Nghiên cứu thành phần hóa học và thử tác dụng chống viêm in vitro bằng mô hình ức chế giải phóng no trên tế bào đại thực bào raw 264 7 của cây vối đường (myrsine seguinii h lev) thu hái tại hòa bình

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI BÙI THỊ HỒNG HẬU NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ THỬ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM IN-VITRO BẰNG MƠ HÌNH ỨC CHẾ GIẢI PHÓNG NO TRÊN TẾ BÀO ĐẠI THỰC BÀO RAW 264.7 CỦA CÂY VỐI ĐƯỜNG (MYRSINE SEGUINII H LEV) THU HÁI TẠI HỊA BÌNH KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2021 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI BÙI THỊ HỒNG HẬU Mã sinh viên: 1601236 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ THỬ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM IN-VITRO BẰNG MƠ HÌNH ỨC CHẾ GIẢI PHÓNG NO TRÊN TẾ BÀO ĐẠI THỰC BÀO RAW 264.7 CỦA CÂY VỐI ĐƯỜNG (MYRSINE SEGUINII H LEV) THU HÁI TẠI HỊA BÌNH KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướngdẫn: TS Hoàng Quỳnh Hoa Nơi thực hiện: Bộ môn ThựcVật HÀ NỘI – 2021 LỜI CẢM ƠN Trong thời gian thực khóa luận mơn Thực Vật – Trường Đại học Dược Hà Nội, em nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ thầy cô, anh chị, bạn em sinh viên Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, trước tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Hoàng Quỳnh Hoa, TS Phạm Hà Thanh Tùng, người trực tiếp hướng dẫn, bảo tận tình giúp đỡ em hồn thành khóa luận Em xin cảm ơn sâu sắc tới Th.S Nghiêm Đức Trọng, Th.S Phạm Thị Linh Giang anh chị kỹ thuật viên môn Thực Vật tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ em hồn thành khóa luận thời hạn Em xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo trường Đại học Dược Hà Nội, người dạy dỗ bảo em tận tình suốt năm tháng học tập trường Cuối cùng, với lịng biết ơn vơ hạn, em xin phép gửi lời cảm ơn tới gia đình, người thân, bạn bè động viên hỗ trợ em suốt thời gian qua Do thời gian trình độ thân cịn hạn chế nên khóa luận khơng thể tránh khỏi thiếu sót Vì vậy, em mong nhận bảo tận tình thầy góp ý chân thành bạn bè Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng năm 2021 Sinh viên Bùi Thị Hồng Hậu MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG I TỔNG QUAN 1.1.Đặc điểm thực vật phân bố loài Myrsine seguiniiH Lev 1.1.1 Vị trí phân bố lồi Myrsine seguinii H Lev 1.1.2 Đặc điểm thực vật loài Myrsine seguinii H Lev 1.2 Thành phần hóa học loài Myrsine seguinii H.Lev 1.2.1 Các flavonoid 1.2.2 Acid benzoic 1.2.3 Hydroquinone glycoside 1.3 Công dụng tác dụng sinh học loài Myrsine seguinii H Lev 1.3.1 Công dụng 1.3.2 Tác dụng sinh học 1.4 Viêm mơ hình in-vitro nghiên cứu tác dụng chống viêm 10 1.4.1 Mơ hình ổn định màng hồng cầu 11 1.4.2 Mơ hình ức chế giải phóng NO tế bào đại thực bào RAW 264.7 11 1.4.3 Mơ hình đánh giá ức chế biến tính protein 12 1.4.4 Mơ hình đánh giá ức chế cyclooxygenase 5-lipooxygenase 13 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Nguyên liệu thiết bị 14 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 14 2.1.2 Nguyên vật liệu nghiên cứu 14 2.2 Nội dung nghiên cứu 15 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 2.3 Phương pháp nghiên cứu 16 2.3.1 Phương pháp chiết xuất phân lập thân, Vối đường 16 2.3.2 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 18 2.3.3 Đánh giá tác dụng chống viêm in-vitro mơ hình xác định khả ức chế sản sinh NO tế bào macrophage RAW 264.7 18 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 21 3.1 Chiết