Đồ án tốt nghiệp khảo sát khả năng kháng nấm sinh aflatoxin của bacillus spp (cs1b) và ứng dụng trong bảo quản nông sản

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP H o C hi h in M KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG NẤM SINH AFLATOXIN CỦA BACILLUS (CS1b) VÀ ỨNG DỤNG TRONG BẢO QUẢN NÔNG SẢN ity C rs ve ni U CÔNG NGHỆ SINH HỌC ity Ngành: of Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC y g lo no ch Te Giảng viên hướng dẫn : TS Nguyễn Hoài Hương Sinh viên thực MSSV: 1211100227 : Trịnh Thị Cẩm Tú Lớp: 12DSH02 TP Hồ Chí Minh, 2016 Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu , kết nêu đồ án trung thực chưa công bố công trình khác Tơi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực đồ án cảm ơn thơng tin trích dẫn Đồ án rõ nguồn gốc H Học viên thực đồ án o C hi M h in Trịnh Thị Cẩm Tú ity C ity rs ve ni U of gy lo no ch Te i Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Ban Giám Hiệu Trường Đại học Cơng nghệ TP Hồ Chí Minh tạo điều kiện thuận lợi để em học tập hồn thành tốt khóa học 2012 – 2016 Em xin cảm ơn thầy Khoa CƠNG NGHỆ SINH HỌC – THỰC PHẨM – H MÔI TRƯỜNG tận tình dạy truyền đạt cho em kiến thức quan trọng o tạo tảng kiến thức vững để hoàn thành tốt Đồ án sau ứng dụng C hi vào cơng việc thực tiễn M in Em xin cảm ơn thầy cô phụ trách phịng thí nghiệm Cơng nghệ sinh học, Khoa h CÔNG NGHỆ SINH HỌC – THỰC PHẨM – MÔI TRƯỜNG, Trường Đại học Cơng C ity nghệ TP Hồ Chí Minh tạo điều kiện tốt giúp cho em thực hoàn ni U thành tốt Đồ án tốt nghiệp ve Đặc biệt, em xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Hồi Hương tận tình hướng ity rs dẫn, giúp đỡ em suốt q trình thực để em hồn thành tốt Đồ án tốt nghiệp of Te Và em gửi lời cảm ơn đến bạn khóa tận tình hỗ trợ, giúp đỡ, lo no ch động viên khích lệ tinh thần , trải qua khó khăn suốt trình thực Đồ án tốt nghiệp gy Cuối cùng, xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến cha mẹ, gia đình bên cạnh, cỗ vũ động viên tinh thần, tạo điều kiện để hồn thành tốt Đồ án tốt nghiệp TP HCM, Ngày 19 tháng 08 năm 2016 Sinh viên thục Trịnh Thị Cẩm Tú ii Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG .vii DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ VÀ HÌNH ẢNH viii MỞ ĐẦU H CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU o C 1.1 Các nấm gây hại hạt hi 1.1.1 Tình trạng nhiễm nấm gây hại hạt ngũ cốc in M 1.1.2 Tình trạng nhiễm nấm trước thu hoạch h 1.1.3 Tình trạng nhiễm nấm sau thu hoạch ity C 1.1.4 Độc tố nấm 1.2 Các phương pháp kháng nấm gây bệnh cho nông sản 11 U ni 1.2.1 Kháng nấm phương pháp hóa học 11 rs ve 1.2.2 Kháng nấm phương pháp sinh học: 12 ity 1.3 Một số vi sinh vật điển hình có khả đối kháng nấm gây bệnh nông sản 15 of 1.3.1 Nấm Trichoderma spp 15 Te 1.3.2 Lactobacillus spp 17 ch 1.3.3 Bacillus subtilis spp 19 lo no 1.4 Cơ chế kháng nấm vi khuẩn 21 gy 1.4.1 Cấu tạo thành tế bào số nấm gây hại nông sản 21 1.4.2 