nghiên cứu thành phần hóa học của thân rễ cây bình tinh chét (curcuma pierreana gagnep.) ở quảng bình, việt nam

MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Cùng với phát triển lịch sử, kinh nghiệm dân gian sử dụng thuốc Việt Nam ngày trở nên phong phú, hiệu nghiệm Với chủ trương kết hợp chặt chẽ y học đại y học cổ truyền dân tộc, đặc biệt tri thức địa cộng đồng người dân tộc sử dụng cỏ làm thuốc bồi bổ thể thuốc chữa bệnh có nhiều nỗ lực, đầu tư điều tra, nghiên cứu tài nguyên thuốc nhằm khai thác, sử dụng phục vụ nghiệp chăm sóc sức khỏe cho nhân dân Hiện nay, xu hướng sử dụng thuốc chữa bệnh theo y học dân tộc cổ truyền Việt Nam ngày nhiều tầng lớp nhân dân tin dùng Ðảng, Nhà nước, Chính phủ quan tâm Mặc dù vậy, việc sưu tầm kinh nghiệm dân gian sử dụng thuốc phục vụ sống người chưa tiến hành có hệ thống, nhiều thuốc hay, nhiều thuốc quý bị thất truyền Các thuộc chi Nghệ (Curcuma) vị thuốc người biết đến từ xa xưa Nghệ tin dùng phương thuốc hữu hiệu để trị tụ huyết, máu cam, làm cao dán nhọt, thoa chống vết thương tụ máu, làm mau lành sẹo, trị viêm gan, vàng da, đau dày, ghẻ lở, mụn nhọt… Ngày nghệ sử dụng nhiều Tây y dạng dược phẩm trị sỏi mật, vàng da, táo bón kinh niên, rối loạn tiêu hóa… Đồng thời nghệ dùng thứ gia vị, chất tạo màu để khêu gợi vị giác khích thích ngon miệng người ăn Việc tận dụng nghệ, nguồn nguyên liệu rẻ tiền, phong phú nước áp dụng vào kỹ thuật bào chế Tây y đại tạo nguồn dược, mỹ phẩm nội địa, vừa kế thừa, phát huy tiềm y học cổ truyền, góp phần bảo vệ sức khỏe cho người dân Với điều kiện khí hậu nhiệt đới ẩm, thảm thực vật phong phú, nước ta có khoảng 18 loài nghệ, nhiều loài nghệ số nghiên cứu Một số lồi có tên sách phân loại khơng tìm thấy, ngược lại số lồi nghệ khác tìm thấy chưa định danh Trong nhiều năm qua có nhiều cơng trình nghiên cứu lồi nghệ ứng dụng chúng Lồi bình tinh chét, nước tác giả Nguyễn Thị Bích Tuyết, Đặng Thị Thanh Nhàn nghiên cứu Tuy nhiên, nghiên cứu cho thấy lồi, vùng đất thành phần hàm lượng chất khác Vì vậy, chúng tơi chọn đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học thân rễ bình tinh chét (Curcuma pierreana Gagnep.) Quảng Bình, Việt Nam” nhằm tìm hiểu thành phần hóa học lồi góp phần phân loại thực vật chi Nghệ, sở đề xuất hướng nghiên cứu ứng dụng loài Mục tiêu nghiên cứu - Nghiên cứu TPHH tinh dầu thân rễ bình tinh chét tỉnh Quảng Bình - Nghiên cứu TPHH thân rễ bình tinh chét tỉnh Quảng Bình dung mơi etanol Nội dung nghiên cứu - Tổng quan tài liệu: Tìm hiểu chi Curcuma bình tinh chét đặc điểm thực vật, tình hình nghiên cứu, ứng dụng - Thu mẫu xử lý mẫu thực vật bình tinh chét Lệ Thủy, Quảng Bình - Thu mẫu xác định thành phần hóa học tinh dầu phận thân rễ - Thu dịch chiết từ thân rễ - Xác định TPHH dịch chiết thân rễ Đối tượng nghiên cứu phạm vi nghiên cứu - Tinh dầu phận thân rễ bình tinh chét (Curcuma pierreana) lấy Lệ Thủy – Quảng Bình - Dịch chiết thân rễ bình tinh chét (Curcuma pierreana) lấy Lệ Thủy – Quảng Bình dung mơi etanol metanol Phương pháp nghiên cứu - Nghiên cứu lý thuyết: Phương pháp nghiên cứu hợp chất tự nhiên, tổng quan tài liệu đặc điểm thực vật, TPHH, công dụng số thuộc chi Nghệ (Curcuma) họ Gừng (Zingiberaceae) - Thực nghiệm: + Thu tinh dầu: Phương pháp chưng cất lôi nước + Thu dịch chiết: Phương pháp ngâm chiết, chiết lỏng – lỏng + Xác định thành phần hóa học GC/MS, Bố cục khóa luận Khố luận gồm trang, có bảng hình Ngồi phần mở đầu ( trang), kết luận ( trang), tài liệu tham khảo ( phụ lục, nội dung khoá luận chia làm chương: trang), - Chương 1: Tổng quan tài liệu ( 15 trang) - Chương 2: Thực nghiệm ( trang) - Chương 3: Kết nghiên cứu thảo luận ( trang) Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sơ lược họ Gừng (Zingiberaceae) Họ Gừng (Zingiberaceae) có khoảng 45 chi 1300 loài, phân bố vùng nhiệt đới cận nhiệt đới, chủ yếu Nam Đông Nam Châu Á Bao gồm có thân rễ lớn chứa nhiều chất dự trữ Lá có bẹ dài ơm lấy thành thân giả, cuống ngắn phiến lớn Thân thường có mùi thơm, nhiều lồi thân khí sinh xuất hoa, mọc lên từ thân rễ, xuyên qua thân giả, mang phần cuối cụm hoa (chi Alipinia), có loài cụm hoa nằm thân rễ sát mặt đất Hoa khơng đều, đài hình ống, màu lục, tràng hình ống, phía chia ba thùy, thùy lớn hai thùy bên Chỉ có nhị sinh sản (ở vòng trong) với hai bao phấn lớn nứt phía Một cánh mơi hình lớn, màu sặc sỡ, ba nhị dính với biến đổi thành, nằm đối diện với nhị sinh sản Hai nhị lại biến thành hai nhị lép nhỏ nằm hai bên bao phấn (nhiều giảm lại vảy nhỏ, hẳn) Bầu có ba ơ, chứa nhiều nỗn Vịi nhụy chui qua khe hở hai bao phấn thị ngồi Quả nang đơi mọng Hạt có nội nhũ ngoại nhũ Ở nước ta biết gần 20 chi khoảng 1000 lồi có nhiều có giá trị [3] 1.2 Sơ lược chi Nghệ (Curcuma) Curcuma chi họ thực vật Zingiberaceae, Linneus tập hợp loài lại đề xuất từ năm 1753 Chi có nguồn gốc từ vùng Malayan cổ đại (IndoMalayan), phân bố rộng rãi vùng nhiệt đới từ châu Á đến châu Phi Australia, đặc biệt vùng ẩm phía Bắc Đơng Bắc châu Á Cây thảo có thân rễ khoẻ, nạc, phân nhánh, thịt thường có màu, củ rễ treo đầu rễ, thân rễ yếu khơng có củ phình đầu Lá hình giải, hình mũi giáo, hay hình trái xoan, mọc đồng thời với hoa sau hoa Cán hoa mọc lên thân tán lá, mọc từ đất Cụm hoa hình trụ tạo thành bắc xếp sít nhau, thường có màu lục, phớt hồng, vàng hay đỏ tùy loài Ở nách bắc có hoa mau tàn, màu vàng hay màu hồng, có nằm thụt bắc Cánh mơi thường rộng ngắn Quả nang có vỏ mỏng, hạt nhiều có áo hạt Chúng thường sinh trưởng phát triển vòng năm, phát triển thành tán rộng sum s Sau lại khơ lụi đi, sống đời sống tiềm sinh, đến năm sau lại mọc lên, sinh trưởng phát triển [3, 5] Từ chi hình thành (1753) nay, có 130 lồi mơ tả Tuy nhiên, số lồi khơng mơ tả theo tiếng Latin khơng có mẫu chứng minh nên cịn bị nghi ngờ chưa xác định rõ ràng Do đó, khoảng 80 lồi số chấp nhận thuộc chi Có khoảng 40 lồi vùng nhiệt đới châu Á Ở nước ta có khoảng 18 lồi [1, 4] 1.3 Tình hình nghiên cứu số loài thuộc chi nghệ (Curcuma) 1.3.1 Curcuma longa (Curcuma domestica hay nghệ vàng) [2] Thân rễ Curcuma longa đóng vai trị quan trọng cơng nghiệp dược phẩm, thực phẩm dệt may Nó sử dụng rộng rãi loại thuốc cổ truyền Việt Nam, Trung Quốc, Nhật Bản Đông Bắc Châu Á với tác dụng kìm hãm tác nhân gây ung thư, ngăn cản phát triển tế bào ung thư, điều tiết hoạt động gan mật, giảm cholesterol, chống oxi hóa, viêm khớp, kháng loại virus làm khả miễn nhiễm người, [21, 23] Từ đầu kỷ XIX, nhà nghiên cứu phân lập hợp chất curcumin 0,3% từ thân rễ nghệ vàng, dạng tinh thể màu nâu đỏ, có khả kháng nấm, kháng khuẩn cao xem chất có triển vọng lớn điều trị viêm gan B, C HIV với giá rẻ Ngoài ra, nhà nghiên cứu phân lập nhiều chất có hoạt tính sinh học khác curcumen, α-tocophenol, β-caroten, [21] Với nhiều tính sử dụng sống, năm gần Curcuma longa tiếp tục thu hút quan tâm nhiều nhà khoa học, đặc biệt lĩnh vực dược học Năm 1983, Yoshinobu Kiso cộng chiết 2,0kg dược liệu thô "Ukon" (điều chế từ thân rễ Curcuma longa) EtOH-H2O (1:1, 3lít lần), lần ngâm ngày, sau cô đuổi dung môi thu 212g cao EtOH Cao EtOH chiết với lít EtOAC thu 76g cao tương ứng, lấy 10g tiến hành sắc ký cột silicagel (200g) với dung môi rửa giải CHCl → CHCl3-MeOH → MeOH Phân đoạn CHCl3 (3,5g) tiếp tục sắc ký cột silicagel (100g) với hệ dung môi n-hexanEtOAc (97:3) thu curlon (240mg) dạng lỏng, không màu, [α] D - 0,03o (CHCl3; c 2,16) [13] 14 O * 10 12 11 15 13 Curlon * Để xác định hóa lập thể C7 , lấy 20mg curlon đề hidro hóa với xúc tác Pd-C (5%, 20mg) to = 320 - 340oC phút Sản phẩm thu hòa tan CHCl tiến hành sắc ký cột silica gel (20g) thu (+)ar-turmeron (8mg) dạng lỏng, không màu, [α]D+54,0o (CHCl3; c 0,25), từ xác định cấu hình C7 S [13] Năm 2001, Hoi - Scon Lee cộng công bố khả chống lại Nilaparvata lugens (Homoptera - sâu bọ cánh giống: Delphacidae) Plutella xylostella (Lepidoptera - Loài bướm: Yponomeutidae) ar-turmernon thân rễ khô Curcuma longa Để phân lập turmeron tác giả lấy 2kg thân rễ mua từ hiệu thuốc Seuol, Hàn quốc xay bột chiết với MeOH (3lít 2lần) nhiệt độ phịng ngày Cơ đuổi dung mơi 35oC thu 20g cao, chiết cao qua dung môi n-hexan, clorofom, EtOAc (mỗi dung môi 800ml 2lần), cuối lại 800ml cao nước Các dung môi hữu cô đuổi áp suất giảm 35 oC thu cao tương ứng với khối lượng 12,6g; 3,8g; 0,8g; riêng cao nước làm khơ đơng lạnh thu 2,8g Trong đó, cao n-hexan có hoạt tính tốt N Lugens trưởng thành ấu trùng P Xylostella Do đó, tác giả tiến hành SKC silica gel (70 - 230mesh, 500g, 6cm i.d x 67cm) cho 10g cao với dung môi rửa CHCl MeOH (50:1) Phân đoạn có hoạt tính mạnh (1,6g) tiếp tục chạy SKC silica gel với hệ dung mơi n-hexan-EtOAc (30:1), sau tinh chế lại HPLC với hệ dung môi n-hexan - EtOAc (200:1), tốc độ dịng 4ml/phút bước sóng 242nm thu 86mg chất có hoạt tính trừ sâu xác định ar-turmeron [16] Năm 2007, Yongchi Zeng cộng phân lập số sesquiterpen loại bisalon hai dẫn xuất calebin từ Curcuma longa với quy trình thực nghiệm sau: Từ thân rễ khô (2,5kg) lấy tỉnh Gui Zhou, Trung Quốc đem nghiền thành bột chiết siêu âm với EtOH 80% (8lít 3lần) 0,5 Cơ đuổi dung môi thu 363g cao Cao EtOH chạy SKC silica gel, rửa giải hệ dung môi CHCl - MeOH có nồng độ tăng tuyến tính thu 17 phân đoạn (A→Q)[23] + Phân đoạn C (16,2g) tiến hành SKC silica gel với cyclohexan - EtOAc với nồng độ tăng tuyến tính thu 11 phân đoạn (C1→C11) Phân đoạn C4 tiếp tục thực SKC pha đảo (C-18) thu phân đoạn C 41 (MeOH - H2O, 60:40) C42 (MeOH H2O, 80:40) Phân đoạn C41 tinh chế HPLC (C-8, MeOH - H2O, 63:35, tR:34,6) thu 5-hydroxyl-ar-turmeron (79,8mg) Phân đoạn C42 tinh chế HPLC (C-8, MeOH - H2O, 70:30, tR:81,5) thu bisalon (330,1mg) Phân đoạn C6 tinh chế SKC hở pha đảo (MeOH - H2O, 60:40), sau HPLC (C-8, MeOH - H2O, 55:45, tR:81,5) thu turmerol B (36mg) [23] + Tương tự, phân đoạn D (31,5g) tiến hành SKC silica gel với hệ dung môi cyclohexan - EtOAc, nồng độ tăng tuyến tính thu 11 phân đoạn Phân đoạn D tinh chế SKC pha đảo (MeOH - H 2O, 60:40), HPLC (C-8, MeOH - H2O, 60:40, tR:42,3) thu (6S)-2-Metyl-6-(4-formylphenyl)-2-hepten-425 on (4,5mg) chất lỏng dạng sệt, [α]D +63,3 (c 0,2; MeOH) D6 thực SKC silica gel với hệ dung môi cyclohexan-EtOH (10:1) thu phân đoạn D 61 D62 D61 tinh chế HPLC (c-8, MeOH-H2O, 65:45, tR:75,1) thu (6S)-2-metyl-6-(4hydroxylphenyl-3-metyl)-2-hepten-4-on (11,8mg) dạng lỏng, sệt [α]25 +51,1 (c 0,9; D MeOH) sesquiterpen với khung D 62 tinh chế HPLC (C-8, MeOHH2O, 60:40, tR:22,3) thu (6S)-2-metyl-6-(4-hydroxylphenyl)-2-hepten-4-on (11,1mg), lỏng dạng sệt, [α]25 +76,7 o (c 0,6, MeOH, tR:25,3) thu bisalon-4-on D (153,5g) tR:39,9 thu turmerol A (186,7mg) [2] Trong đó, (6S)-2-metyl-6-(4hydroxylphenyl)-2-hepten-4-on (6S)-2-Metyl-6-(4-formylphenyl)-2-hepten-4on sesquiterpen bisalon + Phân đoạn G (21,6g) tiến hành SKC silica gel với hệ dung môi CHCl - MeOH, nồng độ tăng tuyến tính cho phân đoạn (G 1→G5) G2 tiếp tục thực SKC pha đảo (C-18, MeOH - H 2O, 40:60, 60:40) thu phân đoạn (G 21→G27) G23 tinh chế HPLC (C-8, MeOH-H 2O, 38:62, tR:148,2) thu hỗn hợp dẫn xuất calebin 4"-(4"'-hydroxylphenyl-3"'-methoxyl)-2"-oxo'-3"-butenyl-3-(4'hydroxyphenyl) propenoat 4"-(4"'-hydroxylphenyl)-2"-oxo'-3"-butenyl-3-(4'hydroxyphenyl)-3'-methoxyl)propenoat (7,9mg), dạng bột vô định hình, màu vàng sáng [23] Ngồi nghiên thân rễ, năm 2007, Chunyan Liu cộng tiến hành nghiên cứu phận rễ Curcuma longa thu tỉnh Qinghai, Trung Quốc Rễ sau lấy phơi khô, cắt nhỏ chiết với EtOH 95% (3 lần) nhiệt độ phòng 24 Cơ đuổi dung mơi thu 500g cao, hịa vào H 2O chiết với ete dầu hỏa (nhiệt độ sôi 60 - 90 oC), EtOAc, BuOH Phân đoạn EtOAc (102g) tiến hành SKC silica gel (kích thước 200-300, CHCl 3) thu curcumin L [17] O 13 10 11 12 15 14 Curcumin L 1.3.2 Curcuma aeruginosa Roxb (Nghệ ten đồng, nghệ xanh) [2] Curcuma aeruginosa Roxb sử dụng làm thuốc trị hen suyễn, ho, hoại huyết rối loạn tâm thần y học dân tộc nhiều nước Năm 2007, Trần Thanh Lương cộng công bố phân lập số hợp chất hóa học từ thân rễ lồi Curcuma aeruginosa trồng Tam Đảo, Vĩnh Phú Thân rễ tươi (6,4kg) sau lấy tinh dầu sấy khơ nhiệt độ 50 - 60oC cịn lại 604g, xay nhỏ ngâm với EtOH nhiều lần nhiệt độ phòng Cao EtOH chiết qua ete dầu, EtOAc thu 22,4g 18,6g cao tương ứng [6] Lấy 10g cao ete dầu hỏa tiến hành SKC silica gel (100g) với dung môi rửa giải ete dầu hỏa/CHCl tử 100:0 → 90:10 → 0:100 CHCl - EtOAc từ 100:0 → 80:20 thu 10 phân đoạn Tiếp tục tinh chế phân đoạn SKC với hệ dung môi ete dầu hỏa - CHCl3 với tỉ lệ 1:1 phân đoạn thu zederon; tỉ lệ 25:75 cho phân đoạn (682g) thu hỗn hợp stigmasterol β-sistosterol tỉ lệ 20:80 cho phân đoạn (99,5g) thu rutaecarpin [6] Đối với cao EtOAc (5g) tiến hành SKC silica gel (50g) với hệ dung môi ete dầu/EtOAc (10:0 → 90:10 → 0:100) thu 12 phân đoạn Tinh chế phân đoạn (225mg) SKC silica gel với dung môi CHCl3 thu evodiamin N N H N Rutaecarpin O N N H H O N H3C evodiamin Rutaecarpin evodiamin hai ankaloit indopyridoquinazolin, lớp chất thiên nhiên lần phân lập từ chi nghệ [6] Phan Minh Giang, Văn Ngọc Hướng Phan Tống Sơn nghiên cứu TPHH dịch chiết ete dầu hỏa (sau chiết etanol) từ thân rễ nghệ xanh “var B” (Curcuma aff aeruginosa Roxb.) Hà Nội năm 1998 thu sesquiterpen sesquiterpenoic sau: β-elemen (1,3%); isocaryophyllen (0,3%); γ-elemen (1,3%); αcurcumen (0,1%); α-humulen (0,5%); β-guaien + γ-muurolen (0,2%); (E)-β-farnensen (0,4%), furanodien (2,7%); virdifloren (0,6%); β- chamigren (0,1%); δ-cadinen (0,1%); β-sesquiphellandren (0,3%); humulen epoxit II (0,1%); furanodienon + curzerenon (23,1%); β- eudesmol (0,6%); guaiazulen (1,3%); (E,E)-gemacron (5,2%); curdion (15,3%); curcumol (3,2%); curcumenol (2,7%) Bảy cấu tử phân lập từ dịch chiết furanodien; (E,E)-gemacron; furanodienon, curdion, curzerenon, curcumol curcumenon [9] Tác giả Trần Trung Tuyến phương pháp GC-MS xác định TPHH dịch chiết thân rễ dung môi n-hexan nghệ xanh huyện Hướng Hoá, Quảng Trị gồm: -elemen (2,98%); -elemen (6,09%); E,E- -farsenen (3,00%); germaron (5,21%) số cấu tử chưa định danh có hàn lượng tương đối cao [9] 1.3.3 Curcuma zedoaria (Nghệ đen, ngải tím) [2] Thân rễ Curcuma zedoaria dùng phương thuốc điều trị dày bệnh đường ruột Theo kết nghiên cứu, thành phần hóa học chủ yếu sesquiterpenoit Năm 1985, Yoshinori Shiobara cộng tiến hành nghiên cứu phận Curcuma zedoaria Roscoe Mua từ đảo Yahushima, Nhật Bản Đối với phận thân rễ khô (16kg), tác giả đem chiết với CH 2Cl2 ngày, cô đuổi dung môi thu 500g cao Lấy 5g thực sắc ký cột silica gel (100g) với hệ dung mơi n-hexan - EtOAc có nồng độ tăng tuyến tính từ 99:1 (n-hexan, 400ml) → 98:2 (200ml) → 97:3 (750ml) → 95:5 (1500ml) thu phân đoạn 50ml Phân đoạn 14 cô đuổi dung môi tiến hành SKC Sephdex LH-20 (CHCl - MeOH, 1:1) thu germacron (22mg, mp50 - 51o) Cao phân đoạn 15-17 thực SKC silica gel với n-hexan - EtOAc (2:1) thu curzeremon Phân đoạn 19-22 xử lý tương tự thu furanodienon (127mg, mp89 - 91o) Phân đoạn 23-25 chứa hai spirolacton (124mg) tinh chế HPLC điều chế cho curcumanol A (23mg) curcumanol B (14mg) Các phân đoạn 28-32 34-40 tiến hành SKC silica gel (n-hexan - CH 2Cl2, 1:2) thu dehydrocurdion (502mg)và isocurcumenol (61mg), tương ứng Tương tự, phân đoạn 44-46 rửa giải CH 2Cl2 thu zederon (180mg); phân đoạn 54-57 thu curcumenol (104mg) phân đoạn 61-69 với hệ dung môi CH2Cl2 - CHCl3 (1:1) thu curcumenon (136mg) [20] Đối với chồi non (58g) tác giả cắt nhỏ chiết với CH 2Cl2 ngày Cao thu (130mg) tiến hành SKC silica gel (5g) với CH 2Cl2 thu phân đoạn 20ml Phân đoạn 8-10, đuổi dung mơi, sau tiến hành CKC Sephadex LH-20 với hệ dung môi rửa giải CHCl3 - MeOH (1:1) thu (+)-germacron-4,5-epoxit (4,4mg) [20] Cũng với Curcuma zedoaria lấy đảo Yakushima, Nhật Bản, Isao Louo Nobusuke chiết thân rễ tươi với MeOH Cao MeOH (214g) hịa tan 1lít H 2O chiết với đietyl ete (300ml) n-BuOH (300ml) Dịch n-BuOH cô đuổi dung môi chạy Amberlite XAD-2CC, rửa giải với H 2O → H2O - MeOH (1:1) → MeOH Hai phân đoạn sau gộp lại cô kiệt dung môi thu 11g cao, tiến hành SKC silica gel (CHCl3 - MeOH, 4:1) thu phân đoạn 50ml Gộp phân đoạn 10-15 tiếp tục SKC với EtOAc (9:1) thu phân đoạn 30ml Phân đoạn 10-13 kết tinh lại CHCl3 thu zedoarondiol (324mg) [18] H Makabe cộng chiết thân rễ tươi Curcuma zedoaria (3,6kg, trồng Okinawa, Nhật Bản) với MeOH Cao thô thêm nước chiết với benzen, EtOAc thu hai cao tương ứng với khối lượng 7,8g 0,6g Phần cao benzen có hoạt tính chống viêm chạy SKC silica gel (400g) với hệ dung môi EtOAc - nhexan nồng độ tăng theo kiểu bậc thang (10%) Phân đoạn 20% EtOAc - n-hexan (1,6g) tiếp tục tinh chế TLC thu furanodien (8mg), furanodienon (384mg), urfurenon (4mg), curzedon (7mg), germacron (10mg) hợp chất dạng dẻo, khơng màu (8mg), có cơng thức sau 10 O 15 14 O 12 11 13 Xử lý tương tự phân đoạn 30% EtOAc - n-hexan (3,4g) thu dehydrocurion (33mg); phân đoạn 40% (0,88g) thu zederon (70mg) curcumenon (22mg) Phân đoạn EtOAc (0,6g) tiến hành SKC silica gel (30g) với hệ dung môi có nồng độ tăng tiến theo kiểu bậc thang 10% EtOAc - n-hexan Phân đoạn 70% (25mg) tinh chế TLC thu zedoarinediol (20mg) Furanodien furanodienon có hoạt tính chống viêm chứng phù tai Đây phát sesquiterpenoit khung germacron có hoạt tính chống viêm [19] Năm 2003, Hideo Etoh cộng chiết rễ (800g) Curcuma zedoaria trồng Okinawa, Nhật Bản Cao n-hexan (3,47g) SKC silica gel với hệ dung môi nhexan - EtOAc (9:1) thu isoprocurmenol (29mg, 0,0033%) Isoprocurcumenol có khả ức chế The blue mussel (0,7mg/ đường kính 4cm) Mạnh gấp lần so với chuẩn CuSO4 [11] 1.3.4 Curcuma aromatica Năm 1986, Masanori Kuroyanagi cộng công bố kết nghiên cứu thân rễ Curcuma aromatica trồng vườn thuốc trường đại học dược Shizuoka, Nhật Bản Tác giả chiết thân rễ tươi MeOH nhiệt độ phịng, lọc đuổi dung mơi thu cao MeOH Phần bã lại chiết với CHCl nhiệt độ phòng thu cao CHCl3 Cao MeOH thêm nước chiết với CHCl Gộp hai cao CHCl3 (37g) tiến hành SKC silica gel với hệ dung môi benzen - EtOAc (1:1) thu phân đoạn [14, 15] Phân đoạn I tiến hành SKC silia gel với hệ dung môi n-hexan - EtOAc nồng độ tăng tuyến, sau chạy HPLC với hệ dung môi axetonitril - nước cuối tinh chế PLC với hệ dung môi n-hexan - EtOAc thu isoprocurcumenol (150mg), epiprocurcumenol (30mg), neoprocurcumenol (60mg), (4S)-hydroxydehydrocurrdinon (15mg), (4S,5S)-13-axetoxygermacron-4,5-epoxi (25mg) 13-hydroxygermacron (240mg) [15] Thực SKC silica gel với hệ dung mơi n-hexan - EtOAc có nồng độ tăng tuyến tính, từ phân đoạn II phân lập germacron (550mg), curdion (720mg) (4S,5S)germacron-4,5-epoxit Phân đoạn III phân lập dehydrocurdion (90mg), neocurdion (150mg) curcumenon (800mg) [14] Phân đoạn IV tiến hành SKC với hệ dung mơi có nồng độ tăng tuyến tính CHCl3 - CH3OH → n-hexan - EtOAc thu procurcumenol (210mg) metylzedoarondiol (160mg) [14] Phân đoạn V tiến hành SKC với hệ dung mơi CHCl - MeOH có nồng độ tăng tuyến tính, sau tinh chế PTLC với hệ dung môi benzen - EtOAc - MeOH (2:2:1) thu zedoarondiol (250mg) isozedoarondiol (80mg) [14] Năm 2003, Hideo Etoh cộng chiết rễ (2,1kg) Curcuma aromatica trồng Okinawa, Nhật Bản với hệ dung môi n-hexan (3lít x 2), sau EtOAc Cao nhexan (11g) tiến hành SKC silica gel với hệ dung môi n-hexan - EtOAc (3:1) thu neocurdion (762mg; 0,036%) Cao EtOAc (2,7g) SKC silica gel với hệ dung môi nhexan - EtOAc nồng độ tăng tuyến tính, sau chạy HPLC thu 9-oxoneoprocurrcumenol (8,6g; 0,0004%) [11] 15 H O 14 OH O 10 11 12 13 10 Phần dung dịch lại tiếp tục chiết với etyl axetat (100ml 4) kiệt Cô đuổi dm thu dịch cô màu vàng đậm (kí hiệu BT-3) + Phần bã sau lọc ép sấy khô tủ sấy nhiệt độ 60 0C, thu 200g bã khô Cho 200g bã khơ vào bình chứa thủy tinh Rót dung mơi etanol vào bình xấp xấp bề mặt lớp bột Giữ yên nhiệt độ phòng khoảng 24 Sau đó, dung dịch chiết lọc ngang qua tờ giấy lọc, dịch chiết có màu đỏ thẫm Tiếp theo, rót dung mơi vào bình chứa bột tiếp tục trình chiết thêm lần để chiết kiệt mẫu Các dịch chiết gom chung lại, thu hồi dung môi máy cất quay hút chân không, cô đuổi dm đến kiệt thu 14,1719g cao etanol có màu đen Cao etanol hòa tan vào 200ml nước cất Chiết dung dịch thu với dm n-hexan kiệt (100ml 3) Phần dung dịch n-hexan (màu vàng nhạt) đem lọc, đuổi dm thu dịch màu vàng (kí hiệu BT-1’) Phần dung dịch nước sau chiết kiệt với dm n-hexan, tiếp tục chiết kiệt với dm đietyl ete (100ml lần) Cô đuổi đietyl ete thu dịch màu đỏ nâu (kí hiệu BT-2’) Phần dung dịch lại tiếp tục chiết với etyl axetat (100ml 5) kiệt Cô đuổi dm thu dịch màu vàng đậm (kí hiệu BT-3’) + Gộp dịch cô BT-1 với BT-1’ thu dịch n-hexan màu vàng + Gộp dịch cô BT-2 với BT-2’ thu dịch đietyl ete màu đỏ nâu + Gộp dịch cô BT-3 với BT-3’ thu dịch etyl axetat màu vàng đậm 19 Quá trình thu dịch chiết thực theo quy trình hình 2.4 2,2kg thân rễ tươi Xay Lọc, ép qua rây Bã Dịch nước đặc Sấy 60 C Lọc hút Ngâm etanol chân không Lọc, cô đuổi dung môi Bột Dịch nước Cao etanol màu đen Thêm 200 ml nước Cô cạn đến 300ml Chiết với n-hexan Chiết với n-hexan Cô đuổi dm (100ml lần) Dịch n-hexan Cô đuổi dm (100ml (màu vàng) lần) GC/MS Dịch nước lại Xác định TPHH Dịch nước lại Chiết với đietyl ete (100ml lần) Chiết với đietyl ete Cô đuổi dm Dịch đietyl ete Cô đuổi dm (100ml lần) (màu đỏ nâu) Dịch nước lại SKBM Dịch nước lại 20 Chiết với etyl axetat (100ml lần) Chiết với etyl axetat Cô đuổi dm Dịch etyl axetat Cô đuổi dm (100ml lần) (màu vàng đậm) Dịch nước lại SKBM Dịch nước cịn lại Hình 2.4 Quy trình tách chiết dịch chiết thân rễ bình tinh chét Lệ Thủy, Quảng Bình 2.6 Xác định thành phần hóa học dịch chiết n-hexan Thành phần hóa học dịch chiết thân rễ phân tích phương pháp sắc ký khí - khối phổ liên hợp (GC/MS) Trung tâm Đào tạo Phát triển sắc ký thành phố Hồ Chí Minh, 79 Trương Định, Quận, Thành phố Hồ Chí Minh 2.7 Sắc ký mỏng Dịch chiết thân rễ đietyl ete etyl axetat tiến hành thử SKBM để tìm hệ dm tốt trình rửa giải cột sắc ký Bản mỏng silica gel F 254 tráng sẵn nhôm, độ dày 0,25mm Sau triển khai với hệ dm, mỏng sấy khô nhận diện chất qua đèn tử ngoại, nhận định sơ chất qua vệt sáng mỏng xác định giá trị Rf Phun dung dịch vanilin/H2SO4đ lên mỏng đốt nóng nhận diện chất qua vết than hóa, chúng tơi nhận thấy chất phân đoạn khơng có tương tác với thuốc thử màu 21 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Tên khoa học Mẫu thực vật bình tinh chét thu hái huyện Lệ Thủy, Quảng Bình giám định nhà giáo ưu tú : Đỗ Xuân Cẩm, nguyên giảng viên trường Đại học Nông lâm Huế, giáo viên thỉnh giảng Đại học Huế, Qui Nhơn, Tây Nguyên, chuyên gia tư vấn bảo vệ môi trường phát triển bền vững Kết giám định xác định mãu có tên khoa học Curcuma pierreana Gagnep., học Zingiberaceae 3.2 Thành phần hóa học tinh dầu 22 Hình 3.1 Sắc ký đồ GC tinh dầu thân rễ Curcuma pierreana Quảng Bình Theo kết phân tích GC/MS, tinh dầu thân rễ tươi (Mẫu TCP) Curcuma pierreana Quảng Bình có hàm lượng 0,03% với cấu tử nhận danh (94,87%), bao gồm: 1,8-cineol (28,13%), β-pinen (16,76%), longiverbenon (15,00%), borneol (13,46%), camphor (8,40%), α-pinen (6,84%) camphen (6,28%) 1,8-cineol xuất với hàm lượng cao nhất, hợp chất tìm thấy tinh dầu thân rễ nhiều lồi khác thuộc chi Curcuma Nó sử dụng nhiều chất khử mùi, khử trùng, thuốc chữa long đờm, chất tẩy màu, thuốc xịt mũi cổ họng, Bảng 3.1 TPHH tinh dầu thân rễ tươi Curcuma pierreana Quảng Bình, Việt Nam TT RT (phút) 6,338 7,616 8,094 10,698 16,808 17,566 32,705 Cấu tử α-pinen Camphen β-pinen Eucalyptol (1,8-Cineol) Camphor Borneol Longiverbenon Hàm lượng (%) 6,84 6,28 16,76 28,13 8,40 13,46 15,00 So sánh với mẫu tinh dầu thân rễ tươi Curcuma pierreana Quảng Bình Huế cho thấy có khác biệt lớn Các cấu tử mẫu Huế isoborneol (22.9%) bornyl acetate (18.8%) Tuy nhiên, hai hợp chất không thấy xuất mẫu Quảng Bình Ngồi có số hợp chất tìm thấy lồi này khơng thấy lồi Như nói trên, khác biệt điều kiện khí hậu, địa lý, thời gian thu hoạch, thổ nhưỡng Bảng 3.2 Bảng so sánh TPHH tinh dầu thân rễ Curcuma pierreana Quảng Bình Thừa Thiên Huế Cấu tử Quảng Bình (%) Thừa Thiên Huế (%) Isoborneol - 22,90 Isobornyl axetat - 18,80 23 Camphor 8,40 7,20 Oxo- -Flagen - 4,70 1,8-cineol 28,13 4,60 Caryophyllen oxit - 3,50 - 300 Axit panmitic - 2,80 Viridiflorol - 2,50 Terpinen-4-ol - 1,30 Camphen 6,28 1,10 α-pinen 6,84 - β-pinen 16,76 - Borneol 13,46 - Longiverbenon 15,00 - -copaen 3.2 Thành phần hóa học dịch chiết n-hexan TPHH dịch chiết thân rễ Curcuma pierreana tỉnh Quảng Bình dung mơi n-hexan phân tích phương pháp GC/MS để nhận diện cấu tử Trung tâm Đào tạo Phát triển sắc ký thành phố Hồ Chí Minh cho kết sau: 24 Hình 3.2 Sắc ký đồ GC/MS dịch chiết thân rễ Curcuma pierreana tỉnh Quảng Bình dung mơi n-hexan TT 10 11 12 13 14 15 RT (phút) 6,132 7,853 10,301 16,529 17,3 17,687 24,401 25,091 25,376 26,415 26,402 27,703 27,783 28,328 28,894 Cấu tử α-thujen β-pinen D-limonen Camphor Isoborneol Borneol Đihidro-5-propyl-2(3H)-Furanon p-Metha-1(7),2-đien-8-ol 1-xiclohexyletanol 2-etylhexyl mercaptoaxetat metyl 3-metyl-2,6-heptadienoat 1-etoxy-4-etylbenzen 1-(1,5-dimetyl-4-hexenyl)-4-metylbenzen 2,3-dimetylnonan 3-(1,5-dimetyl-4-hexenyl)-6-metylencyclohexen Hàm lượng (%) 0,01 0,05 0,08 0,03 0,18 0,03 0,03 0,02 0,02 0,09 0,02 0,21 0,02 0,03 0,03 25 16 17 18 19 30,98 31,654 31,817 32,242 0,02 0,05 0,03 0,10 33,822 34,498 35,028 35,578 43,485 Guaiol Aromadendrene oxit-(2) 2-(1-metyl-2-nitroetyl)xiclohexanon Ar-tumeron 1,2,3,4,5,6,7,8-octahydro-1,4-dimetyl-7-(1metyletenyl)azulen 11-hexadexyn-1-ol 4-(2,2-dimetyl-6-metylenxiclohexyliden)-3metylbutan-2-on 6-(p-tolyl)-2-metyl-2-heptenol 2-etylhexyl benzoat Metyl 3-metylen-2,2-dimetyl-5-[(E)-1propenyl]xiclopentancacboxylat 2-metyl-2-(3-metyl-2-oxobutyl)-1-xiclohexanon 2,6-bis(2-metylpropyliden)xiclohexanon Cedrol 4,7,7-trimetylbixiclo[4.1.0]heptan-2-ol Ledol 20 32,48 21 32,616 22 32,917 23 24 33,086 33,254 25 33,619 26 27 28 29 30 31 44,11 7(11)-selinen-4 -ol 1,48 32 53,032 Bis(2-etylhexyl)phtalat 53,63 điisooctyl 1,2-benzenđicacboxylat 33 0,43 0,08 0,45 0,16 0,25 1,27 0,54 0,13 0,22 0,14 0,22 0,12 93,46 Bảng 3.3 TPHH dịch chiết thân rễ tươi Curcuma pierreana Quảng Bình, Việt Nam Theo kết phân tích GC/MS, dịch chiết thân rễ tươi (Mẫu DNCP) Curcuma pierreana Quảng Bình có 33 cấu tử nhận danh (100%) (Xem bảng 3.3) Điisooctyl 1,2-benzenđicacboxylat xuất với hàm lượng cao (93,46%) Tổng thành phần cấu tử khác chiếm 6,54% Hợp chất tìm thấy dịch chiết nhiều loài khác thuộc chi Curcuma Ngồi tìm thấy có mặt số hợp chất quen thuộc β-pinen, camphor, isoborneol, borneol So sánh với mẫu tinh dầu (mẫu TCP) dịch chiết thân rễ tươi (Mẫu DNCP) Curcuma pierreana Quảng Bình cho thấy có khác biệt lớn Cấu tử tinh dầu thân rễ tươi thu phương pháp chưng cất lôi nước 1,8cineol (28,13%) hợp chất không thấy xuất dịch chiết n-hexan, cịn cấu tử dịch chiết thân rễ tươi dung môi n-hexan điisooctyl 1,2benzendicacboxylat (93,46%) lại khơng tìm thấy tinh dầu thân rễ thu 26 phương pháp chưng cất lôi nước Có số cấu tử giống hai mẫu -pinen, camphor Tuy nhiên hàm lượng cấu tử hai mẫu khác Có số hợp chất với hàm lượng thấp tìm thấy mẫu khơng thấy mẫu Ngoài ra, phương pháp ngâm chiết n-hexan, ta thu nhiều cấu tử Vậy hai phương pháp chưng cất lôi nước phương pháp ngâm chiết với dung môi, tinh dầu thu phương pháp phương pháp có hàm lượng cấu tử số cấu tử khác nhau, phương pháp ngâm chiết cho ta số lượng cấu tử tinh dầu cao Tiến hành so sánh TPHH DC n-hexan bình tinh chét (C.pierreana Gagnep.) Quảng Trị với lồi bình tinh chét (C.cochinchinensis Gagnep.) Quảng Trị, chúng tơi nhận thấy có khác biệt lớn cấu tử hàm lượng cấu tử Kết so sánh cụ thể cấu tử trình bày bảng 3.3 Cấu tử α-thujen β-pinen D-limonen Camphor Isoborneol Borneol Đihidro-5-propyl-2(3H)-Furanon p-Metha-1(7),2-đien-8-ol 1-xiclohexyletanol 2-etylhexyl mercaptoaxetat metyl 3-metyl-2,6-heptadienoat 1-etoxy-4-etylbenzen 1-(1,5-dimetyl-4-hexenyl)-4-metylbenzen 2,3-dimetylnonan 3-(1,5-dimetyl-4-hexenyl)-6-metylencyclohexen Guaiol Aromadendrene oxit-(2) 2-(1-metyl-2-nitroetyl)xiclohexanon Ar-tumeron 1,2,3,4,5,6,7,8-octahydro-1,4-dimetyl-7-(1metyletenyl)azulen Quảng Bình (%) 0,01 0,05 0,08 0,03 0,18 0,03 0,03 0,02 0,02 0,09 0,02 0,21 0,02 0,03 0,03 0,02 0,05 0,03 0,10 Quảng Trị (%) 1,95 2,75 - 0,43 - - 27 11-hexadexyn-1-ol 4-(2,2-dimetyl-6-metylenxiclohexyliden)-3-metylbutan-2on 6-(p-tolyl)-2-metyl-2-heptenol 2-etylhexyl benzoat Metyl 3-metylen-2,2-dimetyl-5-[(E)-1propenyl]xiclopentancacboxylat 2-metyl-2-(3-metyl-2-oxobutyl)-1-xiclohexanon 2,6-bis(2-metylpropyliden)xiclohexanon Cedrol 4,7,7-trimetylbixiclo[4.1.0]heptan-2-ol Ledol 0,08 0,45 - 0,16 0,25 - 1,27 - 0,54 0,13 0,22 0,14 0,22 - 7(11)-selinen-4 -ol 1,48 - Bis(2-etylhexyl)phtalat Điisooctyl 1,2-benzendicacboxylat 1,8-cineol Terpinen-4-ol Axit palmilic Axit lioleic Benzyl benzoat Axit pentadecanoic 0,12 93,46 - 2,18 3,71 14,03 22,05 4,72 3,92 Bảng 3.3 Bảng so sánh TPHH DC thân rễ C.pierreana Gagnep Quảng Bình C.cochinchinensis Gagnep Quảng Trị 3.3 Sắc ký mỏng Khi tiến hành sắc ký mỏng dịch chiết etyl axetat với hệ dung môi clorofom : metanol (90:10) thấy xuất ba chấm trịn có giá trị 28 Ta thấy với giá trị sử dụng mơi phân sắc ký cột hệ dung để tách đoạn Hình 3.3 Sắc ký đồ mẫu dịch chiết etyl acetat 29 KẾT LUẬN Trong phạm vi nghiên cứu đề tài, thu số kết sau Xác định tên khoa học bình tinh chét Lệ Thủy, Quảng Bình Curcuma pierreana Gagnep., họ Zingiberaceae TPHH mẫu thân rễ dung mơi n-hexan Curcuma pierreana Quảng Bình xác định phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ (GC/MS) TPHH mẫu tinh dầu bay có cấu tử là: 1,8-cineol (28,13%), β-pinen (16,76%), longiverbenon (15,00%), borneol (13,46%), camphor (8,40%), α-pinen (6,84%) camphen (6,28%) 1,8-cineol xuất với hàm lượng cao nhất, hợp chất tìm thấy tinh dầu thân rễ nhiều loài khác thuộc chi Curcuma Nó sử dụng nhiều chất khử mùi, khử trùng, thuốc chữa long đờm, chất tẩy màu, thuốc xịt mũi cổ họng, Chiết tách xác định thành phần hóa học DC thân rễ lồi Curcuma pierreana Gagnep Quảng Bình dm n-hexan DC n-hexan có 33 cấu tử định danh (100%) cấu tử điisooctyl 1,2-benzenđicacboxylat xuất với hàm lượng cao (93,46%) Tổng thành phần cấu tử khác chiếm 6,54% TPHH mẫu tinh dầu thân rễ dịch chiết thân rễ n-hexan tương đối khác (xác định phương pháp) Tiến hành chạy SKBM DC etyl axetat DC đietyl ete, kết tìm hệ dm clorofom : metanol (90:10) hệ dung môi tương đối phù hợp để tiến hành chạy SKC DC etyl axetat Vẫn chưa tìm hệ dung mơi thích hợp cho DC đietyl ete 30 TÀI LIỆU THAM KHẢO * Tiếng Việt [1] Nguyễn Chí Bảo (2007), Nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu nghệ đỏ Curcuma sp huyện Hướng Hóa tỉnh Quảng Trị từ dịch chiết dung môi hữu phân cực, Luận văn Thạc sĩ, Đại học Sư phạm Huế [2] Đỗ Xuân Cẩm (2004), Cẩm nang tra cứu tên nông nghiệp thường gặp Việt Nam, NXB Nông nghiệp Hà Nội [3] Võ Văn Chi (2003), Từ điển thực vật thông dụng, tập 1, NXB Khoa học & Kỹ thuật [4] Nguyễn Bảo Hòa (2005), Nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu thân rễ Curcuma sp Phú Yên, Luận văn Thạc sĩ, Đại học Sư phạm Huế [5] Đỗ Tất Lợi (2003), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB y học [6] Trần Thanh Lương, Nguyễn Cao Trí, Phạm Nguyên Đông Yên, Nguyễn Thị Mai Hương, Nguyễn Thị Thanh Thủy, Nguyễn Thị Thúy, Vũ Thị Bích, Studies on rhizome of curcuma aeruginosa roxb Growing in Tam Dao – Vinh Phu, Hội nghị khoa học cơng nghệ Hóa Hữu toàn quốc lần thứ IV [7] Đặng Thị Thanh Nhàn [2008], “Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học bình tinh chét (curcuma cochinchinensis Gagnep tỉnh Quảng Trị” Luận văn Thạc sỹ, đại học sư phạm Huế [8] Phan Tống Sơn, Văn Ngọc Hướng, Nguyễn Văn Đậu, Lương Sĩ Bỉnh (1989), “Về thành phần hóa học tinh dầu thân rễ nghệ trắng (Curcuma aromatica Salisb., Zingiberaceae) Việt Nam”, Tạp chí Hóa học, 27(3), tr 18-19 [9] Trần Trung Tuyến (2007), "Nghiên cứu thành phần hóa học nghệ xanh (Curcuma aeruginosa Roxb.) huyện Hướng Hóa, tỉnh Quảng Trị", Luận văn thạc sĩ, Đại học Sư phạm Huế [10] Nguyễn Thị Bích Tuyết (1998), Nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu lồi thuộc chi curcuma chi Kaempferia họ gừng (Zingberaceae) Việt Nam, Luận án Tiến sĩ, Hà Nội *Tiếng anh [11] Hideo Etoh, Takeyoshi Kondoh, Nohoko Toshika, Kimio Sugiyama, Hajime Ishikawa and Hitoshi Tanaka (2003), 9-oxo-neoprocurcumenol from curcuma 31 aromatica (Zingiberaceae) asan attachment inhibitor against the Blue Musel Mytilus edulis galloprovincialis, Biosci Biotechol Biochem., 67(4), 911-913 [12] Hideji Itokawa, Fusayoshi Hirayama, Kazuko Funakoshi and Koichi Takeya (1985), Studies on the antitumor bisabolane sesquiterpenes isolated from curcuma xanthorrhiza”, Chem Pharm Bull., 33(8) 3488 – 3492 [13] Yoshinobu Kiso, Yuriko Suzuki, Yoshiteru Oshina and Hiroshi Hikino, (1983) Stereostructure of curlone, a sesquiterpenoid of curcuma longa rhizomes, Phytochemistry 22(2) 596-597 [14] Masannosi Kuroyanagi, Akira Ueno, Kaoru Ujie and Sadao Sato (1987), Structures of sesquiterpens from Curcuma aromatica Salisb.” Chem Pharm Bull., 35(1) 53-59 [15] Masanori Kuroyanagi, Akira Ueno, Kiyodaka Koyama and Shinsaku Natori (1990), Structures of sesquiterpenes of curcuma aromatica Salisb II Studies on minor sesquiterpenes”, Chem Pharm Bull., 38(1) 55-58 [16] Hoi-Scon Lee, Wook-Kyun Shin, Cheol Song, Kwang-Yun Cho and YoungJoon Ahn (2001), “Insecticidal activities of ar-curmerone identified in Curcuma longa rhizome against Nikaparvata lugens (Homoptera: Delphacidal) and Plustella (Cepidoptera: Yponomeutidae), J Asia – Pacific Entomol 4(2) 181-185 [17] Chunyan Liu, Bohang Sun, Jian Huang, Huiyuan Gao, Shaodun Wen, Lijun Wu (2007), A novel sesquiterpenes from curcuma longa, Asian Jounal of traditional medicines 2(2) [18] Isao Louno and Nobusuke Kawano (1985), Structure of a guaiane from curcuma zedoaria, phytochemistry, 24(8), 1845-1847 [19] H Makabe, N Maru, A Kuwbara, T Kamo and M Hirota, Antiinflammatory sesquiterpenes from Curcuma zedoaria, sciences of Function Food, Graduate School of Ariculture, Shinchu University, Minami-minowa, Kami-ina, Nagano 399-4598, Japan [20] Yoshinori Shiobara, Yoshinori Asakawa, Mitsuaki, Koji Yasuda and Tsunematsu Takemoto (1985), Curcumenone, curcumanolide A and curcumanolide B, three sesquiterpenoids from curcuma zedoaria, phytochemistry 24(11), 2629 – 2633 [21] M.Tehranipour and R.Javahery (2009), “Neuroprotetive Effect of Curcuma longa Alcoholic Extract on Peripheral Nerves Degeneration after Sciatic Nerve Comperession in Rats”, Journal of Biological Sciences (8): 889-893 32 [22] Kazuaki Yamada, Subeki, Kensuke Nabeta, Masakiro Yamasaki, Ken Katakura and Hideyuki Matsuura (2009), Isolation of antibabesial compound from Brucea javanica, Curcuma xanthirrhiza and Excoecaria cochinchinensis, Biosci Biotechnol Biochem 73(3), 776-780 [23] YongChi Zeng, Feng Qiu, Kyoko Takahashi, JianMu Liang, GeXia Qu and XinSheng Yao (2007), New sesquiterpenes and calebin derivatives from Curcuma longa, Chem Pharm Bull 55(6) 940 – 943 33 ...2 Mục tiêu nghiên cứu - Nghiên cứu TPHH tinh dầu thân rễ bình tinh chét tỉnh Quảng Bình - Nghiên cứu TPHH thân rễ bình tinh chét tỉnh Quảng Bình dung mơi etanol Nội dung nghiên cứu - Tổng quan... Tình hình nghiên cứu hóa học lồi bình tinh chét Quảng Bình Hiện tác giả Lý Thị Thu Hồi có cơng trình luận văn thạc sĩ ? ?Nghiên cứu thành phần hóa học bình tinh chét Quảng Bình, Việt Nam? ?? Ngồi... từ thân rễ - Xác định TPHH dịch chiết thân rễ Đối tượng nghiên cứu phạm vi nghiên cứu - Tinh dầu phận thân rễ bình tinh chét (Curcuma pierreana) lấy Lệ Thủy – Quảng Bình - Dịch chiết thân rễ bình