phân đoạn từ thân Vối đường 21 3.1.1 Xử lý mẫu 21 3.1.2 Chiết xuất cao toàn phần 21 3.1.3 Chiết xuất phân đoạn 21 3.2 Đánh giá tác dụng chống viêm in-vitro cao toàn phần cao phân đoạn 22 3.3 Phân lập xác định cấu trúc hợp chất từ cao PĐ 50 thân Vối đường 25 3.3.1 Quá trình phân lập từ cao phân đoạn PĐ 50 25 3.3.2 Xác định cấu trúc hợp chất VD-2 phân lập từ phân đoạnPĐ 50 26 3.4 Thử tác dụng chống viêm in-vitro hợp chất phân lập 29 3.5 Bàn luận 31 3.5.1 Về kết chiết xuất, phân lập chất 31 3.5.2 Về kết triển khai mơ hình ức chế giải phóng NO tế bào RAW 264.7 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT 5-LOX 5-lipooxygenase CAN Acetonitril AP Protein hoạt hóa CD3OD Deuterated methanol 13 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon (Carbon-13 Nuclear C-NMR Magnetic Resonance spectroscopy) COX-2 Cyclooxygenase-2 d Doublet dd Double doublet DMEM Dulbecco’s ModifiedEagle’s Medium DMSO Dimethyl sulphoxide DPPH 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl EA Ethyl acetat EtOH Ethanol ESI-MS Phương pháp phổ khối ion hóa phun mù điện tử (Electrospray Ionization – Mass Spectrometry) FBS Fetal bovine serum Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (Proton Nuclear Magnetic H-NMR Resonance spectroscopy) HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao IC50 Nồng độ ức chế 50% đối tượng thử nghiệm (Inhibitory Concentration at 50%) IL Interleukin Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an IRAK-1 Kinase-1 liên kết với thụ thể interleukin-1 L-NMMA NG – Methyl L-arginine acetate LPS Lipopolysacharide m Multiplet m/z Khối lượng/điện tích MeOH Methanol NF Yếu tố hạt nhân NO Nitric oxide NOS Nitric oxide synthease Overlap Chồng phổ PGE2 Prostaglandine E2 TLC Sắc ký lớp mỏng TPA 12-O-tetaradecanoylphorbol-13-acetate VSC Hợp chất lưu huỳnh dễ bay δ Độ dịch chuyển hóa học (đơn vị ppm) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Bảng 3.1 Bảng 3.2 Bảng 3.3 Nội dung Khả ức chế sản sinh NO (%) mẫu cao Vối đường (Myrsine seguinii H Lev) Tỷ lệ tế bào RAW 264.7 sống tiếp xúc với mẫu cao Vối đường (Myrsine seguinii H Lev) Bảng so sánh liệu phổ1H, 13C-NMR VD-2 chất đối chiếu Trang 23 24 28 Khả ức chế sản sinh NO gây độc tế bào RAW 264.7 Bảng 3.4 mẫu chất tinh khiết phân lập từ Vối đường (Myrsine seguinii H Lev) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 30 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ Nội dung Hình Hình 1.1 Một số flavonoid có thân lồi Myrsine seguinii Trang H Lev Hình 1.2 Một số acid terpenoic phân lập từ loài Myrsine seguinii H Lev Hình 2.1 Khung logic nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính 16 sinh học Vối đường (Myrsine seguinii H Lev) Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất phân đoạn từ thân Vối đường 22 (Myrsine seguinii H Lev) Hình 3.2 Sơ đồ phân lập hợp chất VD-1, VD-2, VD-3 từ thân 26 Vối đường (Myrsine seguinii H Lev) Hình 3.3 Cấu trúc hóa học hợp chất VD-2 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 29 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an ĐẶT VẤN ĐỀ Theo thống kê Tổ chức Y tế giới (WHO), có đến 80% dân số nước phát triển dựa vào thuốc thảo dược để chăm sóc sức khỏe cộng đồng Ở nước có cơng nghiệp phát triển, 1/4 số thuốc thống kê đơn có chứa hoạt chất thảo mộc Ngày nay, việc tìm kiếm hoạt chất tự nhiên có hoạt tính sinh học cao để làm thuốc xu nhà khoa học quan tâm Chi Myrsine L chi lớn thuộc họ Đơn nem (Myrsinaceae), phân bố rộng rãi nhiều vùng nhiệt đới cận nhiệt giới, có Việt Nam Vối đường (Myrsine seguiniiH Lev) số lồi thuộc chi Myrsine L có mặt Việt Nam phân bố nhiều nơi từ Bắc vào Nam Trong đó, đặc biệt khu vực từ Ninh Bình, Hịa Bình vào đến Hà Tĩnh, Quảng Trị nơi mà loài người dân địa phương sử dụng làm thuốc [4] Cây Vối đường đượcđồng bào người Mường, người Dao trắng Hịa Bình sử dụng theo kinh nghiệm lâu đời với tác dụng mát gan, an thần, kích thích tiêu hóa, chữa sỏi thận, điều vị,…[1] Trong thân Vối đường có nhiều thành phần flavonoid, acid terpeno benzoic, hydroquinon glycoside, polyphenol,… mang lại lợi ích to lớn sức khỏe Các nghiên cứu thành phần có lồi Myrsine seguiniiH Lev có khả kháng viêm, kháng khuẩn ức chế phát triển số tế bào ung thư cách mạnh mẽ [1], [4], [16], [18], [20], [21] Ở Việt Nam, nghiên cứu thành phần hóa học giá trị to lớn tác dụng sinh học Vối đường chưa thực quan tâm Chính vậy, đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học thử tác dụng chống viêm in-vitro mơ hình ức chế giải phóng NO tế bào đại thực bào RAW 264.7 Vối đường (Myrsine seguinii H Lev) thu hái Hịa Bình” thực với mục tiêu: Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 3.5.2 Về kết triển khai mơ hình ức chế giải phóng NO tế bào RAW 264.7 Xuất phát từ kinh nghiệm dân gian nghiên cứu công bố giới, tác dụng bật loài Myrsine seguiniiH Lev chống viêm [4], [16], [18], [31], [34], [48], nhóm nghiên cứu đặt vấn đề nghiên cứu thành phần hóa học sàng lọc tác dụng ức chế giải phóng NO tế bào RAW 264.7 theo nồng độ cao Vối đường chất phân lập với mong muốn đánh giá khả chống viêm dược liệu Phương pháp thử nghiệm tác dụng chống viêm in-vitro mà đề tài sử dụng có ưu điểm độ nhạy cao, đặc hiệu, thuận tiện hiệu việc sàng lọc hợp chất có hoạt tính kháng viêm Đây phương pháp sử dụng phổ biến giới nghiên cứu sàng lọc hợp chất kháng viêm Kết thử nghiệm chống viêm in-vitro cao phân đoạn Vối đường chất tinh khiết, hầu hết mẫu thể khả ức chế sản sinh NO tế bào RAW 264.7 (kích thích LPS) mức độ khác ngoại trừ mẫu chất VD-2 hoạt tính tăng lên tăng nồng độ mẫu nghiên cứu Tất mẫu cao toàn phần cao phân đoạn nồng độ từ 100 µg/ml đến 2000 µg/ml thể khả ức chế giải phóng NO từ tế bào RAW 264.7 với giá trị IC50 từ160,47 đến 1195,54µg/ml Với mẫu chất tinh khiết, VD-1 thể khả ức chế giải phóng NO yếu so với VD-3 mẫu VD-2 chưa thể hoạt tính nồng độ nghiên cứu (từ µg/ml đến 250 µg/ml) Các kết phù hợp với công bố trước tác dụng chống viêm lồi Myrsine seguinii H Lev, khơng thêm minh chứng khoa học tác dụng chống viêm Vối đường mà làm rõ chế chống viêm dược liệu ức chế sản sinh nitric oxid tế bào RAW 264.7 Đối với mẫu chất tinh khiết VD-2 (đã xác định astilbin), có mối liên hệ nồng độ phần trăm ức chế sinh NO, nồng độ 33 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an khảo sát, mẫu chất rõ ràng khả ức chế sinh NO gây độc tế bào RAW 264.7 Điều phần phù hợp với nghiên cứu Ruangnoo S cộng chứng minh hợp chất astilbin phân lập từ lồi Smilax corbularia Kunth khơng thể khả ức chế sản sinh NO nồng độ nghiên cứu với giá trị IC50> 100 µg/ml không ảnh hưởng đến khả sống tế bào RAW 264.7 [39] Tuy nhiên, nghiên cứu trước rằng, hợp chất thể tác dụng ức chế biểu LPS gây TNF-α, IL-1β, IL-6, protein hóa trị monocyte (MCP-1) cyclooxygenase-2 (COX-2) mức độ phiên mã tế bào đại thực bào J774A.1 chuột, cho thấy astilbin đóng vai trị chất chống viêm tiềm [19] Từ gợi mở hướng nghiên cứu mơ hình thử in vitro khác để đánh giá khả chống viêm chất từ Vối đường 34 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an KẾT LUẬN Sau trình