Cơ chế tác động số enzyme ngoại bào 23 1.4.3 Cơ chế kháng nấm số hợp chất 25 1.4.4 Một số phương pháp thu enzyme hợp chất thứ cấp từ dịch nuôi cấy vi khuẩn 26 1.5 Một số nghiên cứu ứng dụng màng bao bảo quản hạt 30 1.6 Một số nghiên cứu nước ứng dụng hợp chất thứ cấp Bacillus spp 31 1.7 Một số nghiên cứu nước ứng dụng hợp chất thứ cấp Bacillus spp 32 iii Đồ án tốt nghiệp CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 33 2.2 Vật liệu – thiết bị - hóa chất 33 2.2.1 Vật liệu 33 2.2.2 Thiết bị dụng cụ 33 2.2.3 Môi trường - Hóa chất 34 H 2.3 Phương pháp nghiên cứu 35 o 2.3.1 Mục đích 35 C hi 2.3.2 Mục tiêu 35 in M 2.3.3 Nội dung 35 h 2.4 Bố trí thí nghiêm phương pháp 36 ity C 2.4.1 Khảo sát khả đối kháng nấm 36 ni U 2.4.2 Ứng dụng sản phẩm trao đổi chất VK có hoạt tính kháng nấm bảo quản hạt 47 ve CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 50 ity rs 3.1 Sản xuất sinh khối nấm Aspergillus sp CĐP1 làm cảm ứng hợp chất kháng nấm cho vi khuẩn Bacillus sp CS1b 50 of 3.2 Xác định thời gian nuôi cấy để khả đối kháng nấm CĐP1 cực đại 51 Te 3.2.1 Dịch nuôi cấy sau ly tâm 51 ch 3.2.2 Dịch nuôi cấy sau ly tâm xử lý nhiệt 53 gy lo no 3.2.3 So sánh khả đối kháng dịch nuôi cấy sau ly tâm với nấm CĐP1 dịch nuôi cấy CS1b thời gian nuôi cấy điều kiện xử lý nhiệt 53 3.3 Khảo sát khả đối kháng nấm protein kết tủa từ dịch nuôi cấy vi khuẩn CS1b sau ly tâm 55 3.3.1 Quy trình thu hồi protein kết tủa có hoạt tính sinh học 55 3.3.2 Định tính enzyme protease, chitinase, 𝜷- glucanase protein kết tủa 56 3.3.3Khảo sát khả đối protein kết tủa với CĐb1 59 3.4 Khảo sát khả đối kháng cao ethyl acetate với CĐb1 60 3.4.1 Quá trình thu cao EA 60 iv Đồ án tốt nghiệp 3.4.2 Khảo sát ức chế cao EA với nấm CĐP1 61 3.5 Khảo sát thành phần hóa học sản phẩm trao đổi chất vi khuẩn Bacillus sp CS1b có hoat tính kháng nấm 64 3.6 Ứng dụng sản phẩm trao đổi chất VK có hoạt tính kháng nấm bảo quản hạt 66 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 76 4.1 Kết luận 76 H o 4.2 Kiến nghị 76 C TÀI LIỆU KHAM KHẢO VÀ PHỤ LỤC 78 hi TÀI LIỆU KHAM KHẢO 78 M h in PHỤ LỤC ity C ity rs ve ni U of gy lo no ch Te v Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC VIẾT TẮT AFPA: Aspergillus flavus and parasiticus agar EA: ethyl acetate NA: Nutrient agar NB: Nutrient broth MT: H Môi trường PDA: Potato dextrose agar o HPLC: High pressure liquid chromatography C hi TLC: Thin layer chromatography h in VK: vi khuẩn M UV: Ultraviolet ity C ity rs ve ni U of gy lo no ch Te vi Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Ảnh hưởng aflatoxin có mặt thức ăn đến biểu bệnh lý vật nuôi Bảng 1.2: Các phương pháp khử nhiễm aflatoxin đường sinh học 13 Bảng 1.3: Các thành phần thành tế bào số nấm 22 Bảng 1.4: Cơ chế tác động mộ số hợp chất thứ cấp 26 H o Bảng 2.1: Bố trí thí nghiệm tạo màng bao hạt đậu phộng 47 C Bảng 3.1: Tỷ lệ đối kháng (%) dịch nuôi cấy VK CS1b với nấm CĐP1 53 hi M Bảng 3.2: Đường kính phân giải enzyme protein kết tủa ethanol .56 h in Bảng 3.3: Khả đối kháng với CĐP1 protein kết tủa ethanol 58 ity C Bảng 3.4: Tỷ lệ đối kháng (%) theo nồng độ cao ethyl acetate với nấm CĐP1……………………………………………………………………………….63 ni U Bảng 3.5: Định tính số chất có dịch sau ly tâm, protein kết tủa cao ethyl ve acetate 63 ity rs Bảng 3.6: Khả ức chế nấm mốc vi khuẩn phát triển hạt đậu phộng bao màng chitosan sản phẩm trao đổi chất CS1b 66 of Bảng 3.7:Kết ứng dụng hợp chất thứ cấp bảo quản đậu phộng……………… 71 gy lo no ch Te vii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ VÀ HÌNH ẢNH Hình 2.1: Sơ đồ khảo sát ảnh hưởng thời gian nuôi cấy lên khả kháng nấm CĐP1 dịch nuôi cấy CS1b sau ly tâm 36 Hình 2.2: Sơ đồ thu sinh khối nấm CĐP1 37 Hình 2.3: Quy trình thu hồi protein kết tủa ethanol 960 40 Hình 2.4: Quy trình thu hồi cao EA 42 H o Hình 2.5: Sơ đồ ứng dụng bảo quản hạt đậu phộng màng bao chitosan 46 C Hình 3.1: Nấm CĐP1 mơi trường PDB 49 hi M Hình 3.2: Kết đối kháng dịch sau ly tâm VK CS1b với nấm CĐP1 .51 h in Hình 3.3: Đồ thị biểu diễn khả đối kháng nấm CĐP1 dịch nuôi cấy CS1b ity C thời gian nuôi cấy điều kiện xử lý dịch sau ly tâm 54 Hình 3.4: Khả phân giải chitin protein kết tủa 56 U ni Hình 3.5: Khả phân giải casein protein kết tủa .57 rs ve Hình 3.6 Khả phân giải 𝛽 − 𝑔𝑢𝑐𝑎𝑛 protein kết tủa…………………… 57 ity Hình 3.7: Khả ức chế nấm mốc CĐP1 dung dịch protein kết tủa……… 59 of Hình 3.8: Khả đối kháng nấm CĐP1 cao EA…………………………….61 Te Hình 3.9: : Khả đối kháng nấm CĐP1 cao EA, 62 lo no ch Hình 3.10: Định tính số chất có dịch nuôi cấy ly tâm (i), protein kết tủa (ii),……………………………………………………… .64 gy Hình 3.11: Định tính lipid .65 Hình 3.12: Sơ đồ chuẩn bị sinh khối nấm CĐP1………………………………… 72 Hình 3.13: Quy trình cơng nghệ sản xuất cao EA………………………………….73 viii Đồ án tốt nghiệp MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Lương thực, thực phẩm đặc biệt nơng sản thóc, gạo, ngô, khoai, sắn, đậu, đỗ lạc nguồn lượng ni sống lồi người Vì thế, việc nghiên cứu để nâng cao chất lượng nông sản vấn đề tổ chức quốc tế H quan khoa học lương thực, thực phẩm giới đặc biệt quan tâm o C Việc nâng cao chất lượng nông sản bao gồm kỹ thuật bảo quản gìn giữ hi giá trị dinh dưỡng, ngăn chặn chất độc hại nhiễm nơng sản đó, đồng thời M in chế biến nơng sản thành thực phẩm có giá trị dinh dưỡng cao h phần cần thiết ngành nông nghiệp nước ta ity C Độc tố aflatoxin chủ yếu loài vi nấm Aspergillus flavus Aspergillus U ni parasiticus tạo ra, độc tố nguy hiểm thường nhiễm nông sản, gây độc rs ve cho người gia súc, gây tác dụng cấp tính, gây tổn thương gan (ung thư gan…), ity gây quái thai, gây đột biến,…thậm chí với liều lượng cao dẫn tới tử vong Trong of nhiều loại aflatoxin tự nhiên aflatoxin B1 coi chất độc nguy hiểm Te Mặc dù diện Aspergillus flavus lúc gắn liền với ch việc tồn aflatoxin với hàm lượng gây độc, thể nguy lớn lo no việc nhiễm aflatoxin gy Ở nước ta với đặc điểm khí hậu nhiệt đới nóng ẩm, độ ẩm khơng khí thường cao, thời vụ canh tác, thu hoạch thường rơi vào mùa mưa, phương tiện thu hoạch, phơi sấy nông sản kém, kho chứa không đảm bảo khô ráo, thoáng mát điều kiện thuận lợi cho nấm mốc phát triển gây nhiễm độc cho thực phẩm thức ăn chăn nuôi Khi phát triển lương thực nấm mốc sử dụng chất dinh dưỡng gây tổn thất lượng chất hạt Khơng thế, số lồi nấm mốc phát triển sinh loại độc tố khác gọi chung mycotoxin Đồ án tốt nghiệp trình, chuẩn bị sinh khối nấm CĐP1 trích ly dịch ni cấy sau ly tâm VK CS1b H o C hi h in M ity C ity rs ve ni U of gy lo no ch Te Hình 3.12: Sơ đồ chuẩn bị sinh khối nấm CĐP1 74 Đồ án tốt nghiệp Môi trường NB1(hấp khử Sinh khối CĐP1 1% trùng 121 C, 15phút) Làm nguội (30 C) Cấy giống CS1b (1%) H Ni cấy (150 vịng/phút 24 giờ, 30 0C) o C hi Ly tâm (4000v/p, 20 phút) h in M ity C Dịch sau ly tâm ni U Pha hữu cịn nước of Na2SO4 ity rs ve Trích ly với ethyl acetate Tỉ lệ 1:1 lập lại lần DMSO % Bay 500C thu cắn Xác định khối lượng (mg) Cao EA DMSO 5% (mg/ml) 75 gy Pha hữu lo no ch Te Lọc Đồ án tốt nghiệp CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 4.1 Kết luận Sau khảo sát khả đối kháng với nấm CĐP1 dịch sau ly tâm từ canh trường nuôi cấy VK CS1b thời gian điều kiện xử lý nhiệt thời gian 24 nuôi cấy không xử lý nhiệt cho kết đối kháng tốt 60,1 % H Trong protein kết tủa từa dịch nuôi cấy sau ly tâm 24 có hoạt tính enzyme o protease, chitinase khơng cịn beta – glucanase Nhưng khả đối kháng với C hi nấm CĐP1 chưa xác định hoạt tính enzyme có protein kết tủa h in M hay không C Khả đối kháng cao EA với nấm CĐP1 phương pháp đục lỗ thạch cho ity tỷ lệ gần với đối chứng DMSO %, phương pháp sử dụng cao EA đun 70 bổ sung 10 % vào mơi trường PDA cho kết cao EA thu dịch nuôi ni U 0C ve cấy sau 24 có khả làm màu bào tử CĐP1 rõ rệt Trong cao ethyl ity rs acetate lipid, nhiên lipid không bổ sung vào mơi trường nên sản phẩm vi khuẩn of Te Kết khảo sát ảnh hưởng sản phẩm trao đổi chất vi khuẩn lên phát triển ch nấm hạt đậu phộng tạo màng bao với chitosan 0,2 % cho thấy sử lo no dụng cao ethyl acetate để ngăn nảy mầm nấm CĐP1 cấy vào đậu phộng với mật độ 102 bào tử/g ngăn nhiễm nấm mốc vi khuẩn từ ngồi mơi trường đến gy sau 12 ngày bảo quản 4.2 Kiến nghị Qua khảo sát thấy cao EA thực có tiềm ức chế nấm mốc in vitro in vivo Nhưng hợp chất có cao EA có khả ức chế nấm mốc chưa xác định Vì chúng tơi kiến nghị: 76 Đồ án tốt nghiệp Tiến hành phương pháp định tính HPLC/MS để xác định rõ chất có cao EA Khảo sát dung mơi trích ly khác để thu hợp chất kháng nấm tốt Ứng dụng quy trình cơng nghệ vào sản xuất cao EA vào sử dụng cao EA để bảo H quản nông sản o C hi h in M ity C ity rs ve ni U of gy lo no ch Te 77 Đồ án tốt nghiệp TÀI LIỆU KHAM KHẢO VÀ PHỤ LỤC TÀI LIỆU KHAM KHẢO Tài liệu tiếng việt [1] Dương Thanh Liêm, Bùi Huy Như Phúc, Dương Duy Đồng, (2002) Thức ăn dinh dưỡng động vật NXB nông nghiệp H o [2] Đậu Ngọc