Phân lập và xác định cấu trúc ccas hợp chất steroit từ cây bình bát (annona reticulata l) ở việt nam luận văn thạc sỹ hóa học

1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH TRẦN VĂN THẠCH PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC HỢP CHẤT STEROIT TỪ CÂY BÌNH BÁT (ANNONA RETICULATA L.) VIT NAM Chuyên ngành: hóa hữu M· sè: 60 44 27 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HC Ng-ời h-ớng dẫn khoa học: TS Trần Đình Thắng VINH - 2012 LỜI CẢM ƠN Luận văn thực phịng thí nghiệm chun đề Hố hữu - khoa Hoá, Trung tâm Kiểm định An tồn Thực phẩm Mơi trường, Trường Đại học Vinh, Viện Hố học-Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam Tơi xin chân thành cảm ơn TS Trần Đình Thắng - Khoa Hoá, Trường Đại học Vinh giao đề tài, tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện suốt q trình thực luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn PGS TS Lê Văn Hạc,TS Nguyễn Xuân - Khoa Hoá - Trường Đại học Vinh tạo điều kiện thuận lợi, động viên trình làm luận văn TS.Trần Huy Thái (Viện Sinh thái Tài nguyên Sinh vật, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam) giúp định danh mẫu thực vật Nhân dịp này, xin gửi lời cảm ơn đến thầy cơ, cán bộ mơn hố Hữu cơ, khoa Hoá, khoa Đào tạo Sau đại học, bạn đồng nghiệp, học viên cao học, sinh viên, gia đình người thân động viên giúp đỡ hoàn thành luận văn Vinh, ngày 30/10/2012 Trần Văn Thạch MỤC LỤC Mục Nội dung Trang MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Nhiệm vụ nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Chương Tổng quan 1.1 Chi Na (Annona) 1.1.1 Đặc điểm thực vật chi Na 1.1.2 Thành phần hóa học 1.1.2.1 Hợp chất acetogenin 1.1.2.2 Các hợp chất ligan 16 1.1.2.3 Ankaloit 16 1.1.2.4 Hợp chất cyclopeptit 18 1.1.2.5 Hợp chất diterpenoit kauran 21 1.2 Cây bình bát 24 1.2.1 Đặc điểm thực vật 24 1.2.2 Thành phần hóa học 25 1.2.2.1 Alkaloit 26 1.2.2.2 Amin béo 27 1.2.2.3 Diterpen 27 1.2.2.4 Acetogenin 27 1.2.2.5 Cyclopeptit 27 1.3 Sử dụng hoạt tính sinh học 28 1.3.1 Sử dụng 28 1.3.2 Hoạt tính sinh học 29 Chương Thực nghiệm 30 Nguyên liệu, phương pháp thiết bị 30 Phương pháp lấy mẫu 30 2.1 2.1.1 2.1.2 Phương pháp phân tích, phân tách hỗn hợp phân 30 lập hợp chất 2.1.3 Phương pháp khảo sát cấu trúc hợp chất 30 2.2 Phân lập hợp chất 30 2.3 Một số kiện phổ tử ngoại, phổ khối phổ cộng 31 hưởng từ hạt nhân chất phân lập Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 3.1 Phân lập hợp chất 33 3.2 Xác định cấu trúc hợp chất 34 3.3 Xác định cấu trúc hợp chất 39 3.4 Xác định cấu trúc hợp chất 44 3.5 Xác định cấu trúc hợp chất 51 KẾT LUẬN 67 Tài liệu tham khảo 68 DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT CC: Column Chromatography (Sắc kí cột) FC: Flash Chromatography (Sắc ký cột nhanh) TLC: Thin Layer Chromatography (Sắc kí lớp mỏng) IR: Infrared Spectroscopy (Phổ hồng ngoại) MS: Mass Spectroscopy (Phổ khối lượng) EI-MS: Electron Impact-Mass Spectroscopy (Phổ khối va chạm electron) Proton Magnetic Resonance Spectroscopy (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân H-NMR: proton) 13 C-NMR: Carbon Magnetic Resonance Spectroscopy (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon-13) DEPT: Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer HSQC: Heteronuclear Single Quantum Correlation HMBC: Heteronuclear Multiple Bond Correlation COSY: Correlation Spectroscopy s: singlet br s: singlet tù t: triplet d: dublet dd: dublet duplet dt: dublet triplet m: multiplet TMS: Tetramethylsilan DMSO: DiMethylSulfoxide Đ.n.c.: Điểm nóng chảy DANH SÁCH BẢNG Bảng Tên bảng Trang Bảng 1.2.4 Một số hợp chất acetogenin na xiêm Bảng 1.2.5 Các hợp chất diterpenoit kauran từ Na 22 Số liệu phổ 13C-NMR hợp chất 35 Bảng 3.2 Bảng 3.3 13 Số liệu phổ C-NMR hợp chất 39 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Bảng 3.4 Bảng 3.5 Số liệu phổ 13C-NMR chất 13 Số liệu phổ C-NMR hợp chất 45 51 DANH SÁCH HÌNH Hình Nội dung Trang Hình 3.2.1 Phổ khối lượng (EI-MS) hợp chất 36 Hình 3.2.2 Phổ 1H-NMR hợp chất 37 Hình 3.2.3 Phổ 13C-NMR hợp chất 37 13 Hình 3.2.4 Phổ C-NMR hợp chất (phổ dãn) 38 Hình 3.2.5 Phổ DPET hợp chất (phổ dãn) 38 Hình 3.3.1 Phổ H-NMR hợp chất 41 42 Hình 3.3.3 Phổ H-NMR hợp chất (phổ dãn) 42 Hình 3.3.4 Phổ 13C-NMR hợp chất 43 Hình 3.3.5 Phổ DEPT hợp chất (phổ dãn) 43 Hình 3.4.1 Phổ khối lượng (EI-MS) hợp chất 47 Hình 3.4.2 Phổ 1H-NMR hợp chất 47 Hình 3.4.3 Phổ 13C-NMR hợp chất 48 Hình 3.4.4 Phổ 13C-NMR hợp chất (phổ dãn) 48 Hình 3.3.2 Hình 3.4.5 Phổ H-NMR hợp chất (phổ dãn) Phổ 13C-NMR hợp chất (phổ dãn) Phổ DEPT hợp chất Hình 3.4.6 49 49 Hình 3.4.7 Phổ DEPT hợp chất (phổ dãn) 50 Hình 3.5.1 Phổ khối lượng (EI-MS) hợp chất 53 Hình 3.5.2 Hình 3.5.3 Phổ H-NMR hợp chất 53 54 Phổ H-NMR hợp chất (phổ dãn) Hình 3.5.4 Phổ H-NMR hợp chất (phổ dãn) 54 Hình 3.5.5 Phổ 13C-NMR hợp chất (phổ dãn) 55 Hình 3.5.6 Phổ 13C-NMR hợp chất (phổ dãn) 55 Hình 3.5.8 Phổ DEPT hợp chất 56 Hình 3.5.7 Phổ DEPT hợp chất 56 Hình 3.5.9 Phổ HMBC hợp chất 57 Hình 3.5.10 Phổ HMBC hợp chất (phổ dãn) 58 Hình 3.5.11 Phổ HMBC hợp chất (phổ dãn) 59 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.5.12 Phổ HMBC hợp chất (phổ dãn) 60 Hình 3.5.13 Phổ HSQC hợp chất 61 Hình 3.5.14 Phổ HSQC hợp chất (phổ dãn) 62 Hình 3.5.15 Phổ HMBC hợp chất (phổ dãn) 63 Hình 3.5.16 Phổ HMBC hợp chất (phổ dãn) 64 Hình 3.5.17 Phổ HSQC hợp chất 65 Hình 3.5.18 Phổ HSQC hợp chất (phổ dãn) 66 DANH SÁCH SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1: Phân lập hợp chất Bình bát A.Reticulata L- trang 33 MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Việt Nam nằm vùng nhiệt đới ẩm, gió mùa nên có hệ thực vật phong phú đa dạng với 12.000 loài, bao gồm 300 họ 1.200 chi Nguồn thực vật phong phú cung cấp cho người nhiều sản phẩm thiên nhiên có giá trị Các sản phẩm thiên nhiên có hoạt tính sinh học có ứng dụng lớn nhiều lĩnh vực khác sống, đặc biệt dùng làm Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an thuốc chữa bệnh Các loại thuốc thảo mộc gây tác dụng phụ độc hại cho người sử dụng Chúng dùng tác nhân điều trị trực tiếp, làm chất dị sinh hố để làm sáng tỏ nguyên lí dược học làm chất chuẩn để phát triển loại thuốc Chính việc nghiên cứu hố học hoạt tính sinh học lồi thuốc có ý nghĩa quan trọng cho việc sử dụng cách hợp lý có hiệu quả, nguồn tài nguyên thiên nhiên Từ trước đến giới hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học ln đóng vai trò quan trọng đời sống người Các hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học dùng làm nguyên liệu cho công nghiệp dược phẩm làm thuốc chữa bệnh, công nghiệp thực phẩm, hương liệu mỹ phẩm Thảo dược nguồn nguyên liệu trực tiếp chất dẫn đường để tìm kiếm loại biệt dược Theo số liệu thống kê cho thấy khoảng 60% loại thuốc lưu hành giai đoạn thử nghiệm có nguồn gốc từ loại hợp chất thiên nhiên [5] Ở nước ta, số loài thuộc chi Na (Annona) có lồi lồi trồng [2] Na xiêm (Annona muricata L.) có nguồn gốc châu Mỹ nhập sang nước nhiệt đới khác Quả chín ăn ngon (ăn tươi nghiền pha thành “kem sinh tố”) Lá dùng làm gia vị chữa sốt rét, chữa ho; chữa kiết lỵ; hạt để duốc cá, làm thuốc trừ sâu [1,2] Cây Bình bát (Annona reticulata L.) lồi phổ biến nước Việt Nam, Trung Quốc dùng làm thuốc chữa bệnh, đồ gỗ… chưa nghiên cứu nhiều thành phần hố học Chính chọn đề tài “Phân lập xác định cấu trúc hợp chất steroit từ bình bát (Annona reticulata L.) Việt Nam” từ góp phần xác định thành phần hố học bình bát tìm nguồn nguyên liệu cho ngành dược liệu, hương liệu Nhiệm vụ nghiên cứu Trong luận văn này, chúng tơi có nhiệm vụ: Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an - Chiết chọn lọc với dung mơi thích hợp để thu hỗn hợp hợp chất bình bát (Annona reticulata L.) - Sử dụng phương pháp sắc ký kết tinh phân đoạn để phân lập hợp chất - Sử dụng phương pháp phổ để xác định cấu trúc hợp chất thu Đối tƣợng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Bình bát (Annona reticulata L.) thuộc họ Na (Annonaceae) Việt Nam Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 Chi Na (Annona) 1.1.1 Đặc điểm thực vật chi Na Họ Na (Annonaceae) gọi họ Mãng cầu, họ thực vật có hoa bao gồm loại thân gỗ, bụi hay dây leo Với khoảng 2.300 đến 2.500 loài 120 - 130 chi, họ lớn Bộ mộc lan (Magnoliales) Chi điển hình họ Annona (Na hay Mãng cầu ta; Mãng cầu xiêm hay Mãng cầu gai) Họ sinh trưởng chủ yếu vùng nhiệt Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 10 đới, có lồi sinh sống vùng ơn đới Khoảng 900 loài Trung Nam Mỹ, 450 loài Châu Phi, loài khác châu Á [2] Trong đó, chi Annona (8 lồi) gồm: Annona cherimola, A.glabra, A.montana, A.muricata, A.reticulata, A.squamosa, A.artemoya (A cherimola x squamosa), A.Purpurea 1.1.2 Thành phần hóa học Những năm gần họ Na nhiều nhà khoa học giới quan tâm nghiên cứu Đặc biệt, nhóm nghiên cứu Y C Wu (Đài Loan) [41] tìm 100 hoạt tính sinh học chất tách từ họ Na (Annonaceae) Trong có nhiều chất có độc tính, hoạt tính kháng vi trùng, ức chế tái tạo tế bào HIV, chống đông tụ tiểu cầu Nhóm nghiên cứu D.Q Yu (Trung Quốc) [52] nghiên cứu tách chất có khả chống u bướu từ thực vật họ Na: có khoảng 50 acetogenin, 12 styrylpyron 25 polyoxygenat cyclohexen tách từ loài Uvaria, loài Goniothalamus loài Annona Bước đầu kiểm tra hoạt tính sinh học, phần lớn chất tách có hoạt tính chống u, bướu quan trọng Trong có 72% glucose, 14,52% saccharose, 1,73% tinh bột, 2,7% protid vitamin C Trong có alcaloit vơ định hình, khơng có glucozit, xanh chứa 0,08% dầu Hạt chứa 38,5-42% dầu, thành phần axit béo là: axit stearic(9,3%), axit oleic (37%), axit linoleic (10,9%), acid arachidic (3,3%) isoricinoleic acid (9,8%) [26] Trong hạt có alcaloit vơ định hình gọi anonain Chất độc hạt rễ glycerit axit có phân tử lớn Lá, vỏ rễ chứa axit hydrocyanic Vỏ chứa anonain Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 66 Hình 3.5.12: Phổ HMBC hợp chất (phổ dãn) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 67 Hình 3.5.13: Phổ HSQC hợp chất Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 68 Hình 3.5.14: Phổ HSQC hợp chất (phổ dãn) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 69 Hình 3.5.15: Phổ HMBC hợp chất (phổ dãn) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 70 Hình 3.5.16: Phổ HMBC hợp chất (phổ dãn) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 71 Hình 3.5.17: Phổ HSQC hợp chất Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 72 Hình 3.5.18: Phổ HSQC hợp chất (phổ dãn) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 73 KẾT LUẬN Nghiên cứu thành phần hóa học bình bát Việt Nam, thu kết sau: Lá (5,0 kg), phơi khô, xay nhỏ ngâm chiết với metanol nhiệt độ phòng (7 ngày), lần Dịch chiết cất loại dung môi thu cặn metanol (316 g) Phân bố cặn metanol nước, sau chiết với hexan, etyl axetat, butanol cất loại dung môi thu cặn dịch chiết tương ứng 31, 82 g 47 g Cao hexan (31g) tách sắc kí cột silica gel với hệ dung môi giải hấp hexan:axeton (25:1; 19:1; 15:1; 9:1; 4:1; 2:1) thu 14 phân đoạn Phân đoạn tiếp tục phân tách sắc kí cột silica gel với hệ dung môi rửa giải hexan:axeton (15:1) thu hợp chất (302 mg) hợp chất (135 mg) Phân đoạn sắc kí lại nhiều lần thu với hệ dung mơi hexan : axeton (9:1) hợp chất (31 mg) Cao butanol (47g) tách sắc kí cột silica gel với hệ dung môi giải hấp clorofoc:metanol:nước (40:1:0,05; 30:1:0,05; 20:1:0,05; 10:1:0,05; 4:1:0,05) thu 10 phân đoạn Phân đoạn tiếp tục phân tách sắc kí cột silica gel với hệ dung môi rửa giải clorofoc : metanol: nước (9:1:0,05) thu hợp chất (235 mg) Xác định cấu trúc hợp chất phương pháp phổ MS NMR Cấu trúc chất -sitosterol (1); stigmasterol (2); sitosterol 3-O--D-glucopyranozit (3); 6-hydroxy-24-etylcholesta-4-en-3-on (4) Trong đó, hợp chất (4) lần tìm thấy từ lồi Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 74 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Nguyễn Tiến Bân (Chủ biên) (2003)., Danh lục loài thực vật Việt Nam, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội, Nguyễn Tiến Bân, Họ Na (Annonaceae), Thực vật chí Việt Nam, Flora of Vietnam, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, (2003) Võ Văn Chi, Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y học Hà Nội, (1997) Nguyễn Thượng Dong người khác ,(2006)., Nghiên cứu thuốc từ thảo dược, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Trần Đình Đại, Khái quát hệ thực vật Việt Nam Hội thảo Việt-Đức Hoá học hợp chất thiên nhiên, Hà Nội, (1998) 16-18 April, tr 17-27 Nguyễn Văn Hùng, Đoàn Thị Mai Hương, Nguyễn Thị Minh Hằng,(2010) Giới thiệu hợp chất thiên nhiên NXB Viện khoa học công nghệ Việt Nam, Đỗ Thị Thu Hương , Nghiên cứu thành phần hố học hoạt tính, (2004) Trần Văn Sung, (2002) Phổ cộng hưởng từ hạt nhân hoá hữu Nhà xuất Đại học Quốc gia Hà Nội, Đào Hữu Vinh, Nguyễn Xuân Dũng, Trần Thị Mỹ Linh, Phạm Hùng Việt, Các phương pháp sắc ký, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, (1985) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 75 Tiếng Anh 10 Ahammadsahib K I., Hollingworth R M., McGovren J P., Hui Y H., McLaughlin J L., (1993) Mode of action of bullatacin: A potent antitumor and pesticidal Annonaceous acetogenin, , Life Sci., 53, pp 1113-1120 11 Ansari, M H., Afaqua S., and Ahmad M., (1985) Isoricinoleic acid in Annona squamosa seed oid J American Oil Chemist’s Society, 62 910), 1514 12 Araya, H., N Hara, Y Fujimoto, and M Sahai (1994b) : SquamostenA, apparently derived from tetrahydrofuran acetogenins, from Annona squamosa Biosci Biotech Biochem., 58, 1146-1147 13 Araya, H., N Hara, Y Fujimoto, A Srivastava, and M Sahai (1994a) : Squamosten-A, a novel mono-tetrahydrofuranic acetogenins with a double bond in the hydrocarbon chain, from Annona squamosa L Chem Pharm Bull., 42, 388-391 14 Araya H., M Sahai S ,Singh A K., Singh M., Yoshida N., Hara and Fujimoto Y (2002), Squamocins-O1 and -O2, new adjacent bistetrahydrofuranic acetogenins from the seeds of Annona squamosa Phytochemistry, 61, 999-1004 15 Chang F R., Chen J L., Chiu H F., Wu M J., Wu Y C., (1998), Acetogenins from seeds of Annona reticulate, Phytochemistry, 47 (6), 1057-1061 16 Chang F R., Wu Y C., Duh C Y.,Wang S K., (1993), Studies on the acetogenin of Formosan Annonaceaes plants, II Cytotoxic acetogenins from Annona reticulate, J Nat Prod., 56 (10), 1688-1694 17 Chang F R., Wu Y C., (2001), Novel cytotoxic annonaceous acetogenins from Annona muricata, J Nat Prod, 64, pp 925-931 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 76 18 Chávez D., Acevedo L A., Mata R., (1988), J Nat Prod.,,61, pp 419-421 19 Dictionary of Natural product on CD-Rom (2009), Chapman and HallCRC 20 Gleye C., Duret P., Laurens A., Hocquemiller R., Cave´ A., (1998), cis-Monotetrahydrofuran acetogenins from the roots of Annona muricata, J Nat Prod., 61, pp 576-579 21 Gleye C., Laurens A., Hocquemiller C R A (1997), Isolation of Montecristin, a key metabolite in biogenesis of acetogenins from Annona muricata and its structure elucidation by Using Tandem mass spectrometry, J Org Chem., 62, pp 510-513 22 Gleye C., Laurens A., Hocquemiller R Laprévote.; O Serani., L Cavé., A, Cohibins A and B, acetogenins from roots of Annona muricata, (1997), Phytochemistry, Vol, 44, pp 1541-1545 23 Gleye C., Laurens A., Laprévoete O., Serani L., Hocquemillre R., Isolation and structure elucidation of sabadelin, an acetogenin from roots of Annona muricata, (1999), Phytochemistry 52, pp 1403-1408 24 Gleye C., Raynaud S., Fourneau C., Laurens A., Laprévote O., Serani L., Fournet A., Hocquemiller R (2000), Cohibins C D, Two important metabolites in the biogenesis of acetogenins from Annona muricata and Annona nutans, J Nat Prod., 63, pp 1192-1196 25 Hernandez M C L V and Nieto Angel D (1997) Diagnostico Técnico y Commercial de la Guanabana en México [Spanish] Memorias del Congreso Internacional de Anonaceas Universidad Autonoma Chapingo (UAC), Chapingo, México : pp 1-18 26 Jaramillo M C, Arango G J., González M C, Robledo S M, Velez I D, Cytotoxicity and antileishmanial activity of Annona muricata Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 77 pericarp, (2000), Fitoterapia 71, pp 183-186 27 Joseph T E., Alexander I G., Peter G W., (1987), Chemistry in the Annonaceae, XXIV Kaurane and kaur-16-en diterpenes from the stem bark ò Annona reticulata J Nat Prod 50 (5), 979-983 28 Kim G S, Zeng L, Alali F., Rogers L L., Wu F E, McLaughlin J L., Sastrodihardjo S (1998), Two new mono-tetrahydrofuran ring acetogenins, annomuricin E and muricapentocin, from the leaves of Annona muricata, J Nat Prod.,61, pp 432-436 29 Kowalska M T and Puett D (1990), Potential biomedical applications for tropical fruit products, Tropical Garden Fruit World, (4) 126- 127 30 Kuo H Y., Yeh M H (1997), Chemical constituents of heartwood of Bauhinia purpurea L., J Chin Chem Soc 44, 379-383 31 Li X H., Hui Y H., Rupprecht J K., Liu Y M., Wood K V., Smith D L., Chang C J and McLaughlin J L (1990), Bullatacin, bullatacinone, and squamone, a new bioactive acetogenin, from the bark of Annona squamosa, J Nat Prod., 53 (1) 81-86 32 Li C M., Tan N H., Lu Y P., Liang H L., Mu Q., Zheng H L., Hao X J., Zhou J (1995), Annomuricatin A, a new cyclopeptide from the seeds of Annona muricata, Acta Botanica Yunnanica, 17(4), pp 459462 33 Li C M., Tan N.H., Zheng