Đồ án tốt nghiệp khảo sát sự hiện diện của các vi sinh vật có lợi tại một số vùng đất nông nghiệp huyện gò dầu, tỉnh tây ninh

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP u iệ il Tà KHẢO SÁT SỰ HIỆN DIỆN CỦA CÁC VI KHUẨN CĨ LỢI TẠI MỘT SỐ VÙNG ĐẤT NƠNG NGHIỆP HUYỆN GÒ DẦU, TỈNH TÂY NINH TE U H CÔNG NGHỆ SINH HỌC CH Ngành: Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : ThS Phạm Minh Nhựt Sinh viên thực : Lê Thị Mỹ Hạnh MSSV: 1051110011 Lớp: 10DSH01 TP Hồ Chí Minh, 2014 Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đồ án nghiên cứu riêng thực sở lý thuyết, tiến hành nghiên cứu thực tiễn hướng dẫn ThS Phạm Minh Nhựt Các số liệu, kết nêu đồ án trung thực chưa công bố cơng trình nghiên cứu khác Tơi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2014 Sinh viên iệ il Tà u Lê Thị Mỹ Hạnh CH TE U H ii Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Trước hết, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban Giám Hiệu Trường Đại học Công Nghệ Tp Hồ Chí Minh, q thầy giảng dạy Khoa Công nghệ sinh học - Thực phẩm - Môi trường tất thầy cô truyền dạy kiến thức quý báu cho em suốt năm học vừa qua Qua em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến thầy Phạm Minh Nhựt, người định hướng nghiên cứu, quan tâm, tận tình hướng dẫn giúp đỡ em suốt thời gian làm khố luận tốt nghiệp Bên cạnh em xin cảm ơn thầy Phịng Thí nghiệm Khoa Công nghệ sinh học - Thực phẩm - Môi trường anh chị, bạn bè nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để em hồn Tà thành tốt đề tài iệ il Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến gia đình ln bên cạnh, động viên H sống u lúc khó khăn, nản lòng suốt thời gian học tập, nghiên cứu Sinh viên CH TE U Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2014 Lê Thị Mỹ Hạnh iii Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC Trang Trang bìa i Lời cam đoan ii Lời cảm ơn iii Mục lục iv Danh sách chữ viết tắt vii Danh sách bảng viii Danh sách hình ix Mở đầu 1 Đặt vấn đề Tà Mục tiêu nghiên cứu iệ il Nội dung nghiên cứu u Phạm vi nghiên cứu H Chương Tổng quan TE U 1.1 Vi sinh vật hữu ích phân bố mơi trường đất nơng nghiệp 1.1.1 Vai trị vi sinh vật đất CH 1.1.2 Sự phân bố vi sinh vật đất 1.1.3 Một số nhóm vi sinh vật hữu ích đất 1.2 Khả sinh enzyme ngoại bào vi sinh vật 1.2.1 Khái niệm enzyme ngoại bào 1.2.2 Phân loại enzyme ngoại bào 1.2.3 Đặc điểm – tính chất 10 1.2.4 Một số enzyme ngoại bào từ vi sinh vật 13 1.3 Tình hình nghiên cứu hệ vi sinh vật đất 23 Chương Nội dung phương pháp nghiên cứu 24 2.