So sánh thành phần hóa học giữa nấm lỗ (hexagonia apiaria (pers ) fr ) tự nhiên và nuôi trồng trên môi trường lỏng

i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH 664    TRẦN THỊ HUYỀN SO SÁNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC GIỮA NẤM LỖ (HEXAGONIA APIARIA (Pers.) Fr.) TỰ NHIÊN VÀ NUÔI TRỒNG TRÊN MÔI TRƢỜNG LỎNG ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Vinh – 2013 ii BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH    SO SÁNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC GIỮA NẤM LỖ (HEXAGONIA APIARIA (Pers.) Fr.) TỰ NHIÊN VÀ NUÔI TRỒNG TRÊN MÔI TRƢỜNG LỎNG Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngƣời hƣớng dẫn: PGS TS Trần Đình Thắng Sinh viên thực hiện: Trần Thị Huyền Vinh-201 i LỜI CẢM ƠN Đồ án đƣợc hồn thành phịng thí nghiệm Vi sinh, phịng Hóa thực phẩm, Trung tâm Phân tích – Chuyển giao Cơng nghệ thực phẩm Môi trƣờng – Trƣờng Đại học Vinh Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, tơi xin chân thành cảm ơn PGS TS Trần Đình Thắng – Khoa Hóa học – Trƣờng Đại học Vinh giao đề tài, tận tình hƣớng dẫn tạo điều kiện giúp tơi suốt q trình hồn thành đồ án Tôi xin chân thành cảm ơn thầy (cơ) giáo khoa Hóa học, cán hƣớng dẫn phịng thí nghiệm Vi sinh, phịng Hóa thực phẩm, Trung tâm Phân tích – Chuyển giao Cơng nghệ thực phẩm Môi trƣờng – Trƣờng Đại học Vinh tạo điều kiện tận tình giúp đỡ tơi suốt q trình nghiên cứu hồn thành đồ án tốt nghiệp Đặc biệt, xin chân thành cảm ơn tận tình giúp đỡ ThS Hồng Văn Trung suốt q trình tơi hồn thành đồ án Tơi xin gửi lời cám ơn chân thành tới anh (chị) phịng thí nghiệm khoa Hóa học – Trƣờng Đại học Vinh tận tình giúp đỡ tơi hồn thành đồ án Đồ án hoàn thành dƣới tài trợ kinh phí đề tài Nghị định thƣ Việt Nam – Đài Loan PGS TS Trần Đình Thắng làm chủ nhiệm Cuối cùng, xin bày tỏ lịng biết ơn vơ hạn tới gia đình, ngƣời thân bạn bè động viên giúp đỡ suốt trình học tập làm đồ án tốt nghiệp Vinh, tháng 12 năm 2013 Sinh viên thực Trần Thị Huyền ii MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Đối tƣợng nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 Nấm lớn 1.1.1 Hình thái học nấm 1.1.1.1 Hình thái học sợi nấm 1.1.1.2 Hình thái thể 1.1.2 Các giai đoạn phát triển nấm 1.1.2.1 Giai đoạn tăng trƣởng 1.1.2.2 Giai đoạn phát triển 1.1.3 Đặc điểm biến dƣỡng nấm 1.1.4 Điều kiện sinh thái nấm 1.1.4.1 Chất dinh dƣỡng 1.1.4.2 Ảnh hƣởng yếu tố vật lý lên sinh trƣởng hệ sợi nấm 1.2 Sản xuất nấm ăn, nấm dƣợc liệu 1.2.1 Sản xuất nấm giới 1.2.2 Sản xuất nấm Việt Nam 10 1.2.3 Giá trị dinh dƣỡng giá trị làm thuốc loại nấm dƣợc liệu 12 1.2.3.1 Protein 13 1.2.3.2 Axit nucleic 13 1.2.3.3 Lipit 13 1.2.3.4 Gluxit xenlulose 14 1.2.3.5 Vitamin 14 1.2.3.6 Khoáng 14 iii 1.2.3.7 Giá trị dƣợc liệu 15 1.3 Axit amin nấm 20 1.3.1 Phân loại axit amin 21 1.3.2 Vai trò axit amin 22 1.4 Giới thiệu chung nấm lỗ (Hexagonia apiaria) 23 1.4.1 Vị trí phân loại 23 1.4.2 Mô tả nấm lỗ (Hexagonia apiaria) 23 1.5 Một số nhóm hợp chất chống ung thƣ từ nấm thuộc họ nấm lỗ (Polyporaceae) 24 1.6 Hệ thống phân tích HPLC 29 1.6.1 Nguyên lý 29 1.6.2 Phân Loại 30 1.6.3 Các phận hệ thống HPLC 31 Chƣơng 32 PHƢƠNG PHÁP VÀ THỰC NGHIỆM 32 2.1 Nuôi cấy nấm lỗ (Hexagonia apiaria) MT lỏng 32 2.1.1 Nguyên vật liệu phƣơng pháp nghiên cứu 32 2.1.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 32 2.1.1.2 Thiết bị dụng cụ tiến hành 32 2.1.1.3 Môi trƣờng nuôi cấy 32 2.1.1.3.1 Môi trƣờng bảo quản giống 32 2.1.1.3.2 MT nuôi cấy lỏng 32 2.1.1.4 Quan sát hình thái giải phẫu nấm lỗ (Hexagonia apiaria) 32 2.1.1.4.1 Hình thái thể 32 2.1.1.4.2 Phƣơng pháp quan sát hệ sợi nấm, bào tử nấm lỗ (Hexagonia apiaria)33 2.1.1.5 Chuẩn bị MT PGA đĩa petri ống nghiệm 33 2.1.1.6 Phƣơng pháp chuẩn bị MT nuôi cấy lỏng 34 2.1.1.7 Phƣơng pháp nuôi cấy 34 2.1.1.8 Nghiên cứu sinh trƣởng phát triển nấm lỗ (Hexagonia apiaria) MT lỏng 35 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an iv 2.2 Phân tích thành phần dinh dƣỡng hợp chất có hoạt tính nấm lỗ (Hexagonia apiaria) HPLC 36 2.2.1 Nguyên vật liệu phƣơng pháp nghiên cứu 36 2.2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 37 2.2.1.2 Phƣơng pháp lấy mẫu 37 2.2.1.3 Dụng cụ thiết bị 38 2.2.1.4 Hoá chất 38 2.2.2 Phân tích axit amin tự có nấm lỗ (Hexagonia apiaria) HPLC 38 2.2.3 Phân tích hoạt chất có nấm lỗ (Hexagonia apiaria) HPLC 40 Chƣơng 41 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 41 3.1 Quan sát hình thái giải phẫu nấm lỗ (Hexagonia apiaria) 41 3.1.1 Hình thái thể nấm lỗ (Hexagonia apiaria) 41 3.1.2 Quan sát hệ sợi nấm lỗ (Hexagonia apiaria) dƣới kính hiển vi 41 3.2 Kết q trình ni cấy nấm lỗ (Hexagonia apiaria) MT khác 41 3.2.1 Nấm lỗ (Hexagonia apiaria) đƣợc bảo quản MT PGA 41 3.2.2 Nghiên cứu sinh trƣởng phát triển nấm lỗ (Hexagonia apiaria) MT lỏng 42 3.2.2.1 Thời gian sinh trƣởng hệ sợi từ cấy đến giai đoạn lan kín thu nhận sinh khối 42 3.2.2.2 Đánh giá khả thu sinh khối khô nấm lỗ (Hexagonia apiaria) sau 25 ngày nuôi cấy MT lỏng 44 3.2.2.3 Hiệu suất sinh học sinh khối nấm lỗ (Hexagonia apiaria) nuôi cấy MT lỏng 46 3.3 Phân tích axit amin tự nấm lỗ (Hexagonia apiaria) HPLC 47 3.3.1 Xác định đƣờng chuẩn axit amin giá trị LOD, LOQ 47 3.3.2 Sắc đồ axit amin có mẫu phân tích 52 3.3.3 Xử lý tìm kết nồng độ axit amin tự có mẫu phân tích 55 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an v 3.4 Thành phần hoạt chất có mẫu phân