Hào, Lê Thị Ngọc Diệp (2003) Nấm mốc độc tố aflatoxin thức C ăn chăn nuôi NXB nông nghiệp hi in M [3] Đỗ Tuyết Mai Nguyễn Văn Hương (2015) “Phân lập tuyển chọn vi khuẩn h Bacillus spp ứng dụng bảo quản nông sản” Luận văn tốt nghiệp Đại học Công Nghệ ity C TP.HCM ni U [4] Huỳnh Văn Phục (2006) Khảo sát tính đối kháng Trichoderma spp ity rs bệnh thối thân bắp ve Rhizoctonia solani Kühn lúa bắp Bước đầu khảo sát Fusarium oxysporum gây of [5] Lê Thanh Huân (2011) Phân lập, tuyển chọn đánh giá tiềm sử dụng ch Te proboitic chủng Lactobacillus phân lập cá chim vây vàng [6] Phạm Hoàng Thái (2007) Phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis từ đất, khảo sát khả lo no ức chế sản sinh aflatoxin chủng phân lập Luận án tốt nghiệp Đại gy học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh [7] Bùi Thị Hồng Gấm (2009) Thu nhận tinh chế enzyme Luận án tốt nghiệp Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh [8] Nguyễn Thanh Nhật (2015) Ứng dụng chitosan sản xuất từ chitin thu hồi phương pháp lên men lactic Luận văn tốt nghiệp trường Đại học Công Nghệ TP.HCM 78 Đồ án tốt nghiệp Tài liệu tiếng anh [1] Christensen, R.B.A Hartlay, R D, and Okelley, J Toxicity va fluorescence properties of the aflatoxin, Nature (lond), 200:1101 [2] Mahmoud A Ghannoum, and Louis B Rice(1999) Antifungal Agents: Mode of H o Action, Mechanisms of Resistance, and Correlation of These Mechanisms with C Bacterial Resistance hi in M [3] Anthony J De Lucca and Thomas J Walsh (1999) Antifungal peptides: Novel h therapeutic compounds against Emerging Pathogens C ity [4] Muhammad Abdul Mojid Mondol, Hee Jae Shin, and Mohammad Tofazzal Islam rs ve and Biological Activity ni U (2013) Diversity of Secondary Metabolites from Marine Bacillus Species: Chemistry [5] Ting Zhang, Zhi-Qi Shi, Liang-Bin Hu, Luo-Gen Cheng, Fei Wang (2007) ity Antifungal compounds from Bacillus subtilis B-FS06m inhibitingthe growth of of Aspergillus flavus World J MicrobiolBiotechnol (2008) 24:783–788, DOI Te lo no ch 10.1007/s11274-007-9533-1 [6] Md Rezuanul Islam ctv (2012) Isolation and Identification of Antifungal gy Compounds from Bacillus subtilis C9 Inhibiting the Growth of Plant Pathogenic Fungi [7] Mohsen Farzaneh ctv (2016) Inhibition of the Aspergillus flavus Growth and Aflatoxin B1 Contamination on Pistachio Nut by Fengycin and Surfactin-Producing Bacillus subtilis 79 UTBSP Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC PHỤ LỤC A: THÀNH PHẦN MƠI TRƯỜNG VÀ TÍNH CHẤT VẬT LIỆU SỬ DỤNG TRONG CÁC THÍ NGHIỆM A1 Thành phần môi trường Potato Dextrose Agar (PDA) H o C Môi trường PDA 20g Agar h in 20g M hi D – glucose Dịch chiết khoai tây 1000ml ity C ni U A2 Thành phần môi trường Potato Dextrose Broth (PDB) 1000ml of Dịch chiết khoai tây 20g ity D – glucose rs ve Môi trường PDB ch Te lo no Lưu ý: - Dịch chiết khoai tây: 200g khoai tây thái lát, cho thêm vào 1000 ml đun sôi 30 gy phút, thu dịch chiết