BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRUONG DAI HOC SU PHAM THANH PHO HO CHI MINH
KHOA HOA HOC
o4
KHểA LUẬN TểT NGHIỆP
CƯ NHÂN HểA HỌC
Chuyờn ngành Húa Hữu cơ Tờn đề tài:
KHẢO SÁT THÀNH PHÁN HOA HỌC
CUA CAY CO SUA LA LON
EUPHORBIA HIRTA L Ho thau dau (Euphorbiaceae)
Hướng dẫn khoa học: Th.S Lờ Thị Thu Hương
Sinh viờn thực hiện: Nguyễn Thị Mỹ Hạnh Niờn khúa: 2010-2014
THU VIEWN
Trang 2Y KIEN CUA HOI DONG
Sink ieN để xin t cỏ Xuõn
Up
Trang 3LỜI CÁM ƠN
Luận văn được thực hiện tại phũng húa hữu cơ thuộc khoa Húa, trường đại học
Su Pham thanh pho Hồ Chớ Minh
Với tõm lũng trần trọng và biết ơn sõu sắc em xin chõn thành cảm ơn cỏ Lờ Thị
Thu Hương, người cụ luụn hột lũng tận tỉnh hướng dẫn, giỳp đỡ tạo mọi điờu kiện thuận
lợi giỳp em hoản thảnh tốt khỏa luận nảy Nếu như khụng cỏ sự chỉ bảo tận tỡnh của cụ tử việc thu thập mẫu, tỡm tư liệu vả trong quỏ trỡnh thực nghiệm luụn được cụ động viờn
chỳng em thi đẻ tài đó khụng được hoản thành như ngảy hụm nay
Em xin cảm ơn cụ Nguyễn Thị Ảnh Tuyết, thầy Bựi Xuõn Hao, thay Duong Thỳc
Huy đó giỳp đỡ và cho chỳng em những ý kiờn quý bỏu để em hoàn thành đẻ tài của
minh
Em xin cảm ơn cỏc bạn phỏng thớ nghiệm húa hữu cơ trường đại học Sư Phạm
thanh pho Hỗ Chỉ Minh đó quan tõm, nhiệt tỉnh hưởng dẫn vả tạo mọi điều kiện giỳp đỡ cm trone suốt qua trỡnh thực hiện dộ tai
Tụi xm gửi lời cảm ơn đến đến tat cả bạn bẻ tụi, đó luụn bền tụi giỳp đỡ và động viờn tụi hoản thành khúa luận này
Trang 5DANH MỤC CÁC BẢNG
Bảng 2.1 Sắc kớ cột silica gel cao ethyè acetate 2- 2-2222 2222222122273222cxxccvccee 16
Bảng 2.2: Sắc kớ cội phõn đoạn EÀè: ccccc,2 0120666 c0 c00i C46 Q566040012Ad46 17 Bảng 2.3 Sắc kớ cội phõn đoạn EA.2 G22 22 1.2.6, 18 Bang 2.4 Sắc kớ cột phan doan BA.2 1 o c.cccccscsccecseessesessnssneceeseesnsessvssvsnnensesneenseneeeeee 18 Bảng 2.5 Sắc kớ cột phõn đoạn EA.2.l.4 coi 19 Bảng 3.1: Số liệu phỏ '?C-NMR của hợp chất EHI và hợp chất so sỏnh 25 Bang 3.2: Số liệu phỏ '?C-NMR của hợp chất EH3 và hợp chõt so sỏnh 28
DANH MỤC CÁC SƠ Đề
Trang 6MỤC LỤC LI MÙ TỦ Ga teenseceeccesekecseaeoodii400080000090/091666gin80gtn I CHƯƠNG 1: TỎNG QUAN 5555555565562 2 1.1 DAC DIEM THUC VAT CÂY CỎ SỬA LÁ LỚNI!Š3*⁄4 ôc2 3 !L11 — MụtachungfèS*“T à Ga ond
I.12 — Vựng phản bố thư hỏi!*! xi0ỏ2i400530iả8 đói ft 3 1:2; CAC NGHIEN COU VE DUOC TINA s0 ceEiieiiieeee 4
!L21 — Hoạt tớnh khỏng viờm(°*?! 4
l.23 - Hoạt thà Khụng khuẩn Tổ s ccni0uiiidiodebtaki 4
123 Hoạt tớnh chồng ung thil!) ooo MA "Mà TxN, 3
MOT SO DON THUỐC DẦN GIAN Cể VỊ CỎ SỮA LA LỚNI!?”!, 5 1.3.CAC NGHIEN CUU VE THANH PHAN HOA HỌC 5 CHƯƠNG 1: THỰC NGHIỆM 14 2.1.NGUYấN LIỆU, HểA CHẤT, THIẾT BỊ Si 15 QD Nguyờn liệu ỡ àceeSVẰ 15 DED: Bb Ui ssisscsicisuci ssa 020v20i8600Av040460000606i46i@sx- lĐ TL l ẽ c.ằằẰa.ằ.ằằ =.e.e.—_—————" 3.2 Cễ LẬP CÁC HỢP CHÁT HỮU CƠ TRONG CÂY CỎ SỮA LA LỚN lú
2.2.1 Sắc kỳ cột phõn đoạn EA.1 ated
222 Sắc kỷ cột phản đoạn EA.].32 17
223 Sắc kỷ cốt phõn đoạn EA.2 SÍ?/
224 Sắc ký cột phõn đoạn EA.21 sanzgéni SA5921099000000000 00 mm /8
22.5, Sắc ký cột phõn đoạn EA.2 ] 4 wal
226 Sắc ky cột phản đoạn EÁ 2 ! $ † AY
Trang 73.1 KHAO SAT CAU TRUC HOA HOC CUA HOP CHAT EHI 24
3.2.KHAO SÁT CÁU TRÚC HểA HỌC CUA HỢP CHÁT EH3 26 CHƯƠNG 4: KẫT LUẬN VÀ ĐẺ XUÁT -.5 J0 NGS?sốhco/vb-C6202 29 (4:1: ET LUẬN: 0012 02020000116408140/4G620406óG0443011444461104382.4/62S002 30
'ệN› oi v0 (-‹4I g5 3I
TÀI LIỀU THAM KHẢO 2222272222220 32 AT EIR TIBI WR eeaenaieeenodaovevdeooadecsesnszeasaudoae IFYIBĂ200312/97.)0 ii 32
Trang 8Khúa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
