Đồ án tốt nghiệp khảo sát các yếu tố ảnh hưởng đến khả năng sinh tổng hợp protease của vi khuẩn bacillus subtilis natto

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH H o ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP C hi M h in KHẢO SÁT CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN KHẢ C ity NĂNG SINH TỔNG HỢP PROTEASE CỦA VI KHUẨN U ity rs ve ni Bacillus subtilis Natto of CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC gy lo no ch Te Ngành: Giảng viên hướng dẫn : ThS NGUYỄN NHƯ NHỨT ThS PHAN TRUNG HẢI Sinh viên thực : NGUYỄN THỊ MINH TRANG MSSV: 1211100022 TP Hồ Chí Minh, 2016 Lớp: 12DSH01 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi hướng dẫn khoa học ThS Nguyễn Như Nhứt ThS Phan Trung Hải Các nội dung nghiên cứu, kết đề tài trung thực chưa cơng bố hình thức trước Những số liệu bảng biểu phục vụ cho việc phân tích, nhận xét, đánh giá tác giả thu thập từ nguồn khác H có ghi rõ phần tài liệu tham khảo o C Ngồi ra, đồ án cịn sử dụng số nhận xét, đánh số hi liệu tác giả khác, quan tổ chức khác có trích dẫn thích h in M nguồn gốc C Nếu phát có gian lận Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm ity nội dung đồ án ni U ve TP Hồ Chí Minh, ngày 19 tháng 08 năm 2016 ity rs Sinh viên thực tập of gy lo no ch Te NGUYỄN THỊ MINH TRANG LỜI CẢM ƠN Trong suốt q trình học tập trường Đại học Cơng Nghệ TP.HCM, quan tâm giúp đỡ tận tình q thầy khơng quản cơng lao khó nhọc trang bị kiến thức cần thiết cho chúng em, tạo điều kiện cho chúng em có hội áp dụng kiến thức vào thực tiễn thơng qua đợt thực tập Tuy thời gian thực tập ngắn ngủi trang bị cho em nhiều kiến thức H thực tiễn bổ ích cho cơng việc sau o C Em xin chân thành biết ơn: hi - Ban giám hiệu toàn thể giáo viên giảng dạy trường Đại học M in Công Nghệ TP.HCM nói chung thầy khoa Cơng nghệ sinh học nói riêng h cho em có hội thực tập C ity - Đặc biệt em xin gửi lời cảm ơn đến ThS Nguyễn Như Nhứt, người tạo ni U điều kiện, hướng dẫn giúp em hồn thành tốt đồ án ity rs thành đồ án ve - Em xin cảm ơn ThS Phan Trung Hải hướng dẫn hỗ trợ em hoàn Em xin tri ân giúp đỡ tận tình của: of Các anh, chị phịng thí nghiệm Chi nhánh Cơng ty TNHH Gia Tường tỉnh Te Bình Dương tồn thể anh, chị phịng ban Công ty tạo gy lo no ch điều kiện hướng dẫn giúp đỡ em suốt thời gian thực tập để hoàn thành luận văn Cuối cùng, xin gửi lời cám ơn đến người bạn tôi, chia sẻ, giúp đỡ động viên tơi học tập ngồi sống Sinh viên thực tập NGUYỄN THỊ MINH TRANG Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ, HÌNH ẢNH vi H MỞ ĐẦU o C Tính cấp thiết hi Tình hình nghiên cứu nước M h in Mục tiêu nghiên cứu Nhiệm vụ nghiên cứu C ity Phương pháp nghiên cứu ni U Kết đạt ve Kết cấu đề tài nghiên cứu ity rs CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sơ lược Bacillus subtilis Natto of Te 1.1.1 Hệ thống phân loại Bacillus subtilis Natto gy lo no ch 1.1.2 Lịch sử phát 1.1.3 Phân bố 1.1.4 Đặc điểm Bacillus subtilis Natto 1.2 Enzyme protease 10 1.2.1 Khái niệm protease 10 1.2.2 Phân loại 11 1.2.3 Nguồn thu nhận 12 1.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến tổng hợp protease Bacillus subtilis 14 1.4 Ứng dụng protease 18 1.5 Tình hình nghiên cứu sản xuất protease 19 i Đồ án tốt nghiệp 1.5.1.Trên giới 19 1.5.2 Tại Việt Nam 20 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Địa điểm thời gian thực thí nghiệm 22 2.1.1 Địa điểm 22 2.1.2 Thời gian nghiên cứu 22 2.2 Vật liệu thí nghiệm 22 H o 2.2.1 Nguồn vi sinh vật 22 C 2.2.2 Cơ chất dùng thí nghiệm 22 hi 2.2.3 Hóa chất thiết bị sử dụng 23 M h in 2.3 Môi trường nuôi cấy 23 C 2.3.1 Môi trường nước chiết giá đậu đường pepton agar (MT1) 23 ity 2.3.2 Môi trường nước chiết giá đậu đường pepton (MT2) 23 ni U 2.3.3 Môi trường định tính khả sinh tổng hợp protease (MT3) 24 ve 2.3.4 Môi trường bán rắn sinh tổng hợp protease (MT4) 24 ity rs 2.4 Phương pháp tiến hành 25 2.4.1 Phương pháp bảo quản giống vi sinh vật 25 of 2.4.2 Phương pháp tăng sinh 25 Te gy lo no ch 2.4.3 Phương pháp xác định mật độ tế bào 25 2.4.4 Phương pháp định tính khả tổng hợp protease 26 2.4.5 Phương pháp nuôi cấy bán rắn 27 2.4.6 Phương pháp thu nhận dịch chiết từ nuôi cấy bán rắn 27 2.4.7 Phương pháp xác định hoạt độ enzyme protease 27 2.4.8 Phương pháp tủa enzyme protease 30 2.4.9 Phương pháp xử lý thống kê 30 2.5 Phương pháp nghiên cứu 30 2.5.1 Sàng lọc chủng Bacillus subtilis Natto có khả tổng hợp enzyme protease cao 30 ii Đồ án tốt nghiệp 2.5.2 Khảo sát khả tổng hợp enzyme protease chủng Bacillus subtilis Natto môi trường bán rắn có thành phần chất khác 30 2.5.3 Khảo sát số điều kiện ảnh hưởng đến khả tổng hợp enzyme protease chủng Bacillus subtilis Natto 31 2.5.4 Khảo sát ảnh hưởng pH lên khả xúc tác protease chủng Bacillus subtilis Natto 32 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 H 3.1 Sàng lọc chủng B subtilis Natto có khả tổng hợp protease cao 33 o C 3.2 Khảo sát hoạt độ protease chủng B subtilis Natto BN2.1 môi trường hi bán rắn có thành phần chất khác 35 M h in 3.3 Khảo sát số điều kiện ảnh hưởng đến khả sinh protease chủng C B subtilis Natto BN2.1 37 ity 3.3.1 Ảnh hưởng tỉ lệ chất môi trường bán rắn lên khả tổng ni U hợp protease 37 ve 3.3.2 Ảnh hưởng độ ẩm lên khả tổng hợp protease 39 ity rs 3.3.3 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy lên khả tổng hợp protease 41 3.4 Khảo sát ảnh hưởng pH lên khả xúc tác protease chủng of B.subtilis Natto BN2.1 43 Te gy lo no ch CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 45 4.1 Kết luận 45 4.2 Kiến nghị 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 PHỤ LỤC iii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT H o C A candidus Aspergillus candidus A.oryzae Aspergillus oryzae B Bacillus B subtilis Bacillus subtilis BDN Bã đậu nành CB Cám bắp CG Cám gạo hi CM Cám mì M Colony Foming Unit in CFU Đậu xanh h DX C kiloDalton ity kDa Điểm đẳng điện protein ity rs P roquerti Optical Density ve pI ni OD nanoKatal U nKat Penicillium roqueforti of Đơn vị hoạt độ UI Te SPSS Phần mềm xử lý thống kê gy lo no ch (Statistical Package for the Social Science) Trọng lượng phân tử TLPT iv Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Kết phản ứng sinh hóa chủng B subtilis Bảng 1.2 Ảnh hưởng nguồn carbon lên hoạt độ protease chủng Bacillus licheniformis N-2 15 Bảng 1.3 Ảnh hưởng nguồn nitrogen vô lên hoạt độ protease chủng Bacillus licheniformis N-2 16 H Bảng 1.3 Ảnh hưởng nguồn nitrogen hữu lên hoạt độ protease chủng o C Bacillus licheniformis N-2 17 hi Bảng 2.1 Danh sách chủng nghiên cứu 22 M h in Bảng 2.2 Dựng đường chuẩn Tyrosine 28 C Bảng 2.3 Xác định lượng Tyrosine dung dịch nghiên cứu 29 ity Bảng 2.4 Thành phần khối lượng chất môi trường bán rắn 31 ni U Bảng 3.1 Kích thước đường kính vịng phân giải casein chủng ve B subtilis Natto 34 ity rs Bảng 3.2 Hoạt độ enzyme protease chủng BN2.1 sử dụng thành phần nuôi cấy khác 35 of Bảng 3.3 Ảnh hưởng tỉ lệ BDN:CB môi trường bán rắn lên hoạt độ Te protease 38 gy lo no ch Bảng 3.4 Ảnh hưởng độ ẩm lên khả tổng hợp protease 40 Bảng 3.5 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy lên khả tổng hợp protease 41 Bảng 3.6 Ảnh hưởng pH phản ứng lên khả xúc tác protease 43 v Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ, HÌNH ẢNH Hình 1.1 Sản phẩm Natto Hình 1.2 Tế bào vi khuẩn Bacillus subtilis Natto Hình 1.3 Phản ứng thủy phân liên kết peptide 10 Hình 1.4 Cấu trúc khơng gian enzyme protease 11 Hình 3.1 Khả phân giải casein mơi trường thạch đĩa chủng H Bacillus subtilis Natto 33 o C hi Biểu đồ 3.1 Kích thước đường kính vòng phân giải casein chủng M h in B subtilis Natto 34 C Biểu đồ 3.2 Hoạt độ enzyme protease chủng B subtilis Natto BN2.1 sử ity dụng thành phần nuôi cấy khác 36 ni U Biểu đồ 3.3 Ảnh hưởng tỉ lệ BDN:CB môi trường bán rắn lên hoạt độ ve protease 38 ity rs Biểu đồ 3.4 Ảnh hưởng độ ẩm lên khả tổng hợp protease 40 Biểu đồ 3.5 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy môi trường bán rắn lên hoạt of độ protease 42 Te Biểu đồ 3.6 Ảnh hưởng pH phản ứng lên khả xúc tác protease 43 gy lo no ch vi Đồ án tốt nghiệp MỞ ĐẦU Tính cấp thiết Một số lồi vi sinh vật có khả sinh tổng hợp enzyme protease ứng dụng nhiều vi khuẩn thuộc chi Bacillus[40] Bacillus subtilis Natto chủng vi khuẩn có ích, phổ biến tự nhiên Chúng có khả phát triển nhanh sinh tổng hợp nhiều loại enzyme thủy phân amylase, H protease, phytase, hemicellulase, glucannase… Chủng vi khuẩn sử o C dụng ăn truyền thống Nhật Bản từ lâu Khi ủ ấm với hạt đậu nành, hi chúng sản sinh enzyme nattokinase hoạt huyết mạnh, có khả phịng M in chữa bệnh chống viêm, ngừa bệnh tả[54] Nhiều nghiên cứu B subtilis Natto h tiến hành kết cho thấy chủng vi khuẩn có khả sinh nhiều C ity enzyme nhóm protease nattokinase[33], elastase[32], bacillopeptidase F [45] … ni U Chủng vi khuẩn đáp ứng nhu cầu lớn protease ngành chăn nuôi ve nuôi trồng thủy sản lĩnh vực chế biến thức ăn chăn ni, bổ sung men tiêu ity rs hóa, giúp vật nuôi nâng cao sức đề kháng, tăng trọng nhanh Tuy nhiên, việc nghiên cứu ứng dụng chủng vi khuẩn tạo sản phẩm protease Việt Nam chưa of nhiều Do nhóm nghiên cứu tiến hành thực đề tài: “Khảo sát yếu tố ảnh Te hưởng đến khả sinh tổng hợp protease vi khuẩn Bacillus subtilis Natto” gy lo no ch Ý nghĩa đề tài nghiên cứu: - Về khoa học: Cung cấp thông tin khả sinh tổng hợp protease Bacillus subtilis Natto môi trường nuôi cấy bán rắn với thành phần phế phụ liệu ngành nông nghiệp Việt Nam - Về thực tiễn: Góp phần xây dựng quy trình sản xuất sản phẩm giàu protease, giúp đa dạng hóa sản phẩm Đồ án tốt nghiệp 45 Tokudome S, Omura K (2005) A newly derived protein from Bacillus subtilis natto with both antithrombotic and fibrinolytic effects, Journal of Pharmacological Sciences , 99, p 247 – 251 46 William Shurtleff, Akiko Aoyagi (2012) History of Natto and Its Relatives, Soyinfo Center 47 Ashikaga S, Nanamiya H (2000) Natural genetic competence in Bacillus subtilis natto OK2, Journal of Bacteriology, 182(9), p 2411 – 2415 H 48 Yan S, JiaQi W (2011) Screening of protease and cellulase producing o C Bacillus subtilis natto strain and its growth characteristics, Dongbei Nongye hi Daxue Xuebao Journal, 42(3), p 39 – 43 M in 49 Kato T et al (1992) Purification of a new extracellular 90 – kDa serine h proteinase with isoelectric point of 3.9 from Bacillus subtilis (natto) and C ity elucidation of its distinct mode of action, Bioscience biotechnology and ni U biochemistry, 56 (7), p 1166 – 1168 ve 50 Seki T., Oshima T (1975) Taxonomic study of Bacillus by deoxyribonucleic ity rs acid – deoxyribonucleic acid hybridization and interspecific transformation, International Journal of Systematic Bacteriology, 25(3), pp.258 - 270 of 51 Deepak V et al (2008) Optimization of media composition for Nattokinase Te production by Bacillus subtilis using response surface methodology, gy lo no ch Bioresource Technology (99), pp.8170 - 8174 52 Ogawa Y, Hosoyama H, Hamano M, Motai M (1991) Purification and properties of γ – glutamyltranspeptidase from Bacillus subtilis (natto), Agricultural Biology and Chemistry, 55, p 2971 – 2977 53 Yamagata Y, Abe R (1995) Molecular cloning and nucleotide sequence of the 90k serine protease gene, hspK, from Bacillus subtilis (natto) No 16, Current Microbiology, 31(6), p 340 – 344 51 Đồ án tốt nghiệp Tài liệu Internet 54 Báo điện tử Sahifa (2016) NATTOKINASE gì? - Những điều cần biết., 15/8/2016: http://shopthucphamsach247.com/natokinase-la-gi-va-co-tac-dung-nhu-naodoi-voi-suc-khoe/.html 55 Japan NattoKinase Associasion (online) Bacillus subtilis Natto, 5/7/2016: http://j-nattokinase.org/en/jnka_nattou_02.html H 56 Lorie Kramer (2011) Resen(online) The Bacillus subtilis Story, 5/9/2015: o C http://www.rense.com/general4/bac.htm hi h in M ity C ity rs ve ni U of gy lo no ch Te 52 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC PHỤ LỤC A Bảng độ ẩm nguyên liệu ban đầu H o Nguyên liệu Độ ẩm (%) Bã đậu nành Đậu xanh Cám bắp Cám gạo Cám mì 9,6 11 10,65 9,8 10 C hi PHỤ LỤC B Đường chuẩn Tyrosine theo phương pháp Anson h in M 0,0163 OD 0,5546 0,694 1,0767 1,2966 0,2 0,4 0,6 0,8 0,5383 0,6777 1,0604 1,2803 ve ni 0,2320 U Lượng Tyrosine (µM) ity C OD trung bình 0,2157 ity rs of gy lo no ch Te Đồ thị phụ lục B Đường chuẩn Tyrosine Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC C Khảo sát khả phân giải casein môi trường thạch đĩa chủng B subtilis Natto ONEWAY HD BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /MISSING