tích 57 3.4.1 Sắc đồ hoạt chất có mẫu phân tích 58 3.4.2 Kết hoạt chất có mẫu phân tích 61 KẾT LUẬN 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO 64 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an vi DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ CÁI VIẾT TẮT HPLC: Sắc ký lỏng hiệu cao LOD: Giới hạn phát LOQ: Giới hạn định lƣợng/giới hạn xác định SKPB: Sắc ký phân bố SKPT: Sắc ký pha thƣờng SKPĐ: Sắc ký pha đảo VQG: Vƣờn quốc gia MT: Môi trƣờng ME: Malt Extract PGA: Potatoes Glucose Agar Asp: Aspatic Glu: Glutamat Ser: Serin His: Histidin Gly: Glycin Thr: Threonin Ala: Alanin Arg: Arginin Tyr: Tyrosin Cys-SS-Cys: Cystein Val: Valin Met: Methionin Phe: Phenylalanin Ile: Iso – Leucin Leu: Leucin Lys: Lysin Pro: Prolin Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an vii DANH MỤC SƠ ĐỒ BẢNG Bảng 1.1: Các chất làm thuốc miễn dịch từ số loài nấm 16 Bảng 1.2: Phân loại axit amin .21 Bảng 1.3: Vị trí phân loại nấm lỗ (Hexagonia apiaria) 23 Bảng 2.1: Điều kiện chạy sắc ký để phân tích axit amin 39 Bảng 2.2: Điều kiện chạy sắc ký để phân tích hoạt chất 40 Bảng 3.1: Thời gian trung bình hệ sợi nấm lỗ (Hexagonia apiaria) lan bề mặt MT nuôi cấy lỏng (ngày) .42 Bảng 3.2: Trọng lƣợng khô sợi nấm lỗ (Hexagonia apiaria) sau 25 ngày nuôi cấy MT lỏng 45 Bảng 3.3: Trọng lƣợng tƣơi sợi nấm lỗ (Hexagonia apiaria) sau 25 ngày nuôi cấy MT lỏng 46 Bảng 3.4: Giá trị LOD LOQ phƣơng pháp qua lần đo axit Aspatic 51 Bảng 3.5: Giá trị LOD LOQ phƣơng pháp 17 axit amin .52 Bảng 3.6: Hàm lƣợng axit amin tự mẫu phân tích 56 Bảng 3.7: So sánh thành phần hoạt chất có nấm lỗ (Hexagonia apiaria) tự nhiên nuôi cấy MT lỏng .61 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an viii DANH MỤC HÌNH VÀ BIỂU ĐỒ Hình 1.1: Vịng đời nấm Hình 1.2: Nấm linh chi đỏ…………………………………………………… 11 Hình 1.3: Nấm linh chi đen 11 Hình 1.4: Linh chi trắng……………………………………………………… 12 Hình 1.5: Linh chi vàng 12 Hình 1.6: Nấm mỡ…………………………………………………………… 12 Hình 1.7: Nấm hƣơng 12 Hình 1.8: Mộc nhĩ trắng……………………………………………………….12 Hình 1.9: Mộc nhĩ đen 12 Hình 1.10: Công thức cấu tạo tổng quát axit amin 20 Hình 1.11: Nấm lỗ (Hexagonia apiaria) 24 Hình 1.12: Một số lanostan tách chiết từ nấm 26 Hình 1.13: Một số isoprenylat cyclohexan tách chiết từ nấm 29 Hình 1.14: Sơ đồ hệ thống HPLC 31 Hình 2.1: Sinh khối nấm đƣợc chuẩn bị để đƣa vào sấy chân khơng 36 Hình 2.2: Mẫu nấm sau sấy đông khô 37 Hình 3.1: Mặt thể nấm………………………………………… 41 Hình 3.2: Mặt dƣới thể nấm 41 Hình 3.3: Hình thái sợi mẫu nấm 41 Hình 3.4: Sợi nấm lỗ (Hexagonia apiaria) đĩa Petri 42 Biểu đồ 3.1: Thời gian hệ sợi nấm lỗ (Hexagonia apiaria) lan bề mặt MT nuôi cấy lỏng (ngày) 42 Hình 3.5: Tơ nấm MT khống………………………………………… 44 Hình 3.6: Tơ nấm MT ME 44 Biểu đồ 3.2: Trọng lƣợng khô sợi nấm lỗ (Hexagonia apiaria) sau 25 ngày nuôi cấy 45 Hình 3.7: Nấm lỗ ME sau 25 ngày……………………………………….46 Hình 3.8: Nấm lỗ khống sau 25 ngày 46 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 52 phƣơng pháp qua lần đo nồng độ khác 10pmol; 25pmol; 100pmol ta đƣợc kết bảng sau: Bảng 3.5: Giá trị LOD LOQ phƣơng pháp 17 axit amin TT Axit amin LOD LOQ Asp 0,027 0,090 Glu 0,025 0,083 Ser 0,016 0,052 His 0,024 0,080 Gly 0,021 0,071 Thr 0,021 0,069 Ala 0,022 0,073 Arg 0,016 0,053 Tyr 0,02 0,066 10 Cys-SS-Cys 0,046 0,152 11 Val 0,051 0,051 12 Met 0,015 0,048 13 Phe 0,018 0,061 14 Ile 0,016 0,053 15 Leu 0,016 0,052 16 Lys 0,046 0,153 17 Pro 0,029 0,095 Qua bảng số liệu ta thấy phƣơng pháp có khoảng giới hạn phát khoảng định lƣợng nhỏ chứng tỏ thiết bị có độ nhạy cao, phát đƣợc hàm lƣợng axit amin tự dƣới dạng vết có mẫu phân tích 3.2.2 Sắc đồ axit amin có mẫu phân tích Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 53 Hình 3.26: Sắc đồ axit amin tự có nấm lỗ (Hexagonia apiaria) đƣợc thu hái từ VQG Phong Nha- Kẻ Bàng Hình 3.27: Sắc đồ axit amin tự có nấm lỗ (Hexagonia apiaria) đƣợc thu hái từ VQG Pù Mát Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 54 Hình 3.28: Sắc đồ axit amin tự từ sợi nấm lỗ (Hexagonia apiaria) đƣợc nuôi cấy MT khống hoạt hóa ( Sợi K) Hình 3.29: Sắc đồ axit amin tự từ dịch nuôi cấy nấm lỗ (Hexagonia apiaria) ( Dịch K) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 55 Hình 3.30: Sắc đồ axit amin tự từ sợi nấm lỗ (Hexagonia apiaria) đƣợc ni cấy MT khống hoạt hóa ( Sợi ME) Hình 3.31: Sắc đồ axit amin tự từ dịch nuôi cấy nấm lỗ (Hexagonia apiaria) ( Dịch ME) 3.3.3 Xử lý tìm kết nồng độ axit amin tự có mẫu phân tích Từ giá trị diện tích peak đo đƣợc ta tính đƣợc hàm lƣợng Co (µg/l) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 56 Sau ta tính hàm lƣợng axit amin (µg/g) có mẫu nấm theo cơng thức sau: C=(Co/m).Vdm.f Trong đó: - C hàm lƣợng axit amin tự có mẫu, tính theo µg/g - Co: Hàm lƣợng axit amin tự có dịch chiết thơng qua đƣờng chuẩn, µg/l - f: hệ số pha lỗng (nếu có) - m: khối lƣợng mẫu nấm phân tích (g) - Vdm: Thể tích bình định mức mẫu(ml) Kết đƣợc trình bày bảng 3.6 Bảng 3.6: Hàm lƣợng axit amin tự mẫu phân tích Hàm lƣợng axit amin tự nấm ( µg/g) Axit amin Nấm tự nhiên Nấm nuôi cấy Phong Nha Pù Mát Sợi K Dịch K Sợi ME Dịch ME Asp _ _ _ _ _ _ Glu 75,292 68,458 1694,880 2065,449 2289,952 246,251 Ser _ 137,828 409,258 180,563 311,284 His 617,047 511,956 2421,221 2174,182 1694,010 645,983 Gly _ _ _ _ _ _ Thr _ _ 61,498 96,571 _ _ Ala 459,375 40,320 811,566 1080,761 323,961 42,619 Arg 51,327 40,762 1608,394 