thực hiện, đề tài hoàn thành mục tiêu ban đầu đề thu số kết luận thành phần hóa học tác dụng chống viêm in-vitro loài Vối đường (Myrsine seguinii H Lev) sau: Đã chiết xuất, phân lập 03 hợp chất tinh khiết bao gồm VD-1, VD-2, VD-3 xác định cấu trúc hóa học 01 hợp chất astilbin (VD-2) từ phân đoạn EtOH 50% thân mẫu nghiên cứu Bằng mơ hình ức chế giải phóng NO tế bào đại thực bào RAW 264.7 khoảng nồng độ khác nhau, đánh giá tác dụng chống viêm invitro cao toàn phần, cao phân đoạn H2O, EtOH 25%, EtOH 50%, EtOH 96% với giá trị IC50 tương ứng 348,20±11,23; 1195,54±18,98; 195,91±5,76; 173,93±20,23 160,47±11,24µg/ml Cũng mơ hình này, chất VD-1 VD-3 phân lập từ phân đoạn EtOH 50% có giá trị IC50 tương ứng 98,05±3,23 55,51±3,15µg/ml Chất VD-2 chưa thể hoạt tính nồng độ nghiên cứu (2-250µg/ml) ĐỀ XUẤT Do thời gian thực đề tài có hạn, kết đề tài bước đầu cơng trình nghiên cứu, chúng tơi xin đưa số đề xuất sau: Tiếp tục nghiên cứu phân lập hợp chất để xác định thêm thành phần khác có thân Vối đường, nghiên cứu xác định cấu trúc hợp chất phân lập VD-1 VD-3 Nghiên cứu tác dụng dược lý khác phân đoạn dịch chiết hợp chất phân lập kháng khuẩn, chống ung thư 35 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt 1] Lê Thị Ngọc Anh (2018), Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học tác dụng an thân Vối đường, Khóa luận Dược sĩ Đại học, Đại học Dược Hà Nội 2] Trần Thị Vân Anh (2019), Triển khai mơ hình in vitro sàng lọc tác dụng chống viêm thuốc áp dụng đánh giá tác dụng số dược liệu, Khóa luận Dược sĩ Đại học, Đại học Dược Hà Nội 3] Bộ môn Dược liệu (2012), Phương pháp nghiên cứu dược liệu, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh, tr 1-6 4] Changyoung Lee, Trần Thế Bách et al (2019), "Đánh giá hoạt tính sinh học số lồi thực vật Khu Bảo tồn thiên nhiên Bắc Hướng Hóa vùng lân cận, tỉnh Quảng Trị", VNU Journal of Science: Natural Sciences and Technology 35, pp 119-126 5] Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phương pháp nghiên cứu hóa học thuốc, NXB Y học TP Hồ Chí Minh, tr 28, 34, 151-159, 213-224, 284-286, 334 6] Trần Thị Kim Liên (2002), Thực vật chí Việt Nam, Vol 4, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, tr 5-209 7] Nguyễn Thị Kim Phụng (2007), Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, NXB Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh, tr 28, 34, 151-159, 213–214, 284– 286, 334 8] Lê Đình Roanh, Nguyễn Văn Chủ (2009), Bệnh học viêm bệnh nhiễm khuẩn, NXB Y học, tr Tài liệu tiếng Anh 9] Batista Pereira L G., Petacci F et al (2002), "Biological activity of astilbin from Dimorphandra mollis against Anticarsia gemmatalis and Spodoptera frugiperda", Pest management science 58 (5), pp 503-507 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 10] Berridge M V., Herst P M et al (2005), "Tetrazolium dyes as tools in cell biology: new insights into their cellular reduction", Biotechnology annual review 11, pp 127-152 11] Blonska M., Czuba Z et al (2003), "Effect of flavone derivatives on interleukin‐1β (IL‐1β) mRNA expression and IL‐1β protein synthesis in stimulated RAW 264.7 macrophages", Scandinavian journal of immunology 57 (2), pp 162-166 12] Cai Y., Chen T et al (2003), "Astilbin suppresses collagen-induced arthritis via the dysfunction of lymphocytes", Inflammation Research 52 (8), pp 334-340 13] Chamkha M., Cathala B et al (2003), "Phenolic composition of champagnes from Chardonnay and Pinot Noir vintages", Journal of Agricultural and Food Chemistry 51 (10), pp 3179-3184 14] Chen T.-H., Liu J.-C et al (2001), "The In Vitro Inhibitory Effect of Flavonoid Astilbin on 3-Hydroxy-3-Methylglutaryl Coenzyme A Reductase on Vero Cells" 15] Closa D., Torres M et al (1997), "Prostanoids and free radicals in Cl4C- induced hepatotoxicity in rats: effect of astilbin", Prostaglandins, leukotrienes and essential fatty acids 56 (4), pp 331-334 16] Dong M., Nagaoka M et al (1999), "3-Geranyl-4-hydroxy-5-(3′-methyl- 2′-butenyl) benzoic acid as an anti-inflammatory compound from Myrsine seguinii", Bioscience, biotechnology, and biochemistry 63 (9), pp 1650-1653 17] Haraguchi H., Ohmi I et al (1997), "Inhibition of aldose reductase and sorbitol accumulation by astilbin and taxifolin dihydroflavonols in Engelhardtia chrysolepis", Bioscience, biotechnology, and biochemistry 61 (4), pp 651-654 18] Hirota M., Miyazaki S et al (2002), "Myrsinoic acids B, C and F, anti- inflammatory compounds from Myrsine seguinii", Bioscience, biotechnology, and biochemistry 66 (3), pp 655-659 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 19] Huang H., Cheng Z et al (2011), "Isolation and characterization of two flavonoids, engeletin and astilbin, from the leaves of Engelhardia roxburghiana and their potential anti-inflammatory properties", Journal of Agricultural and Food Chemistry 59 (9), pp 4562-4569 20] Ito S., Narise A et al (2008), "Identification of a methioninase inhibitor, myrsinoic acid B, from Myrsine seguinii Lév., and its inhibitory activities", Bioscience, biotechnology, and biochemistry 72 (9), pp 2411-2414 21] Ito S., Shimura S et al (2010), "Myrsinoic acid B inhibits the production of hydrogen sulfide by periodontal pathogens in vitro", Journal of breath research (2), pp 026005 22] Jiménez-Aspee F., Alberto M R et al (2015), "Anti-inflammatory activity of copao (Eulychnia acida Phil., Cactaceae) fruits", Plant Foods for Human Nutrition 70 (2), pp 135-140 23] Jürgenliemk G , Nahrstedt A (2002), "Phenolic compounds from Hypericum perforatum", Planta medica 68 (01), pp 88-91 24] Kuroshima K N., de Campos F et al (2001), "Phytochemical and pharmacological investigations of Virola oleifera leaves", Zeitschrift für Naturforschung C 56 (9-10), pp 703-706 25] Landrault N., Larronde F et al (2002), "Levels of stilbene oligomers and astilbin in French varietal wines and in grapes during noble rot development", Journal of Agricultural and Food Chemistry 50 (7), pp 2046-2052 26] Lee M H., Lee J M et al (2007), "In‐vitro and in‐vivo anti‐inflammatory action of the ethanol extract of Trachelospermi caulis", Journal of pharmacy and pharmacology 59 (1), pp 123-130 27] Leelaprakash G , Dass S M (2011), "Invitro anti-inflammatory activity of methanol extract of Enicostemma axillare", International Journal of Drug Development and Research (3), pp 189-196 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 28] Li G.-S., Jiang W.-L et al (2009), "Effect of astilbin on experimental diabetic nephropathy in vivo and in vitro", Planta medica 75 (14), pp 14701475 29] Liao J.-C., Deng J.-S et al (2012), "Anti-inflammatory activities of Cinnamomum cassia constituents in vitro and in vivo", Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine 2012 30] MacMicking J., Xie Q.-w et al (1997), "Nitric oxide and macrophage function", Annual review of immunology 15 (1), pp 323-350 31] Makabe H., Miyazaki S et al (2003), "Myrsinoic acid E, an anti- inflammatory compound from Myrsine seguinii", Bioscience, biotechnology, and biochemistry 67 (9), pp 2038-2041 32] Matsunami K., Otsuka H et al (2011), "Myrseguinosides A—E, Five New Glycosides from the Fruits of Myrsine seguinii", Chemical and Pharmaceutical Bulletin 59 (10), pp 1274-1280 33] Meng F , Lowell C A (1997), "Lipopolysaccharide (LPS)-induced macrophage activation and signal transduction in the absence of Src-family kinases Hck, Fgr, and Lyn", Journal of experimental medicine 185 (9), pp 1661-1670 34] Mizushina Y., Miyazaki S et al (2000), "Novel anti-inflammatory compounds from Myrsine seguinii, terpeno-benzoic acids, are inhibitors of mammalian DNA polymerases", Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-General Subjects 1475 (1), pp 1-4 35] Mogana R., Teng-Jin K et al (2013), "The medicinal timber canarium patentinervium miq.(Burseraceae Kunth.) is an anti-inflammatory bioresource of dual inhibitors of cyclooxygenase (COX) and 5-lipoxygenase (5-LOX)", International Scholarly Research Notices 2013 36] Moulari B., Pellequer Y et al (2006), "Isolation and in vitro antibacterial activity of astilbin, the bioactive flavanone from the leaves of Harungana madagascariensis Lam ex Poir.(Hypericaceae)", Journal of ethnopharmacology 106 (2), pp 272-278 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 37] Ohshima H , Bartsch H (1994), "Chronic infections and inflammatory processes as cancer risk factors: possible role of nitric oxide in carcinogenesis", Mutation Research/Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis 305 (2), pp 253-264 38] Otsuka H., Zhong X.-N et al (2001), "Myrsinionosides AE: Megastigmane glycosides from the leaves of Myrsine seguinii Lev", Chemical and Pharmaceutical Bulletin 49 (9), pp 1093-1097 39] Ruangnoo S., Jaiaree N et al (2012), "An in vitro inhibitory effect on RAW 264.7 cells by anti-inflammatory compounds from Smilax corbularia Kunth", Asian Pacific journal of allergy and immunology 30 (4), pp 268 40] Sa F., Gao J.-L et al (2008), "Anti-proliferative and pro-apoptotic effect of Smilax glabra Roxb extract on hepatoma cell lines", Chemico-biological interactions 171 (1), pp 1-14 41] Sarveswaran R., Jayasuriya W et al (2017), "In Vitro Assays To Investigate The Anti-Inflammatory Activity Of Herbal Extracts A Review" 42] Szabo C (1995), "Alterations in nitric oxide production in various forms of circulatory shock", New horizons (Baltimore, Md.) (1), pp 2-32 43] Wang M., Zhao J et al (2016), "Astilbin improves potassium oxonate- induced hyperuricemia and kidney injury through regulating oxidative stress and inflammation response in mice", Biomedicine & Pharmacotherapy 83, pp 975988 44] Wang S.-w., Xu Y et al (2018), "Astilbin ameliorates cisplatin-induced nephrotoxicity through reducing oxidative stress and inflammation", Food and chemical toxicology 114, pp 227-236 45] Xu Q., Wu F et al (1999), "Astilbin selectively induces dysfunction of liver-infiltrating cells—novel protection from liver damage", European journal of pharmacology 377 (1), pp 93-100 46] Yan R , Xu Q (2001), "Astilbin selectively facilitates the apoptosis of interleukin-2-dependent phytohemagglutinin-activated Pharmacological research 44 (2), pp 135-139 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Jurkat cells", C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 47] Yang T., Zhang A et al (2006), "Nitric oxide stimulates COX-2 expression in cultured collecting duct cells through MAP kinases and superoxide but not cGMP", American Journal of Physiology-Renal Physiology 291 (4), pp F891-F895 48] Yang W S., Jeong D et al (2014), "Myrsine seguinii ethanolic extract and its active component quercetin inhibit macrophage activation and peritonitis induced by LPS by targeting to Syk/Src/IRAK-1", Journal of ethnopharmacology 151 (3), pp 1165-1174 49] Zhang Q.-F., Zhang Z.-R et al (2009), "Antioxidant activity of Rhizoma Smilacis Glabrae extracts and its key constituent-astilbin", Food chemistry 115 (1), pp 297-303 50] Zhao R., Zhao Y et al (2013), "Determination of isofraxidin and astilbin by HPLC in rat plasma and its application after orally administration the extract of Sarcandra glabra", Pak J Pharm Sci 26 (1), pp 1-6 51] Zhong X.-N., Ide T et al (1998), "(+)-Isolarisiresinol 3a-O-sulphate from leaves of Myrsine seguinii", Phytochemistry 49 (6), pp 1777-1778 52] Zhong X.-N., Otsuka H et al (1999), "Hydroquinone diglycoside acyl esters from the leaves of Myrsine seguinii", Phytochemistry 52 (5), pp 923927 53] Zhong X.-N., Otsuka H et al (1997), "Three flavonol glycosides from leaves of Myrsine seguinii", Phytochemistry 46 (5), pp 943-946 54] Zhong X.-N., Otsuka H et al (1998), "Hydroquinone glycosides from leaves of Myrsine seguinii", Phytochemistry 49 (7), pp 2149-2153 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an PHỤ LỤC Phụ lục 1: Phiếu giám định tên khoa học mẫu nghiên cứu Phụ lục 2: Sắc ký đồ HPLC hợp chất VD-2 Phụ lục 3: Phổ ESI-MS hợp chất VD-2 Phụ lục 4: Phổ 1H-NMR hợp chất VD-2 Phụ lục 5: Phổ 13C-NMR hợp chất VD-2 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục 1: Phiếu giám định tên khoa học TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI BỘ MÔN THỰC VẬT ***** PHIẾU GIÁM ĐỊNH TÊN KHOA HỌC Số: 21/2021 Người thu mẫu: Ngày thu mẫu: Nơi thu mẫu: Tên địa phương: Bùi Thị Hồng Hậu 5/2020 Lương Sơn, Hịa Bình Vối đường Kết giám định: Căn vào tài liệu thực vật có Trường Đại học Dược Hà Nội với đặc điểm phận mẫu cây, xác định mẫu có: - Tên khoa học: Myrsine seguinii H Lév - Họ: Myrsinaceae - Tên thường gọi: Mặt cắt, Xay tước đào Trưởng môn Hà Nội, ngày 07 tháng năm 2021 Người giám định TS Hoàng Quỳnh Hoa ThS Nghiêm Đức Trọng Tài liệu tham khảo Võ Văn Chi (2003), Từ điển Thực vật thông dụng, NXB Khoa học - Kỹ thuật, Tập Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ Việt Nam, NXB Trẻ, Quyển Trần Thị Kim Liên (2002), Thực vật chí Việt Nam, Họ Đơn nem - Myrsinaceae R.Br, Tập 4, NXB Khoa học - Kỹ thuật Jie Chen, John J Pipoly (1996), Myrsinaceae, in: Wu, Z Y & P H Raven, D Y Hong, eds., Flora of China Vol 15 (Myrsinaceae through Loganiaceae), Science Press, Beijing, and Missouri Botanical Garden Press, St Louis Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục 2: Sắc ký đồ HPLC hợp chất VD-2 2.579 DAD1A, Sig=205,4Ref=off (G:\Phenikaa\Hieu\Data\Desmodium\Gac25022116\VD-25.1DTM.D) mAU 150 VD-2 3.163 20.195 100 50 2.064 2.199 2.451 -50 -100 -150 -200 10 15 20 25 30 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 35 40 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục 3: Phổ ESI-MS hợp chất VD-2 Inten.(x10,000,000) 208.65 1.25 1.00 0.75 0.50 126.25 337.25 0.25 294.15 389.25 0.00 100 200 300 641.40 695.40 400 500 600 700 800 900 m/z (+) Inten.(x1,000,000) 449.25 6.0 5.0 4.0 3.0 547.20 2.0 899.35 1.0 487.20 285.15 0.0 100 200 300 400 500 600 700 (-) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 800 900 m/z C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục 4: Phổ 1H-NMR hợp chất VD-2 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn