Hóa mô miễn dịch

Bài giảng chứng sinh học phân tử Đối tượng: NCS, CKII, CH, CKI, BSNT H P HÓA MÔ MIỄN DỊCH U H PGS TS HỨA THỊ NGỌC HÀ Mục tiêu • Biết hóa mơ miễn dịch • Biết ứng dụng chẩn đoán • Biết ứng dụng tiên lượng số bệnh ung thư • Biết ứng dụng điều trị số bệnh ung thư • Biết điều kiện đánh giá kết nhuộm hạn chế phương pháp H P H U HOÙA MÔ MIỄN DỊCH (IMMUNOHISTOCHEMISTRY ‟ IHC) LÀ GÌ? H P • Là phương pháp xác định vị trí kháng nguyên đặc hiệu diện mô tế bào (bào tương, màng tế bào, nhân) dựa phản ứng miễn dịch (kháng nguyên – kháng thể) kết hợp với hóa chất H U H P ĐẠI CƯƠNG H U HÓA MÔ MIỄN DỊCH ‟ LỊCH SỬ PHÁT TRIỂN  1940s: Coons (miễn dịch hùynh quang) Chất phát huỳnh quang Kháng thể Kháng nguyên H P U H - mô đông lạnh, - cần trang bị kính hiển vi hùynh quang - Kết không lưu trữ lâu HÓA MÔ MIỄN DỊCH ‟ LỊCH SỬ PHÁT TRIỂN  1974: Taylor et al: xác định số kháng nguyên tế bào mô xử lý thường quy phòng xét nghiệm GPB - kết lưu trữ lâu - sử dụng khối nến lưu trữ từ trước H P H U - Không cần KHV hùynh quang  1990s: áp dụng rộng rãi toàn giới  Hiện nay: xét nghiệm thường quy phòng XN GPB Kháng nguyên Antigens H P  từ thể: protein hay polysaccharide vi khuẩn, độc tố, virus, flagella, H U Kháng Nguyên • từ thể: KN gồm: H P - sợi trung gian (intermediate filaments), • - thụ thể hormon (ER, PR, AR ), • - protein sản phẩm đột biến gen: H U c-kit, p53, Her2, EGFR Antigen - Epitope: H P Là phần nhỏ kháng nguyên, nơi tiếp xúc với kháng thể Một kháng nguyên có vài epitope Mỗi epitope nhận biết kháng thể riêng biệt Cần bộc lộ epitope trước cho tiếp xúc với kháng thể (trong quy trình nhuộm HMMD) H U H P H U • p53: gen đè nén u, đảm nhận nhiều chức năng, đặc biệt chận tiến trình phân bào • Đột biến gen p53: tạo phân tử protein chức năng, tích tụ nhân • p53 tích tụ nhiều tiên lượng xấu H P H U Cách tính điểm p53 • Định tính dựa vào: H P – Tỉ lệ % nhân tế bào bắt màu – Đậm độ bắt màu không bắt màu nhạt 1(+): 2(+): 3(+): H bắt màu trung bình >10% bắt màu đậm >10% • Kết luận: Âm tính: Dương tính: 1(+), 2(+), 3(+) Vi thể: biểu p53 H P U H p53 (++) p53 (+++) •Ứng dụng HMMD •trong điều trị Hormon liệu pháp H P H U Liệu pháp nhắm trúng đích Ứng dụng HMMD điều trị Dự đoán đáp ứng điều trị với hormon liệu pháp Xác định thụ thể Estrogen, Progesteron H P ung thư vú „ liên quan đến tiên lượng bệnh nhân „ „ „ „ „ „ độ mô học giai đoạn bệnh U biệt hóa cao, grad thấp: ER, PR dương tính U H đáp ứng tốt với hormon liệu pháp H P U H Liệu pháp nhắm trúng đích (targeted therapy) Ứng dụng HMMD điều trị H P U H Her +++  Điều trị Herceptin GIST Ứng dụng HMMD điều trị H P U CD117 dương tính H  Điều trị Gleevec Ứng dụng HMMD điều trị LYMPHOMA H P U CD20 dương tính H  Điều trị + Rituximab Ứng dụng HMMD điều trị MELANOMA  U H P Đột biến gen BRAF V600E (+) H Điều trị Zelboraf vemurafenib FDA: August 17, 2011 •Các phân tử nhỏ Thuốc Đích phân tử Imatinib mesylate (Gleevec) c-kit* Gefitinib (Iressa) Erlotinib (Tarceva) Bortezomib (Velcade) Tamoxifen EGFR tyrosine kinase EGFR* Ung thö CML, GIST H P dermatofibrosarcoma protuberans U H lung and breast cancers lung cancer apoptosisinducing drug multiple myeloma ER*, PR * breast cancer *phát hóa mô miễn dịch •Điều trị kháng thể đơn dòng Thuốc Đích phân tử Ung thư Rituximab CD20* non Hodgkin lymphoma Trastuzumab (Herceptin) Her2* (ErbB2) Cetuximab (Erbitux) EGFR* Bevacizumab (Avastin) VEGF U H P H *phát hóa mô miễn dịch breast cancers colon cancer non-small cell lung cancer colon cancer, breast cancer, non-small cell lung cancer, sarcoma Hạn chế phương pháp • Đối với số kháng thể, địi hỏi quy trình xử lý mơ nghiêm nhặt, đặc biệt thời gian dung dịch cố định bệnh phẩm H P • Khơng giải tất trường hợp U • Chi phí tương đối cao so với xét nghiệm GPB thường quy phải nhuộm nhiều kháng thể cho ca H KẾT LUẬN * Kỹ thuật đại, khách quan H P * Giúp xác định nguồn gốc mô, chẩn đoán xác loại u,  điều trị tốt loại ung thư U * Giúp tiên lượng theo dõi điều trị ung thö H H P H U