Khoá luận nghiên cứu tổng hợp tạp chất b của terazosin dùng trong kiểm nghiệm

h ại Đ ọc Mã sinh viên: 1201452 NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP TẠP CHẤT B CỦA TERAZOSIN DÙNG TRONG KIỂM NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2017 ội N TRẦN THỊ OANH -  H TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI c ượ D BỘ Y TẾ h ại Đ ọc ội N -  H TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI c ượ D BỘ Y TẾ TRẦN THỊ OANH Mã sinh viên: 1201452 NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP TẠP CHẤT B CỦA TERAZOSIN DÙNG TRONG KIỂM NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn ThS Đỗ Thị Thanh Thủy Nơi thực Bộ mơn Hóa Dược HÀ NỘI, 2017 h ại Đ ọc c ượ D LỜI CẢM ƠN Sau thời gian nghiên cứu, tìm hiểu thực đề tài với nhiều cố H gắng, thời điểm hồn thành khóa luận lúc tơi xin phép bày tỏ lòng biết ơn ội N chân thành với người dạy dỗ, hướng dẫn giúp đỡ tơi suốt thời gian qua Với lịng biết sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới ThS Đỗ Thị Thanh Thủy giảng viên Bộ mơn Hóa Dược - trường Đại học Dược Hà Nội, người thầy trực tiếp hướng dẫn tận tình bảo tơi thời gian thực khóa luận Tôi xin gửi lời cảm ơn đến thầy giáo, cô giáo anh chị kỹ thuật viên Bộ mơn Hóa Dược Bộ mơn Hóa Lý - trường Đại học Dược Hà Nội, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho thực khóa luận tốt nghiệp Cuối tơi xin gửi lời cám ơn sâu sắc đến gia đình, anh chị, bạn em nhóm kiểm nghiệm mơn Hóa Dược ln động viên khích lệ giúp đỡ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Hà Nội, ngày 18 tháng năm 2017 Sinh viên Trần Thị Oanh h ại Đ ọc DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT H DANH MỤC CÁC BẢNG c ượ D MỤC LỤC ội N DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ……………………………………………………………… Chương TỔNG QUAN……………………………………………………2 1.1 Terazosin 1.1.1 Một số thông tin chung terazosin 1.1.2 Chỉ định terazosin .2 1.1.3 Một số thành phẩm chứa terazosin thị trường 1.2 Tạp chất B terazosintheo USP 37 1.2.1 Một số thông tin chung tạp chất B terazosin 1.2.2 Quy định giới hạn tạp chất B terazosin nguyên liệu thành phẩm chứa terazosin 1.2.3 Phương pháp xác định tạp chất B trongnguyên liệu terazosin theo USP 37 1.3 Tổng quan số phương pháp hóa lý sử dụng nghiên cứu đề tài 1.3.1 Phương pháp sắc ký lớp mỏng 1.3.2 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 1.3.3 Phương pháp đo phổ hồng ngoại 11 1.3.4 Phương pháp phân tích khối phổ 12 1.3.5 Phương pháp đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân 12 1.3.6 Phương pháp đo nhiệt độ nóng chảy .13 1.3.7 Phương pháp phân tích nhiệt trọng lượng .14 1.4 Các phương pháp tinh chế hợp chất hữu 14 h ại Đ ọc c ượ D 1.4.1 Chiết 14 1.4.2 Sắc ký cột 15 H 1.4.3 Kết tinh 15 ội N 1.5 Các phương pháp tổng hợp dẫn chất phenol 16 1.5.1 Phương pháp 16 1.5.2 Phương pháp 16 1.5.3 Phương pháp 16 1.5.4 Phương pháp 17 1.5.5 Phương pháp 17 1.6 Tình hình nghiên cứu Việt Nam giới 17 1.6.1 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 17 1.6.2 Tình hình nghiên cứu giới 18 Chương NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU…………………………………………………… 21 2.1 Nguyên liệu 21 2.2 Thiết bị 21 2.3 Nôi dung nghiên cứu 22 2.4 Phương pháp nghiên cứu 22 2.4.1 Phương pháp tổng hợp tạp chất B 22 2.4.2 Phương pháp tinh chế sản phẩm thô .22 2.4.3 Khẳng định cấu trúc chất tổng hợp 23 2.4.4 Xác định giới hạn tạp chất 23 2.4.5 Xác định hàm lượng IBT 23 2.4.6 Xác định giới hạn tạp chất B nguyên liệu chứa terazosin .23 h ại Đ ọc c ượ D Chương THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN…………… 24 3.1 Tổng hợp tạp chất B terazosin 24 H 3.1.1 Nguyên tắc : 24 ội N 3.1.2 Quy trình tổng hợp chung: 24 3.1.3 Cách đánh giá để lựa chọn điều kiện phản ứng thích hợp 25 3.1.4 Khảo sát giai đoạn diazo hóa 25 3.1.5 Khảo sát giai đoạn thủy phân 29 3.1.6 Quy trình tổng hợp tạp chất B terazosin 32 3.2 Kiểm tra độ tinh khiết sản phẩm thô .32 3.2.1 Đo nhiệt độ nóng chảy 32 3.2.2 Kiểm tra độ tinh khiết sản phẩm thô TLC .33 3.3 Tinh chế IBT thô 34 3.3.1 Chuẩn bị cột sắc ký 34 3.3.2 Đưa mẫu lên cột 34 3.3.3 Tiến hành rửa giải 34 3.4 Kiểm tra độ tinh khiết sản phẩm tinh chế 35 3.4.1 Đo nhiệt độ nóng chảy 35 3.5 Khẳng định cấu trúc sản phẩm tinh chế 37 3.5.1 Đo phổ IR 37 3.5.2 Phổ khối MS 38 3.5.3 Phổ NMR 38 3.5.4 Kết phân tích nhiệt trọng lượng .39 3.6 Xác định giới hạn tạp chất liên quan hàm lượng sản phẩm 40 3.6.1 Xác định tạp chất liên quan TLC 40 h ại Đ ọc c ượ D 3.6.2 Xác định tạp chất liên quan HPLC 40 3.6.3 Bước đầu xác định hàm lượng hàm lượng IBT 43 H 3.7 Sử dụng sản phẩm để kiểm tra giới hạn tạp B nguyên liệu terazosintheo ội N USP 37 45 3.7.1 Điều kiện sắc ký 45 3.7.2 Chuẩn bị dung dịch 45 Chương BÀN LUẬN…………………………………………………….49 4.1 Tổng hợp 49 4.2 Phân lập sản phẩm thô 49 4.3 Khảo sát hệ sắc ký đánh giá mức độ tạp chất sản phẩm thô hệ sắc ký tinh chế phương pháp sắc ký cột 49 4.4 Tinh chế 50 4.5 Đánh giá độ tinh khiết củaIBT TLC xác định nhiệt độ nóng chảy 50 4.6 Khẳng định cấu trúc IBT tinh chế 50 4.7 Về xác định giới hạn tạp chất liên quan hàm lượng IBT phương pháp HPLC 51 4.8 Về sử dụng sản phẩm tinh chế kiểm tra giới hạn tạp chất B nguyên liệu terazosin 52 Chương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ…………………………………53 5.1 KẾT LUẬN 53 5.2 KIẾN NGHỊ 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC h ại Đ ọc c ượ D DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT : Dimethylsulfoxid deuteri hóa HPLC (High-performance liquid : Sắc ký lỏng hiệu cao chromatography) IBT (Impurity B of terazosin) : Tạp chất B terazosin IR (Infranred) : Hồng ngoại MS (Mass spectrum) : Phổ khối lượng NMR (Nulear magnetic resonance) : Cộng hưởng từ hạt nhân PA (Pure analysis) : Tinh khiết phân tích RSD (Relative standard deviation) : Độ lệch chuẩn tương đối TLC (Thin layer chromatography) : Sắc ký lớp mỏng TB : Trung bình USP (United States Pharmacopoeia) : Dược điển Mỹ ội N DMSO-d6 : Chất chuẩn đối chiếu H CRS (Chemical reference standard) h ại Đ ọc c ượ D DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số thành phẩm chứa terazosin thị trường H Bảng 1.2 Dãy chất phenol thơm tổng hợptừ dẫn chất halogenid vòng ội N thơm 19 Bảng 3.2 Hiệu suấtcủa phản ứng tổng hợp thay đổi tỷ lệ mol acid sulfuric .25 Bảng3.3 Hiệu suấtcủa phản ứng tổng hợp thay đổi tỷ lệ mol NaNO2 27 Bảng 3.4 Hiệu suất phản ứng tổng hợp thay đổi thời gian diazo hóa 28 Bảng 3.5 Hiệu suất phản ứng tổng hợp thay đổi nhiệt độ thủy phân 30 Bảng 3.6 Hiệu suất phản ứng tổng hợp khảo sát thời gian thủy phân 31 Bảng 3.7 Hiệu suấtcủa trình tổng hợp 32 Bảng 3.8 Nhiệt độ nóng chảy sản phẩm thô .33 Bảng 3.9 Hiệu suất tinh chế IBT thơ tồn trình tổng hợp tinh chế IBT 35 Bảng 3.10 Nhiệt độ nóng chảy sản phẩm tinh chế .36 Bảng 3.11 Kết phổ IR sản phẩm 37 Bảng 3.12 Kết phân tích phổ 1H-NMR sản phẩm 38 Bảng 3.13 Kết phân tích phổ 13C-NMR sản phẩm .39 Bảng 3.14 Kết phân tích nhiệt trọng lượng sản phẩm 40 Bảng 3.15 Kết đánh giá tính thích hợp hệ thống sắc ký 41 Bảng 3.16 Giá trị thời gian lưu pic sắc ký 41 Bảng 3.17 Giá trị độ phân giải hai pic liền kề 42 Bảng 3.18 Diện tích pic tạp chất IBT 42 Bảng 3.19 Giới hạn tạp chất IBT .43 Bảng 3.20 Kết xác định hàm lượng IBT tinh chế .44 Bảng 3.21 Đánh giá tính thích hợp hệ thống sắc ký 46 Bảng 3.22 Giá trị thời gian lưu pic sắc ký 47 h ại Đ ọc c ượ D DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Công thức cấu tạo terazosin H Hình 1.2 Một vài biệt dược chứa terazosin ội N Hình 1.3 Cơng thức cấu tạo IBT Hình 3.1 Giai đoạn phản ứng tổng hợp IBTdự kiến 24 Hình 3.2 Giai đoạn phản ứng tổng hợp IBTdự kiến 24 Hình 3.4 Sắc ký đồ phản ứng khảo sát tỷ lệ mol acid sulfuric 26 Hình 3.5 Sắc ký đồ phản ứng khảo sát tỷ lệ mol natri nitrit .27 Hình 3.6 Sắc ký đồ phản ứng khảo sát thời gian diazo hóa .29 Hình 3.7 Sắc ký đồ phản ứng khảo sát nhiệt độ thủy phân 30 Hình 3.8 Sắc ký đồ phản ứng khảo sát thời gian thủy phân 31 Hình 3.9 Sắc ký đồ đánh giá sản phẩm thơ .33 Hình 3.10 Sắc ký đồ khảo sát phân đoạn tinh chế IBT qua cột 35 Hình 3.11 Sắc ký đồ sản phẩm tinh khiết .37 Hình 3.12 Giản đồ nhiệt sản phẩm tinh chế .39 Hình 3.13 Sắc ký đồ mẫu trắng xác định hàm lượng IBT 43 Hình 3.14 Sắc ký đồ dung dịch đối chiếukhi xác định hàm lượng IBT 44 Hình 3.15 Sắc ký đồ dung dịch thửkhi xác định hàm lượng IBT 44 Hình 3.16 Sắc ký đồ mẫu trắng kiểm tra giới hạn tạp B nguyên liệu terazosin 46 Hình 3.17 Sắc ký đồ dung dịch đối chiếukhi kiểm tra giới hạn tạp B nguyên liệu terazosin .47 Hình 3.18 Sắc ký đồ mẫu nguyên liệu terazosinkhi kiểm tra giới hạn tạp B nguyên liệu terazosin .47 h ại Đ ọc c ượ D H ội N h ại Đ ọc c ượ D H ội N h ại Đ ọc c ượ D H ội N h ại Đ ọc c ượ D H ội N h ại Đ ọc c ượ D H ội N h ại Đ ọc c ượ D H ội N h ại Đ ọc c ượ D H ội N h ại Đ ọc c ượ D H ội N h ại Đ ọc c ượ D H ội N h ại Đ ọc c ượ D H ội N h ại Đ ọc c ượ D H ội N h ại Đ ọc c ượ D H ội N h ại Đ ọc c ượ D H ội N h ại Đ ọc c ượ D H ội N h ại Đ ọc c ượ D H ội N