Đồ án tốt nghiệp khảo sát khả năng kháng oxy hóa của gạo mầm từ gạo nương đỏ tây nguyên ở hai điều kiện ủ khác nhau

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP u iệ il Tà KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG OXY HÓA CỦA GẠO MẦM TỪ GẠO NƯƠNG ĐỎ TÂY NGUYÊN Ở HAI ĐIỀU KIỆN Ủ KHÁC NHAU TE U H CÔNG NGHỆ SINH HỌC CH Ngành: Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : Th.S Nguyễn Thị Ngọc Yến Sinh viên thực MSSV: 1151110384 : Phan Thị Tuyết Trinh Lớp: 11DSH01 TP Hồ Chí Minh, 2015 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu thân Các số liệu, kết trình bày luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình luận văn trước Sinh viên thưc Phan Thị Tuyết Trinh u iệ il Tà CH TE U H LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn sâu sắc đến ThS Nguyễn Thị Ngọc Yến tận tình hướng dẫn, quan tâm, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để em hồn thành luận văn Em xin chân thành biết ơn tất quý thầy cô khoa Công nghệ sinh họcThực phẩm- Môi trường truyền đạt cho em kiến thức vơ hữu ích q báu thời gian học tập rèn luyện trường Xin gửi lời cảm ơn đến tạp thể cán bộ, anh chị bạn Phịng thí nghệm- Trường Đại học Công nghệ TP.HCM Cuối xin cảm tạ biết ơn ba mẹ nuôi dưỡng, bảo bọc tạo điều kiện thuận lợi để học tập có thành ngày hơm u iệ il Tà CH TE U H Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iii DANH MỤC CÁC BẢNG iv DANH MỤC CÁC HÌNH v MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1.Tổng quan lúa 1.1.1 Giới thiệu lúa 1.1.2 Cấu tạo chung hạt lúa 1.1.3 Thành phần hóa học lúa gạo 1.1.4 Giá trị dinh dưỡng gạo 1.2 Tổng quan gạo lứt 1.2.1 Giới thiệu chung Tà 1.2.2 Cấu tạo 1.2.3 Thành phần hóa học gạo lứt 10 il 1.2.4 Giá trị dinh dưỡng 11 iệ 1.3 Tổng quan gạo mầm 13 u 1.3.1 Giới thiệu 13 H U 1.3.2 Các công đoạn quan trọng công nghệ sản xuất gạo mầm 14 TE 1.3.3 Thành phần đặc tính gạo mầm 16 CH 1.3.4 Các nghiên cứu gạo mầm 19 1.3.5 Ứng dụng gạo mầm 20 1.4 Các chất kháng oxy hóa 21 1.4.1 Định nghĩa 21 1.4.2 Phân loại 22 1.4.3 Đăc điểm chất kháng oxy hóa 22 1.4.4 Cơ chế chất kháng oxy hóa 23 1.4.5 Polyphenol 23 1.4.6 Anthocyanin 26 1.4.7 Vitamin E 28 1.4.8 Các phương pháp xác định khả kháng oxy hóa (Michael Antolovich cộng sự, 2002) 30 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 35 2.1 Vật liệu nghiên cứu 36 2.1.1 Địa điểm nghiên cứu 36 2.1.2 Đối tượng nghiên cứu 36 i Đồ án tốt nghiệp 2.1.3 Thiết bị dụng cụ 36 2.1.4 Hóa Chất 36 2.2 Phương pháp nghiên cứu 37 2.2.1 Phương pháp ngâm 37 2.2.2 Phương pháp ủ 37 2.2.3 Phương pháp chuẩn bị dịch trích 37 2.2.4 Phương pháp sấy đến khối lượng không đổi 40 2.2.5 Phương pháp xác định hàm lượng monomeric anthocyanin 41 2.2.6 Phương pháp xác định tổng hàm lượng acid phenolic 42 2.2.7 Phương pháp xác định khả kháng oxy hóa 43 2.2.8 Phương pháp xử lý số liệu 44 2.3 Bố trí thí nghiệm 45 2.3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát thời gian ngâm để gạo lứt hút nước đạt độ ẩm thích hợp 45 Tà Độ ẩm hạt gạo sau ngâm đạt 30-31% 45 iệ il 2.3.