ANALYSIS /POSTHOC=DUNCAN DUNNETT ALPHA(0.05) Oneway H [DataSet0] o C hi h in M HD Descriptives ity C Std Error 1.00000 33333 33333 88192 1.00000 00000 1.52943 ity rs ve ni of ANOVA HD Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 697.778 18.000 715.778 df gy lo no ch Te Std Mean Deviation 7.0000 1.73205 20.3333 57735 12.3333 57735 12.6667 1.52753 13.0000 1.73205 0000 00000 10.8889 6.48880 U N 3 3 Total 18 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound Minimum Maximum 2.6973 11.3027 6.00 9.00 18.8991 21.7676 20.00 21.00 10.8991 13.7676 12.00 13.00 8.8721 16.4612 11.00 14.00 8.6973 17.3027 11.00 14.00 0000 0000 00 00 7.6621 14.1157 00 21.00 Mean Square 139.556 12 1.500 17 F 93.037 Sig .000 Đồ án tốt nghiệp Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable:HD H 95% Confidence Interval Mean Lower Upper (I) NT (J) NT Difference (I-J) Std Error Sig Bound Bound Dunnett t 7.00000* 1.00000 000 4.0987 9.9013 a * (2-sided) 20.33333 1.00000 000 17.4321 23.2346 * 12.33333 1.00000 000 9.4321 15.2346 * 12.66667 1.00000 000 9.7654 15.5679 * 13.00000 1.00000 000 10.0987 15.9013 a Dunnett t-tests treat one group as a control, and compare all other groups against it * The mean difference is significant at the 0.05 level o C hi h in M ity C HD rs ve ni U Homogeneous Subsets ity Subset for alpha = 0.05 0000 7.0000 12.3333 12.6667 13.0000 of NT N Duncan 3 3 3 Sig 1.000 1.000 538 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 a gy lo no ch Te 20.3333 1.000 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC D Khảo sát hoạt độ enzyme protease chủng B subtilis Natto mơi trường bán rắn có thành phần chất khác ONEWAY HD BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /MISSING ANALYSIS /POSTHOC=DUNCAN DUNNETT ALPHA(0.05) Oneway H [DataSet0] o C hi M Descriptives h in HD ity C ity rs ve ni of ANOVA HD Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 155 093 248 df 12 17 gy lo no ch Te Mean 7980 6600 6797 6160 5220 7713 6745 Std Error 07654 01504 04590 04775 06921 01702 02847 U N 3 3 Total 18 Std Deviation 13258 02606 07950 08271 11988 02948 12077 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound Minimum Maximum 4687 1.1273 72 95 5953 7247 64 69 4822 8772 63 77 4105 8215 56 71 2242 8198 40 64 6981 8446 74 79 6144 7346 40 95 Mean Square 031 008 F 3.977 Sig .023 Đồ án tốt nghiệp Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable:HD H 95% Confidence Interval Mean Difference Std Lower Upper (I) NT (J) NT (I-J) Error Sig Bound Bound Dunnett t 02667 07200 995 -.1822 2356 (22 -.11133 07200 432 -.3202 0976 sided)a -.09167 07200 599 -.3006 1172 -.15533 07200 176 -.3642 0536 -.24933* 07200 019 -.4582 -.0404 a Dunnett t-tests treat one group as a control, and compare all other groups against it * The mean difference is significant at the 0.05 level o C hi h in M ity C of HD ity rs ve ni U Homogeneous Subsets gy lo no ch Te Subset for alpha = 0.05 NT N a Duncan 5220 6160 6160 6600 6600 6600 3 6797 6797 6797 7713 7713 7980 Sig .064 068 100 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Đồ án tốt nghiệp PHỤC LỤC E: Khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ chất môi trường bán rắn ONEWAY HD BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /MISSING ANALYSIS /POSTHOC=DUNCAN DUNNETT ALPHA(0.05) Oneway [DataSet0] H o C hi HD Descriptives in M h ity C ity rs ve ni U HD Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 230 165 395 df gy lo no ch ANOVA Te N Mean 3910 4967 3 5783 7447 6143 5657 4753 Total 21 5523 Std Error 02843 07703 02099 05899 05783 09184 07127 03068 of Std Deviation 04924 13342 03636 10218 10016 15908 12345 14060 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound Minimum Maximum 2687 5133 35 45 1652 8281 40 65 4880 6687 55 62 4908 9985 63 81 3655 8631 54 73 1705 9608 38 66 1687 7820 38 62 4883 6163 35 81 Mean Square 038 14 012 20 F 3.253 Sig .032 Đồ án tốt nghiệp Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable:HD H 95% Confidence Interval Mean Difference Std Lower Upper (I) NT (J) NT (I-J) Error Sig Bound Bound Dunnett t -.08433 08868 845 -.3426 1739 (2-sided)a 02133 08868 1.000 -.2369 2796 10300 08868 717 -.1553 3613 * 26933 08868 040 0111 5276 13900 08868 456 -.1193 3973 09033 08868 807 -.1679 3486 a Dunnett t-tests treat one group as a control, and compare all other groups against it * The mean difference is significant at the 0.05 level o C hi h in M ity C of HD ity rs ve ni U Homogeneous Subsets gy lo no ch Te Subset for alpha = 0.05 NT N a Duncan 3910 4753 4753 4967 4967 5657 5657 5657 3 5783 5783 5783 6143 6143 7447 Sig .075 176 083 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC F: Khảo sát ảnh hưởng độ ẩm lên khả tổng hợp enzyme protease ONEWAY HD BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /MISSING ANALYSIS /POSTHOC=DUNCAN DUNNETT ALPHA(0.05) Oneway H [DataSet0] o C hi h in M HD Descriptives ity C Std Error 00376 04148 08027 05954 08827 ity rs ve ni U of ANOVA HD Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df gy lo no ch Te Total N Mean 0207 3780 7913 5677 12 4394 Std Deviation 00651 07184 13903 10312 30579 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound Minimum Maximum 0045 0368 01 03 1995 5565 30 43 4460 1.1367 70 95 3115 8238 45 65 2451 6337 01 95 Mean Square 958 319 070 1.029 11 009 F 36.330 Sig .000 Đồ án tốt nghiệp Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable:HD H 95% Confidence Interval Mean (J) Difference Std Lower Upper (I) NT NT (I-J) Error Sig Bound Bound * Dunnett t -.54700 07656 000 -.7675 -.3265 a (2-sided) -.18967 07656 091 -.4101 0308 * 22367 07656 047 0032 4441 a Dunnett t-tests treat one group as a control, and compare all other groups against it * The mean difference is significant at the 0.05 level o C hi h in M ity C HD ity rs ve ni U Homogeneous Subsets of Subset for alpha = 0.05 0207 3780 5677 gy lo no ch Te NT N Duncan 3 3 Sig 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 a 7913 1.000 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC G: Khảo sát ảnh hưởng thời gian nuôi cấy lên khả tổng hợp enzyme protease ONEWAY HD BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /MISSING ANALYSIS /POSTHOC=DUNCAN DUNNETT ALPHA(0.05) Oneway H [DataSet0] o C hi HD Descriptives h in M Std Error 01354 00590 01041 02028 02100 01405 01856 01667 ity rs ve ni U Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 106 010 117 df gy lo no ch HD Te ANOVA of 3 3 3 21 ity Total Mean 8397 8857 9323 9577 1.0070 1.0420 1.0363 9572 C N Std Deviation 02346 01021 01804 03512 03637 02433 03215 07641 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound Minimum Maximum 7814 8979 81 86 8603 9110 87 89 8875 9771 92 95 8704 1.0449 92 99 9166 1.0974 97 1.04 9816 1.1024 1.01 1.06 9565 1.1162 1.01 1.07 9225 9920 81 1.07 Mean Square 018 14 001 20 10 F 24.060 Sig .000 Đồ án tốt nghiệp Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: HD H 95% Confidence Interval Mean (I) (J) Difference Lower Upper NT NT (I-J) Std Error Sig Bound Bound * Dunnett t -.19667 02217 000 -.2612 -.1321 a * (2-sided) -.15067 02217 000 -.2152 -.0861 * -.10400 02217 002 -.1686 -.0394 * -.07867 02217 015 -.1432 -.0141 -.02933 02217 611 -.0939 0352 00567 02217 1.000 -.0589 0702 a Dunnett t-tests treat one group as a control, and compare all other groups against it * The mean difference is significant at the 0.05 level o C hi h in M ity C ity rs ve ni U Homogeneous Subsets of Te HD gy lo no ch Subset for alpha = 0.05 8397 8857 8857 9323 9323 9577 NT N Duncan 3 3 Sig .057 054 272 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 a 11 1.0070 1.0363 1.0420 156 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC H: Khảo sát ảnh hưởng pH phản ứng lên khả xúc tác enzyme protease ONEWAY HD BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /MISSING ANALYSIS /POSTHOC=DUNCAN DUNNETT ALPHA(0.05) Oneway H [DataSet0] o C hi Descriptives M h in HD C ity rs ve ni Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 164.903 65.274 230.177 df gy lo no ch HD Te ANOVA of 3 3 15 U Total Mean 59.7249 61.5992 67.9251 67.1832 66.7146 64.6294 ity N Std Deviation Std Error 2.41668 1.39527 1.14829 66296 2.26877 1.30988 4.27583 2.46865 1.43115 82627 4.05478 1.04694 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound Minimum Maximum 53.7215 65.7283 57.17 61.97 58.7467 64.4517 60.39 62.67 62.2892 73.5610 65.31 69.35 56.5614 77.8049 62.50 70.87 63.1594 70.2698 65.72 68.35 62.3839 66.8749 57.17 70.87 Mean Square 41.226 10 6.527 14 12 F 6.316 Sig .008 Đồ án tốt nghiệp Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable:HD H 95% Confidence Interval Mean Difference Lower Upper (I) NT (J) NT (I-J) Std Error Sig Bound Bound Dunnett t (2- -6.98971* 2.08605 024 -13.0194 -.9600 a sided) -5.11537 2.08605 102 -11.1451 9143 1.21051 2.08605 937 -4.8192 7.2402 46858 2.08605 998 -5.5611 6.4983 a Dunnett t-tests treat one group as a control, and compare all other groups against it * The mean difference is significant at the 0.05 level o C hi h in M ity C ve HD ni U Homogeneous Subsets ity rs Subset for alpha = 0.05 NT N a Duncan 59.7249 61.5992 66.7146 67.1832 3 67.9251 Sig .390 592 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 of gy lo no ch Te 13