A SS A
lir xua dộn nay, viộe sir dụng cỏc cõy cú lảm thuốc quý đúng vai trũ hột sức
quan trọng trong đời sụng con người Ngảy nay với nờn kinh tế phỏt triển mạnh mẽ mục tiờu chăm súc sức khỏe con người ngày cảng được đẻ cao, chớnh vỡ thộ, được tớnh vả húa tỉnh của nhiều loại thảo mộc đang được nghiờn cứu và khụng ngừng phỏt triển
Trong đú, cõy cú sữa lỏ lớn hiện diện khắp nơi và được sử dụng trong Y học
cú truyền đẻ chữa cỏc bệnh thụng dụng như: giải nhiệt, hạ sút an thần khỏng viờm, chữa ly hen suyờn, viờm phẻ quản Ngoài ra, cỏ sữa lỏ lớn cũn chứa chất chống oxy húa, khỏng khuõn khỏng nắm lợi tiờu và chồng ung thư
Cho đền nay việc nghiờn cứu vẻ thành phõn húa học của cõy cỏ sữa lỏ lớn ở nước ngoải núi chung rat pha biến đặc biệt ở cỏc nước như Trung Quốc Nhật Bản, Án Độ, Malaysia nhưng ở Việt Nam cỏ rat ớt cụng trỡnh nghiờn cứu vẻ loại cõy nảy
Với những lớ do trờn, chỳng tụi đó chọn đẻ tài “Khảo sỏt thành phần húa
học của cõy cỏ sữa 14 lon — Euphorbia hirta L.” nhằm mục đớch gúp một phần nhỏ vào việc tỉnh hiểu thành phản húa học trong cõy cú sữa lỏ lớn được thu hải ở tỉnh Đồng
Nai
Trang 9Khúa luận tot nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
CHUONG 1:
TONG QUAN
Trang 10Khúa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
' _[=======ằ=ằ=:Œ GP < ššỏHAÁÁÁaaaaaỏạaaaaggĐ5<<— —_-——eẶ- ễ=ẼễẼ
1.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẶT CÂY COSTA LA LON!3-341 Tờn thụng thường C'ỏ sữa lỏ lon
lờn goi khỏc: cú sữa lụng, cú sữa lỏ to
Thuộc họ Thõu dau (Euphorbiaceae)
Tộn khoa hoc Euphorbia hirta Linn
Hiah 1.1: Cay co sữa lỏ lon Hỡnh 1.2: Hoa và quả
LL Mộ ta chung!"
Cỏ sữa lỏ lớn lả cõy thảo sụng hằng năm hay nhiều năm, cú thõn mảnh cao 1 5-40 cm, toàn cõy cú lụng rắp màu vàng nhạt vả cú nhựa mủ trắng
Lỏ mọc đối, cuống ngăn, phiến lỏ hỡnh mũi mỏc, dải 2-3 cm, rộng 5-!5 mm, mộp
cú răng cưa nhỏ Gốc cuồng lỏ cú 2 lỏ kốm nhỏ hỡnh lụng cứng Nhiều cụm hoa hỡnh chộn nhỏ ở cỏc nỏch lỏ Mỗi chộn mang cỏc hoa đơn tớnh
Quả rất nhỏ, đường kinh khoảng l5 mm, khi giả nứt thành 3 mónh vỏ mang 3
hạt rất nhỏ
1.1.2 Ving phan bộ, thu hai!"
Cú sữa lỏ lớn cú nguụn gộc chõu Mỹ nhiệt đới Hiện nay, cõy mọc phụ biến
khụng chỉ ở những vựng nhiệt đới mả ngay cả vựng ỏ nhiệt doi, chau Phi, chau A
và chõu LJc như Trung Quốc, Án Độ, Malaysia, Australia
ế nước ta cõy cú sữa lỏ lớn mọc hoang ở khọp mọi nơi, nhất là những nơi nhiều
súi đỏ, dễ đảng tỡm được ở bở bụi, ven đường
Trang 11Khúa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
-————————————————— 1.2 CÁC NGHIấN CỨU VẺ DƯỢC TÍNH
Ở Việt Nam cõy cỏ sữa lỏ lớn là một trong những cõy thuốc dõn gian quen thuộc đựng đề trị kiết ly, ly trực khuẩn, ly amib, viờm ruột cấp khú tiờu!”!
Dựng cõy cú sữa lỏ lớn đẻ chữa cỏc bệnh ngoài da như eczema viờm da học lào,
zona viờm mủ đa, ngoài ra cũn dựng cho phụ nữ sinh đẻ ớt sữa hoặc tắc tia sữa 113,
Hiện nay, ở Việt Nam cao nước cỏ sữa lỏ lớn được phối hợp với cõy hoảng đẳng
đẻ chữa bệnh ly mang tờn Codanzit Í!è,
Nhiều nghiờn cứu chỉ ra rang Euphorbia hirta L chứa nhiều chất trị rỗi loạn tiờu
húa tiộu chay!"l, loột đạ dảy ợ núng nụn mứa Í°è, bệnh ly l3, bệnh cao huyết ỏp I1, chồng ngửa, thụng sữa, rồi loạn kinh nguyệt vụ sinhèđè, cõy cũng được sử dụng trong điều trị cỏc rỗi loạn phẻ quản và đường hụ hắp bao gồm cả bệnh hen suyễn (7è, viờm phẻ quản, sốt mựa hố Í*!!I và viờm kết mạcÍ?!,
Cỏ sữa lỏ lớn cú cỏc hoạt tớnh chống oxy húa khỏng khuắn!"!, khỏng nắm, lợi tiờu!*!, giỏi lo õu??è, chống viờm vả chụng ung thưi??đ)
Ngoài ra người ta cũn nghiờn cứu tỏc dụng của cỏ sữa lỏ lớn trong việc điều trị
bệnh tiều đường l?*,
1.2.1 Hoạt tớnh khỏng vier?"
Năm 1991, khi khảo sỏt chiết xuat n-hexane cila cỏc bộ phận của cõy cỏ sữa lỏ lớn và thành phõn chớnh của nú (triterpene, đ-amyrin 24-methylenecycloartenol -sitosterol), M.C Lanhaers và cỏc cộng sự đó đỏnh giỏ hiệu quả khỏng viờm ở chuột Chiết xuất dung dịch nước đụng khụ cỏ khả năng giảm đau, hạ sốt và chụng
viờm ở chuột Bờn cạnh đú hoạt động trằm cảm trung ương, thể hiện bởi tac dung an thõn mạnh mẽ kột hợp với hiệu ứng giải lo õu, cũng được tiền hành nghiờn cứu
1.2.2 Hoạt tớnh khỏng khuẩn?“
Năm 1995, bằng cỏch sử dụng cỏc dũng tế bảo Vero K Vijaaya, S Ananthan và cỏc cộng sự đó nghiờn cứu tỏc dụng khỏng khuẩn của cỏc hợp chất chiết xuất từ
Camellia sinensis L và chiết xuất methanol của cỏ sữa lỏ lớn chống lại bệnh ly -
một loại bộnh do Shigella spp gay nờn Cỏc tỏc dụng khỏng khuõn của dịch chiết
methanol của cú sữa lỏ lớn đó được chứng mỉnh trong phũng thớ nghiệm băng cỏch
—m—————=TmmTT==T“ù———=
Trang 12Khúa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
` C== HE, TU" GHI, hỡnh Aưnnhớn ham la nminthn an tHPnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnsnn==nnnnnnmr==s==s=mmmmmùmm=————————————-————~-——————— —-
sử dụng lồi vi khũn S¿gefia Thực nghiệm cho thấy chiết xuất khụng gõy độc tế bảo và và cú hoạt tớnh khỏng khuẩn
1.2.3 Hoạt tớnh chẳng ung thưt"đ
Cũng năm 1995 K Vijaya S Ananthan va cac cộng sự cũn nghiờn cửu khả
năng gõy độc của cỏc chất trong cỏc dịch trớch khỏc nhau Cỏc chất chiết xuất này đúng vai trũ như một tỏc nhõn khỏng khuẩn hiệu quả và khụng gõy độc tế bảo Riờng chiết xuất của cỏ sữa lỏ lớn lại cú hoạt tớnh gõy độc tế bảo chọn lọc đổi với
một số dũng tế bảo ung thư Điều đú cho thấy cõy cú sữa lỏ lớn rất hữu ớch trong điều trị ung thư, khỏi u ỏc tớnh đặc biệt ỏc tớnh vả ung thư tế bảo vảy,
MOT SO DON THUỐC DÂN GIAN Cể VỊ CỎ SỮA LÁ LỚN!!*!
>
1.3
Chữa nứt mụi hoặc viờm lưỡi: Lấy dịch mủ của cõy cú sữa lỏ lớn bụi lờn mụi giỳp mau lành cỏc vết nứt nẻ mụi
Cầm tiờu chảy: Lấy khoảng 12 gam thõn lỏ cú sữa lỏ lớn nghiền hoặc xay chung với Ít nước uống vào sẽ giỳp cảm tiờu chảy vả ly
Chữa cỏc bệnh nhiễm tring đa: Lấy cõy cỏ sữa lỏ lớn phơi khụ nghiờn thành
bột trộn thành khối nhóo sau đú đắp lờn vết thương hay vết bỏng
Chữa ly: Cỏ sữa lỏ lớn phối hợp với hoàng đăng nấu thành cao lỏng để uống
Chữa ho hen: Cú sữa lỏ lớn 10 g, lỏ cõy bồng bỏng 3 lỏ, lỏ đõu 20 g Sắc uống ngày một thang, chia 2-3 lần
Chữa thiếu sữa: Cỏ sữa tươi 100g, hạt cõy gạo 40g, hai thứ sắc kỹ lấy nước nấu chao gao ăn
CAC NGHIEN CUU VE THANH PHAN HOA HOC
Nam 1966, D R Gupta va S K Garg!'*! khao sat trộn cao eter dau hộa va cao alcol
của thõn vả lỏ cú sữa lỏ lớn đó cụ lập được cõu tử taraxerol (1) friedelin (2) va &
sitosterol (3)
Nam 1972, Ahmed M Atallad va Harold J Nicholas!*! da c6 lap tir la va than co sita
la lon được cỏc cầu tu: taraxerol (1), taraxerone (4) campestcrol (5) va stigmastcrol (6)
Trang 13Khỏa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
._—————————————— .Ê>Êễm`ằ`ỄẼ————8.F~Ƒ_—==
Năm 1978 L Elnagpar và cỏc cộng sựi'*! đó cụ lập được từ cao alcol của cỏ sữa lỏ
lớn 2 chất cú hoạt tớnh trị liệu lọ acid shikimic (7) va choline (8)
Năm 1980 từ phản thõn của cú sữa lỏ lớn, R K Baslas, R Agarwail””! đó cụ lập
duge cycloartenol (9) va euphorbol (10)
Nam 1991 L Chen đó cụ lập được cỏc hợp chất từ lỏ của cú sữa lỏ lớn”! 6 hợp chất là: > Myricitrin (11) ằ Acid gallic (12) đ 2.4.6-Tri-O-galloyl-D-glucose (13) > 1,2,3.4,6-Penta-O-galloyl-f-D-glucose (14) đ Acid 3,4-di-O-galloylquinic (15) > Quercitrin (16)
Nam 1984, A Sofowora: 1993, J Galvez 1999, P B Johnson va cỏc cộng sự đó
cụ lập được cỏc hợp chat!?!5?9! > 24-Methylenecycloarternol (17) > Ingenoltriacetate (18) > Đ-amyrin acetate (19) > Hexacosan-l-ol (20) >ằ Tinyaloxin (21) >ằ #-amyrin (22)
Năm 2012, Wu Yi, Qu Wei, Geng Di, Liang Jing-Yu, Luo Yang-Li da cộ lap tir cao ethanol
Trang 14Khúa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh ————————————ễ——————————— > Luteolin (30) ằ Gallic acid (12) Cũng năm 2012 Shao-Ming Chi, Yi Wang, Yan Zhao va cac cong sự đó cụ lập chất mới!”?l
> (I1 ˆ8.Š'#)-Š-(Š-carboxymethyl-2-oxocyclopentyl)-3Z-pentenyl acetate (31) Ngoài ra năm 2012 Yuya Nomoto Sachiko Sugimoto, Katsuyoshi Matsunami Hideaki
Otsuka da cộ lap duge cac hop chat!*?!
đ Hirtionoside A (32)
ằ Hirtionoside B (33)
ằ Hirtionoside C (34)
đ 3-Hydroxyvoctanoic acid O-Ê-D-glucopyranoside (35)
ằ Methyl 3-hydroxyoctanoate O-{-D-glucopyranoside (36)
Methy! 3.5-dimethoxy-4-hydroxyphenylpropanoate O-#-D-glucopyranoside (37) Và 13 hợp chất đó biết: (Z)-3-Hexeny! #-D-glucopyranoside (38) vv VV Benzyl! #-D-glucopyranoside (39) -D-(6-O-a-L-arabinopyranosy|)glucopyranose (40) Syringin (41) we W.Y Linocinnamarin (42) Vv Blumenol C glucoside (43) ằ Citroside A (44) ằ Corchoionoside C (45) ằ (R)-lotaustralin (46) > Bumaldoside (47) z lsovitexin (48) ằ Afzelin (49)
> Methy! /+-D-glucopyranosy! tuberonate (50)
Nam 2013 Consolacion Y Ragasa, Kimberly B Cornelio đó cộ lap
Š———>——>—>>s<z=sễfm->>aaaaanaa>measaam>mmme>m>e>aờagagyợynynỶnnananaanaỷnởỶớnnna
Trang 15Khúa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh z laraxerone (4) z 25-Hydroperoxycycloart-23-en-3 đol (S1) z 24-Hydropcroxycycloart-25-en-3/-ol (S2) ằ Cycloarteny! (53) ằ Lupeol (54) ằ a-amyrin (55) ằ f-amyrin (22)
ằ Cycloartenol fatty acid ester (56) >ằ Lupeol fatty acid ester (57) >ằ a-amvyrin fatty acid ester (58)
Trang 19Khúa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
Trang 21CHƯƠNG 2:
Trang 22Khúa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
————————ễẦ—šŠ— ———————T——————————————————-—>'—— EE——-
2.1 NGUYEN LIEU, HOA CHÁT, THIẾT BỊ
24.1 Nguyờn liệu
Mau cõy Euphorbia hirta L, duge thu hải ở Đồng Nai vào thỏng 7 năm 2013 Mẫu cõy được phơi khụ trong búng rõm đề nơi khụ thoỏng, sảy ở 50-55°C Sau đú xay thành
bột ngõm trong ethanol đẻ điều chẻ cỏc cao
2.1.2 Húa chất
+ Dung mụi: ethvl acetate petroleum ecther chloroform methanol acetone acetic acid
+ Silica gel: Silica gel 230 - 400 Mesh Himedia - Án Độ đựng cho sắc ký cột
+ Sắc ký bản múng loại 25C — Alufolien 20 x 20 Kiesel gel 60 F2s4, Merck + Thuốc thử hiện hỡnh sắc ký bảng mỏng: HạSO¿ 20%, 2.1.3 Thiết bị + Cỏc thiết bị dựng đẻ giải ly, dụng cụ chứa mẫu + Cột sắc kỷ + Mỏy cú quay chõn khụng Heidolph, mỏy sấy + Bếp cỏch thủy + May soi UV
+ Can điện tử Sartorius Mass 620g
+ Phỏ cộng hưởng tử hạt nhõn 'H-NMR được thực hiện trờn mỏy cộng hưởng từ hạt
nhõn Bruker AC.Đ00, tần số cộng hưởng S00MH¿
+ Phụ cộng hưởng từ hạt nhõn !*C-NMR kột hợp kỹ thuật DEPT được thực hiện
trờn mỏy cộng hưởng từ hạt nhõn Rruker AC.Đ00 tõn số cộng hưởng 125MHz
Tắt cỏ phụ được ghi tại phũng phõn tớch cấu trỳc Viện Húa Học - Viờn Khoa Học vả Cụng Nghệ Việt Nam, I8 - Hoàng Quốc Việt, quận Cõu Giấy, Hà Nội
Trang 23Khúa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
_” ——————————ễễ ễễ-ễ -ễễễ ễ ễễễ———————————ễ
2.2 COLAP CAC HOP CHAT HUU CO TRONG CAY CO SUA LA LON 12 kg mẫu cõy khụ được ngõm với ethanol 96', địch chiết được gom lại rồi cụ
đặc băng mỏy cắt quay đưới ỏp suất giảm thu được 635 gam cao thộ Cao ethanol thộ được chiết lỏng — lỏng lần lượt với ether dõu hoả, ethyl acetate thu được cao ether dau hoỏ (60.4 gam) cao cthyl acetate (335,27 gam) Quỏ trỡnh thực hiện được túm tắt theo
i
so d6 2.1
Sắc kỷ cột silica gel phan cao ethyl acetate (335.27 gam) với hệ dung mụi ED:EA cú độ phõn cực tăng dõn Dịch từ cột sắc ký được hứng vào cỏc binh tam giỏc 250 mi
Sau đú cụ quay thu hỏi dung mụi phần cao thu được đựng vào cỏc hũ bi Dựng sắc ký
bảng mỏng đẻ kiểm tra phan cao thu được, những phản giỏng nhau gom lại thành một
phõn đoạn Kẻt quả thu được 5Š phõn đoạn kớ kiệu là EA 1-5, cỏc phõn đoạn được trỡnh
bay trong bang 2.1
Bang 2.1: Sac ky c6t silica gel cao ethyl acetate
Sắc ký bảng mỏng Phõn Khối lượng ' ` Dung mụi
(với thuốc thử hiện Ghi chỳ
Trang 24Khúa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh 2.2.1 Sắc kỷ cột phõn đoạn EA.!
Phan cao thu duge tir phan doan EA.1 tiộp tục sắc ký cot silica gel với hệ dung mụi
ED:EA tỷ lệ 5:5 Dịch từ cột sắc ký được hứng vao cac binh tam giỏc 250 ml Sau do,
cụ quay thu hồi dung mụi phản cao thu được đựng vào cỏc hũ bớ Dựng sắc ký bảng
múng đề kiếm tra phõn cao thu được những phõn giỏng nhau gom lại thành một phõn
đoạn Kết quả thu được 3 phõn đoạn cỏc phõn đoạn được trỡnh bảy trong bảng 2.2 Bảng 2.2: Sắc ký cột phõn đoạn EA.I
l ; Sắc ký bảng mỏng
Phan Khụi lượng Dung mdi c
(với thuốc thử hiện Ghi chỳ _ đoạn ( (gam) giải ly hỡnh là H;SO¿ 20%)
ED:EA | Hai vết màu đen rừ, vẻt
EA.1.I 29.126 Chua khao sat (5:5) dư mờ —— ———ơl ED:EA | Vắt màu vàng trũn, rừ, EA.1.2 6,456 (5:5) vết đơ mờ mane ent => ED:EA EA.1.3 11,006 Vệt dài Chưa khảo sỏt (5:5) L
2.2.2 Sắc ký cột phõn đoạn EA I.2
Sắc ký cột silica gel phõn đoạn EA.I.2 (6,456 g) với hệ dung mụi ED:EA với tỉ
lệ (7:3) Kết quả thu được 8 mg hợp chất màu vàng Kiểm tra băng sắc ký bảng mỏng
với hệ dung mụi C:Me (9:1) giải ly nhiều lõn cho một vột trũn, rừ, mỏu vàng với Rụ
0.59 Hợp chất này được ký hiệu là EHI
3.2.3 Sắc ký cật phõn đoạn E4.2
Phần cao thủ được từ phõn đoạn Í:A.2 (54.502 g) tiếp tục sắc ký cột silica gel với hệ dung mdi ED: BA ty 1ộ 3:7 Dich tir cot sắc ký được hứng vào cỏc binh tam giỏc 250 ml Sau đỏ cụ quay thu hỏi dung mụi phõn cao thu được đựng vào cỏc hủ hi Dựng sắc
Trang 25Khúa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
ky bang múng đề kiểm tra phần cao thu được, những phần giống nhau gom lại thành
một phõn đoạn Kột quỏ thu được 3 phõn đoạn cỏc phõn đoạn được trỡnh bảy trong bảng 2.3 Bảng 2.3: Sắc ký cột phõn đoạn EA.2 Sắc ký bảng mỏng
Phõn Khối lượng | Dung mụi (với thuốc thử hiện : Chỉ chủ
đoạn (gam) giải ly hỡnh là H;SO; | 20%) ED:EA Vết cam trũn, vết EA.2.1 18,260 Khao sat | (3:7) den — —— =
| ED:EA Nhiều vết cam đẻ
EA.2.2 6.485 Chua khao sat | (3:7) nhau, vết dơ | ED:EA EA.2.3 15.742 Vột kộo dai Chua khao sat (3:7)
2.2.4 Sắc ký cột phõn đoạn EA.2 Phõn cao thu được từ phõn đoạn EA.2.1 được tiếp tục sắc ký cột silica gel với hệ dung mụi ED:EA cú độ phõn cực tăng dần Kết quỏ thu được 4 phõn đoạn, cỏc phõn đoạn được trỡnh bày trong bảng 2.4
Bảng 2.4: Sắc ký cột phõn đoạn EA.2.I
| ‘ Sắc ký bảng mỏng
._ Phõn Khụi lượng | Dung mdi
(với thuốc thử hiện Ghi chu
Trang 26Khúa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
ee
Nhiều vết cam đẻ nhau
EA.2.1.2 3.485 ED:EA (3:7) |, 4 Chua khao sat vột da + EA.2.1.3 2.742 ED:EA (2:8) | Vết cam, vết do ma Khảo sỏt Vết đen trũn, vết dơ EA.2.1.4 5,486 ED:EA (2:8) š Khảo sỏt mờ
2.2.5 Sắc ký cột phõn đoạn EA.2 I.4
Sac ky cột silica gel phan doan EA.2.1.4 (5.486 g) giải ly băng hệ dung mụi C:Me với tớ lệ 10:1 Kết quả thu được 3 phõn đoạn, cỏc phõn đoạn được trỡnh bảy trong bảng 2.5 Bảng 2.5: Sắc ký cột phõn đoạn EA.2.1.4 Khối Sắc ký bảng mỏng Dung mụi Phõn đoạn lượng (với thuốc thử hiện Ghi chỳ iai |
(gam) c.y hỡnh là H;SO; 20%) C:Me (10:1) | Hai vết màu đen rừ,
EA.2.1.4.I 0,341 Khao sat
tron
EA.2.1.4.2 2.934 | C:Me(10:1) Nhiều vết mở Khảo sỏt EA.2.1.4.3 1,268 C:Me (9:1) Vết dai Chua khao sat '
: _—
2.2.6 Sắc ký cột phõn doan EA.2.1.4.1
Sic ky cột silica gel tiếp tục trờn phản đoạn EA.2.l 4.1 (0,341 ứ) giải ly bằng hệ dung mụi C:Me:Aa với tớ lệ 9:]:0,1 Kết quả thu được 4 mg chất ở dạng bột màu trang, ki hiệu EH3
if ar
Trang 27Khúa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh mS SS NS OS Sơ đồ 2.1: Qui trỡnh điều chế cao ether dầu hoa va cao ethyl acetate Bột cõy cú sữa lỏ lớn (12 kg) — Ngắm dam trong ethanol ~ Loc | | Bó khụ | Dịch ethanol | — 75 ~ C6 quay thu hội dung mdi Cao ethanol (635 g)
~ Chiết long — long voi ether dau
hoa, ethy! acetate
~ Cụ quay thu hụi dung mụi
Cao ether dau hoa (ED) Cao ethyl acetate (EA)
(60 g) (335,27 g)
Trang 30
CHUONG 3:
KET QUA
VA
Trang 31Khúa luận tút nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
——————_——————————— ee
3.1 KHẢO SÁT CÁU TRÚC HểA HỌC CỦA HỢP CHAT EHI
— Hợp chat EHI (8 mẹ) là chất rắn màu vàng nhạt, R=0,59 (hệ dung mụi giải ly
chloroform : methanol tỷ lẻ 9: |)
—_ Vệt chất trờn sắc ký bản mỏng (TLC) chuyờn thành màu vàng khi hơ núng và sử dụng thuốc thử hiện màu lả axit sunfUric 209% cho phộp dự đoỏn EHI là một hợp
chat flavonoid,
— Trộn phd 'H-NMR (acetone-ds, 500 MHz) 5 ppm, J Hz (xem phu luc |, 2) xuat hiộn:
+ Hai tin hiộu broad singlet cd dy 6.52 (1H H-8), 6,26 (1H, H-6) cho thay vong A co hai proton ghep cap meta
+ Hai tin hiộu doublet cộ dy 7,69 (1H, d, J = 8.5 Hz), 6,99 (1H, d, / = 8 Hz) vả một tớn hiệu broad, singlet c6 dy 7.82 1a cua cac proton H-6’, H-5' va H-2’ trộn vong B
+ Ngoài ra cũn cú tớn hiệu singlet & 12,15 dac trung cho proton tao liộn kột hydro ndi phần tử (Š-OH) với nhúm carbonyl
Phd C-NMR (acetone-do, 125 MHz) (xem phu luc 3, 4) kột hgp voi phộ DEPT-
NMR (xem phụ lục Š) cho cỏc tin hiệu cộng hưởng ứng với 15 carbon gồm Đ carbon
loại CH ừc (94,5; 99.2: 115.8; 116,2; 121,4), 10 carbon tử cấp ừc (104.1; 123,8:
136,7; 14S,8; 146,9; 148,4; 157,8; 162.3; 165,0; 176,6), trong đú tớn hiệu cú ðc 176.6 đặc trưng cho carbon cua nhom >C=O),
—_ Trờn phụ HSQC (xem phụ lục 6) nhận thõy sự tương quan giữa proton H-6 [6,26
(1H bể š)| với carbon & 99,2 ppm va proton H-8 [6,52 (1H, br s)] vai carbon a 94,5 ppm, do dộ &Â 99,2 va 94.5 la cda C-6 va C-8, tương tự ta quy kết cỏc tin hiộu c6 &
115.8; 116.2; 121.4 la cla carbon C-2', 5' và C-6'
—_ Trờn phố HIMBC (xem phụ lục 7) tương quan từ proton bu 12.15 (5-OH) dộn carbon & 162.3 cho phộp xỏc định đỏy là C-Š tương quan từ proton ði 6.26 (H-6) và du
a
Trang 32Khúa luận tỏt nghiệ Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
6.52 (H-8) dộn carbon 5c 165.0, do dộ carbon nay 14 C-7 Dua trộn ph6 HMBC ta dộ
đảng xỏc định được độ chuyờn dich hoa hoc cua cac carbon con lại
Tử cỏc dữ kiện nờu trẻn, số liệu phỏ !3C.NMR của EHI được so sỏnh với cỏc giỏ trị
tương ứng đó được cụng hỏ cho hợp chỏt quercetin '*!, Sy phi hợp vẻ số liệu phỏ tại cỏc
vị trị tương ứng giữa hai hợp chất cho phộp xỏc định cấu trỳc húa học của EHI là quercetin, cú cụng thức phõn tử C;sHĂứO› vả cú cụng thức cầu tạo như sau:
Hỡnh 3.1: Một số tương quan HMBC cia quercetin
Trang 33Khúa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh .——————-c“——— 9 157.8 156.1 0 104.1 103,0 1’ | 1234 OT 121.9 2 | 7.82(1H.brs) 115.8 3", 4, 6’ 115.0 3 145.8 145.0 4 148.4 147.7 _ Đ" | 6.99(1H,đ.8) 116,2 1", 3', 4 115.6 6 | 7.69(H.d.8.5) | 1214 22 — 1200 'gỉHT† T215 (1H.s) 5 6, 10
3.2 KHAO SAT CAU TRUC HOA HOC CUA HOP CHAT EH3
Hợp chat EH3 (4 mg) la mot chat mau trang, dạng hột cú đặc điểm phỏ:
— Phộ 'H-NMR (MeOD, 500 MHz) (xem phu luc 8, 9) 5u ppm, J Hz: 6,81 (1H, m, H- 2); 4.39 ( 1H, m, H-3); 3,71 (1H, dd, J = 7; 4, H-4); 4,02 (1H, m, H-S); 2.72 (1H, dat, J = 18; 5; 2; H-6a); 2,22 (1H, ddt, J = 18; 5,5; 1,5; H-6b); 3,77 (3H, s, OCHs) ~ Phộ C-NMR (MeOD, 125 MHz) (xem phụ lục !0) kết hợp với phụ DEPT-NMR (xem phụ luc 11), c ppm: 130.2 (C-1): 139,1 (C-2): 67,2 (C-3); 72,6 (C-4); 68,4 (C- 5); 31.5 (C-6); 52,4 (OCH:): 168,7 (C-1')
~ Phỏ COSY, HSỌC, HMBC (MeOD, phụ luc 12, 13, 14, 15) % BIỆN LUẬN CẢÁU TRÚC
~ Phụ !H-NMR (MeOD, 500MHz) (xem phụ lục 8.9) cú:
â â ving trudng thap:
Cú 1 tin hiộu multiplet cua | proton c6 Sy 6.81 ppm dugc quy kột cho proton
cua nhom =C-H khong no (trong vong cyclohexene) e_ ểj vựng trường trung binh:
Cú 3 tin hiệu của 3 proton cú ỗĂt lẫn lượt là 4.39, 4.02 và 3.71 được quy kết
cho 3 proton nhhom —CH-OH (8) nay nam trong ving tir 3.5=4.1 ppm) Co | tin hicu singlet co dy 3,77 là tớn hiÂu proton cua nhhom methoxy,
eee
Trang 34Khúa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
e vựng trường cao:
Co 2 tin hiộu dang doublet-doublet-triplet cua 2 proton cú ồn lắn lượt là 2.72
và 2,22, được quy kết cho proton của nhúm -CH; (I1-6a và H-6h)
— Pho C-NMR (MeOH, 125MHz) (xem phụ lục !1) kết hợp với phụ DEPT (xem phụ
luce 11) cho thay EH3 cú 8 nguyờn tử carbon gom 1 carbon loai CH) | carbon loai
CHĂ, 3 carbon loại CH-OH dc (67,2; 68,4; 72,6), 1 carbon loai -CH= (SÂ 139.1), va 2 carbon tir cap Šc (130,2; 168,7), trong đú tớn hiệu cd dc 168.7 đặc trưng cho carbon
của nhúm >C=O
—_ Tương quan HSQC (xem phụ lục !4) giữa proton ðu 2.72 vả proton ð 2,22 với
carbon 8c 31,5, cho nộn 2 proton 84 2.72 va 5y 2.22 sộ gan trộn carbon &Â 31.5 (C-
6) Tuong quan gitta proton 6, 3,77 voi carbon tai d 52,4 là proton của nhúm methoxy, cling như proton ð (6,81 H-2) tương quan với carhon & dc 139.1 nộn & nảy là của C-2 Tương tự ta quy kết cỏc tớn hiệu cỏ 5c 67,2; 68,4; 72,6 là của carbon
C-3, Š và C-4
~_ Trờn phụ HMBC (xem phụ lục Ă 5) tương quan tử proton ỗu 4.02 (H-Đ) ụu 2.72 (H- 6a) và ụu 2.22 (H-6b) đến carbon ừc 130.2, do đú carbon này là C-l Tương quan từ proton 5 6,81 (H-2) va nu 3,77 (OCHS) dộn carbon ừc 168,7 là của carbon C-]' ~ Trộn phd COSY (xem phu luc /2, /3) cho thấy tương quan từ proton 5y 2,72 (H-6a)
va 5y 2.22 (H-6b) dộn cdc proton 54 6.81 (H-2), 54 4.39 (H-3), 544,02 (H-5), nộn
hỡnh dạng cua proton H-6 là doublet-doublet-triplet
Trang 36CHƯƠNG 4:
KẾT LUẬN VÀ
Trang 37Khúa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh 41 KẫT LUẬN
Việc khảo sỏt thành phần húa học của lỏ cõy cỏ sữa lỏ lớn Euphorbia hirta L được thu hỏi tại tỉnh Đụng Nai thu được những kết quả như sau;
Bảng cỏc phương phỏp sắc ký hợp chất quercetin (EH1) đó được phõn lập từ
phan doan EA.1.2 cia cao ethyl acetate cla cay Euphorbia hirta L Cau tric hộa hoc
của nú được xỏc định bằng cỏc phương phỏp phú hiện đại như: phụ cộng hưởng từ hạt nhõn một chiờu (LD-NMR: !H-NMR, C-NMR va cỏc phụ DEPT 90 DEPT 135) va hai chiờu (2D-NMR: HSỌC HMBC) Kết hợp so sỏnh với cỏc tải liệu tham khảo đó đẻ
nghị cõu trỳc EHI như sau:
HO
Quercetin
Từ phõn doan A.2.1.4.1 cia cao ethyl acetate da cộ lap được hợp chất EH3 sử
Trang 38Khúa luận tết nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
4.2 DEXUAT
Do hạn chế về thời gian nờn chỳng tụi chỉ dừng lại ở việc khảo sỏt cầu trỳc húa học của một số hợp chất của cõy co sita 14 lon — Euphorbia hirta L trong một số phõn đoạn nhỏ của cao etyl acetate Do đú thời gian tới chỳng tụi sẽ tiền hành khảo sỏt trong cỏc phõn đoạn cũn lại của cao ety] acetate đẻ gúp phõn làm rừ hơn thành phần húa học cua cay co sita la lon — Euphorbia hirta L.,
Trang 39Khúa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
TÀI LIỆU THAM KHẢO
TAI LIEU TIENG VIET
|! Đỗ Tất Lợi (2009) Những cõy thuốc và vị thuốc Việt Nam, NXB Y học 200 [2] Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), Phương phỏp cụ lập hợp chất thiờn nhiờn NXB
DHQGTPHCM
[3] Phạm Hoàng Hộ (2000), Cỏn cú Việt Nam Tập 2 NXB Trẻ 291
{4| Phạm Thị Hụng Minh, Hà Thị Bớch Ngọc Nguyễn Văn Mựi, Nguyễn Quyết Tiờn
(2012) “Cỏc flavonoit và triterpen trong lỏ cõy vụi (Cfeistocalyx operculatus) ở Bắc
Giang”, Tạp chớ húa học, 5(4A) 226-229,
[5] Vừ Văn Chỉ (1997) Từ điền cõy thuốc Việt Nam, NXB Y học Hà Nội, 283-284 TAI LIEU TIENG ANH
[6] Abu Arra Basma, Zuraini Zakaria, Lacimanan Yoga Latha, Sreenivasan Sasidharan (2011), “Antioxidant activity and phytochemical screening of the methanol extracts of Euphorbia hirta ”, Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, 386-390
|7] A Annamalai, V.L.P Chnstina , D Sudha , M Kalpana, P-T.V Lakshmi (2013), “Green synthesis, characterization and antimicrobial activity of Au NPs using Euphorbia
hirta L leaf extract”, Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 108, 60-65
[8] A M Atallah, H J Nicholas (1972), “Triterpenoids and steroids of Euphorbia pilulifera”, Phytochemistry, 11(5), 1860
[9] A Sofowora (1984), “Medical Plants and Traditional Medicine in Africa”, John Wiley and Sons, 1, 114-213
[10] Consolacion Y, Ragasa, Kimberly B, Cornelio (2013), “Triterpenes from Euphorbia hirta and their cytotoxicity”, Chinese Journal of Natural Medicines, 11(5), 0528-0533 [II C Panneerselvam, K Murugan K Kovendan, P Mahesh Kumar, J.Subramaniam (2013), “Mosquito larvicidal and pupicidal activity of Euphorbia hirta Linn, (Family: Euphorbiaceae) and Bacillus sphaericus against Anopheles stephensi Liston”, Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, 102-109
{12] D R Gupta S K Gard (1966), “A chemical examination of Euphorbia hirta Linn”, Bull Chem Soc Japan., 3911), 2532-4
|13] Daphne Sue Yen Loh, Hui Meng Er, Yu Sui Chen (2009), “Mutagenic and antimutagenic activities of aqueous and methanol extracts of Euphorbia hirta” Journal
enn errr eee
Trang 40Khúa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hanh
of Ethnopharmacology, 126, 406-414
{14] lwelina Piosro-Jabrucka, Anna Pawelczak, Jaroslaw L Przybyl, Katarzyna Baezek Zenon Weglarz (2011), “Accumulation of phenolic and sterol compounds in
Euphorbia hirta (L.)” Herha polonica, 57?(2) 30-37
[15] J Galvez, A Zarzeulo, M.E Crespo, M.D Lorente, M.A Occte, J Jimenez (1993),
~Antidiarrhoeic activity of Euphorbia hirta extract and isolation of an active flavonoid constituent”, Planta Medical, 594), 333-336
{16} K.Vijaaya, S Ananthan R Nalini (1995), “Antibacterial effect of theaflavin polyphenon 60 (Camellia sinensis) and Euphorrbia hirta on Shigella spp. a cell culture study”, J Ethnopharmacol, 4%(2), 115-8
{ 17] L Chen (1991), “Polyphenols from leaves of Euphorbia hirta L ”, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 16 1), 38-39
[18] L Elnagar, J L Beal, L, M Parks, K N Salman, P Patil, A E Shawarting (1978), “A note on the tsolation and identification of two pharmacologically active constituents
of Euphorbia pilulifera’ Lloydia, 41(1), 73-75
[19] Linfang Huang, Shilin Chen va Methua Yang (2012), “Euphorbia hirta (Feiyangcao): A review on its ethnopharmacology, phytochemistry and pharmacology ”,
Journal of Medicinal Plants Research, 6(39), 5176-5185
[20] M.C Lanhers, J.Fleurentin, P.Cabalion, P.Dorfman, J.M Pelt Dorfman P, Mortier
F, Analgesic (1991), “Antipyretic and anti-inflammatory properties of Euphorbia hirta”, Planta Medica, Đ7(3), 225-31
[21] Mingchuan Liu, Shengjie Yang Linhong Jin, Deyu Hu, Zhibing Wu va Song Yang (2012), “Chemical constituents of the ethy!] acetate extract of Belamcanda chinensis (L.)
DC roots and their antitumor activities”, Molecules, 17, 6156-6169
[22] Met-Fen Shih Yih-Dih Cheng, Chia-Rui Shen, Jong-Yuh Cherng (2010), “A
molecular pharmacology study into the antiinflammatory actions of Euphorbia hirta 1 on the LPS-induced RAW 264.7 cells through selective INOS protein inhibition”, /
Nat Med, 64, 330-335,
[23] Patricia B Johnson Ezzeldin M Abdurahman Emmanuel A Tiam (1999),
“Euphorbia hirta leat extracts increase urine output and electrolytes in rats” Journal of Ethnopharmacology, 65, 63-69
—_——————————Ss====Z>-.-Ỷ>->-.-.ẳs-s-sa-sỶ-.-srỶ-.Ỷ-Ỷ-Ỷ.Ỷ-zỶ- -sễỶễ-=TễỶùỶẳ-iẫễẳr-sễỶ-Ỷ-T=ễỶùễẳr-.-rỶùỶùẳễ -.ẳễẳễẳễẳễ-.-.ờa.ờ.Ỷẳ-œœa