Đánh giá tác dụng chống viêm giảm đau của chế phẩm me06 trên thực nghiệm

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐÀO THỊ LƯƠNG ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM GIẢM ĐAU CỦA CHẾ PHẨM ME06 TRÊN THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2021 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐÀO THỊ LƯƠNG Mã sinh viên: 1601484 ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM GIẢM ĐAU CỦA CHẾ PHẨM ME06 TRÊN THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Nơi thực hiện: Bộ môn Dược lực Người hướng dẫn: TS Đỗ Thị Nguyệt Quế HÀ NỘI- 2021 LỜI CẢM ƠN Lời nói đầu cho em gửi lịng biết ơn vơ sâu sắc đến TS Đỗ Thị Quyệt Quế -bộ môn Dược lực, người cô em vơ kính trọng ngưỡng mộ tận tình giúp đỡ, hết lịng bảo em từ ngày đầu chập chững tham gia nghiên cứu khoa học suốt trình nghiên cứu, thực đề tài Cảm ơn cô cho em học tập nhiều điều bổ ích sống đường hành nghề sau Em xin chân thành cảm ơn đến PGS TS Đào Thị Vui-Trưởng mơn Dược Lực, TS Nguyễn Thùy Dương-Phó trưởng mơn Dược lực thầy cô môn Dược lực tạo điều kiện cho em học tập nghiên cứu trình thực đề tài Em xin cảm ơn chị Nguyễn Thị Thủy, chị Đinh Thị Kiều Giang anh Đinh Đại Độ - anh chị kỹ thuật viên môn Dược lực bên cạnh hướng dẫn em trình thực đề tài Em xin cảm ơn chị, bạn em học tập nghiên cứu môn giúp đỡ em nhiều trình thực đề tài Em xin trân trọng cảm ơn Ban giám hiệu, Phịng Đào Tạo tồn thể thầy trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ em trình học tập, nghiên cứu Em xin cảm ơn gia đình, người anh em đồng đội bên cạnh động viên, chia sẻ, giúp đỡ nhiều năm học tập nghiên cứu trường Dược thân yêu Hà Nội, ngày 11 tháng 06 năm 2021 Học viên Đào Thị Lương MỤC LỤC DANH MỤC VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vài nét viêm đau 1.1.1 Vài nét viêm 1.1.2 Vài nét đau 1.2 Các nhóm thuốc giảm đau, chống viêm 1.3 Một số mơ hình giảm đau, chống viêm 1.4 Tổng quan chế phẩm nghiên cứu 14 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Đối tượng nghiên cứu 19 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 19 2.1.2 Động vật tế bào thí nghiệm 20 2.1.3 Hóa chất thuốc thử 21 2.1.4 Thiết bị dụng cụ nghiên cứu 21 2.2 Nội dung nghiên cứu 22 2.3 Phương pháp nghiên cứu 23 2.3.1 Phương pháp đánh giá tác dụng chống viêm, giảm đau in vivo 23 2.3.2 Phương pháp đánh giá tác dụng ức chế COX-2 tế bào RAW 264.7 27 2.4 Phương pháp xử lý số liệu 30 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 31 3.1 Kết đánh giá tác dụng chống viêm, giảm đau chế phẩm ME06 in vivo 31 3.2 Kết đánh giá tác dụng ức chế COX-2 tế bào RAW in vitro 35 CHƯƠNG BÀN LUẬN 36 4.1 Về tác dụng chống viêm, giảm đau chế phẩm ME06 in vivo 36 4.2 Về tác dụng ức chế COX-2 tế bào RAW 264.7 chế phẩm ME06 41 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC VIẾT TẮT TÊN ĐẦY ĐỦ VIẾT TẮT APS Ammonium persulphate solution COX Enzym cyclooxygenase DMEM Dulbecco's modified eagle medium DMSO Dimethyl sulfoxide ELISA Enzyme-liked immunosorbent assay IASP International Association for the Study of Pain FBS Huyết bào thai bò IL Interleukin LOX Enzym Lypooxygenase LPS Lipopolysaccharide LTA Acid lipoteichoic MAPKs Mitogen-activated protein kinase MPO Myeloperoxidase NF-κB Nuclear factor-kappa B NSAIDs Thuốc chống viêm không steroid PG Prostaglandin SDS Sodium dodecyl sulphate TNF Tumor necrosis factor-alpha TXA2 Thromboxan A2 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Thành phần viên nang cứng ME06 19 Bảng 2.2 Thành phần stacking gel resolving gel 28 Bảng 3.1 Ảnh hưởng ME06 lên mức độ phù bàn chân chuột 31 Bảng 3.2 Ảnh hưởng ME06 lên khối lượng u hạt chuột cống trắng .32 Bảng 3.3 Ảnh hưởng chế phẩm ME06 lên số đau quặn 34 Bảng 3.4 Mức độ biểu COX-2 so với β-actin 35 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình 2.1 Nội dung tiến hành nghiên cứu 22 Hình 2.2 Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây phù bàn chân chuột .24 Hình 2.3 Nghiên cứu tác dụng chống viêm mạn mơ hình gây u hạt .25 Hình 2.4 Nghiên cứu tác dụng giảm đau quặn acid acetic 26 Hình 3.1 Đồ thị biểu diễn ảnh hưởng ME06 đến mức độ phù bàn chân chuột thời điểm giờ, giờ, 32 Hình 3.2 Đồ thị biểu diễn ảnh hưởng ME06 lên số đau quặn xuất 34 Hình 3.3 Hình ảnh băng protein sau rửa film X-quang 35 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an ĐẶT VẤN ĐỀ Viêm phản ứng bảo vệ thể trước tác nhân lạ, trình viêm phức tạp với tham gia nhiều tế bào thể chủ yếu đại thực bào bạch cầu đa nhân trung tính Viêm xuất nhiều bệnh lý gout, viêm khớp dạng thấp, viêm xương khớp Trong nhiều tình huống, viêm cấp gây nguy hiểm cho người bệnh viêm mạn tính (viêm âm ỉ, kéo dài) ngồi việc gây tổn thương mơ tiến triển chúng cịn gây cảm giác đau đớn, khó chịu cho người bệnh làm giảm chất lượng sống Hiện nay, hai nhóm thuốc điều trị viêm NSAIDs glucocorticoid (GC) Khơng thể phủ nhận tầm quan trọng nhóm thuốc điều trị triệu chứng viêm, đau chúng gây nhiều tác dụng không mong muốn NSAIDs làm tăng nguy viêm loét dày tá tràng, biến cố tim mạch…, việc sử dụng glucocorticoid dễ dẫn đến viêm dày, tăng huyết áp, hội chứng cushing, tăng nhãn áp… Chính vậy, việc nghiên cứu phát triển thuốc có nguồn gốc dược liệu để điều trị viêm, đau với tác dụng khơng mong muốn xu hướng giới Theo thống kê tạp chí “International Journal of Evirommental Research and Public Healthy” đăng tải vào tháng năm 2020, giai đoạn 1960-2001 có khoảng 1.300 nghiên cứu thuốc có nguồn gốc dược liệu cơng bố năm, đến giai đoạn 2001-2011 số lượng nghiên cứu tăng nhanh đỉnh điểm lên đến 6.200 nghiên cứu năm, sau mức tăng trưởng ổn định 5.000 báo công bố năm [46] Người bệnh cộng đồng chuyển hướng sang tin dùng thuốc, sản phẩm bảo vệ sức khỏe có nguồn gốc dược liệu Theo thống kê Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) cho biết doanh thu toàn cầu thuốc sản phẩm bảo vệ sức khỏe có nguồn gốc thiên nhiên từ năm 2001 17 tỷ đô la Mỹ đến năm 2012 lên đến 83 tỷ đô la Mỹ Chế phẩm nằm đề tài nghiên cứu thuốc chống viêm, giảm đau công ty cổ phần dược phẩm Medzavy, chế phẩm đời nhằm giúp người bệnh mong muốn tìm sản phẩm có nguồn gốc từ thảo dược tác dụng không mong muốn để điều trị viêm đau Thành phần chế phẩm phối hợp nhiều dược liệu Việt Nam toàn giới dùng điều trị tình trạng xuyên khung, độc hoạt, đỗ trọng, phòng phong, đương quy đặc biệt liễu trắng Để đánh giá tác dụng Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an chế phẩm cung cấp tài liệu thử tiền lâm sàng hồ sơ đăng ký thuốc, tiến hành đề tài “Đánh giá tác dụng chống viêm giảm đau chế phẩm ME06 thực nghiệm” Đề tài tiến hành với hai mục tiêu chính: Đánh giá tác dụng chống viêm, giảm đau chế phẩm ME06 in vivo Đánh giá tác dụng ức chế COX-2 tế bào RAW 264.7 chế phẩm ME06 kỹ thuật Western blot Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ I Kết luận Từ hai mục tiêu nghiên cứu đề tài, tiến hành đánh giá thu kết sau: Mục tiêu 1: Đánh giá tác dụng chống viêm, giảm đau in vivo Đánh giá tác dụng chống viêm cấp chế phẩm ME06 mơ hình gây phù chân chuột carrageenan Chế phẩm ME06 liều 140 mg/kg có tác dụng giảm mức độ phù bàn chân chuột có ý nghĩa thống kê so với lô chứng thời điểm (31,5%; p