1384,371 1541,791 530,429 Tyr 327,122 306,994 647,194 1855,548 2005,209 726,029 Cys-SS-Cys 201,837 205,228 432,655 1240,449 1340,499 485,357 569,106 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 57 Val 8,396 20,851 372,612 906,050 _ 122,804 Met _ _ _ 201,579 _ _ Phe KPH KPH Ile 232,837 Leu _ Lys 731,265 Pro _ 2222,170 2372,920 1468,195 KPH 283,901 2721,949 8390,315 1665,684 1119,986 _ _ _ _ _ 811,077 3033,623 9351,038 1856,411 1248,229 638,378 737,220 3291,989 4183,428 1924,123 Chú thích: KPH: Khơng phát _ khơng có 3.4 Thành phần hoạt chất có mẫu phân tích Từ mẫu nấm lỗ tự nhiên phân lập đƣợc hợp chất HAM1, HAM2, HAM3 Có cơng thức nhƣ sau: HAM1 HAM2 HAM3 Hình 3.32: Cơng thức hóa học hợp chất HAM1, HAM2, HAM3 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 58 3.4.1 Sắc đồ hoạt chất có mẫu phân tích Cân 2g mẫu đƣợc xay nhỏ, cho vào cốc, định mức 20ml dung môi pha động; đánh siêu âm 30 phút; ly tâm 15 phút, tốc độ 3500 v/p; lọc thô qua giấy lọc ta thu đƣợc dịch lọc Sau hút bơm qua màng lọc cho vào vial khác Ghi nhãn cho mẫu vial Phân tích HPLC Hình 3.33: Sắc đồ chất có hoạt tính có mẫu nấm lỗ (Hexagonia apiaria) đƣợc thu hái từ VQG Phong Nha – Kẻ Bàng Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 59 Hình 3.34: Sắc đồ chất có hoạt tính có mẫu nấm lỗ (Hexagonia apiaria) đƣợc thu hái từ VQG Pù Mát Hình 3.35: Sắc đồ hoạt chất có mẫu sợi nấm lỗ (Hexagonia apiaria) đƣợc nuôi cấy MT khống hoạt hóa (Sợi K) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 60 Hình 3.36: Sắc đồ hoạt chất có mẫu dịch ni cấy nấm lỗ (Hexagonia apiaria) ( Dịch K) Hình 3.37: Sắc đồ hoạt chất có mẫu sợi nấm lỗ (Hexagonia apiaria) đƣợc nuôi cấy MT ME (Sợi ME) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 61 Hình 3.38: Sắc đồ hoạt chất có mẫu dịch ni cấy nấm lỗ (Hexagonia apiaria) ( Dịch ME) 3.4.2 Kết hoạt chất có mẫu phân tích Bảng 3.7: So sánh thành phần hoạt chất có nấm lỗ (Hexagonia apiaria) tự nhiên nuôi cấy MT lỏng Sự hiển diện hợp chất có hoạt tính nấm Nấm tự nhiên Thành phần Phong Nha Nấm nuôi cấy Pù Mát Sợi K Dịch K Sợi ME Dịch ME HAM + + + + + + HAM _ _ + _ _ _ HAM _ _ + _ + _ Chú thích: + _ có khơng có Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 62 KẾT LUẬN So sánh thành phần dinh dƣỡng hoạt chất có nấm lỗ (Hexagonia apiaria) tự nhiên nuôi cấy môi trƣờng lỏng thu đƣợc kết nhƣ sau: 1) Đã nuôi cấy bảo quản giống nấm lỗ (Hexagonia apiaria) MT PGA: Trên đĩa petri ống nghiệm 2) Đã nuôi cấy giống nấm lỗ (Hexagonia apiaria) hai MT lỏng là: ME khoáng hoạt hóa (PG+ Pepton+ KH2PO4+ MgSO4), MT ME MT thu nhận đƣợc sinh khối lớn 3) Đã xây dựng đƣợc phƣơng trình đƣờng chuẩn 17 loại axit amin xác định giới hạn phát (LOD) giới hạn định lƣợng (LOQ) phƣơng pháp HPLC 17 loại axit amin 4) Đã phân tích axit amin tự nấm lỗ (Hexagonia apiaria) tự nhiên nấm lỗ (Hexagonia apiaria) nuôi cấy MT lỏng HPLC cho thấy: - Ảnh hƣởng MT đến số axit amin tự hàm lƣợng loại axit amin tự có nấm lỗ (Hexagonia apiaria) - Các axit amin Asp, Gly Leu khơng có chứa với hàm lƣợng không đáng kể mẫu phân tích Phát thấy hàm lƣợng 14 loại axit amin tự có mẫu phân tích, cụ thể: + Mẫu dịch ni cấy (Dịch K): 14 loại axit amin + Mẫu sợi (Sợi K): 13 loại axit amin + Mẫu sợi (Sợi ME), mẫu dịch nuôi cấy (Dịch ME), mẫu nấm thu thập từ VQG Pù Mát: 11 loại axit amin + Mẫu nấm thu thập từ VQG Phong Nha – Kẻ Bàng: loại axit amin - Nhìn chung, hàm lƣợng axit amin tự có nấm lỗ (Hexagonia apiaria) ni cấy MT lỏng lớn nhiều so với nấm lỗ (Hexagonia apiaria) tự nhiên dịch nuôi cấy (Dịch K) lớn nhất, cụ thể: Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 63 + Tổng lƣợng axit amin tự có mẫu nấm thu thập từ VQG Phong Nha – Kẻ Bàng: 2704,498 µg/g + Tổng lƣợng axit amin tự có mẫu nấm thu thập từ VQG Pù Mát: 3065,753 µg/g + Tổng lƣợng axit amin tự có mẫu sợi (Sợi K): 17174,24 µg/g + Tổng lƣợng axit amin tự có mẫu dịch ni cấy (Dịch K): 34980,33 µg/g + Tổng lƣợng axit amin tự có mẫu sợi (Sợi ME): 17339,7 µg/g + Tổng lƣợng axit amin tự có mẫu dịch ni cấy (Dịch ME): 7403,094 µg/g - Loại axit amin tự có nấm lỗ (Hexagonia apiaria) với hàm lƣợng lớn Lysin, cụ thể: + Mẫu nấm thu thập từ VQG Phong Nha – Kẻ Bàng: 731,265 µg/g + Mẫu nấm thu thập từ VQG Pù Mát: 811,077 µg/g + Mẫu sợi (Sợi K): 3033,623 µg/g + Mẫu dịch ni cấy (Dịch K): 9351,038 µg/g + Mẫu sợi (Sợi ME): 1856,411 µg/g + Mẫu dịch ni cấy (Dịch ME): 1248,229 µg/g 5) Đã định tính hoạt chất có nấm lỗ (Hexagonia apiaria) cho thấy: - Sự khác thành phần hoạt chất có nấm lỗ (Hexagonia apiaria) tự nhiên nấm lỗ (Hexagonia apiaria) nuôi cấy MT lỏng + Mẫu sợi (Sợi K) chứa đầy đủ tất hoạt chất (HAM1, HAM2, HAM3) + Mẫu nấm thu thập từ VQG Pù Mát, Phong Nha – Kẻ Bàng mẫu dịch (Dịch K, Dịch ME) chứa HAM1 + Mẫu sợi (Sợi ME) chứa HAM1 HAM3 - Ảnh hƣởng MT ni cấy đến hoạt chất có nấm lỗ (Hexagonia apiaria) Hướng nghiên cứu đề tài: Định lƣợng hợp chất có hoạt tính có nấm lỗ (Hexagonia apiaria) tự nhiên ni cấy MT lỏng Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ nông nghiệp phát triển nông thôn (2008), Cơ sở khoa học công nghệ nuôi trồng, Nhà xuất nông nghiệp Hà Nội Phạm Thị Trân Châu, Nguyễn Thị Hiền, Phùng Gia Tƣờng (2000), Hoá sinh học, Nhà xuất Giáo dục, Hà Nội Tô Minh Châu, Vƣơng Thị Việt Hoa, Vũ Thị Lâm An, Lâm Thanh Hiền, Nguyễn Thị Ngọc Diệp, Nguyễn Thúy Hƣơng (1999), Vi sinh vật học đại cương, Đại học Quốc gia Hồ Chí Minh Nguyễn Hữu Đống, Đinh