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 24 2.1.1 Địa điểm nghiên cứu 24 2.1.2 Thời gian nghiên cứu 24 iv Đồ án tốt nghiệp 2.2 Vật liệu nghiên cứu 24 2.2.1 Nguồn mẫu phân lập 24 2.2.2 Vi khuẩn thị 24 2.2.3 Hoá chất, dụng cụ thiết bị 25 2.3 Phương pháp nghiên cứu 25 2.3.1 Phương pháp thu chuẩn bị mẫu 25 2.3.2 Phương pháp pha loãng mẫu 26 2.3.3 Phương pháp tăng sinh 27 2.3.4 Phương pháp bảo quản giữ giống vi sinh vật 27 2.3.5 Phương pháp định danh vi sinh vật 28 2.3.6 Phương pháp định tính khả sinh enzyme ngoại bào vi khuẩn 30 Tà 2.3.7 Phương pháp xác định mật độ tế bào 31 iệ il 2.3.8 Phương pháp xử lý số liệu 31 2.4 Bố trí thí nghiệm 31 u H 2.4.1 Thí nghiệm 1: Phân lập định danh sơ vi khuẩn 32 TE U 2.4.2 Thí nghiệm 2: Đánh giá khả sinh enzyme ngoại bào chủng vi khuẩn phân lập 33 CH 2.4.3 Thí nghiệm 3: Đánh giá mức độ đối kháng sinh khối chủng vi khuẩn phân lập với vi khuẩn gây bệnh 36 Chương Kết thảo luận 38 3.1 Kết đánh giá nguồn mẫu đất sử dụng nghiên cứu 38 3.2 Kết phân lập định danh sơ 40 3.2.1 Kết phân lập 40 3.2.2 Kết định danh sơ 41 3.3 Đánh giá khả sinh enzyme ngoại bào 43 3.2.1 Đánh giá khả sinh enzyme amylase 43 3.2.2 Đánh giá khả sinh enzyme cellulase 44 3.3.3 Đánh giá khả sinh enzyme protease 46 3.3.4 Đánh giá khả sinh enzyme lipase 47 v Đồ án tốt nghiệp 3.3.5 Đánh giá khả sinh enzyme catalase 49 3.3.6 Đánh giá khả sinh enzyme oxidase 49 3.4 Đánh giá khả đối kháng sinh khối vi khuẩn phân lập vi khuẩn gây bệnh 51 3.4.1 Kết đánh giá khả đối kháng sinh khối vi khuẩn phân lập nhóm vi khuẩn Salmonella sp 52 3.4.2 Kết đánh giá khả đối kháng sinh khối vi khuẩn phân lập nhóm vi khuẩn E Coli 53 3.4.3 Kết đánh giá khả đối kháng sinh khối vi khuẩn phân lập nhóm vi khuẩn Shigella 55 3.4.4 Kết đánh giá khả đối kháng sinh khối vi khuẩn phân lập Tà nhóm vi khuẩn Vibrio 57 iệ il 3.4.5 Kết đánh giá khả đối kháng sinh khối vi khuẩn phân lập vi khuẩn L monocytogenes, L innocua, E feacalis, S aureus 59 u H 3.5 Tổng hợp kết đánh giá khả sinh enzyme ngoại bào TE U đối kháng vi khuẩn gây bệnh chủng vi khuẩn phân lập 63 Chương Kết luận đề nghị 68 CH 4.1 Kết luận 68 4.2 Đề nghị 68 Tài liệu tham khảo 69 vi Đồ án tốt nghiệp DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT CMC: carboxymethyl cellulose HEC: hydroxyethyl cellulose EG: endoglucanase CBH: exoglucanase CBD: cellulose binding domain Ser: Serine His: Histidine Asp: Acid aspartic TSB: Trypton Soya Broth Tà TSA: Trypticase Soya Agar u iệ il CH TE U H vii Đồ án tốt nghiệp DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1 Danh sách mẫu phân lập 24 Bảng 3.1 Đặc điểm hình thái chủng vi khuẩn phân lập 40 Bảng 3.2 Kết định danh sơ chủng vi khuẩn phân lập 41 Bảng 3.3 Khả sinh enzyme amylase chủng vi khuẩn phân lập 43 Bảng 3.4 Khả sinh enzyme cellulase chủng vi khuẩn phân lập 45 Bảng 3.5 Khả phân huỷ gelatin casein chủng vi khuẩn phân lập 46 Bảng 3.6 Khả sinh enzyme lipase chủng vi khuẩn phân lập 48 Bảng 3.7 Khả sinh enzyme catalase chủng vi khuẩn phân lập 49 Tà Bảng 3.8 Khả sinh enzyme oxidase chủng vi khuẩn phân lập 50 iệ il Bảng 3.9 Khả đối kháng sinh khối chủng vi khuẩn phân lập u nhóm vi khuẩn Salmonella sp 52 H Bảng 3.10 Khả đối kháng sinh khối chủng vi khuẩn phân lập TE U nhóm vi khuẩn E Coli 54 Bảng 3.11 Khả đối kháng sinh khối chủng vi khuẩn phân lập CH nhóm vi khuẩn Shigella 56 Bảng 3.12 Khả đối kháng sinh khối chủng vi khuẩn phân lập nhóm vi khuẩn Vibrio 58 Bảng 3.13 Kết đánh giá khả đối kháng sinh khối chủng vi khuẩn phân lập vi khuẩn L monocytogenes, L innocua, E feacalis, S aureus 60 Bảng 3.14 Kết tổng hợp đánh giá khả sinh enzyme ngoại bào chủng vi khuẩn phân lập 64 Bảng 3.15.A Kết tổng hợp đánh giá khả đối kháng với vi khuẩn gây bệnh chủng vi khuẩn phân lập 65 Bảng 3.15.B Kết tổng hợp đánh giá khả đối kháng với vi khuẩn gây bệnh chủng vi khuẩn phân lập 66 viii Đồ án tốt nghiệp DANH SÁCH CÁC HÌNH Trang Hình 1.1 Sơ đồ biểu diễn quan hệ sinh thái ba nhóm sinh vật Hình 1.2 Hình thái số nhóm vi khuẩn Hình 1.3 Hình thái xạ khuẩn Hình 1.4 Cấu trúc khơng gian loại enzyme amylase 14 Hình 1.5 Mơ hình enzyme protease xúc tác trình thuỷ phân protein 15 Hình 1.6 Cấu trúc khơng gian enzyme protease 17 Hình 1.7 Cấu trúc không gian enzyme cellulase 19 Hình 1.8 Cấu trúc khơng gian enzyme lipase từ Candida rugosa 21 Hình 1.9 Mơ hình hoạt động lipase chất hồ tan khơng tan Tà nước 22 iệ il Hình 2.1 Phương pháp pha loãng mẫu 26 u Hình 2.2 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 31 H Hình 2.3 Quy trình phân lập vi khuẩn từ nguồn mẫu đất nông nghiệp 32 TE U Hình 2.4 Vịng phân giải tinh bột vi khuẩn môi trường Starch Agar 34 CH Hình 2.5 Vịng phân giải casein vi khuẩn môi trường Skim Milk Agar 34 Hình 2.6 Vịng phân giải Tween vi khuẩn môi trường Tween Peptone Agar 35 Hình 2.7 Vịng phân giải cellulose vi khuẩn mơi trường CMC Agar 35 Hình 2.8 Kết âm tính dương tính thử nghiệm gelatinase 36 Hình 3.1 Các nguồn mẫu đất sử dụng nghiên cứu 39 Hình 3.2 Kết nhuộm gram chủng vi khuẩn phân lập 42 Hình 3.3 Vịng phân giải tinh bột chủng ĐTL101, ĐTL102, ĐTT112 môi trường Starch Agar 44 Hình 3.4 Vịng phân giải cellulose chủng ĐMT701, ĐRD801, ĐTQ901 ĐTT111 môi trường CMC Agar 46 ix Đồ án tốt nghiệp Hình 3.5 Kết dương tính cáic chủng vi khuẩn phân lập so với mẫu đối chứng thử nghiệm gelatinase 47 Hình 3.6 Kết qảu kiểm tra khả sinh enzyme lipase chủng ĐTL201, ĐTL301, ĐTL502 ĐTB601 môi trường Tween Peptone Agar 48 Hình 3.7 Vịng kháng khuẩn sinh khối chủng ĐTL501, ĐRD801 ĐTT111 vi khuẩn S dublin 53 Hình 3.8 Vịng kháng khuẩn sinh khối chủng ĐTL301, ĐTL401 ĐTL501 nhóm vi khuẩn E Coli 55 Hình 3.9 Vịng kháng khuẩn sinh khối chủng ĐTL301, ĐTL501, ĐRD801 vi khuẩn Shi sonnei 57 Tà Hình 3.10 Vòng kháng khuẩn sinh khối chủng ĐTT112 iệ il vi khuẩn thị nhóm Vibrio 59 Hình 3.11 Vịng kháng khuẩn chủng ĐTL501, ĐTT112, ĐRD801 u CH TE U H vi khuẩn thị L monocytogenes, L innocua 61 x Đồ án tốt nghiệp CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 4.1 Kết luận - Từ 10 mẫu đất từ vùng đất canh tác nông nghiệp khác huyện Gò Dầu, tỉnh Tây Ninh, phân lập 15 chủng vi khuẩn có khả sinh enzyme ngoại bào Trong đó, có chủng vi khuẩn Gram (+) chủng vi khuẩn Gram (-) - Kết sàng lọc khả sinh enzyme ngoại bào 15 chủng vi khuẩn phân lập cho thấy tất chủng có khả sinh enzyme ngoại bào khác - Kết đánh giá khả ức chế sinh khối 15 chủng vi khuẩn phân lập 19 chủng vi khuẩn thị cho thấy tất vi khuẩn phân lập Tà khơng có khả đối kháng với chủng S typhii(K), S typhii(V), Shi boydii, iệ il Shi flexneri, V parahaemolyticus, E feacalis, S aureus Chỉ có chủng ĐTT112 có u khả đối kháng với S enteritidis S typhimurium Tương tự có chủng CH TE 4.2 Đề nghị U tính đối kháng mạnh H ĐRD801 có khả đối kháng với L innocua Trong đó, chủng ĐTL501 thể - Khảo sát thêm số vùng đất canh tác nông nghiệp khác huyện Gò Dầu, tỉnh Tây Ninh - Đánh giá yếu tố ảnh hưởng đến khả sinh enzyme ngoại bào chủng ĐTL501 - Đánh giả khả ức chế sinh khối vi khuẩn ĐTL501 với nhiều vi sinh vật gây bệnh khác 68 Đồ án tốt nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Nguyễn Lân Dũng, Dương Văn Hợp Giới thiệu số kỹ thuật bảo quản vi sinh vật 03/03/2007.http//vietsciences.free.fr/khaocuu/nguyenlandung/kythuatbaoquan visinhvat.htm Nguyễn Thị Ngọc Huyền 2012 Chọn hỗn hợp vi khuẩn Bacillus đối kháng Vibrio Khoá luận tốt nghiệp Kỹ sư bệnh học thuỷ sản Trường Đại học Cần Thơ Nguyễn Đức Lượng 2004 Công nghệ enzyme Nhà xuất Đại học Quốc gia Tp HCM Tà Nguyễn Đức Lượng 2006 Vi sinh vật công nghiệp Công nghệ vi sinh tập Nhà iệ il xuất Đại học Quốc gia Tp HCM H Tp HCM u Phạm Minh Nhựt 2013 Thực hành vi sinh đại cương Trường Đại học Công Nghệ TE U Phan Thanh Phương 2007 Khảo sát khả sinh kháng sinh chủng nấm sợi phân lập từ rừng ngập mặn huyện Cần Giờ Tp HCM Khóa luận tốt CH nghiệp thạc sĩ sinh học Trường Đại học Sư Phạm Tp HCM Lê Ngọc Thuỳ Trang 2013 Phân lập khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến khả sinh hợp chất kháng khuẩn vi khuẩn Lactobacillus plantarum Khố luận tốt nghiệp Kỹ sư Cơng nghệ Sinh học Trường Đại học Công Nghệ Tp.HCM Nguyễn Tiến Thắng 2008 Giáo trình cơng nghệ enzyme Trường Đại học Công nghệ Tp HCM Trần Linh Thước 2010 Phương pháp phân tích vi sinh vật nước, thực phẩm mỹ phẩm, tái lần thứ sáu Nhà xuất giáo dục Việt Nam Đặng Thị Kim Thoại 2007 Khảo sát mức độ ô nhiễm vi sinh vật loại thực phẩm khu vực thành phố Phan Thiết Khố luận tốt nghiệp Kỹ sư Cơng nghệ Sinh học Trường Đại học Nông Lâm Tp HCM Lê Quốc Tuấn 2009 Vi sinh môi trường Trường Đại học Nông Lâm Tp.HCM 69 Đồ án tốt nghiệp TÀI LIỆU TIẾNG ANH Aslim B., Saglam N., Beyatli Y., 2002 Determination of Some Properties of Bacillus Isolated from Soil Turkish Journal of Biology 26: 41 – 48 Begunin P.,1990 Molecular biology of cellulose degradation Annual Reriew of Microbiology 44 (2): 19 – 248 Bernfeld P., Colowick S.P., Kalpan N.O., 1955 Amylase α and β In: Methods in Enzymology, Academic Press, New York, Vol 1, pp: 149 – 158 Bhat M K., 2000 Cellulases and related enzymes in biotechnology Biotechnology Advances 18: 355-383 Buckley D H., Schmidt T M., 2001 The Structure of Microbial Communities in Soil and the Lasting Impact of Cultivation Microbial Ecology 42: 11 – 21 Tà Chaudhary H S., Yadav J., Shrivastava A R., Singh S., Singh A K., Gopalan N., iệ il 2013 Antibacterial acivity of actinomycetes isolated from different soil samples of Sheopur (A city of central India) Journal of Advanced u H Pharmaceutical Technology and Research (2): 118 – 23 TE U Domrongpokkaphan V., Wanchaitanawong P., 2006 In vitro Antimicrobial Activity of Bacillus spp Against Pathogenic Vibrio spp in Black Tiger Shrimp CH (Penaeus monodon) Kesetsart Journal 40: 949 – 957 Eriksson KEL., Blanchette R.A., Ander P., 1990 Biodegration of cellulose In: Microbiology Enzymatic Degradation of Wood and Wood Components, Springer-Verlag, New York, pp: 89 – 180 Fisher E.H., Stein E.A., 1960 α-amylase In: The Enzyme 2nd Edition, Academic Press Incorporated, New York, pp: 313 – 143 Gilkes N R., Claeyssens M., Aebersold R., Henrissat B., Meinke A., Morrison H D., Kilburn D G., Warren R A J., Miller R C., 1991 Structural and functional relationships in two families of β-1,4-glycanases European Journal of Biochemistry 202 (2): 367-377 70 Đồ án tốt nghiệp Giller K E., Beare M H., Lavelle P., Izac A M N., Swift M J., 1997 Agricultural intensification, soil biodiversity and agroecosystem function Applied Soil Ecology 6: – 16 Kaynar P., Beyatli Y., 2012 Antagonistic Activities of Bacillus spp Strains Isolated from the Fishes Journal of Applied Biologycal Sciences (3): 77-81 Kushwaha A., Verma V., Avasthi M.S., Gupta A R., Singh M., 2011 Amylase Production & Purification from Bacteria Isolated from a Waste Potato Dumpsite in District Farrukhabad U.P State India European Journal of Experimental Biology (3): 107 – 113 Mishra S., Behera N., 2008 Amylase activity of a starch degrading bacteria isolated from soil receiving kichen wastes African Journal of Biotechnology Tà (18): 3326 – 3331 iệ il Narendra D., 2012 Isolation and characterization of protease producing bacterial from soil and estimation of protease by spectrophotometer International u H journal of science and technology, the Experiment (1): – TE U Nayebyazdi N., Salary M., Ghanbary M A T., Ghorbany M., Bahmanyar M A., 2012 Investigation of cellulase activity in some soil borne fungi isolated from CH agricultural soils Annals of Biologycal Reseach (12): 5705 – 5713 Ntabo R., Boga H., Muigai A., Mwirichia R., 2010 Isolation and characterization of bacteria isolates from soil feeding termites and soil from Juja and Kakamega forest in Kenya Journal of Scientific Conference Proceedings, pp: 92 – 106 Pace N R., 1997 A Molecular View of Microbial Diversity and the Biosphere Science 276: 734 – 740 Pandey A., Sukumaran R K., Singhania R R., 2005 Microbial cellulases – Production, applications and challenges Journal of scientific and Industrial Reseach 64: 832 – 844 71 Đồ án tốt nghiệp Prasad M P., 2014 Production of lipase enzyme from Pseudomonas aeruginosa isolated from lipid rich soil International Journal of Pure & Applied Bioscience (1): 77-81 Prescott H., 2005 The gram stain In: Microbiology McGraw-Hill Science, engineering and math, New York, pp: – Rahul S., Awasthi G., Kumar L Kamraj S., 2013 Isolation and characterization of bacteria from soil collected from Himalayan region for the production of lipase by soilid state fermentation using tween-20 Octa Journal of Environmental Research (1): 23 – 29 Rashid Md M., Fakruddin Md., Mazumdar R M., Kaniz F., Chowdhury A., 2014 Anti-Bacterial Activity of Pigments Isolated From Pigment-Forming Soil Tà Bacteria British Journal of Pharmaceutical Research (8): 880 – 894 iệ il Rajeshkumar M P., Mahendran V S., Balakrishnan V., 2013 Isolation and identification of lipase producing organisms from diverse soil samples of Kolli u TE U 205 – 210 H hills International Journal of Current Microbiology and Applied Sciences 2: Saha A., Santra S C., 2014 Isolation and Charactrization of Bacteria Isolated from CH Municipal Solid Waste for Production of Industrial Enzymes and Waste Degradation Journal of Microbiology and Experimentation (1): – Sethi S., Palsaniya P., Mishra R., Beejawat N., Gupta B.L., 2012 Optimization of alkaline protease production from Bacteria isolated from soil Journal of Microbiology and Biotechnology Research (6): 858 – 865 Sethi S., Datta A., Gupta B L., Gupta S., 2013 Optimization of Cellulase Production from Bacteria Isolated from Soil ISRN Biotechnology, Hindawi Publishing Corporation, pp: – Sharon C., Furugoh S., Yamakido T., Ogawa H I., Kato Y., 1998 Purification and characterization of a lipase from Pseudomonas aeruginosa KKA-5 and its role in castor oil hydrolysis Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology 20 (5): 304-307 72 Đồ án tốt nghiệp Sheikh H M A., 2010 Antimicrobial activity of certain bacteria and fungi isolated from soil mixed with human saliva against pathogenic microbes causing dermatological diseases Saudi Journal of Biological Sciences 17: 331 – 339 Sorokulova I., Moore T., Globa L., Barbaree J., Vodyanoy V., 2013 Antagonistic Activity of Bacillus Bacteria against Food-Borne Pathogens Journal of Probiotics and Health, pp: – Swamy M K., Kashyap S S N., Vijay R., Tiwari R., Anuradha M., 2012 Production and optimization of extra cellular protease from Bacillus sp Isolated from soil International Journal of Advandced Biotechnology and Research (2): 564 – 569 Trevors J T., Kirk J L., Beaudette L A., Hart M., Moutoglis P., Klironomos J N., Tà Lee H., 2004 Methods of studying soil microbial diversity Journal of iệ il Microbiological Methods 58, pp: 169 – 188 Van Elsas J D., Duarte G F., Keijzer-wolters A., Smit E., 2000 Analysis of the u by denaturing gradient gel electrophoresis Journal of TE U followed H dynamics of fungal communities in soil via fungal-specific PCR of soil DNA Microbiological Methods 43 (2): 133 – 151 CH Veerapagu M.,Narayanan DR A S., Ponmurugan K., Jeya K R., 2013 Screening selection indentification and optimization of bacterial lipase from oil spilled soil Asian Journal of Phamaceutical and Clinical Reseach (3): 62 – 67 Willerding A L., Oliveira L Ad., Moreira F W., Germano M G., Chagas A F., 2011 Lipase Activity among Bacteria Isolated from Amazonian Soils SAGEHindawi Access to Research, pp: – Yazdanparast R., 1993 Screening for starch-hydrolysing bacteria Medical Journal of the Islamic Republic of Iran (1): 35 – 41 73 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC A: KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG SINH ENZYME NGOẠI BÀO A.1 Kết đánh giá khả sinh enzyme amylase chủng vi khuẩn phân lập (mm) Chủng vi khuẩn Đường kính vòng phân giải tinh bột 14 13 13 ĐTL102 29 29 29 ĐTL201 7 ĐTL301 15 14 16 ĐTL302 7 ĐTL401 7 7 7 23 23 23 u 12 12 15 15 14 ĐMT701 19 18 19 ĐRD801 23 22 ĐTQ901 18 CH 23 18 19 ĐTT111 24 24 24 ĐTT112 19 20 20 ĐTL502 iệ ĐTL501 il ĐTL402 Tà ĐTL101 TE U H ĐTB601 12 Đường kính giếng thạch 7mm Đồ án tốt nghiệp A.2 Kết đánh giá khả sinh enzyme cellulase chủng vi khuẩn phân lập (mm) Chủng vi khuẩn Đường kính vịng phân giải cellulose 13 13 13 ĐTL102 29 29 29 ĐTL201 7 ĐTL301 17 17 17 ĐTL302 7 ĐTL401 13 13 13 ĐTL402 20 20 20 ĐTL501 23 23 23 16 15 15 17 17 17 ĐMT701 21 iệ 20 20 ĐRD801 22 22 22 18 19 24 23 ĐTL502 il ĐTB601 Tà ĐTL101 u 23 ĐTT112 19 CH ĐTT111 TE 19 U H ĐTQ901 19 Đường kính giếng thạch 7mm 19 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC B: KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG B.1 Kết đánh giá khả đối kháng sinh khối vi khuẩn phân lập vi khuẩn nhóm Salmonella dựa vào đường kính vịng kháng khuẩn (mm) S enteritidis S S dublin typhimurium S typhii (K) S typhii (V) 0 0 0 0 0 0 0 ĐTL102 0 0 0 0 0 0 0 ĐTL201 0 0 0 0 0 0 0 ĐTL301 0 0 0 0 0 0 0 ĐTL302 0 0 0 0 0 0 0 ĐTL401 0 0 0 0 0 0 0 ĐTL402 0 0 0 0 0 0 0 ĐTL501 0 ĐTL502 0 ĐTB601 ĐMT701 14 14 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 U 0 0 0 0 ĐRD801 0 16 15 17 0 0 0 0 ĐTQ901 0 0 0 ĐTT111 0 16 14 15 ĐTT112 11 12 11 14 14 17 16 u iệ 13 H il Tà ĐTL101 CH TE 0 0 0 0 0 0 0 0 17 19 0 0 0 Đồ án tốt nghiệp B.2 Kết đánh giá khả đối kháng