H.L., Hao X.J., Zhou J., (1995) Cyclopeptide from the seeds of Annona glabra, Chin Chem Lett., (1) 39-40 34 Li C M., Tan N H., Zheng H L., Mu Q., Hao X J., He Y N., Zhou J (1998), Cyclopeptide from the seeds Phytochemistry, Vol 48, pp 555-556 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn of Annona muricata, C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 78 35 Li D Y, Yu J G, Luo X Z, Yang S L, Muricatenol, a Linear Acetogenin from Annona muricata (Annonaceae), (2000), Chin Chem Lett ,Vol 11, pp, 239-242 36 Liaw C C, Chang F R, Lin C Y, Chou.C.J, Chiu.H.F, Wu M J, and Wu Y C, (2002), New Cytotoxic Monotetrahydrofuran Annonaceous Acetogenins from Annona muricata, J Nat Prod., 65, pp 470-475 37 Londershausen, M., Wolfgangleicht, F M., Heinrich, M and Hanne, W 1991 Molecular mode of action of Annonis Pesticide Science, 33: 427-438 38 Maeda U., Hara N., Fujimota Y., Srivastava A., Gupta Y K., Sahai M., (1993), N-fatty acyl tryptamines from Annona reticulata Phytochemistry 34 (6), 1633-1635 39 Marina D G., Pietro M., Lucio P., Stigmasterols from Typha latifolia J Nat Prod, 53 (6), 1430-1435 (1990) 40 Pérez-Âmdor M C., González-Esquinca A., Morales M C., Toriz F., (2004), Oxoaporphine alkaloids in Guatteria diospyroides Baill And Annona squamosa L (Annonaceae), International Journal of Experimental Botany, p.53-55 41 Pinto A C Q., Cordeiro M C R., Andrade S R M., Ferreira F R., Filgueiras H A C., Alves R E., Kinpara D I., Annona species, International Centre for Underutilised Crops, University of Southampton, Southampton, UK (2005) 42 Ranjan R., and Sahai M., (2009), Coumarinolignans from the Seeds of Annona squamosa Linn E J Chemistry, (2) 518-522 43 Saad J M., Hui Y H., Rupprecht J K., Anderson J E., Kozlowski J F., Zhao G X., Wood K V., McLaughlin J L., (1991), Reticulatacin: Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 79 A new bioactive acetogenin from Annona reticulata (Annonaceae) Tetrahedron, 47 (16/17) 2751-2756 44 Shi E G., Alfonso D., Fatope M O., Zeng L., Gu Z M; Zhao G X; He K; MacDougal J M; McLaughlin J L., J Am.Chem Soc., 1995, 117, pp 10409-10410 45 Shi G., Kozlowski J F., Schwedler J T., Wood K V., MacDougal J M., McLaughlin J L (1996), J Org Chem., 61, pp 7988-7989 46 Srinivas E K., Reddy C S., Ganapaty S., Analgesic and antiinflammatory activity of stem bark of Annona reticulata L J Che Pharm Sci (3), 100 – 104 47 Suresh H M., Shivakumar B., Shivakumar S I., (2012), Aporphine alkaloids from the roots of Annona reticulata on human cancer cell lines International Journal of Plants research, (3) 57-60 48 Suresh H M., Shivakumar B., Shivakumar S I., (2012), Inhibitory potential of the ethanol extract of Annona reticulata Linn against melanoma tumor, J Nat Pharm., (4) 168-172 49 Tylor J.,Arnold W., Thomas J., Salleh M M., (2011), Antimalarial alkaloids isolated from Annona squamosa, Phytopharmacology, 1(3) 49-53 50 Wélé A., Zhang Y., Caux C., Brouard J.P., Pousset J.P., Bodo B., (2004), Annomuricatin C, a novel cyclohexapeptide from the seeds of Annona muricata, C R Chimie ,7, pp 981–988 51 Weslé A., Mayer C., Dermigny Q., Zhang Y., Blond A., Bodo B., (2008), Sequence and three-dimensional structure of cycloreticulins A and B, new cyclooctapeptides from the seeds of Annona reticulata Tetreahedron, 64, 154-162 52 Yu D Y., (1999), Recent works on anti-tumor constituent from Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn