Nghiên cứu tính đa hình gen mã hóa thụ thể vitamin d trong một số thể bệnh lâm sàng do nhiễm vi rút viêm gan b

BỘGIÁODỤCVÀĐÀOTẠO BỘQUỐCPHỊNG HỌCVIỆNQNY NGUYỄNKHUYẾN NGHIÊN CỨU TÍNH ĐA HÌNH GEN MÃ HÓA THỤ THỂVITAMINDỞMỘTSỐTHỂBỆNHLÂMSÀNG DO NHIỄM VI RÚT VIÊM GAN B LUẬNÁNTIẾNSĨYHỌC HÀNỘI-2021 BỘGIÁODỤCVÀĐÀOTẠO BỘQUỐCPHỊNG HỌCVIỆNQNY NGUYỄNKHUYẾN NGHIÊN CỨU TÍNH ĐA HÌNH GEN MÃ HĨA THỤ THỂVITAMINDỞMỘTSỐTHỂBỆNHLÂMSÀNG DO NHIỄM VI RÚT VIÊM GAN B Chuyênngành:Truyềnnhiễmvàcácbệnhnhiệtđới Mã số: 972 01 09 LUẬNÁNTIẾNSĨYHỌC Hƣớngdẫnkhoahọc: PGS.TS.LêHữuSong PGS.TS.ĐỗTuấnAnh HÀNỘI-2021 LỜICẢMƠN Trongsuốtqtrìnhthựchiệnluậnánnày,tơiđãnhậnđƣợcsựgiúpđỡ tận tình nhiều tập thể cá nhân Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới: Đảng ủy Ban Giám đốc Bệnh viện TWQĐ 108, Học viện Quân Y, Bệnh viện Quân Y 103, Bệnh viện Đa khoa Đức Giang, Bệnh viện Đak h o a h u y ệ n M ỹ Đ ứ c , B ộ m ô n t r u y ề n n h i ễ m – V i ệ n Nghiên cứu khoa học y dƣợc lâm sàng 108, Bộ môn truyền nhiễm – Học viện Quân y cho phép, tạo điều kiện giúp đỡ tơi q trình học tập hồn thành luận án Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Lê Hữu Song PGS TS Đỗ Tuấn Anh, ngƣời Thầy tận tình hƣớng dẫn tạo điều kiện thuận lợi để hồn thành luận án Tơi xin chân thành cảm ơn Bác sỹ, Điều dƣỡng viên Viện lâm sàng bệnh truyền nhiễm – Bệnh viện TƢQĐ 108; Khoa Truyền nhiễm bệnh viện Quân y 103; Khoa tiêu hóa -B ệ n h v i ệ n T W Q Đ v Bệnh viện Quân Y 103 cung cấp mẫu bệnh phẩm cho nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới bạn kỹ thuật viên Khoa sinh học phân tử - Bệnh viện TWQĐ 108 hƣớng dẫn thực xét nghiệm sinh học phân tử Tơixintrân trọng cảmơn Thầy,Cơ tronghộiđồng chấmluận ánđã đóng góp nhiều ý kiến q báu giúp tơi hồn thành luận án Cuối cùng,tơixingửilời cảmơn đến giađình,bạnbèvàngƣời thânđã ln ủng hộ, động viên sống nhƣ suốt q trình hồn thành luận văn Tơixinchânthànhcảmơn! Hà Nội, ngày tháng04năm2021 Học viên NguyễnKhuyến LỜICAMĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi với hƣớng dẫn khoa học tập thể nhómnghiên cứu cán hƣớng dẫn Các số liệu, kết trình bày luận án trung thực đƣợc công bố phần báo khoa học Luận án chƣa đƣợc cơng bố Nếu có điều sai tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm HàNội,ngàyt h n g 4năm2021 Tác giả luận án NguyễnKhuyến MỤCLỤC Trangphụbìa Lời cảm ơn Lờicamđoan Mục lục Danhmụcchữviếttắt Danh mục bảng Danhmụchình ĐẶTVẤNĐỀ CHƢƠNG1:TỔNGQUANTÀILIỆU .3 1.1 NHIỄMVIRÚTVIÊMGANBVÀTIẾNTRIỂNLÂMSÀNG 1.1.1 TìnhhìnhnhiễmvirútviêmganBtrênthếgiớivàViệtNam .3 1.1.2 QtrìnhtiếntriểnbệnhởngƣờinhiễmvirútviêmganBmạntính 1.2 TỔNGQUANVỀVITAMIND .7 1.2.1 BảnchấthóahọcvàchuyểnhóacủavitaminD 1.2.2 VaitrịcủavitaminDtronghệmiễndịchcủacơthể 11 1.3 SỰTHIẾUHỤTVITAMIND .13 1.3.1 DịchtễhọcvềtìnhtrạngthiếuvitaminD .13 1.3.2 ThiếuhụtvitaminDởbệnhnhânviêmganBmạntính 15 1.3.3 MốiliênquangiữathiếuhụtvitaminDvàxơgan 16 1.3.4 MốiliênquangiữathiếuhụtvitaminDvàungthƣbiểumơtếbàogan17 1.4 ĐA HÌNH GENVDRVÀ BỆNH LÝ GAN DO NHIỄM VI RÚTV I Ê M GANBMẠNTÍNH 18 1.4.1 CácbiếnthểđahìnhcủaVDR 18 1.4.2 Tínhđ a h ì n h g e n V D R t r o n g v i ê m g a n m n d o n h i ễ m v i r ú t v iêmganB .21 1.4.3 ĐahìnhgenVDRvàxơhóagan 23 1.4.4 ĐahìnhgenVDRvàungthƣgan 24 1.5 CÁCPHƢƠNGPHÁPXÁCĐỊNHĐIỂMĐAHÌNHGEN 26 1.5.1 Địnhnghĩađahìnhđơnnucleotide 26 1.5.2 Phƣơngphápđiệndi .27 1.5.3 PhƣơngpháprealtimePCR 31 1.5.4 PhƣơngphápgiảitrìnhtựSanger .31 CHƢƠNG2:ĐỐITƢỢNGVÀPHƢƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU 33 2.1 ĐỐITƢỢNGNGHIÊNCỨU .33 2.1.1 Đốitƣợngnghiêncứu .33 2.1.2 Tiêuchuẩnchẩnđốncácnhómbệnhnhânnhiễmvirútviêmgan Bmạntính 33 2.1.3 Tiêuchuẩnloạitrừ 36 2.1.4 Cỡmẫunghiêncứu 36 2.1.5 Phânloạimứcđộxơganvàungthƣgan .37 2.1.6 Mẫubệnhphẩmnghiêncứu 38 2.2 PHƢƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU 39 2.2.1 Thiếtkếvàsơđồnghiêncứu 39 2.2.2 Nộidungnghiêncứu .40 2.3 PHÂNTÍCHVÀXỬLÝSỐLIỆU 51 2.4 THỜIGIANVÀĐỊAĐIỂMNGHIÊNCỨU 52 2.5 ĐẠOĐỨCNGHIÊNCỨU 52 CHƢƠNG3:KẾTQUẢNGHIÊNCỨU 53 3.1 ĐẶCĐIỂMCHUNGCỦACÁCĐỐITƢỢNGNGHIÊNCỨU 53 3.1.1 Đặcđiểmlâmsàng 53 3.1.2 Đặcđiểmphânbốvềtuổicủacácnhómnghiêncứu 53 3.1.3 Phânbốgiớitínhcủacácnhómnghiêncứu 53 3.1.4 Đặcđiểmcậnlâmsàngởnhómbệnhnhân viêmganB 54 3.2 PHÂNB Ố K I Ể U G E N V À A L E N C Ủ A C Á C B I Ế N T H Ể V D R A PAI,FOKI,TAQIVÀBSMIỞCÁCNHÓMNGHIÊNCỨU 54 3.2.1 ĐahìnhVDRApaI 55 3.2.2 ĐahìnhVDRFokI 66 3.2.3 ĐahìnhVDRBsmI 68 3.2.4 ĐahìnhVDRTaqI 71 3.3 PHÂNBỐHAPLOTYPEỞCÁCNHĨMNGHIÊNCỨU .73 3.3.1 Phânbốhaplotype(FokI/BsmI/ApaI/TaqI)ởcácnhómnghiêncứu 73 3.3.2 Mốiliênquangiữacáchaplotypevàcácchỉsốcậnlâmsàng 77 3.4 ĐẶCĐ I Ể M V Ề N Ồ N G Đ Ộ V I T A M I N D Ở C Á C N H Ó M NGHIÊN CỨU 77 3.4.1 ThiếuhụtvitaminDởnhómkhỏemạnhvànhómbệnhnhân 77 3.4.2 Thiếu hụt vitamin D nhóm bệnh nhân viêm gan B mạn tính, xơgan ung thƣ biểu mơ tế bào gan 78 3.4.3 PhânbốnồngđộvitaminDtheokiểugencủacácbiếnthểVDR82 3.4.4 Mối liên quan biến thể VDR nồng độ vitamin D với cácthôngsốcậnlâmsàng 84 CHƢƠNG4:BÀNLUẬN .86 4.1 ĐAH Ì N H G E N V D R T R O N G B Ệ N H L Ý V I Ê M G Ạ N M Ạ N T Í N H D O V I R Ú T V I Ê M G A N B .88 4.1.1 Mốil i ê n q u a n g i ữ a t í n h đ a h ì n h g e n V D R đ ố i v i n g u y c nh iễmvi rútviêmganBvàbiểuhiệnlâmsàng 88 4.1.2 Mối liên quan tính đa hình gen VDR mức độ nặng củabệnhlýganmạntính 96 4.2 MỐIL I Ê N Q U A N G I Ữ A C Á C H A P L O T Y P E C Ủ A V D R V À V I Ê M G A N B M Ạ N T Í N H 97 4.3 THIẾUH Ụ T V I T A M I N D V À T I Ế N T R I Ể N B Ệ N H Ở N G Ƣ Ờ I NHIỄMVIRÚTVIÊMGANBMẠNTÍNH 100 KẾTLUẬN 109 KIẾNNGHỊ 111 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨUCỦA ĐỀ TÀI LUẬN ÁN 112 TÀILIỆUTHAMKHẢO PHỤ LỤC DANHMỤCCHỮVIẾTTẮT Cáctừviếttắt TiếngAnh AFP Alpha-fetoprotein ALT AlaninAminoTransferase ARMS Amplificationrefractory mutation system AST AspartateAminoTransferase BCLC BarcelonaClinicLiverCancer CI ConfidenceInterval DNA Deoxyribonucleicacid dNTP Deoxynucelsidetriphosphate ECOG EasternCooperativeOncologyGrou TiếngViệt Hệthốngkhuyếchđạiđộtbiến Khoảngtincậy p HBsAg HepatitisBsurfaceAntigen Khángnguyênbềmặtvirút viêm gan B HIV/AIDS HumanImmunodeficiencyvir us/Acquired Hộichứngnhiễmvirútlàm suy giảm miễn dịch ởngƣời ImmunoDeficiencysyndrome IFN Interferon IL Interleukin NAFLD Non-AlcoholicFattyLiverDisease Bệnhgannhiêmmỡkhông rƣợu NASH Non-AlcoholicSteatoHepatitis NKM OR Viêmgannhiễmmỡkhông rƣợu Ngƣờikhỏemạnh OddRatio Tỷsuấtchênh Cáctừviếttắt TiếngAnh TiếngViệt PCR Polymerasechainreaction RFLP RestrictionFregmentLengthPolym Xácđịnhđahìnhchiềudài orphism đoạnbằngenzymecắtgiớihạn RNA RibonucleicAcid TDF TenofovirDisoproxilFumarate TLR2 TollLikeReceptor2 TLR4 TollLikeReceptor4 UVB UltravioletB UTBMTBG VDR TiacựctímB Ungthƣbiểumơtếbàogan VitaminDReceptor ThụthểvitaminD VRVGB VirútviêmganB VGBMT Viêmgan Bmạntính VRVGC VirútviêmganC VGCMT Viêmgan Cmạntính WHO XG WorldHealthOrganization Tổchức Ytếthếgiới Xơgan