0103 nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm một số chế phẩm probiotic có chứa chủng bacillus và streptococcus faecalis

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ NGUYỄN THANH NHÀN NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN KIỂM NGHIỆM MỘT SỐ CHẾ PHẨM PROBIOTIC CÓ CHỨA CHỦNG BACILLUS VÀ STREPTOCOCCUS FAECALIS LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SỸ ĐẠI HỌC Cần Thơ – 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ NGUYỄN THANH NHÀN NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN KIỂM NGHIỆM MỘT SỐ CHẾ PHẨM PROBIOTIC CÓ CHỨA CHỦNG BACILLUS VÀ STREPTOCOCCUS FAECALIS LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SỸ ĐẠI HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC ThS NGUYỄN THỊ BÍCH THỦY Cần Thơ – 2014 LỜI CẢM ƠN Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến cô Dương Thị Trúc Ly, người hướng dẫn tận tình chu đáo, tạo điều kiện thuận lợi vật chất tinh thần, động viên hỗ trợ em suốt q trình làm đề tài để em hồn thành tốt luận văn Em xin chân thành cảm ơn thầy cô môn Vi Sinh (cô Nguyễn Thị Hải Yến, cô Trần Thị Như Lê, thầy Dương Hồng Phúc, cô Đỗ Ánh Minh, cô Phạm Thị Ngọc Yến thầy Lương Quốc Bình) giúp đỡ tạo điều kiện tốt để em hoàn thành luận văn thời gian quy định Em xin chân thành cảm ơn thầy cô liên mơn Hóa Phân TíchKiểm Nghiệm-Độc Chất (thầy Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ, Nguyễn Thị Bích Thủy, Nguyễn Thị Ngọc Vân, cô Nguyễn Thị Tường Vi, thầy Lữ Thiện Phúc, cô Nguyễn Thị Đặng cô Trần Thị Thanh Thúy) giúp đỡ, động viên em để hồn thành tốt đề tài Mình xin gửi lời cảm ơn đến bạn làm đề tài, bạn lớp Dược K35 chia sẽ, giúp đỡ thời gian hoàn thành đề tài Cuối xin vô biết ơn cha mẹ bên con, giúp đỡ, động viên, tạo điều kiện cho con, để hồn thành tốt tất việc LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết luận văn trung thực chưa có cơng trình nghiên cứu cơng bố Cần Thơ, ngày 12 tháng năm 2014 Sinh viên Nguyễn Thanh Nhàn i MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH x ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ PROBIOTIC 1.1.1 Lịch sử probiotic 1.1.2 Định nghĩa probiotic 1.1.3 Các vi sinh vật sử dụng sản phẩm probiotic giới 1.1.4 Thành phần chế phẩm probiotic 1.1.5 Cơ chế tác dụng probiotic 1.1.6 Tính an tồn probiotic sử dụng 1.1.7 Tác dụng probiotic 1.1.8 Ứng dụng probiotic dược phẩm 13 1.1.9 Các tiêu chuẩn để chọn chủng probiotic 14 1.2 TỔNG QUAN VỀ BACILLUS VÀ STREPTOCOCCUS FAECALIS 14 1.2.1 Giới thiệu Bacillus 14 1.2.2 Sơ lược vi khuẩn Streptococcus faecalis 16 1.3 CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH, PHÂN LOẠI VÀ ĐỊNH LƯỢNG VI SINH VẬT 18 1.3.1 Các phương pháp định danh vi sinh vật 18 1.3.2 Các phương pháp phân tích định lương vi sinh vật 19 ii 1.4 MỘT SỐ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU LIÊN QUAN TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC 20 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 22 2.2 ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 22 2.3 HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ SỬ DỤNG 22 2.3.1 Hóa chất 22 2.3.2 Thiết bị sử dụng 22 2.4 MÔI TRƯỜNG NGHIÊN CỨU 23 2.5 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.5.1 Quy trình phân lập 23 2.5.2 Quy trình định danh 24 2.5.3 Quy trình định lượng 29 2.5.4 Quy trình thử giới hạn vi sinh vật gây bệnh 31 2.5.5 Thẩm định quy trình phân tích 32 2.5.6 Áp dụng quy trình phân tích chế phẩm probiotic thị trường 35 CHƯƠNG KẾT QUẢ 36 3.1 KẾT QUẢ QUY TRÌNH PHÂN LẬP 36 3.1.1 Kết phân lập S.faecalis 36 3.1.2 Kết phân lập B.clausii 36 3.1.3 Kết phân lập B.coagulans 36 3.2 KẾT QUẢ QUY TRÌNH ĐỊNH DANH 37 3.2.1 Kết định danh S.faecalis 37 3.2.2 Kết định danh B.clausii 39 3.2.3 Kết định danh B.coagulans 41 3.3 KẾT QUẢ QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG 42 3.3.1 Kết định lương S.faecalis 42 3.3.2 Kết định lượng B.clausii 42 3.3.3 Kết định lượng B.coagulans 43 iii 3.4 KẾT QUẢ QUY TRÌNH THỬ GIỚI HẠN VI SINH VẬT GÂY BỆNH 43 3.5 KẾT QUẢ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH 44 3.5.1 Kết thẩm định quy trình định danh 44 3.5.2 Kết thẩm định quy trình định lượng 46 3.5.3 Kết thẩm định quy trình thử giới hạn vi sinh vật gây bệnh E.coli, Shigella, Salmonella, Candida albicans, Staphylococcus aureus 54 3.6 KẾT QUẢ PHÂN TÍCH CHẾ PHẨM TRÊN THỊ TRƯỜNG 57 3.6.1 Kết phân lập từ chế phẩm 57 3.6.2 Kết định danh từ chế phẩm 58 3.6.3 Kết định lượng từ chế phẩm 59 3.6.4 Kết thử giới hạn vi sinh vật gây bệnh 60 CHƯƠNG BÀN LUẬN 61 4.1 QUY TRÌNH PHÂN LẬP 61 4.1.1 Quy trình phân lập S.faecalis 61 4.1.2 Quy trình phân lập B.clausii 61 4.1.3 Quy trình phân lập B.coagulans 61 4.2 QUY TRÌNH ĐỊNH DANH 61 4.2.1 Quy trình định danh S.faecalis 61 4.2.2 Quy trình định danh B.clausii 62 4.2.3 Quy trình định danh B.coagulans 63 4.3 QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG 64 4.3.1 Quy trình định lượng S.faecalis 64 4.3.2 Quy trình định lượng B.clausii 64 4.3.3 Quy trình định lượng B.coagulans 64 4.4 QUY TRÌNH THỬ GIỚI HẠN VI SINH VẬT GÂY BỆNH 65 4.5 THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH PHÂN TÍCH 67 4.5.1 Thẩm định quy trình định danh S.faecalis, B.clausii B.coagulans 65 4.5.2 Thẩm định quy trình định lượng S.faecalis, B.clausii B.coagulans 66 iv 4.5.3 Thẩm định quy trình thử giới hạn vi sinh vật gây bệnh E.coli, Shigella, Salmonella, C.albicans Staphylococcus aureus 68 4.6 ÁP DỤNG QUY TRÌNH ĐÃ THẨM ĐỊNH PHÂN TÍCH CHẾ PHẨM TRÊN THỊ TRƯỜNG 68 4.6.1 Phân lập từ chế phẩm 68 4.6.2 Định danh từ chế phẩm 69 4.6.3 Định lượng từ chế phẩm 71 4.6.4 Thử giới hạn vi sinh vật gây bệnh 72 KẾT LUẬN 73 KIẾN NGHỊ 74 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC PHỤ LỤC v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết Ý nghĩa Từ nguyên tắt ADN Acid deoxyribose nucleic Vật chất di truyền cấp độ phân tử ARN Acid ribonucleic Vật chất di truyền cấp độ phân tử B Bacillus Chi Bacillus BHI Brain heart infusion Môi trường dinh dưỡng Bif Bifidobacterium Chi Bifidobaccterium C Candida Chi nấm Candida cfu Colony forming unit Đơn vị khuẩn lạc DB Decarboxylase Basal Môi trường thực phản ứng decarboxylase E Escherichia Chi Escherichia EMB Eosin methylene blue Môi trường chọn lọc E.coli FAO Food and Agriculture Tổ chức nông lương giới Organization GRAS Generally recognized as safe Được xem an toàn GMP Good Manufacturing Practice Thực hành tốt sản xuất IBS Irritable Bowel Syndrome Hội chứng ruột kích thích KIA Kligler’s iron agar Mơi trường thử khả lên men đường L Lactobacillus Chi Lactobacillus LAB Lactic acid bacteria Vi khuẩn sinh acid lactic LOD Limit of detection Giới hạn phát LOQ Limit of quantification Giới hạn định lượng MC MacConkey agar Môi trường MacConkey MPN Most propable number Phương pháp định lượng số tối khả MR Methyl Red Thử nghiệm phân biệt vi sinh vật vi MRSA De Mann-Rogosa-Sharpe agar Môi trường thạch MRS NA Nutrient agar Môi trường thạch dinh dưỡng NB Nutrient broth Môi trường dinh dưỡng lỏng PFGE Pulsed-field gel electrophoresis Điện di xung điện PCR Polymerase chain reaction Phản ứng chuỗi polymerase khuếch đại ADN S Streptococcus Chi Streptococcus SIM H2S-Indole-Motility Mơi trường tìm H2S, indol, khả di động SPW Saline peptone water Dung dịch nước pha loãng mẫu TSA Tryptic soy agar Môi trường thạch casein đậu tương TSB Tryptic soy broth Môi trường casein đậu tương lỏng VP Voges-Proskauer Phản ứng tìm acetoin từ glucose WHO World Health Organization Tổ chức y tế giới PL-18 Hình PL3.10 Phản ứng khử citrat dương tính (trái), âm tính (phải) Thử nghiệm lysin decarboxylase Vi khuẩn B.clausii cho kết dương tính Hình PL3.11 Thử nghiệm lysin decarboxylase dương tính (trái), âm tính (phải) Khả chịu đựng nồng độ muối 7% Vi khuẩn B.coagulans phân lập khơng có khả chịu đựng mơi trường có nồng độ muối NaCl 7% PL-19 Hình PL3.12 Khả chịu đựng nồng độ NaCl 7% dương tính (phải), âm tính (trái) Thử nghiệm khả sống mơi trường kỵ khí Vi khuẩn B.clausii khơng có khả sống mơi trường kỵ khí Hình PL3.13 Khả sống mơi trường kỵ khí dương tính (trái), âm tính (phải) PL-20 Hình PL3.14: Phản ứng citrat âm tính vi khuẩn E.coli Hình PL3.15: Phản ứng VP âm tính E.coli Hình PL3.16: Khuẩn lạc ánh than E.coli mơi trường EMB PL-21 Hình PL3.17: Phản ứng Indol âm tính E.coli Hình PL3.18: Phản ứng MR dương tính E.coli Hình PL3.19: Đặc điểm khuẩn lạc C.albicans mơi trường Sabouraud PL-22 Hình PL3.21: Phản ứng Germ tube (+) C.albicans Hình PL3.20: Nhuộm Gram C.albicans Hình PL3.22: Đặc điểm khuẩn Staphylococcus aureus mơi trường MSA lạc Hình PL3.23: Phản ứng coagulase Stapylococcus aureus Hình PL3.24: Nhuộm Staphylococcus aureus Gram PL-23 Hình PL3.25 Đặc điểm khuẩn lạc Salmonella môi trường Hektoen Hình PL3.26 Đặc điểm khuẩn lạc Shigella mơi trường Hektoen Hình PL3.27 Đặc điểm Salmonella Hình PL3.28 Đặc điểm Shigella môi trường KIA môi trường KIA TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Nguyễn Đức Duy Anh (2005), Xác định môi trường tối ưu để thu sinh khối enzyme vi khuẩn Bacillus subtilis, Lactobacillus acidophilus, thử nghiệm sản xuất chế phẩm sinh học, Trường Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh Bộ mơn Vi Sinh (2010), Giáo trình thực tập Vi Sinh Học, Khoa Y-Trường Đại học Y Dược Cần Thơ, tr 10-13, tr 30-43 Bộ Y Tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, tr 641-642 Ngô Thị Phương Dung, Huỳnh Thị Yến Ly Huỳnh Xuân Phong (2011), “Phân lập tuyển chọn vi khuẩn lactic có khả sinh chất kháng khuẩn”, Tạp chí khoa học, Viện nghiên cứu phát triển công nghệ sinh học, Đại học Cần Thơ Nguyễn Tiến Dũng (2007), Phương pháp kiểm nghiệm vi sinh vật thực phẩm, Đại học quốc gia thành phố Hố Chí Minh, trường đại học khoa học tự nhiên, tr 10-15, 20-50 Dương Văn Hợp, Nguyễn Lân Dũng (2007), “Phân loại vi sinh Sinh Học Phân Tử”, Vietsciences Lê Thanh Huân (2011), Phân lập, tuyển chọn đánh giá số đặc tính số chủng Lactobacillus cá chim vây vàng, Trường Đại học Nha Trang, Viện công nghệ sinh học môi trường, tr 4-8 Bùi Thị Huyền (2010), Phân lập tuyển chọn chủng vi sinh vật hữu ích phục vụ cho việc sản xuất chế phẩm probiotic dùng chăn nuôi, Luận văn Thạc sĩ, Đại học khoa học tự nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội Nguyễn Lân (2012), Ảnh hưởng sữa bổ sung pre-probiotic lên tình trạng dinh dưỡng, nhiễm khuẩn hệ khuẩn chí đường ruột trẻ 6-12 tháng tuổi huyện phổ yên, tỉnh Thái Nguyên, Viện dinh dưỡng quốc gia, Hà Nội, tr 15-28 10 Đoàn Thanh Lâm Lê (2011), Probiotic, Thư viện Học Liệu Mở Việt Nam 11 Nguyễn Duy Khánh (2006), Khảo sát điều kiện nuôi cấy sinh bào tử vi khuẩn Bacillus subtilis, trường Đại Học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh 12 Lê Thanh Mai (2008), Phân tích vi sinh vật thực phẩm, Trường đại học Bách Khoa Hà Nội, Viện công nghệ sinh học công nghệ thực phẩm, Bô môn công nghệ sản phẩm lên men 13 Bùi Thị Phi (2007), Phân lập, khảo sát đặc điểm sinh học tìm hiểu khả sinh enzyme vi khuẩn Bacillus subtilis để sản xuất thử nghiệm chế phẩm sinh học, trường Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh, bơ mơn cơng nghệ sinh học 14 Trần Mộng Tố Tâm (2013), Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm chế phẩm chứa Lactobacillus acidophilus Bacillus subtilis lưu hành Cần Thơ, Liên môn Độc Chất-Hóa Phân Tích-Kiểm Nghiệm, Đại học Y Dược Cần Thơ 15 Phạm Hoàng Thái (2007), Phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis từ đất, khảo sát khả ức chế sản sinh alfatoxin chủng phân lập được, trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh, mơn công nghệ sinh học 16 Hồ Văn Thảo (2006), Phân lập, định danh tuyển chọn chủng Enterococcus có tiềm probiotic từ phân trẻ sơ sinh, Luận văn thạc sĩ ngành sinh học, trường Đại học khoa học tự nhiên 17 Nguyễn Thị Bích Thùy (2009), Phân lập vi khuẩn lactic có nguồn gốc từ thực phẩm dược phẩm mang hoạt tính probiotic, trường đại học kỹ thuật công nghệ TP.HCM, khoa môi trường công nghệ sinh học 18 Trần Linh Thước (2010), Phương pháp phân tích vi sinh vật nước, thực phẩm mĩ phẩm, Nhà xuất giáo dục, tr 63-100 19 Viện kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia (2010), Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vi sinh vật, Nhà xuất khoa học kỹ thuật, tr 60-72 TÀI LIỆU TIẾNG ANH 20 Abdulamir A.S., Yoke T.S., Nordin N., Abu Bakar F (2009), “Detection and quantification of probiotic bacteria using optimized DNA extraction, traditional and real-time PCR methods in complex microbial communities”, African Journal of Biotechnology, Vol (10), p 1481-1492 21 Albert Manero and Anicet R Blanch (1999), “Identification of Enterococcus spp With a Biochemical Key”, appl Environ Microbiol., 65(10):4425 22 Ali A Ali, Manuel T Velasquez, Carl T Hansen, Ali I Mohamed, Sam J Bhathena (2004), “Effects of soybean isoflavones, probiotics, and their interactions on lipid metabolism and endocrine system in an animal model of obesity and diabetes”, Journal of Nutritional Biochemistry 15, p 583-590 23 Allison Tannis BSc, MSc, RHN (2008), Probiotic rescue how you can use probiotics to fight cholesterol, cancer, superbug, digestive complaints and more, chapter 3, p 21-39 24 Ashlee M.Earl, Richard Losick and Roberto kolter (2008), Ecology and genomics of Bacillus subtilis, department of microbiology and molecular genetics, Harvard Medical School, Boston, MA 02115, USA, p 269-271 25 Bodil Lund and Charlotta Edlund, “Probiotic Enterococcus faecium strain is a possible recipient of the vanA gene cluster”, Oxford journals, medicine, clinical infectious diseases, volume 32, issue 9, p 1384-1385 26 Carla Pinto (2012), “Physiological characterization of a Bacillus licheniformis strain in chemostat cultivations”, department of chemical engineering, Lund University, Sweden 27 Catherine Beal, Philippe Louvet, and Georges Corrieu (1989), Influence of controlled pH and temperture on the growth and acidification of fure cultures of Streptococccus thermophilus 404 and Lactobacilluss bulgaricus 398, INRA F-78850 Thiverval-Grignon, France 28 Dimitris Charalempopoulos, Robert A Rastall, Prebiotics and probiotics Science and technology, Springer reference P 650 29 E De Vecchi, and L Drago (2006), “Lactobacillus sporogenes or Bacillus coagulans: misidentification or mislabelling”, International Journal of Probiotics and Prebiotics Vol 1, No 1, p 3-10 30 Eunok Im, Yoon Jeong Choi, Charalabos Pothoulakis and Sang Hoon Rhee, “Bacillus polyfermenticus ameliorates colonic inflammation by promoting cytoprotective effects in colitic mice”, J Nutr Oct 2009; 139(10): 18481854 31 Fawzia H Abo Ali, Zeinab A Ashour, Rasha Y Shahin, Wafaa K Zaki, Salwa B Ragab, Mohamed Y Attia (2013), “Role of intestinal microflora (Lactobacillus acidophilus) in phagocytic function of leukocytes in type diabetic patients”, The Egyptian Journal of Medical Human Genetics 14, p 95-101 32 Fergus G Priest, “Bacillus”, Edinguburgh, Scotland, U.K, p 368-369 33 Fausto Gardini, Maria Martuscelli, Marisa Carmela Caruso, Fernanda Galgano, Maria Antonietta Crudele, Fabio Favati, Maria Elisabetta Guerzoni, Giovanna Suzzi (2001), “Effects of pH, temperature and NaCl concentration on the growth kinetics, proteolytic activity and biogenic amine production of Enterococcus faecalis”, International Journal of Food Microbiology 64 34 Fuller R (1989), “Probiotics in man and animals” J Appl Bacteriol, 66, p 65–78 35 Fuller R (1992), “History and development of probiotics”, In: R Fuller (Ed.) Probiotics: The Scientific Basis Chapman & Hall, London, p 1-8 36 Gomes AMP, Malcata FX (1999), “Bifidobacterium Spp and Lactobacillus acidophilus :Biological, Biochimical and Therapeutical properties relevant for use as probiotics”, Trends in Food Sci Technol, 10: 139-157 37 Gunter Klein (2003), “Taxonomy, ecology and antibiotic resistance of enterococci from food and the gastro-intestinal