sinh khối vi khuẩn phân lập vi khuẩn nhóm E Coli dựa vào đường kính vịng kháng khuẩn (mm) E Coli (K) E Coli (V) TEC EC 02 08 ĐTL101 0 0 0 0 0 0 ĐTL102 0 0 0 0 0 0 ĐTL201 0 0 0 0 0 0 ĐTL301 16 15 16 14 14 15 16 16 16 14 15 15 ĐTL302 0 0 0 0 0 0 ĐTL401 0 14 14 14 16 17 17 14 13 13 ĐTL402 0 0 0 0 0 0 ĐTL501 18 18 18 14 14 14 16 16 17 14 15 15 ĐTL502 Tà 0 0 0 0 ĐTB601 0 il 0 0 0 0 ĐMT701 0 0 0 0 0 0 ĐRD801 16 16 15 13 14 12 16 14 14 14 13 15 ĐTQ901 13 14 13 12 14 13 15 14 0 ĐTT111 12 13 12 13 13 14 TE 16 15 15 0 ĐTT112 0 0 CH 0 0 0 0 u iệ U H 13 Đồ án tốt nghiệp B.3 Kết đánh giá khả đối kháng sinh khối khuẩn phân lập vi khuẩn nhóm Shigella dựa vào đường kính vịng kháng khuẩn (mm) Shi sonnei Shi boydii Shi flexneri ĐTL101 0 0 0 0 ĐTL102 0 0 0 0 ĐTL201 0 0 0 0 ĐTL301 17 17 18 0 0 0 ĐTL302 0 0 0 0 ĐTL401 17 17 17 0 0 0 ĐTL402 0 0 0 0 ĐTL501 19 19 20 0 0 0 ĐTL502 Tà 0 0 0 ĐTB601 0 0 0 0 ĐMT701 0 iệ 0 0 0 ĐRD801 14 14 14 0 0 ĐTQ901 H 0 0 0 0 0 ĐTT111 13 13 12 0 0 ĐTT112 0 0 0 0 il u TE U CH 0 Đồ án tốt nghiệp B.4 Kết đánh giá khả đối kháng sinh khối vi khuẩn phân lập vi khuẩn nhóm Vibrio dựa vào đường kính vịng kháng khuẩn (mm) V parahaemolyticus V alginolyticus ĐTL101 0 0 0 0 ĐTL102 0 0 0 0 ĐTL201 0 0 0 0 ĐTL301 0 0 0 17 18 18 ĐTL302 0 0 0 0 ĐTL401 0 0 0 18 18 18 ĐTL402 0 0 0 0 ĐTL501 0 14 15 15 0 ĐTL502 Tà 0 il 0 0 0 ĐTB601 0 0 0 0 ĐMT701 0 0 0 0 ĐRD801 H 0 0 U 19 19 20 0 ĐTQ901 0 0 0 18 19 18 ĐTT111 0 0 19 19 17 ĐTT112 CH 0 0 20 20 19 19 20 19 u iệ TE V harveyi Đồ án tốt nghiệp B.5 Kết đánh giá khả đối kháng sinh khối vi khuẩn phân lập vi khuẩn: L monocytogenes, L innocua, E feacalis, S aureus dựa vào đường kính vịng kháng khuẩn (mm) L L innocua monocytogenes E feacalis S aureus 0 0 0 0 ĐTL102 0 0 0 0 0 0 ĐTL201 0 0 0 0 0 0 ĐTL301 0 0 0 0 0 0 ĐTL302 0 0 0 0 0 0 ĐTL401 0 0 0 0 0 0 ĐTL402 Tà ĐTL501 0 0 0 0 0 18 17 0 0 0 0 ĐTL502 0 0 0 0 0 0 ĐTB601 0 0 0 0 0 0 ĐMT701 0 0 0 0 0 ĐRD801 0 18 18 18 0 0 ĐTQ901 0 0 ĐTT111 0 0 ĐTT112 12 13 13 17 u U H iệ il ĐTL101 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 CH TE Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC C: THÀNH PHẦN MỘT SỐ MÔI TRƯỜNG DINH DƯỠNG SỬ DỤNG TRONG THÍ NGHIỆM C.1 Thành phần mơi trường Starch Agar Starch Agar (g/l) Meat Extract Peptone Tinh bột tan Agar 25 C.2 Thành phần môi trường CMC Agar Tà CMC Agar (g/l) il iệ NaNO3 u K2HPO4 H MgSO4 0,5 U TE KCl CH CMC Peptone Agar 0,5 0,2 25 C.3 Thành phần môi trường Skim Milk Agar Skim Milk Agar (g/l) Skim milk 28 Peptone Yeast Extract 2,5 D – Glucose Agar 25 Đồ án tốt nghiệp C.4 Thành phần môi trường Nutrient Gelatin Nutrient Gelatin (g/l) Peptone NaCl Beef Extract 1,5 Yeast Extract 1,5 Gelatin 120 C.5 Thành phần môi trường Tween – peptone agar Tween – pepton agar (g/l) Peptone 10 Tà CaCl2 0,1 NaCl iệ il H Agar ml/l u Tween 80 25 CH TE U