Xuân Linh, Nguyễn Thi Sơn, Zanl Fderico, (2000), Nấm ăn- sở khoa học công nghệ nuôi trồng, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Lân Dũng (2002), Công nghệ nuôi trồng nấm – Tập 1, 2, Nhà xuất Nông Nghiệp, Hà Nội Nguyễn Minh Khang (2005), Trồng nấm Linh chi đen, Khóa luận tốt nghiệp khoa Cơng nghệ Sinh học, Trƣờng Đại học Nông Lâm, Tp, HCM Trịnh Tam Kiệt (2011), Nấm lớn Việt Nam, tập 1, Nhà xuất khoa học tự nhiên Công nghệ, Hà Nội Trịnh Tam Kiệt (2012), Nấm lớn Việt Nam, tập 2, Nhà xuất khoa học tự nhiên Công nghệ, Hà Nội Phạm Luân (1999), Cơ sở lý thuyết phân tích sắc ký lỏng hiệu suất cao, Đại học quốc gia Hà Nội 10 Nguyên tác: Trần Quốc Lƣơng, Trần Huệ, Trần Hiểu Thanh (1998) Biên dịch: Cơng Diễn, Linh chi phịng trị bệnh, Nhà xuất mũi Cà Mau, Thực hành sinh hóa học, Nhà xuất Giáo dục, Hà Nội 11 Nguyễn Đức Lƣợng, Phan Thị Huyền Nuyễn Ánh Tuyết (2003), Thí nghiệm cơng nghệ sinh học, tập 2, thí nghiệm vi sinh vật học, Nhà xuất Đại học Quốc gia TP HCM 12 Trần Văn Mão (2004), Sử dụng vi sinh vật có ích – Tập 1: Ni trồng Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 65 chế biến nấm ăn nấm làm thuốc chữa bệnh, Nhà xuất Nông Nghiệp, Hà Nội 13 Hồ Viết Quý (2007), Các phƣơng pháp phân tích cơng cụ hóa học đại, Nhà xuất Đại học Sƣ phạm, Hà Nội 14 Lê Xuân Thám (1996), Nấm Linh chi – dược liệu quý Việt Nam, Nhà xuất mũi Cà Mau 15 Lê Duy Thắng (1999), Kỹ thuật trồng nấm – Tập 1: Nuôi trồng số nấm ăn thông dụng Việt Nam, Nhà xuất Nông Nghiệp, Hà Nội 16 Lê Duy Thắng, Trần Văn Minh, 2001, Sổ tay hướng dẫn trồng nấm, Nhà xuất Nông Nghiệp,Hà Nội 17 Đào Hữu Vinh, Nguyễn Xuân Dũng cộng (1985), Các phƣơng pháp sắc ký, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Tiếng Anh 18 Arora D K., Bridge P D., and Deepak B (2004), Fungal Biotechnology in Agricultural, Food, and Environmental, CRC Press 19 Arya A., Albert S., and Nagadesi P.K (2008), New and Interesting Records of Basidiomycetous Fungi from Ratanmahal Wildlife Sanctuary, Gujarat, India, J Mycol Pl Pathol., 3(2) 222 – 223 20 Ding Z (1980), The Ganodermataceae in China, Berlin Shiffigart 21 Efimov A (2005), HPLC introduction 22 Jiang M Y., Li Y., Wang F., and Liu J K (2011), Isoprenylated cyclohexanoids from the basidiomycete Hexagonia speciosa, Phytochemistry, 72, 923-928 23 Lindequist U., Niedermeyer H.J., Julich W (2005), The pharmacological potential of mushrom, eCAM, 2(3) 285-299 24 Ríos J L., Andújar I., Recio M C., and Giner R M (2012), lanostanoids from fungi: A group of potential anticancer compounds, J Nat Prod., 75, 2016-2044 25 Steyaert R.L (1972), Species of Ganoderma and related genera mainly Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn