F2 C3 0,59 B1 TLK (mg/ml) M1 M2 Tên mẫu 0,02 F2 F2 54 0,21 12 F3 M1 0,03 1,87 F3 M1 2,00 F3 M1 2,30 M2 1,86 M2 2,14 M2 2,19 M3 1,85 M3 2,15 M3 2,14 C1 1,57 C1 2,06 C1 1,93 C2 1,34 C2 2,54 C2 1,79 C3 2,00 C3 0,64 C3 1,78 14 16 B1 2,06 B1 1,85 B1 2,13 B2 2,57 B2 1,93 B2 1,99 B3 0,64 B3 2,15 B3 2,15 F1 F1 F1 F2 F3 2,30 M1 2,19 M2 2,46 M3 1,85 C1 1,99 C2 1,89 18 C3 2,25 B1 2,14 B2 2,15 B3 F1 F2 F3 55 Phụ lục Hàm lượng sắc tố tảo H pluvialis loại ánh sáng khác Ngày Tên mẫu Chlo a (μg/l) 71,88 Astaxanthin (μg/l) Ngày 42,40 TR1 Chlo a (μg/l) Astaxanthin (μg/l) 126,29 56,00 117,23 62,00 128,17 68,00 115,85 39,00 81,67 40,00 112,19 45,00 104,94 42,00 98,92 41,00 121,36 39,00 82,46 36,00 85,69 36,00 TR1 98,12 38,40 TR2 TR2 102,01 40,00 TR3 TR3 104,03 36,00 D1 D1 82,93 43,20 D2 D2 87,34 Tên mẫu 40,00 D3 87,36 D3 41,60 X1 X1 95,05 38,40 X2 X2 99,57 37,60 X3 X3 84,58 38,40 T1 T1 88,72 40,00 T2 T2 97,07 41,60 T3 118,46 56,00 364,07 170,67 255,98 93,33 T3 TR1 272,79 90,67 TR2 401,29 126,67 254,84 96,00 TR3 381,86 176,00 202,50 90,67 D1 139,53 148,00 143,00 80,00 D2 157,83 162,67 134,01 93,33 D3 129,94 152,00 249,04 90,67 X1 273,88 105,33 246,14 70,67 X2 290,12 152,00 246,76 93,33 X3 308,63 113,33 202,50 132,00 T1 213,94 140,00 173,94 136,00 T2 202,50 138,67 218,89 141,33 T3 199,10 138,67 TR1 TR2 TR3 D1 D2 D3 X1 X2 X3 T1 T2 T3 56 329,99 250,00 TR1 795,58 280,00 708,11 220,00 TR2 402,82 268,00 395,45 212,00 TR3 382,80 300,00 189,44 188,00 D1 194,02 140,00 166,68 210,00 D2 304,64 136,00 209,74 202,00 D3 428,03 92,00 TR1 TR2 TR3 D1 D2 D3 10 340,87 178,00 X1 399,92 200,00 286,35 184,00 X2 554,46 232,00 411,99 180,00 X3 487,76 276,00 235,84 234,00 T1 431,07 268,00 225,24 132,00 T2 414,56 260,00 246,85 354,00 T3 382,80 272,00 640,99 320,00 TR1 701,75 360,00 529,67 348,00 TR2 729,44 344,00 863,17 300,00 TR3 900,82 400,00 194,02 120,00 D1 194,02 100,00 304,64 116,00 D2 153,84 112,00 314,65 112,00 D3 175,45 84,00 X1 X2 X3 T1 T2 T3 TR1 TR2 TR3 D1 D2 12 D3 14 621,58 316,00 X1 781,55 300,00 513,58 276,00 X2 758,02 312,00 637,62 280,00 X3 702,55 360,00 291,87 268,00 T1 291,87 216,00 414,56 224,00 T2 140,64 212,00 382,80 200,00 T3 301,41 208,00 791,93 360,00 TR1 710,73 484,00 639,40 480,00 TR2 639,40 524,00 X1 X2 X3 T1 T2 T3 16 TR1 18 TR2 57 749,93 360,00 TR3 712,46 400,00 101,22 120,00 D1 101,22 60,00 153,84 84,00 D2 153,84 64,00 175,45 76,00 D3 74,98 76,00 637,81 280,00 X1 598,57 400,00 653,20 360,00 X2 618,82 436,00 702,55 400,00 X3 644,55 400,00 291,87 192,00 T1 175,87 232,00 140,64 224,00 T2 140,64 192,00 197,01 200,00 T3 197,01 156,00 TR3 D1 D2 D3 X1 X2 X3 T1 T2 T3 58 Phụ lục Hàm lượng sắc tố tảo H