tract”, international journal of food microbiology 88, 123-131 38 Harald Brussow, Marc Fremont, Anne Bruttin, Josette Sidoti, Anne Constable, and Vincent Fryder (1994), “Detection and classification of Streptococcus thermophilus Bacteriophages isolated from industrial Milk fermentation”, Applied and enviroment microbiology 39 Havenaar, R and Huis in't Veld, M.J.H (1992), “Probiotics:A general view Lactic acid bacteria in health and disease (Ed.: Wood, J.B.J.)”, Vol Elsevier Applied Science Publishers, Amsterdam 40 Jangrim-Dong, Saha-Gu (2006), “New dietary ingredient notification for Bacillus polyfermenticus SCD”, Busan, Korea 41 Jin Hwan Lee, Sang Hae Nam, Weon Taek Seo, Han Dae Yun, Su Young Hong, Min Keun Kim, Kye Man Cho (2012), “The production of surfactin during the fermentation of cheonggukjang by potential probiotic Bacillus subtilis CSY191 and the resultant growth suppression of MCF-7 human breast cancer cells”, Food Chemistry 131, p 1347-1354 42 John W Fuquay, Patrick F Fox, HuBert Roginski (2002), Encyclopedia of dairy sciences, four volume set, academic press, p 2573-2580 43 Jonh W Fuquay, Patreict F Fox, Paul L.H McSweeney (2011), Encyclopedia of Dairy Sciences, Second Edition, Elsevier Science & Tachnology 44 Kaouther Ben Amor, Elaine E Vaughan Willem M.de Vos, “Advanced molecular tools for the identification of lactic acid bacteria”, The journal of nutrion 137: 741S-747S, 2007), Wageningen, Netherland 45 Kim, Kang Min, Myo Jeong Kim, Dong Hee Kim, You Soo Park, and Jae Seon Kang (2009), “Characterization of Bacillus polyfermenticus KJS-2 as a probiotic”, J Microbiol Biotechnol 46 Kingsley C Anukan (2007), “Probiotics: 100 years (1907-2007) after Elie Metchnikoff’s observation”, Communicating Current Research and Educational Topics and Trends in Applied Microbiology 47 Knut Heller, Ruth Schulz and Robert Roschenthaler (1980), cell arrangment, mass, and dimension of Streptococcus faecalis during growth, current microbiology, vol 3, p 273-278 48 Lee Kirsch (2000), “PDA journal of pharmaceutical science and technology”, Volume 54, No 49 Miranda (April 25, 2006) "Probiotics May Help Stressed Gut" WebMD 50 N.K Asha Devi, K Balakrishnan, R Gopal and S Padmavathy (2008), “Bacillus clausii MB9 from the east coast regions of India: isolation, biochemical characterization and antimicrobial potentials”, current science, vol 95, no 51 Ozlem Ates, Ebru Toksoy Oner, Burhan Arikan, Aziz Akin Denizici, Dilek Kazan (2007), “Isolation and identification of alkaline protease producer halotolerant Bacillus licheniformis strain BA17”, Annals of Microbiology, 57 (3), 369-375 52 Paul De Vos, George M Garrity, Dorothy Jones, Noel R Krieg, Wolfgang Ludwig, Fred A Rainey, Karl-Heinz Schleifer and William B Whitman (2009), Bergey’s manual of systematic bacteriology, second edition, volume three, p 40-80 53 Puccio G, Cajozzo C, Meli F, et al (2007), "Clinical evaluation of a new starter formula for infants containing live Bifidobacterium longum BL999 and prebiotics", Nutr 23, p.1–8 54 Robert S Breed, E G D Murray, Nathan R Smith, Bergey’s manual of determinative bacteriology, the williams & wilkins company 1957, seventh edition, p 610-622 55 Ronald Ross Watson, Victor R Preedy (2010), Bioactive foods in promoting health: proniotics and prebiotics, academis press, p 399-340 56 R.Tabasco, T.Paarup, C.Janer, C.Pelaez, T.Requena (2007), “Selective enumeration and identification of mixed cultures of Streptococcus thermophilus, Lactobacillus delbrueckii subsp bulgaricus, Lactobacillus acidophilus, L.paracasei subsp paracasei and Bifidobacterium lactis in fermented milk”, International Dairy Journal 17, p 1107-1114 57 Rut Carballido-López, Alex Formstone (2007), “Shape determination in Bacillus subtilis”, current opinion in microbiology, p 611-613 58 Saavedra JM, bi-Hanna A, Moore N, et al (2004), "Long-term consumption of infant formulas containing live probiotic bacteria: tolerance and safety", Am, J, Clin, Nutr 79, p 261–267 59 Saggioro A, Caroli M, Pasini M, Bortoluzzi F, Girardi L, Pilone G Helicobacter pylori eradication with Lactobacillus reuteri A double blind placebo-controlled study (2005) Dig Liver Dis 37(suppl 1): S88, abstr PO1.49 60 Seyed Mohsen Abbasi-Hosseini, Fereshteh Eftekhar, Bagher Yakhchali, Dariush Minai-Tehrani (2011), “Cloning and enhanced expression of an extracellular alkaline protease from a soil isolate of Bacillus clausii in Bacillus subtilis”, Iranian Journal of Biotechnology, Vol 9, No 61 Simon M Cutting (2011), “Bacillus probiotics”, food microbiology 28 214220 62 S.L Gorbach (2002), “Probiotics in the Third Millennium”, Digest Liver Dis 34 (2), p 2-7 63 Susan Sungsoo Cho, E Terry Finocchiaro (2009), Handbook of prebiotics and probiotics ingredients, Health benefits and food application, chapter 18 64 Susanne Hempel, Sydne Newberry, Alicia Ruelaz, Zhen Wang, Jeremy N V Miles, Marika J Suttorp, Breanne Johnsen, Roberta Shanman, Wendelin Slusser, Ning Fu, Alex Smith, Beth Roth, Joanna Polak, Aneesa Motala, Tanja Perry, Paul G Shekelle (2011), “Safety of Probiotics to Reduce Risk and Prevent or Treat Disease”, Evidence Report/Technology Assessment, p 91-95 65 T Vasiljevic, N.P.Shah (2008), “Probiotics-from Metchnikoff to bioactives”, International Dairy Journal 18, p 714-728 66 Uk standards for microbiology investigations, Health protection agency, “Identification of Bacillus species”, bacteriology – identification, p 7-15 67 United States Pharmacopeia 34 (2011), Validation of alternative microbiological methods 68 Yolanda Sanz, Reza Rastmanesh, Carlo Agostonic (2012), “Understanding the role of gut microbes and probiotics in obesity: how far we are?”, Pharmacological Research xxx, p 1-12 69 Yuan Kun Lee, Seppo Salminen (2009), Handbook of Probiotics and Prebiotics, Second Edition, John Wiley & Sons, Inc., p 21-22 70 Zofia Olempska-Beer (2011), “Pullulanase from Bacillus deramificans expressed in Bacillus licheniformis”, genencor international B.V., P.O.Box 218, 2300 AE Leiden, The Netherlands DANH MỤC PHỤ LỤC Trang PHỤ LỤC 1: BẢNG KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ Ý NGHĨA CỦA CÁC HỆ SỐ VÀ TÍNH THÍCH HỢP CỦA PHƯƠNG TRÌNH HỒI QUY…………………… PL-1 PHỤ LỤC 2: MÔI TRƯỜNG, THUỐC THỬ……………………………… PL-4 PHỤ LỤC 3: MỘT SỐ HÌNH ẢNH………………………………………… PL-14