định mức lên 1000 ml Bảo quản tủ mát chưa sử dụng - Khi ni cấy nấm mốc, bổ sung Chloramphenicol vào thành phần môi trường với tỉ lệ 0.02% Đồ án tốt nghiệp A3 Thành phần môi trường Nutrient Broth (NB) Môi trường NB H o 5g Meat extract 3g NaCl 5g Nước cất 1000ml C Peptone hi M h in A Thành phần môi trường Nutrient Broth_1 (NB1) Peptone 1.5g ni 2.5g ve NaCl 2.5g U Meat extract ity C Môi trường NB1 1000ml ity rs Nước cất of Môi trường Casein 15g Casein 10g Đệm phosphate (pH=7) 1000ml gy Agar lo no ch Te A Thành phần môi trường Casein 1% Đồ án tốt nghiệp A Thành phần môi trƣờng Chitin 1% Môi trường Chitin Agar 15g Chitin 10g Đệm phosphate (pH=7) 1000ml H o C hi Lưu ý: M in - Huyền phù hóa chitin: lấy 10 g chitin hòa vào 100ml HCl đậm đặc Khuấy h 10 phút Sau cho từ từ nước cất làm lạnh đến 500ml, chitin huyền phù có C ity màu trắng sữa Để qua đêm ngăn mát tủ lạnh Huyền phù rửa cách ni U ly tâm (4000 vòng/10 phút) nhiều lần với dung dich có pH = đến huyền phù đạt rs ve pH = Bảo quản huyền phù tủ mát ity A Thành phần môi trường β - glucan 1% of Môi trường β – glucan Te Agar 25g ch β - glucan Đệm phosphate (pH=7) lo no 10g 1000ml gy A Tình chất chitosan cơng ty Hùng Tiến Cần Thơ Độ hòa tan 1% acetic acid : (87,6 0,72) % Khối lượng phân tử : (576350 3835,34) Da Độ deacetyl hóa: (97,4 0,24) % Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC B: PHỤ LỤC HÌNH ẢNH H o C hi h in M ity C U ve ni Hình B.1: Kết thử nghiệm khả bảo quản nước cất, A: ngày, B: ngày, C: ngày, D: ngày, E: 12 ngày ity rs of gy lo no ch Te Hình B.2: Kết thử nghiệm khả bảo quản chitoosan, A: ngày, B: ngày, C: ngày, D: ngày, E: 12 ngày Đồ án tốt nghiệp H o C hi h in M ity C Hình B.3: Kết thử nghiệm khả bảo quản DMSO %, A: ngày, B: ngày, C: ngày, D: ngày, E: 12 ngày ity rs ve ni U of gy lo no ch Te Hình B.4: Kết thử nghiệm khả bảo quản Nystatin, A: ngày, B: ngày, C: ngày, D: ngày, E: 12 ngày Đồ án tốt nghiệp H o C hi h in M C ity Hình B.5: Kết thử nghiệm khả bảo quản sinh khối CS1b NB1, A: ity rs ve ni U ngày, B: ngày, C: ngày, D: ngày, E: 12 ngày of gy lo no ch Te Hình B.6: Kết thử nghiệm khả bảo quản sinh khối CS1b NB, A: ngày, B: ngày, C: ngày, D: ngày, E: 12 ngày Đồ án tốt nghiệp H o C hi h in M ity C Hình B.7: Kết thử nghiệm khả bảo quản dịch sau ly tâm, A: ngày, B: ity rs ve ni U ngày, C: ngày, D: ngày, E: 12 ngày of gy lo no ch Te Hình B.8: Kết thử nghiệm khả bảo quản dịch sau ly tâm xử lý 100 0C, A: ngày, B: ngày, C: ngày, D: ngày, E: 12 ngày Đồ án tốt nghiệp H o C hi h in M ity C Hình B.9: Kết thử nghiệm khả bảo quản canh trường CS1b NB, A: U ity rs ve ni ngày, B: ngày, C: ngày, D: ngày, E: 12 ngày of gy lo no ch Te Hình B.10: Kết thử nghiệm khả bảo quản canh trường CS1b NB1, A: ngày, B: ngày, C: ngày, D: ngày, E: 12 ngày Đồ án tốt nghiệp H o C hi h in M ity C Hình B.11: Kết thử nghiệm khả bảo quản cao EA, A: ngày, B: ngày, C: ngày, D: ngày, E: 12 ngày ity rs ve ni U of gy lo no ch Te