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát hàm lượng anthocyanin gạo mầm điều kiện nảy mầm khác 45 u 2.3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát hàm lượng polyphenol gạo mầm điều kiện nảy mầm khác 46 H TE U 2.3.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát khả kháng oxy hóa gạo mầm điều kiện nảy mầm khác 47 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 48 CH 3.1 Kết khảo sát thời gian ngâm để gạo lứt hút nước đạt độ ẩm thích hợp (30-31%) 48 3.2 Hàm lượng anthocyanin 49 3.3 Hàm lượng Polyphenol 50 3.3.1 Kết xây dựng đường chuẩn Acid Gallic 50 3.3.2 Hàm lượng Polyphenol điều kiện nhiệt độ ánh sáng khác 51 3.4 Khả kháng oxy hóa 52 3.4.1 Xác định giá trị IC50 53 3.5 Hàm lượng GABA 54 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 56 4.1 Kết luận 56 4.2 Kiến nghị 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 PHỤ LỤC ii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT GABA : γ-aminobutyric acid DPPH : 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl BHT : Butylated hydroxytoluene Tp.HCM : Thành phố Hồ Chí Minh H : Giờ u iệ il Tà CH TE U H iii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 : Tỷ lệ thành phần hạt thóc (%khối lượng hạt) Bảng 1.2: Thành phần hóa học hạt gạo Bảng 1.3: Thành phần hóa học lúa gạo độ ẩm 14% Bảng 1.4: Hàm lượng vitamin muối khoáng lúa gạo độ ẩm 14% Bảng 1.5: Giá trị dinh dưỡng số gạo có màu khác giới Bảng 1.6: Thành phần hóa học (tính theo trọng lượng khơ) gạo lứt, gạo xát cám 10 Bảng 1.7: Gía trị dinh dưỡng gạo lứt 11 Bảng 1.8 : Hàm lượng dinh dưỡng gạo mầm 16 Bảng 1.9: Tóm tắt đặc điểm phương pháp đo khả chống oxy hóa 34 Tà Bảng 2.1: Bảng pha nồng độ quy trình thử hoạt tính ức chế gốc tự DPPH il (Đối với mẫu cám, gạo, cơm) 38 iệ Bảng 2.2: Bảng pha nồng độ quy trình thử hoạt tính ức chế gốc tự DPPH 38 u Bảng 2.3:Bảng pha nồng độ xây dựng dãy chuẩn acid gallic 40 U H Bảng 3.1: Sự thay đổi độ ẩm hạt gạo qua khoảng thời gian ngâm 49 TE Bảng 3.2: Nồng độ đường chuẩn acid gallic 50 CH Bảng 3.3: Hàm lượng GABA số mẫu gạo mầm 54 iv Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cấu tạo hạt lúa Hình 1.2 Sơ đồ phân loại hợp chất polyphenol 26 Hình 1.3 Cấu trúc anthocyanin 27 Hình 1.4 Biến đổi cấu trúc anthocyanin theo giá trị pH khác 29 Hình 1.5 Cấu trúc vitamin E 30 Hình 2.1 Sơ đồ nghiên cứu 35 Hình 2.2: Quy trình thử hoạt tính ức chế gốc tự DPPH 39 Hình 2.3 Quy trình xây dựng đường chuẩn acid gallic 40 Hình 2.4 Cơng thức cấu tạo acid gallic 43 Hình 3.1 Sự thay đổi độ ẩm hạt gạo qua khoảng thời gian ngâm 48 Tà Hình 3.2.Hàm lượng anthocyanin gạo lứt nảy mầm điều kiện ánh sáng il nhiệt độ khác 49 iệ Hình 3.3 Đường chuẩn acid gallic 50 u Hình 3.4 Hàm lượng polyphenol tổng gạo lứt nảy mầm điều kiện ánh U H sáng nhiệt độ khác 51 TE Hình 3.5 Khả bắt gốc tự DPPH gạo mầm ủ điều kiện sáng CH nhiệt độ khác 52 Hình 3.6 Đường biểu diễn khả kháng oxy hóa 54 Hình 3.7 Hàm lượng GABA số mẫu gạo mầm 55 v Đồ án tốt nghiệp MỞ ĐẦU Từ lâu nay, vấn đề dinh dưỡng sức khỏe mối quan tâm người Theo xu hướng sống ngày nay, người ta có thời gian để chăm sóc cho sức khỏe, đồng thời bệnh thời đại có chiều hướng gia tăng Do việc sử dụng loại thực phẩm có thành phần dinh dưỡng, dược liệu cần thiết nhằm bổ sung hỗ trợ thể Trong loại thực phẩm từ nhiều nguồn nguyên liệu khác gạo nguồn nguyên liệu tự nhiên quan trọng thiếu cho nửa dân số giới, cơm nấu từ gạo dễ tiêu hóa, lượng cung cấp nhanh chóng tới quan giúp thể đủ lượng dự trữ để làm việc Gạo lứt nguồn thực phẩm giàu dinh dưỡng so với gạo xát trắng, số thành phần Tà gạo lứt cịn có thễ ngăn ngừa điều trị số bệnh, cơm gạo lứt dần trở iệ il nên phổ biến bữa ăn nhiều nhà Tuy nhiên gạo lứt hấp u dẫn thởi gian nấu lâu, cơm gạo lứt có cấu trúc cứng vị không hấp dẫn H cơm gạo trắng Quá trình nảy mầm gạo lứt phương pháp cải thiện chất lượng TE U gạo lứt, cơm gạo lứt mềm Q trình cịn làm thay đổi quan trọng thành phần dinh dưỡng như: hàm lượng chất xơ, vitamin, khoáng hàm lượng γ- CH aminobutyric acid… sau nảy mầm hàm lượng số chất sinh học tăng lên Khả chống oxy hóa gạo mầm giá trị quan trọng ngành dược thực phẩm chức năng, với xu hướng sử dụng sản phẩm có nguồn gốc tự nhiên ngày tăng, an toàn cho sức khỏe đem lại hiệu cao Việc nghiên cứu, phát triển đặc tính tuyệt vời gạo mầm nhà khoa học giới nước quan tâm Có nhiều cơng trình nghiên cứu từ trước đến góp phần nâng cao chất lượng sống cho người Với sở khoa học ý nghĩa thực tiễn trên, tiến hành thực đề tài “Khảo sát khả kháng oxy hóa gạo mầm từ gạo nương đỏ Tây Nguyên hai điều kiện ủ khác nhau” Đề tài thực Phịng thí nghiệm, Đồ án tốt nghiệp Khoa Công nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trường, Trường Đại học Công nghệ Tp.HCM u iệ il Tà CH TE U H Đồ án tốt nghiệp coloured rice As J Food Ag-Ind.Pincemail J., Dafraigne, Meurisse M et Limet R., 1998 Antioxydants et prévention des maladies cardiovasculaires, lere partie: la vitamine C Medi-Sphere 33 Niki E., Noguchi N., Tsuchihashi H and Gotoh N., 1995 Interaction among vitamin C, vitamin E, and beta-carotene American Journal of Nutrition, 62 : p1322-1326 34 Ridge, I., 1991 The regulation of plant growth, In I Ridge (Ed) Plant hysiology p 282-333 London: Hodder and Stoughton 35 Shahidi, F and Naczk, M., 2004 Biosynthesis, classification and nomenclature of phenolics in food and nutraceuticals In: Phenolics in food and nutraceuticals, F Shahidi and M Naczk CRC Press, New York 36 Ueda Y., Doi T., Nagatomo K., Tokumaru J., Takaki M., Willmore L.J (2007), Tà “Effect of levetiracetam on molecular regulation of hippocampal glutamate and il iệ GABA transporters in rats with chronic seizures in-duced by amygdalar FeCl3 u injection”, Brain Research, 1151 55-61 H 37 Vansant G., Pincemail J., Defraigne J.O., Van Camp J., Govens P et Hercberg U TE S., 2004 Antioxidants et alimentation Instiut Danone CH 38 Wrolstad, R E., Durst, R W., Giusti, M M., and Rodriguez-Saona, L E., 2002 Analysis of anthocyanins in nutraceuticals, In Ch In Quality Management of Nutraceuticals., C T Ho, and Q Y Zheng, eds Washington D.C.: Am Chem Soc 39 You-Tung Lin, Cheng-Cheng Pao, Shwu-Tzy Wu, and Chi-Yue Chang, 2015 Effect of Different Germination Conditions on Antioxidative Properties and Bioactive Compounds of Germinated Brown Rice TÀI LIỆU TỪ WEB 40 Http://www.fao.org/docrep/t0567e/T0567E0c.htm#Chapter%204%20Nutritiona l%20value%20of%20rice%20and%20rice%20diets 41 http://www.umm.edu/altmed/articles/red-yearice-000323.htm 60 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC Phụ lục A:Độ ẩm Thời gian ngâm 0h 2h m0 m1 m2 W% 22.8751 27.9782 27.3965 11.40 22.8513 27.9544 27.3502 11.84 22.2543 27.3574 26.8088 10.75 21.8753 27.9636 26.3000 27.32 21.2034 27.2917 25.6491 26.98 21.8298 27.9181 26.2633 27.18 20.728 26.997 25.2373 28.07 20.6133 26.8823 25.1195 28.12 20.8385 25.3566 27.93 26.6893 30.23 28.4367 26.6339 29.33 30.31 28.5473 22.29 22.9402 29.0869 22.8749 22.838 29.313 22.6377 27.2238 29.3499 27.3461 30.95 27.3200 30.78 29.1127 27.1042 31.02 21.8786 28.3642 26.3226 31.48 21.7269 28.2125 26.1858 31.25 21.2947 27.7803 25.7185 31.79 20.7256 27.3493 25.2351 31.92 20.983 27.6077 25.5196 31.52 20.2874 26.9121 24.8088 31.75 CH TE U 12h 22.4006 H 10h u 8h 27.1075 iệ 6h il Tà 4h Lần Đồ án tốt nghiệp Sự thay đổi độ ẩm hạt gạo qua khoảng thời gian ngâm Thời gian ngâm Độ ẩm (W%) 0h 11.33a ± 0.548 2h 27.16b ± 0.171 4h 28.04c ± 0.098 6h 29.96d ± 0.544 8h 30.92e ± 0.123 10h 31.51f± 0.271 12h 31.73f ± 0.201 Summary Statistics for Do Am Minimum Maximum Range Stnd skewness il Tà Thoi Count Average Standard Coeff of Gian deviation variation 11.33 10.75 11.84 1.09 -0.399571 10h 31.5067 0.270986 0.860091% 31.25 31.79 0.54 0.310094 12h 31.73 0.200749 0.632678% 31.52 31.92 0.4 -0.313865 2h 27.16 0.17088 27.32 0.34 -0.367321 4h 28.04 0.0984886 0.351243% 27.93 28.12 0.19 -0.879314 6h 29.9567 0.544181 1.81656% 29.33 30.31 0.98 -1.19503 8h 30.9167 0.123423 0.399213% 30.78 31.02 0.24 -0.796685 27.2343 6.85799 31.92 21.17 -3.64487 u TE U H 0.629161% 26.98 CH Total 21 0.548361 4.8399% iệ 0h 25.1815% 10.75 ANOVA Table for Do Am by Thoi Gian Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 939.111 156.518 Within groups 1.5294 14 0.109243 Total (Corr.) 940.64 20 1432.76 P-Value 0.0000 Đồ án tốt nghiệp Multiple Range Tests for Do Am by Thoi Gian Method: 95.0 percent LSD Thoi Gian Count Mean Homogeneous Groups 0h 11.33 X 2h 27.16 X 4h 28.04 X 6h 29.957 X 8h 30.917 X 10h 31.507 X 12h Tà X 31.73 iệ il u Phụ lục B: Hàm lượng anthocyanin U H Cách tiến hành CH - Pha 0.025M KCl buffer, pH 1.0 TE Chuần bị dung dịch đệm pH, pha dung môi Cân 1.86g KCl cho vào becher 1l, thêm nước cất đến 980 ml Đo pH chỉnh pH 1.0 HCl( ~6.3 ml) Sau đó, cho vào bình định mức ll nước cất - Pha 0.4M CH3COONa buffer pH 4.5 Cân 54.43g CH3COONa.3H2O cho vào bercher 1l thêm nước cất khoảng 960 ml Đo pH chỉnh pH 4.5 HCl(~ 20ml) Sau đó, định mức 1l nước cất - Pha dung môi EtOH:HCl 1%( 85:15) Pha HCl 1% từ HClđđ 37%(d~1.19g/ml) 10ml dd HClđđ + 430 ml nước cất 425 EtOH 96% +75 HCl 1% ta 500 ml dung môi HCl 1M(đđ 1% ~3.5%) 84.3 ml HCl 37% định mức 1000ml Sau lắc Đồ án tốt nghiệp Ánh sáng pH=1 Anthocyanin Lần Tổng 520nm 700nm 520nm 700nm (mg/100g) Nhiệt độ ủ (OC) Gạo lứt 10 20 0.786 0.382 1.001 0.635 2.15 0.748 0.382 0.967 0.642 2.32 0.762 0.381 0.978 0.64 2.44 0.639 0.29 0.832 0.492 0.38 0.64 0.301 0.823 0.493 0.38 0.625 0.292 0.814 0.495 0.60 0.955 0.479 1.222 0.752 0.26 0.94 0.48 1.215 0.765 0.43 0.947 0.519 1.195 0.775 0.34 il Tà 50% sáng 50% tối 0.666 0.323 1.104 0.768 0.30 0.674 0.333 1.108 0.772 0.21 0.654 0.325 1.098 0.775 0.26 0.517 0.2 0.688 0.38 0.508 CH 0.38 0.203 0.68 0.386 0.47 0.497 0.201 0.684 0.398 0.43 0.898 0.485 1.102 0.698 0.38 0.863 0.487 1.055 0.69 0.47 0.859 0.484 1.035 0.672 0.51 0.666 0.323 1.104 0.768 0.30 0.674 0.333 1.108 0.772 0.21 0.654 0.325 1.098 0.775 0.26 u H iệ 30 20 30 TE 100% Tối U 10 pH=4.5 Đồ án tốt nghiệp Bảng tổng hợp hàm lượng anthocyanin gạo lứt nảy mầm điều kiện ánh sáng nhiệt độ ủ khác Nhiệt độ ủ (OC) 10 20 30 50% sáng 100% 50% sáng 100% 50% sáng 100% 50% tối sáng 50% tối sáng 50% tối sáng Anthocyanin 0.45c ± 0.47c ± 0.34ab ± 0.38ab ± 0.26a ± 0.28a ± (mg/100g) 0.13 0.04 0.08 0.04 0.04 0.08 Gạo lứt 2.30d ± 0.15 Ánh sáng Summary Statistics for Anthocyanin Count Average Standard deviation Coeff of variation 2.30333 0.145717 6.32634% 2.15 0.453333 0.127017 3 0.343333 0.085049 0.256667 0.0450925 17.5685% 0.21 0.426667 0.0450925 10.5686% 0.38 Total Minimum Maximum Range Stnd skewness 0.29 -0.359185 0.6 0.22 1.22474 0.43 0.17 0.12452 0.3 0.09 -0.233933 0.47 0.09 -0.233933 0.453333 0.0665833 14.6875% 0.38 0.51 0.13 -0.746586 0.246667 0.0450925 17.5685% 0.21 0.3 0.09 -0.233933 21 0.641905 0.703617 2.44 2.23 3.98596 iệ il 2.44 TE Tà Nghiem Thuc 28.0185% 0.38 u U H 24.7716% 0.26 CH 109.614% 0.21 ANOVA Table for Anthocyanin by Nghiem Thuc Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 9.79126 1.63188 Within groups 0.110267 14 0.00787619 Total (Corr.) 9.90152 20 207.19 P-Value 0.0000 Đồ án tốt nghiệp Multiple Range Tests for Anthocyanin by Nghiem Thuc Method: 95.0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups 0.246667 X 0.256667 X 3 0.343333 XX 0.426667 X 0.453333 X 0.453333 2.30333 Tà Nghiem Thuc X il u iệ X TE U H Phụ lục C: Hàm lượng Polyphenol Pha loãng CH Lấy ml dịch chiết cho vào ống nghiệm chứa ml nước cất Dịch pha loãng sử dụng để xác định hàm lượng polyphenol tổng số Xây dựng đường chuẩn acid gallic Đường chuần acid gallic xây dựng khoảng nồng độ từ 10 đến 50 µg/ml (dung dịch sử dụng ngày) Bảng: Dung dịch chuẩn axit gallic pha lỗng Thể tích dung dịch gốc Nồng độ chất chuẩn pha loãng Dung dịch chuẩn axit gallic axit gallic ml µg/ml A 1,0 10 B 2,0 20 C 3,0 30 D 4,0 40 Đồ án tốt nghiệp E 5,0 50 Xác định hàm lượng polyphenol Dùng pipette chuyển ml nước cất vào ống nghiệm 10 ml (nhắc lại lần)-mẫu trắng Dùng pipette chuyển ml dịch chiết mẫu pha loãng vào ống nghiệm 10 ml (nhắc lại lần) – mẫu phân tích Dùng pipette cho ml dung dịch Folin-ciocalteu 10% vào ống nghiệm lắc Sau cho Folin-ciocalteu phút, tiếp tục cho ml NaCO3 7.5% vào ống nghiệm, nút miệng ống, lắc Để ống phản ứng nhiệt độ phịng 60 phút sau đo mậ quang 725 nm (cuvet 10 mm, đối chứng nước cất) Tính kết Tà 𝑇= u iệ il Polyphenol tổng số dịch chiết tính theo cơng thức sau : TE T : Polyphenol tổng số (GAE/g) U H Trong : 𝐶 𝑉 𝑀 CH C : Nồng độ dịch chiết tính từ đường chuẩn acid gallic (mg/ml) V : Thể tích dịch chiết (ml) M : Khối lượng dịch chiết (g) Bảng tổng hợp hàm lượng polyphenol tổng gạo lứt nảy mầm điều kiện ánh sáng nhiệt độ khác Nhiệt độ ủ (OC) 10 20 30 50% sáng 100% 50% sáng 100% 50% sáng 100% 50% tối sáng 50% tối sáng 50% tối sáng Polyphenol tổng 0.76e± 0.59d± 0.57d± 0.62d± (mg GEA/g) 0.03 0.06 0.02 0.02 Control 0.18a± 0.03 Ánh sáng c 0.43 ± 0.04 0.29b± 0.06 Đồ án tốt nghiệp Summary Statistics for Polyphenol Nghiem Count Average Standard Thuc deviation Coeff of variation Minimum Maximum Range Stnd skewness 0.181367 0.027801 15.3286% 0.1501 0.2033 0.0532 -0.947853 0.764233 0.0323444 4.23227% 0.7378 0.8003 0.0625 0.86364 3 0.568033 0.0211925 3.73086% 0.5484 0.5905 0.0421 0.417811 0.432467 0.033405 0.3942 0.4558 0.0616 -1.1382 0.659033 0.0243254 3.69107% 0.641 0.6867 0.0457 1.0625 0.524533 0.0106228 2.02519% 0.5147 0.5358 0.0211 0.421529 0.332633 0.0458611 13.7873% 0.2799 0.3632 0.0833 -1.17868 Total 21 0.494614 0.18909 0.1501 0.8003 0.6502 -0.517161 7.72429% il Tà u iệ 38.2297% H TE U ANOVA Table for Polyphenol by Nghiem Thuc Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio CH Between groups 0.702713 0.117119 Within groups 0.0123838 14 0.000884555 Total (Corr.) 0.715097 20 132.40 Multiple Range Tests for Polyphenol by Nghiem Thuc Method: 95.0 percent LSD Nghiem Thuc Count Mean Homogeneous Groups 0.181367 X 0.332633 X 0.432467 X P-Value 0.0000 Đồ án tốt nghiệp 0.524533 X 3 0.568033 X 0.659033 X 0.764233 X Phụ lục D: Khả kháng oxy hóa (DPPH) Thực với mẫu thử nồng độ (C0/30) DPPH hồ tan dung mơi methanol nồng độ 6mM Dịch mẫu giữ nguyên nồng độ ban đầu C0 Cho 100μl dung dịch DPPH nồng độ 6mM vào 2800μl methanol, sau bổ sung 100μl dịch mẫu il Tà Dung dịch lắc đều, thực phản ứng điều kiện nhiệt độ phòng thờ i gian 30 phút, đem mẫu đo độ hấp thu bước sóng μ = 517 nm iệ -Thực với mẫu đối chiếu mẫu trắng u Hoà tan ascorbic acid (vitamine C) DMSO nồng độ khác TE U H Mẫu đối chiếu (ascorbic acid): Cho 100μl dung dịch DPPH nồng độ 6mM vào 2800μl methanol, sau bổ sung 100μl dung dịch ascorbic acid CH Mẫu trắng: Cho 100μl DMSO vào 2900μl methanol Bảng tổng hợp khả bắt gốc tự DPPH gạo mâm ủ điều kiện sáng nhiệt độ khác Nhiệt độ ủ (OC) Ánh sáng % DPPH Control 10 20 30 50% sáng 100% 50% sáng 100% 50% sáng 100% 50% tối sáng 50% tối sáng 50% tối sáng 96.95f± 77.36c± 96.09e± 96.54ef± 93.90d± 54.41b± 0.13 0.26 0.07 0.11 0.37 0.26 22.61a± 0.66 Summary Statistics for %DPPH Nghiem Count Average Standard Coeff of Minimum Maximum Range Stnd Đồ án tốt nghiệp Thuc deviation variation skewness 22.61 0.66468 2.93976% 22.14 23.08 0.94 2 96.95 0.127279 0.131283% 96.86 97.04 0.18 96.09 0.0707107 0.073588% 96.04 96.14 0.1 93.895 0.374767 0.399134% 93.63 94.16 0.53 88.62 0.494975 0.558536% 88.27 88.97 0.7 95.54 0.113137 0.118419% 95.46 95.62 0.16 51.655 1.03945 2.01229% 50.92 52.39 1.47 Total 14 77.9086 28.0726 36.0328% 22.14 97.04 74.9 Tà ANOVA Table for %DPPH by Nghiem Thuc Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value 6154.47 0.0000 u iệ il Source Between groups 10243.0 1707.16 H Total (Corr.) 10244.9 13 0.277386 CH TE 1.9417 U Within groups Multiple Range Tests for %DPPH by Nghiem Thuc Method: 95.0 percent LSD Nghiem Thuc Count Mean Homogeneous Groups 22.61 X 51.655 X 88.62 X 93.895 X 95.54 X 96.09 XX 10 -2.02694 Đồ án tốt nghiệp 2 96.95 X u iệ il Tà CH TE U H 11 Đồ án tốt nghiệp Phụ lục E: giá trị IC50 -Thực với mẫu thử DPPH hồ tan dung mơi methanol nồng độ 6mM Hoà tan mẫu DMSO nồng độ khác Cho 100μl dung dịch DPPH nồng độ 6mM vào 2800μl methanol, sau bổ sung 100μl mẫu thử (thực cho nồng độ) Dung dịch lắc đều, thực phản ứng điều kiện nhiệt độ phòng thời gian 30 phút, đem mẫu đo độ hấp thu bước sóng λ = 517 nm Mỗi nồng độ mẫu thử nghiệm lặp lần để tính giá trị trung bình -Thực với mẫu đối chiếu mẫu trắng Hoà tan ascorbic acid (vitamine C) DMSO nồng độ khác Tà Mẫu đối chiếu (ascorbic acid): Cho 100μl dung dịch DPPH nồng độ 6mM vào 2800μl methanol, sau bổ sung 100μl dung dịch ascorbic acid iệ il Mẫu trắng: Cho 100μl DMSO vào 2900μl methanol u Cả hai dung dịch lắc đều, thực phản ứng điều kiện nhiệt độ phòng thời gian 30 phút, đem mẫu đo độ hấp thu bước sóng λ = 517 nm H Lần Lần Lần CH TE U Mỗi nồng độ chất đối chiếu thử nghiệm lặp lần để tính giá trị trung bình Blank 2.225 2.197 2.228 2.217 Vitamine C 0.074 0.074 0.073 0.074 Nồng độ (xCo) A1 A2 A3 Q1 0.1000 0.138 0.136 0.133 96.998 97.091 97.231 97.107 0.0667 0.229 0.236 0.244 92.752 92.425 92.052 92.409 0.0333 0.822 0.817 0.816 65.080 65.313 65.360 65.251 0.0222 1.200 1.214 1.212 47.441 46.788 46.881 47.037 0.0167 1.463 1.461 1.465 35.169 35.262 35.075 35.169 12 Trung bình Q2 Q3 Qtb Đồ án tốt nghiệp 0.0111 1.734 1.724 1.735 22.523 22.990 22.476 22.663 0.0083 1.810 1.818 1.810 18.977 18.603 18.977 18.852 0.0067 1.893 1.869 1.878 15.103 16.223 15.803 15.710 0.0056 1.911 1.917 1.915 14.263 13.984 14.077 14.108 0.0033 2.011 2.015 2.014 9.597 9.410 9.457 9.488 0.0022 2.185 2.186 2.191 1.478 1.431 1.198 1.369 Phụ lục F: Hình ảnh đồ án u iệ il Tà CH TE U H Hình Gạo lứt nảy mầm 13 Đồ án tốt nghiệp u iệ il Tà CH TE U H Hình 2.Dịch chiết gạo mầm trước (trái) sau (phải) ly tâm Hình 3.Xây dựng đường chuẩn acid gallic 14