pluvialis trung bình loại ánh sáng khác Ngày Astaxanthin (μg/l) Tên mẫu Chlo a (μg/l) TR 90,67 40,27 D 91,43 39,73 Ngày Tên mẫu Chlo a (μg/l) Astaxanthin (μg/l) TR 527,07 282,67 D 308.89 122,67 10 X 94,00 39,2 X 480,71 236 T 90,00 40 T 409,48 266,67 TR 123,89 62 TR 677,94 322,67 D 103,23 41,33 D 271,10 116 12 X 108,40 40,67 X 590,93 290,67 T 95,53 42,67 T 363,08 230,67 TR 261,20 93,33 TR 777,34 368 D 159,84 88 D 174,44 98,67 14 X 247,31 84,89 X 690,93 324 T 198,44 136,44 T 244,64 212 TR 382,41 157,78 TR 727,09 400 D 142,43 154,22 D 143,50 93,33 16 X 290,88 123,56 X 664,52 346,67 T 205,18 139,11 T 209,84 205,33 TR 477,85 227,33 TR 687,53 469,33 D 188,62 200 D 110,01 66,67 18 X 346,40 180,67 X 620,65 412 T 235,96 240 T 171,17 193,33 59 Phụ lục Mật độ trung bình tảo loại ánh sáng khác (x104) Ngày TR D X T Ngày TR D X T 8,00 8,70 8,30 8,00 10 42,33 21,00 37,00 33,00 13,33 11,00 11,67 11,00 12 52,00 17,00 41,67 29,00 20,00 13,67 16,33 14,67 14 55,33 14,33 46,00 20,67 32,33 21,33 23,00 22,33 16 46,67 11,33 42,67 17,67 37,00 26,00 29,67 29,67 18 38,67 9,33 33,67 12,67 Phụ lục Trọng lượng khơ trung bình tảo H pluvialis loại ánh sáng khác Ngày T n mẫu TLK (g/l) Ngày T n mẫu TLK (g/l) TR 0,304 10 TR 1,700 D 0,344 D 1,200 X 0,339 X 1,620 T 0,401 T 1,560 TR 0,667 TR 1,950 D 0,610 D 1,090 X 0,619 X 1,750 T 0,544 T 1,480 TR 0,738 TR 2,200 D 0,705 D 0,870 X 0,700 X 1,860 T 0,704 T 1,230 TR 1,187 TR 2,280 D 0,820 D 0,750 X 0,910 X 1,890 T 0,870 T 0,900 TR 1,540 TR 2,350 D 1,430 D 0,620 X 1,470 X 1,910 T 1,450 T 0,820 12 14 16 18 60 Phụ lục9 Hàm lượng astaxanthin trọng lượng khơ trung bình tảo H pluvialis cường độ chiếu sáng khác Ngày T n mẫu Astaxanthin (μg/l) A 22,4 A 33,6 A 63,2 A 105,6 A 158,4 10 A 174,4 12 A 278,4 14 A 324,8 ĐC 558,93 120 μmol/m /s 724,27 2 180 μmol/m /s 752,53 ĐC 628,27 120 μmol/m2/s 942,4 180 μmol/m2/s 360 ĐC 968,53 120 μmol/m2/s 1891,2 180 μmol/m2/s 96 ĐC 1073,6 120 μmol/m2/s 4618,67 180 μmol/m /s 61 TLK (g/l) 0,42 0,56 0,96 1,13 1,28 1,57 1,71 1,86 2,53 2,37 2,26 2,93 0,52 2,38 3,68 2,55 4,44 Phụ lục 10 Hàm lượng sắc tố trọng lượng khơ trung bình tảo H pluvialis thời gian chiếu sáng khác Ngày T n mẫu Chlo a (μg/l) Astaxanthin TLK (g/l) (μg/l) B 75,60 33,60 0,22 B 101,03 43,20 0,45 B 193,64 68,00 1,07 B 362,54 129,60 1,09 B 440,01 142,40 1,26 10 B 436,81 166,40 1,5 12 B 532,74 256,00 1,7 14 B 399,00 384,00 1,84 ĐC 431,54 453,33 1,92 16 421,79 464 2,02 24 460,94 568,53 2,59 ĐC 426,43 579,73 2,15 16 423,48 767,47 2,18 24 494,67 1409,6 2,68 ĐC 696,55 819,73 2,23 16 429,03 956,27 2,26 24 514,09 2086,4 2,84 ĐC 514,20 1156,8 2,24 16 419,94 1454,4 2,29 24 481,77 3076,8 3,72 62